目的探讨NF-κB基因对胰腺癌细胞侵袭的影响及机制。方法应用NF-κB基因小干扰RNA(siRNA)转染处理人胰腺癌PANC-1细胞,采用W estern b lot方法检测NF-κB蛋白水平,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞侵袭能力。收集转染48 h的癌细胞,采...目的探讨NF-κB基因对胰腺癌细胞侵袭的影响及机制。方法应用NF-κB基因小干扰RNA(siRNA)转染处理人胰腺癌PANC-1细胞,采用W estern b lot方法检测NF-κB蛋白水平,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞侵袭能力。收集转染48 h的癌细胞,采用包含有96个转移相关基因的芯片检测基因表达情况;根据基因芯片结果,随机抽取3个表达明显变化的基因采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)验证基因芯片结果。结果转染组癌细胞NF-κB蛋白水平下调(P<0.05),且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞的穿膜细胞数减少(P<0.05),且呈浓度依赖关系。基因芯片检测发现,96个基因中有11个基因表达出现明显变化,其中9个基因明显下调,包括基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-7和血管内皮生长因子(VEGF),有2个基因出现明显上调。采用荧光RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-7、VEGF基因表达,结果也发现这3个基因表达下调,且下调幅度与基因芯片结果一致。结论NF-κB基因siRNA转染可明显抑制胰腺癌细胞的锚着不依赖性增殖和恶性侵袭,其机制可能与下调MMP-2、MMP-7和VEGF有关。展开更多
文摘目的探讨NF-κB基因对胰腺癌细胞侵袭的影响及机制。方法应用NF-κB基因小干扰RNA(siRNA)转染处理人胰腺癌PANC-1细胞,采用W estern b lot方法检测NF-κB蛋白水平,采用Boyden小室模型试验检测癌细胞侵袭能力。收集转染48 h的癌细胞,采用包含有96个转移相关基因的芯片检测基因表达情况;根据基因芯片结果,随机抽取3个表达明显变化的基因采用荧光实时定量PCR(RT-PCR)验证基因芯片结果。结果转染组癌细胞NF-κB蛋白水平下调(P<0.05),且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞的穿膜细胞数减少(P<0.05),且呈浓度依赖关系。基因芯片检测发现,96个基因中有11个基因表达出现明显变化,其中9个基因明显下调,包括基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-7和血管内皮生长因子(VEGF),有2个基因出现明显上调。采用荧光RT-PCR方法检测MMP-2、MMP-7、VEGF基因表达,结果也发现这3个基因表达下调,且下调幅度与基因芯片结果一致。结论NF-κB基因siRNA转染可明显抑制胰腺癌细胞的锚着不依赖性增殖和恶性侵袭,其机制可能与下调MMP-2、MMP-7和VEGF有关。
