软组织肿瘤分子生物学研究进展 被引量：4

1

作者 郑颂国 张仁元 朱雄增 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期58-60,共3页

关键词 软组织肿瘤 分子生物学 研究

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GPC5过表达对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞生物学功能的影响

2

作者 周青 胡静雯 +3 位作者 许有涛 王洁 尹荣 许林 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1528-1532,共5页

目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(glypican 5,GPC5)基因对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞(cancer-initiating cells,CICs)生物学功能的影响。方法 :采用前期构建的过表达GPC5慢病毒载体稳定转染的细胞株GPC5-A549,无血清培养方法富集A549细胞... 目的:探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5(glypican 5,GPC5)基因对人肺腺癌A549肿瘤起始细胞(cancer-initiating cells,CICs)生物学功能的影响。方法 :采用前期构建的过表达GPC5慢病毒载体稳定转染的细胞株GPC5-A549,无血清培养方法富集A549细胞中的CICs微球,通过定量分析检测微球大小,流式细胞术检测CD133阳性细胞比率,Matrigel和Tanswell小室检测细胞侵袭迁移能力,Western blot检测上皮细胞间质化相关蛋白表达。结果:与对照组相比,过表达GPC5后A549细胞中CICs微球形成数目明显减少,体积变小,CD133阳性率明显下降(P<0.05);细胞侵袭、迁移能力显著降低(P<0.05);E-cadherin的蛋白表达明显上调,Vimentin、N-cadherin的表达显著被抑制(P<0.05)。结论:GPC5过表达能够抑制肺腺癌细胞株A549中CICs的发生、侵袭和迁移,调控上皮细胞间质化相关蛋白表达。 展开更多

关键词 肺腺癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-5 肿瘤起始细胞 上皮细胞间质化

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miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901生物学行为的影响 被引量：2

3

作者 李明 连海峰 +2 位作者 刘成霞 胡营滨 李有杰 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期273-278,共6页

背景与目的:既往研究表明微小RNA-486-5p(miR-486-5p)在多种肿瘤的进展中起重要作用,但其在胃癌中作用的研究较少,本研究旨在探讨miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:使用实时定量PCR(quantification real-... 背景与目的:既往研究表明微小RNA-486-5p(miR-486-5p)在多种肿瘤的进展中起重要作用,但其在胃癌中作用的研究较少,本研究旨在探讨miR-486-5p对胃癌细胞株SGC7901增殖、凋亡及迁移能力的影响。方法:使用实时定量PCR(quantification real-time PCR,qRT-PCR)检测胃癌细胞株SGC7901及胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-486-5p的表达,构建miR-486-5p过表达质粒,使用脂质体法瞬时转染胃癌细胞株SGC7901,qRT-PCR检测转染细胞后miR-486-5p的表达丰度,噻唑蓝(MTT)法及流式细胞仪检测细胞的增殖及凋亡情况,Transwell小室迁移实验检测细胞的迁移能力。结果:miR-486-5p在SGC7901细胞中表达明显下调,SGC7901细胞转染miR-486-5p过表达质粒后,miR-486-5p表达明显上调,细胞增殖、迁移能力降低,凋亡率增高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-486-5p可抑制胃癌细胞株SGC7901的增殖和迁移。 展开更多

关键词 胃癌 增殖 凋亡 迁移

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RNAi抑制MCF7细胞Lon基因后的生物学效应 被引量：5

