痰细胞p53和ras基因突变检测诊断价值的研究 被引量：1

1

作者 张贺龙 王文亮 崔大祥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第4期299-301,共3页

肺癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤，其发病率逐年增加，临床上所诊断的肺癌的８０％属晚期，失去了手术治疗的机会，５年生存率很低。寻找能诊断尤其是早期诊断肺癌的方法十分必要。分子生物学技术的发展为肺癌的基因诊断提供了可... 肺癌是严重危害人类健康的常见恶性肿瘤，其发病率逐年增加，临床上所诊断的肺癌的８０％属晚期，失去了手术治疗的机会，５年生存率很低。寻找能诊断尤其是早期诊断肺癌的方法十分必要。分子生物学技术的发展为肺癌的基因诊断提供了可能。作者应用聚合酶链反应－单链构象... 展开更多

关键词 肺肿瘤 痰 P53基因 诊断 RAS基因

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mRNA差异展示研究胃癌差异表达基因 被引量：6

2

作者 崔大祥 闫小君 +2 位作者 王枫 赵锦荣 苏成芝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第4期379-382,共4页

以胃癌细胞株GC790 1与胃粘膜细胞株GES 1为对比材料 ,利用mRNA差异展示技术 ,研究胃粘膜至胃癌过程的差异表达基因 ,为建立胃癌预警系统打下基础 .获得 8个未知的与胃癌相关的cDNA ,命名为GCYS 1,2 ,3,4,5 ,6 ,7,2 0 ,完成其克隆及序... 以胃癌细胞株GC790 1与胃粘膜细胞株GES 1为对比材料 ,利用mRNA差异展示技术 ,研究胃粘膜至胃癌过程的差异表达基因 ,为建立胃癌预警系统打下基础 .获得 8个未知的与胃癌相关的cDNA ,命名为GCYS 1,2 ,3,4,5 ,6 ,7,2 0 ,完成其克隆及序列分析 ,RNA印迹证实GCYS 1至 7片段与GCYS 2 0基因在GC790 1细胞株中呈高表达 ,在GES 1细胞株中呈低表达 .此 8个序列在GenBank数据库中登录 ,接受号为AF0 5 416 2～AF0 5 6 16 8及AF2 19140 . 展开更多

关键词 胃癌 细胞株 mRNA差异展示 基因克隆

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应用TDI-FP技术分析宫颈癌组织HPV16 E7基因A647G点突变(英文) 被引量：1

3

作者 高艳娥 张菊 +2 位作者 樊江波 陈中灿 阎小君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1199-1203,共5页

模板指导的末端碱基掺入反应结合荧光偏振检测技术(templatedirectdye-terminatorincorporationwithfluorescence-polarization,TDI-FP)是SNP检测新技术.应用TDI-FP方法分析中国陕西HPV16阳性宫颈组织HPV16E7基因第647位核苷酸A→G热点... 模板指导的末端碱基掺入反应结合荧光偏振检测技术(templatedirectdye-terminatorincorporationwithfluorescence-polarization,TDI-FP)是SNP检测新技术.应用TDI-FP方法分析中国陕西HPV16阳性宫颈组织HPV16E7基因第647位核苷酸A→G热点突变(即A647G),首先在HPV16阳性的91例宫颈癌及49例正常/宫颈炎妇女宫颈DNA标本中,PCR扩增含647位点在内的HPV16E7部分基因,然后将紧邻647位点5′端的寡核苷酸探针与PCR产物内的模板杂交,并延伸一个与647位点碱基互补的荧光标记碱基:TAMRA-ddTTP或R110-ddCTP.用荧光偏振仪读取荧光偏振(FP)值,根据升高的相应FP值判断647位点碱基.结果表明,宫颈组织HPV16E7A647G的总体检出率为35.71%(50/140).宫颈癌组的A→G突变率为42.86%(39/91),显著高于正常/宫颈炎组22.45%(11/49)的突变率(x2=5.778,P=0.016),两组间的OR值为2.59(95%CI=1.17￣5.71).提示TDI-FP可用于HPV有意义点突变的分析;我国陕西地区妇女HPV16A647G突变率及其对宫颈癌的警示性与其他地区相比有明显差异,该地区携带此突变病毒株的妇女患宫颈癌的风险可能较高. 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒16型 E7基因 突变 荧光偏振 宫颈癌