4

作者 薛霞 朱运峰 毛建平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期870-874,共5页

目的通过构建Lon基因表达下调的哺乳动物细胞模型,观察Lon基因对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法设计针对Lon蛋白酶基因的小干扰RNA(siRNA),构建pSilencer U6 2.1-Lon真核表达载体,并用脂质体法转染人乳腺癌细胞MCF7。RT-PCR法检测Lon... 目的通过构建Lon基因表达下调的哺乳动物细胞模型,观察Lon基因对肿瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法设计针对Lon蛋白酶基因的小干扰RNA(siRNA),构建pSilencer U6 2.1-Lon真核表达载体,并用脂质体法转染人乳腺癌细胞MCF7。RT-PCR法检测Lon基因下调的水平,通过采用高温、紫外线照射、顺铂处理,观察Lon基因下调后细胞敏感性的变化(MTT法);流式细胞术检测siRNA诱导细胞凋亡的作用。结果RT-PCR显示重组质粒pSilencer U6 2.1-Lon转染MCF7细胞后,Lon基因明显下调,RT-PCR未见扩增目的条带,细胞培养结果显示细胞增殖能力明显减弱。MTT结果显示,pSilencer U6 2.1-Lon转染的MCF7细胞经紫外线照射和顺铂处理后,增殖能力明显下降,与空载体转染组和未转染组相比有显著差异(P<0.05)。加热应激实验显示,41℃处理后,RNA干扰转染组(pSilencer U6 2.1-Lon)与空载体转染组(pSilencer U6 2.1)、未转染组相比有显著性差异(P<0.05)。而在43℃和45℃时,3组之间均无显著性差异(P>0.05)。流式细胞术检测pSilencer U6 2.1-Lon质粒组细胞凋亡率为(22.47±3.15)%,相对于空载体转染组的(2.3±0.9)%和无质粒转染组的(1.14±0.79)%有明显提高,而空载体转染组和无质粒转染组相比无明显差异。结论RNAi能有效下调Lon蛋白的表达。Lon基因的下调可抑制乳腺癌细胞MCF7的增殖,诱导细胞凋亡,并可增加MCF7细胞对紫外线和顺铂的敏感性。 展开更多

关键词 RNA干扰 Lon基因 细胞凋亡

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应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原 被引量：2

5

作者 岳文涛 张丽娜 +3 位作者 郑华 王玥 孙颖 焦振峰 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第4期289-293,共5页

背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多,为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物,本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物... 背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多,为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物,本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物淘选和SEREX筛选。PCR扩增阳性克隆插入片段后测序,结果与GeneBank数据库中已知基因进行同源性比较,分析其生物学特性。结果用非小细胞肺癌血清对噬菌体展示文库进行筛选,共获得31个阳性克隆,测序后发现其代表15个基因,其中12个与已知cDNA序列同源,与肺癌或其它肿瘤的发生、发展关系密切;另外3个未发现有同源基因,可能是新基因。结论应用SEREX技术发现15个肺癌相关抗原和3个肺癌相关抗原的候选基因,为进一步的深入研究打下良好的基础。 展开更多

关键词 肺肿瘤 SEREX 噬菌体展示 基因文库

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抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体死亡受体5嵌合抗体的构建及其真核表达 被引量：1

6

作者 陈凤 郭雅彬 +2 位作者 刘士廉 郑德先 刘彦信 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期690-695,共6页

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳... 目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 抗死亡受体5嵌合抗体 中国仓鼠卵巢细胞 人IgG轻链 人IgG重链

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肺癌血清肿瘤标志物研究进展 被引量：1

7

作者 郑华 岳文涛 朱允中 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第8期935-938,共4页

肺癌是当前全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。大部分患者确诊时已为晚期，失去了最佳治疗时机。近年来，虽然不断有新型的化疗药物被发现，但是肺癌5年存活率没有明显的提高。不能早期发现和诊断肺癌是导致肺癌疗效差及高死亡率的... 肺癌是当前全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。大部分患者确诊时已为晚期，失去了最佳治疗时机。近年来，虽然不断有新型的化疗药物被发现，但是肺癌5年存活率没有明显的提高。不能早期发现和诊断肺癌是导致肺癌疗效差及高死亡率的主要原因，故提高肺癌预后的关键是早期诊断。 展开更多

关键词 肺癌预后 血清肿瘤标志物 早期诊断 高死亡率 5年存活率 恶性肿瘤 治疗时机 化疗药物

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差异表达基因的克隆筛选及其在肿瘤研究中的应用

8

作者 岳文 孙丽亚 +1 位作者 傅春江 李春海 《中国肺癌杂志》 CAS 2001年第1期51-54,共4页

关键词 肿瘤 差异表达基因 克隆

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麝香保心丸防治急性冠状动脉综合征的临床与实验研究 被引量：30

9

作者 冯培芳 刘艳 冯久贤 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2004年第B12期23-26,共4页

目的探讨麝香保心丸(HMP)是否能通过影响巨噬细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达与分泌来发挥防治急性冠状动脉综合征(ACS)的作用。方法测定40例不稳定性心绞痛(UA)低危组患者联合运用HMP和常规治疗20周前后心电图及血清MMP2(酶联免疫吸附... 目的探讨麝香保心丸(HMP)是否能通过影响巨噬细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达与分泌来发挥防治急性冠状动脉综合征(ACS)的作用。方法测定40例不稳定性心绞痛(UA)低危组患者联合运用HMP和常规治疗20周前后心电图及血清MMP2(酶联免疫吸附法,ELISA),并以单用常规治疗为自身对照,年龄相仿的健康人为正常对照。收集Ba1b/c雌性小鼠腹腔巨噬细胞与不同浓度HMP共同培养24h后用RTPCR法测定MMP2基因表达,用ELISA测定培养上清液MMP2分泌量,并以生理盐水为对照。结果与正常人比,UA低危组患者血清MMP2明显增高。治疗后,与常规治疗组比,HMP能显著改善症状与心电图变化,并相应降低血清MMP2水平(P<0.05)。与巨噬细胞和生理盐水共同培养结果相比,不同浓度HMP都能显著抑制巨噬细胞MMP2的表达和分泌(P<0.05)。大剂量组HMP比小剂量组抑制更明显,有量效趋势,无线性相关。结论通过抑制MMP2稳定易损斑块的破裂可能是HMP2防治ACS的机制之一。 展开更多

关键词 麝香保心丸 急性冠状动脉综合征 基质金属蛋白酶-2 不稳定性心绞痛

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PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌的关系 被引量：29

10

作者 岳文涛 王小敏 王玥 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第4期312-315,共4页

背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科... 背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科手术中获取40例非小细胞肺癌组织及30例癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测癌及癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平。结果非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(40±59)%、(61±23)%、(77±32)%、(43±21)%,癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(16±40)%、(23±16)%、(10±12)%、(20±17)%,非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。联合应用4个基因表达作为NSCLC诊断标志,诊断的敏感性达到87.5%,特异性为90%。结论非小细胞肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径相关基因表达水平明显上调,说明该通路在非小细胞肺癌中被激活。联合检测VEGF、PI3K、Akt、mTOR的表达水平改变可能作为NSCLC的诊断标志。 展开更多

关键词 肺肿瘤 VEGF P13K AKT MTOR

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mRNA差异显示技术中差异条带的回收与再扩增 被引量：16

11

作者 王宏 李春海 +3 位作者 陈高明 王尧河 夏贞彪 杨毅 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期350-351,共2页

目的：对来源于两种或两种以上组织的ＲＮＡ经反转录和ＰＣＲ后进行比较。方法：采用ｍＲＮＡ差异显示过程中差异条带的回收与再扩增的方法。结果：直接将切下的凝胶条简单洗涤和碾碎后制备的再扩增模板比传统的糖原沉淀法简单有效。结... 目的：对来源于两种或两种以上组织的ＲＮＡ经反转录和ＰＣＲ后进行比较。方法：采用ｍＲＮＡ差异显示过程中差异条带的回收与再扩增的方法。结果：直接将切下的凝胶条简单洗涤和碾碎后制备的再扩增模板比传统的糖原沉淀法简单有效。结论：再扩增过程中将３０循环的低退火温度的ＤＤＰＣＲ和２０循环的严格条件的ＰＣＲ结合，能获得较高的再扩增效率。 展开更多

关键词 MRNA差异显示 差异条带回收 再扩增 肿瘤

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RT-PCR定量检测GST-π mRNA的表达 被引量：14

12

作者 陈高明 李春海 +3 位作者 王尧河 冯东晓 孙丽亚 朱运峰 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1998年第12期858-861,共4页

目的：建立一个用于测定临床样本中胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）ｍＲＮＡ表达水平的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量技术。方法：根据共扩增ＰＣＲ定量原理，通过多对引物的特异性分析和动力学筛选，建立了以β－... 目的：建立一个用于测定临床样本中胎盘型谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ＧＳＴ－π）ｍＲＮＡ表达水平的逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量技术。方法：根据共扩增ＰＣＲ定量原理，通过多对引物的特异性分析和动力学筛选，建立了以β－ａｃｔｉｎ作内参，底片扫描定量的ＲＴ－ＰＣＲ法，并对３０例食管癌组织和癌旁组织ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平进行了检测。结果：本方法灵敏度高、重复性好（批内ＣＶ＜１６％；批间ＣＶ＜３０％）、不用同位素标记，ＧＳＴ－π／β－ａｃｔｉｎ比值不受肝素、ＳＤＳ等的影响。２３例食管癌组织的ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达水平（１．９８±０．７６）明显高于２１例癌旁组织表达水平（１．０２±０．５８）（Ｐ＜０．０１）。结论：所建立的方法能反映ＧＳＴ－πｍＲＮＡ表达的微小差异并能作批量分析，ＧＳＴ－πｍＲＮＡ可作为食管癌的肿瘤基因标志。 展开更多

关键词 RT-PCR 食管肿瘤 GST-Π MRNA

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mTOR和PTEN在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义 被引量：9

13

作者 王亮 许绍发 +3 位作者 岳文涛 赵晓婷 张丽娜 王玥 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第7期717-721,共5页

背景与目的mTOR是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶。它通过活化下游的相关的效应蛋白发挥作用。在信号转导通路中PTEN基因可通过对该信号途径的负调控而抑制mTOR的活化。本研究通过分析mTOR信号转导途径中mTOR和... 背景与目的mTOR是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶。它通过活化下游的相关的效应蛋白发挥作用。在信号转导通路中PTEN基因可通过对该信号途径的负调控而抑制mTOR的活化。本研究通过分析mTOR信号转导途径中mTOR和PTEN基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达和临床意义。方法外科手术中获取65例NSCLC组织及30例癌旁组织,RT-PCR技术检测NSCLC组织及癌旁组织中mTOR和PTEN基因的表达水平。结果mTOR在NSCLC组织中表达量(0.23±0.16)显著高于癌旁组(0.12±0.09)(P<0.01),PTEN在NSCLC组织中表达量(0.19±0.28)显著低于癌旁组(0.53±0.28)(P<0.01)。mTOR和PTEN与病人的性别、年龄、病理类型、淋巴结转移情况无关,与病人的肿瘤大小有关。结论mTOR在NSCLC中被激活,PTEN在NSCLC组织表达缺失或减少,mTOR通路的激活和PTEN表达缺失在NSCLC发生发展中起到一定的作用。 展开更多

关键词 MTOR PTEN 逆转录聚合酶链反应 肺肿瘤

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非小细胞肺癌患者中Survivin抗体的临床意义及诊断价值 被引量：6

14

作者 马丽 岳文涛 +3 位作者 张丽娜 王玥 张春彦 杨学惠 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第7期706-712,共7页

背景与目的在世界范围内,恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因,且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入,肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。... 背景与目的在世界范围内,恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因,且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入,肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。本研究旨在探讨Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中可能的临床应用价值。方法采用RT-PCR方法获得Survivin cDNA,构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin,亲和层析方法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,建立基于Survivin融合蛋白的间接ELISA方法,对89例健康志愿者、215例非小细胞肺癌患者以及20例肺部良性疾病患者的血清样本进行检测。结果重组Survivin融合蛋白在BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,间接ELISA方法检测Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中的阳性率为19.5%,特异性为88.9%,Survivin自身抗体与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、远处转移间存在相关性(P<0.05),Survivin自身抗体与CEA在非小细胞肺癌患者中联合检测的阳性率明显高于CEA与NSE、SCC、CYFRA、ProGRP联合检测的阳性率,这大大提高了非小细胞肺癌检测的敏感性。结论本研究成功构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin,并建立检测Sur-vivin自身抗体的间接ELISA方法,Survivin自身抗体与肺癌肿瘤大小、远处转移间的相关性及在非小细胞肺癌患者联合检测中的重要作用,为Survivin自身抗体在肺癌中的临床应用提供了线索和依据。 展开更多

关键词 原核表达 Survivin自身抗体 肺肿瘤 间接ELISA 联合检测

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多药耐药相关蛋白基因在乳腺癌中的表达及其临床意义 被引量：7

15

作者 陈高明 李春海 +5 位作者 毛慧生 王建军 孙丽亚 王立梅 杨毅 王白岚 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1999年第1期23-25,共3页

目的：检测多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因在乳腺癌组织中的表达水平，并和谷胱甘肽Ｓ－转移酶－ｐｉ（ＧＳＴ－π）的表达作相关性比较，探讨其在临床的应用价值。方法：用定量ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测了５５例乳腺癌组织中ＭＲＰ和其... 目的：检测多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因在乳腺癌组织中的表达水平，并和谷胱甘肽Ｓ－转移酶－ｐｉ（ＧＳＴ－π）的表达作相关性比较，探讨其在临床的应用价值。方法：用定量ＲＴ－ＰＣＲ技术，检测了５５例乳腺癌组织中ＭＲＰ和其中４０例ＧＳＴ－πｍＲＮＡ的表达水平，并和术前化疗比较分析。结果：ＭＲＰ表达的阳性率为７６．４％，高表达占１８．２％，中低表达各占２３．６％和３４．５％。ＭＲＰ和ＧＳＴ－π有４０％的共表达率，虽然ＭＲＰ表达阳性率及水平和术前化疗关系不明显，但化疗后二者表达有正相关趋势。结论：ＭＲＰ在乳腺癌中普遍表达，以中低表达为主，其和ＧＳＴ－π的共表达可能和化疗药物诱导有关。 展开更多

关键词 MRP 乳腺癌 多药耐药性 基因表达

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FAK基因表达对人结直肠癌细胞增殖及运动的影响 被引量：6

16

作者 潘宁 章蔼然 +1 位作者 牟茂森 侯颖春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期783-786,共4页

目的:探讨黏着斑激酶(FAK)表达水平对结直肠癌细胞增殖及运动的影响。方法:针对FAK基因不同靶点设计siRNA序列,构建siRNA重组子,转染Caco-2细胞,以RT-PCR和免疫细胞化学方法检测FAK mRNA和蛋白表达变化及时间效应,同时检测FAK基因敲低对... 目的:探讨黏着斑激酶(FAK)表达水平对结直肠癌细胞增殖及运动的影响。方法:针对FAK基因不同靶点设计siRNA序列,构建siRNA重组子,转染Caco-2细胞,以RT-PCR和免疫细胞化学方法检测FAK mRNA和蛋白表达变化及时间效应,同时检测FAK基因敲低对Caco-2细胞的凋亡、增殖及迁移的影响。结果:FAK siRNA导入Caco-2细胞后,FAK mRNA和蛋白表达水平明显下调,细胞增殖及迁移能力受抑,呈时间依赖关系,FAK mRNA水平下调在转染后48h达到最大。结论:FAK siRNA可有效抑制靶基因表达,FAK表达水平下调后Caco-2细胞的增殖及运动明显受抑制。 展开更多

关键词 小干扰RNA 结直肠癌 FAK 细胞增殖 细胞运动

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人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：3

17

作者 刘东海 张更荣 +2 位作者 张乐鸣 张顺 董虹 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期486-489,共4页

目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。 方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C... 目的 :从海马组织提取中国人神经生长因子基因 (NGFβ) ,分析中国人NGFβ序列 ,再克隆成熟肽部分 ,使NGFβ在大肠杆菌中表达。 方法 :提取组织总RNA进行逆转录 ,克隆到PCRⅡ载体 ,得 6 5 0bpDNA片段 ,以PCRⅡ /NGFβ载体为模板 ,扩增C端成熟肽部分 ,并克隆到PG5中 ,转化大肠杆菌BL2 1用异丙基 - β -D -半乳糖苷(IPTG)诱导培养。表达产物提纯、复性后 ,进行活性测定。结果 :NGFβcDNA全序列为 10 4 7bp ,所克隆的蛋白编码部分为 6 36bp ,由 2 12个氨基酸组成 ,序列分析结果与Genebank完全一致 ,成熟肽部分表达后 ,经SDS -PAGE电泳在 14kD左右有 1条明显的新增蛋白带 ,与预期的分子量相符 ,并Western印迹证实 ,rNGF约占菌体蛋白 10 %左右。结论 :通过序列分析证实 ,重组NGFβ在大肠杆菌中获得较高水平的表达 。 展开更多

关键词 人神经生长因子β亚基 CDNA 克隆 大肠杆菌 重组 序列分析 基因表达

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舌癌单细胞培养建系与癌干细胞相关标志的检测 被引量：3

18

作者 姚金光 解继胜 +3 位作者 李俊 韦星 杨永荣 陈海波 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期86-90,共5页

目的以舌癌Tca8113M1细胞系单细胞培养建系为基础,观察Tca8113M1细胞系中舌癌干细胞存在的现象及其相关标志的变化规律。方法选取Tca8113M1细胞系,以有限稀释法进行体外单细胞培养并建立细胞亚系,在证实其成瘤性的基础上,进一步采用流... 目的以舌癌Tca8113M1细胞系单细胞培养建系为基础,观察Tca8113M1细胞系中舌癌干细胞存在的现象及其相关标志的变化规律。方法选取Tca8113M1细胞系,以有限稀释法进行体外单细胞培养并建立细胞亚系,在证实其成瘤性的基础上,进一步采用流式细胞术检测癌干细胞相关标志CD44、CD184、细胞外可溶性抗原(ESA)的表达情况,着重观察单个细胞培养形成细胞克隆的形态与时间。结果以有限稀释法获取192个Tca8113M1舌癌单个细胞,在96孔板中进行体外培养,获取12个细胞亚系(获取比例为6.25%),均有高成瘤性。癌干细胞相关标志CD44与ESA均为高水平表达,而CD184表达则在12个细胞系之间有差异。在单个细胞培养中,形成完全克隆、部分克隆与旁克隆3种形态,12个细胞亚系均源于单个细胞形成的完全克隆,均可进行连续传代与扩增,而部分克隆与旁克隆则在后续培养中逐渐衰老与消亡。结论 Tca8113M1细胞系中可能存在癌干细胞,而单细胞培养可形成完全克隆并建立细胞亚系,是进行舌癌干细胞后续研究重要的细胞培养模式。 展开更多

关键词 单细胞 有限稀释法 舌癌干细胞 完全克隆

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骨实质来源间质干细胞对博莱霉素诱导小鼠肺损伤的保护作用 被引量：4

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作者 王莉 方妮 +2 位作者 张伟京 李秀森 刘兵 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1220-1224,共5页

目的观察小鼠骨实质来源间质干细胞(MSCs)对博莱霉素诱导的小鼠肺损伤的保护作用。方法分离培养小鼠骨实质MSCs,通过流式细胞术和诱导分化培养,鉴定其免疫表型和分化潜能。56只雌性C57BL/6小鼠分为8组(每组7只):正常对照组,马利兰(BUS)... 目的观察小鼠骨实质来源间质干细胞(MSCs)对博莱霉素诱导的小鼠肺损伤的保护作用。方法分离培养小鼠骨实质MSCs,通过流式细胞术和诱导分化培养,鉴定其免疫表型和分化潜能。56只雌性C57BL/6小鼠分为8组(每组7只):正常对照组,马利兰(BUS)组,博来霉素(BLM)组,马利兰+博来霉素(BLM+BUS)组,博来霉素+MSCs(BLM+MSCs)组,马利兰+博来霉素+MSCs(BLM+BUS+MSCs)组;其中,BLM+MSCs组和BLM+BUS+MSCs组根据给予细胞数量不同再分为两个亚组:BLM+MSCs 1组(输注5×105个MSCs)和BLM+MSCs 2组(输注2.5×105个MSCs);BLM+BUS+MSCs 1组(输注5×105个MSCs)和BLM+BUS+MSCs 2组(输注2.5×105个MSCs)。细胞输注后14d处死小鼠,分析肺组织病理变化和羟脯氨酸含量。结果小鼠骨实质MSCs为成纤维样细胞,免疫表型为Sca-1、CD44、CD29、CD105阳性,CD34、CD45、CD11b、CD31阴性,在体外能够分化为脂肪细胞和成骨细胞。经静脉输注骨实质MSCs能够减轻博莱霉素诱导的小鼠肺损伤;在BLM+MSCs组,输注2.5×105MSCs较5×105MSCs能更明显地改善肺损伤;BLM+BUS+MSCs组与BLM+MSCs组比较,肺组织病变明显减轻。正常对照组、BUS组、BLM组、BLM+BUS组、BLM+MSCs 1组、BLM+MSCs 2组、BLM+BUS+MSCs 1组、BLM+BUS+MSCs 2组小鼠肺组织羟脯氨酸含量分别为0.72±0.05、0.79±0.10、1.37±0.09、1.22±0.16、1.24±0.14、1.01±0.15、1.03±0.19、0.88±0.12μg/mg。与正常对照组比较,BLM组和BLM+BUS组羟脯氨酸含量明显上升(P<0.01);BLM+MSCs组、BLM+BUS+MSCs组(MSCs输注组)分别与BLM组、BLM+BUS组(阳性对照组)相比,羟脯氨酸含量明显下降(P<0.01);而在BLM+BUS+MSCs组的肺组织羟脯氨酸含量均低于BLM+MSCs组(P<0.01)。结论小鼠骨实质MSCs具有间充质干细胞的特征;经静脉输注骨实质MSCs对博莱霉素诱导的小鼠肺损伤具有保护性作用;骨实质MSCs在肺内的作用与输注细胞数量有关;在博莱霉素诱导肺损伤后,马利兰与骨实质MSCs共同作用有助于减轻肺泡炎和肺纤维化的程度。 展开更多

关键词 间质干细胞 骨 小鼠 肺纤维化

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阿司匹林对结肠癌细胞凋亡及Fas/FasL表达的影响 被引量：7

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作者 陆维祺 艾志龙 沈兆忠 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2003年第4期350-352,共3页

目的:探讨阿司匹林对结直肠癌化学预防的机理。方法:培养结肠癌细胞株Caco-2,用不同浓度阿司匹林进行干预,对细胞生长、增殖、凋亡及Fas/FasL表达进行观察、检测。结果:高浓度阿司匹林组细胞大量死亡,低浓度组促进细胞凋亡;25 mmol/L阿... 目的:探讨阿司匹林对结直肠癌化学预防的机理。方法:培养结肠癌细胞株Caco-2,用不同浓度阿司匹林进行干预,对细胞生长、增殖、凋亡及Fas/FasL表达进行观察、检测。结果:高浓度阿司匹林组细胞大量死亡,低浓度组促进细胞凋亡;25 mmol/L阿司匹林组可见Fas表达,而对照组不表达;25 mmol/L阿司匹林组FasL表达与对照组相比明显降低。结论:低浓度阿司匹林促进结肠癌细胞凋亡,其机理与诱导Fas表达、下调FasL表达有关。 展开更多

关键词 阿司匹林 结肠癌 细胞凋亡 FAS/FASL 表达 影响

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