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人GLUT4基因的克隆及原核表达的初步实验研究

4

作者 焦凯 张菊 +1 位作者 孙脊峰 刘晓宇 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期108-110,123,共4页

目的　通过反转录聚合酶链方法 ,从人新鲜手术肌肉组织获得人葡萄糖转运子 4 (GLUT4 )cDNA基因 ,并分别克隆入测序载体、表达载体 ,获得具有正确序列的目的基因及其原核表达产物 ,为其进一步的抗体制备、活性鉴定及研究应用奠定物质基... 目的　通过反转录聚合酶链方法 ,从人新鲜手术肌肉组织获得人葡萄糖转运子 4 (GLUT4 )cDNA基因 ,并分别克隆入测序载体、表达载体 ,获得具有正确序列的目的基因及其原核表达产物 ,为其进一步的抗体制备、活性鉴定及研究应用奠定物质基础。方法　经GenBank在线检索 ,设计、确定人GLUT4cDNA基因特异引物 ,采用反转录聚合酶链 (RT PCR)方法从一例手术的人新鲜腹部肌肉组织总RNA模板中 ,获得人GLUT4表达片段cDNA的基因 ,经克隆入测序载体pGEM 3zf(- )测序 ,验证cDNA大小、完整性及序列。再克隆入表达载体 pBV2 2 0 ,经温度诱导 ,在E .coli获得表达。结果　以设计的特异引物 ,从人肌肉组织模板中能得到预期大小完整的人GLUT4cDNA基因 ,并能插入预定的克隆载体中测序 ,所得基因的序列与目的基因的序列相符。所获GLUT4cDNA基因插入原核非融合表达载体pBV2 2 0 ,获得预期大小的重组表达产物。结论　从人肌肉组织中能获得具有正确序列、含完整起始及终止密码的人GLUT4cDNA基因。 展开更多

关键词 GLUT4基因 基因克隆 基因表达 实验 基因序列

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MBL基因突变检测新方法及RRTI患者的突变研究

5

作者 薛丽 赵新 +3 位作者 杨芳 赵锦荣 张文红 白玉杰 《海南医学院学报》 CAS 2010年第10期1248-1252,共5页

目的:建立一种新的MBL基因突变检测方法,并分析反复呼吸道感染儿童中突变频率及发病相关性。方法:PCR扩增MBL基因第一外显子区段,核酸外切酶和碱性磷酸酶降解,清除PCR产物中残余引物和dNTPs,经引物延伸反应荧光素(R110或TAMRA)标记终止... 目的:建立一种新的MBL基因突变检测方法,并分析反复呼吸道感染儿童中突变频率及发病相关性。方法:PCR扩增MBL基因第一外显子区段,核酸外切酶和碱性磷酸酶降解,清除PCR产物中残余引物和dNTPs,经引物延伸反应荧光素(R110或TAMRA)标记终止碱基特异性掺入引物的3′-末端,测定荧光偏振值判断掺入碱基及突变类型。用所建立方法检测46例反复呼吸道感染(RRTI)患儿和50例健康对照的MBL突变。结果:所建立方法检测MBL突变经测序验证完全正确。在临床RRTI患儿及对照组中发现54位密码子G>A突变,健康儿童中野生纯合型(G/G)39例(78.00%)、杂合型(G/A)8例(16.00%)、纯合突变(A/A)3例(6.00%);RRTI患儿中野生纯合型(G/G)18例(39.13%)、杂合型(G/A)22例(47.83%)、纯合突变(A/A)6例(13.04%);RRTI患儿组A等位基因频率显著高于对照组。患儿和对照组均未检测到52和57位密码子突变。结论:MBL 54G>A突变与RRTI发病风险相关,所建立的MBL基因多态性快速检测方法可用于小儿反复呼吸道感染辅助诊断和高风险人群的筛查。 展开更多

关键词 甘露聚糖结合凝集素 基因突变 反复呼吸道感染 荧光偏振

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A组轮状病毒一步法RT-PCR检测技术的建立和应用研究

6

作者 王信隆 闫小君 +1 位作者 梁未丽 王莹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期450-451,共2页

目的设计A组轮状病毒RV特异性引物,应用Tth酶,建立一步法RT-PCR扩增方案,检测西安地区腹泻幼儿196份粪便标本,并与本室研制建立的反向间接血凝法RPHA,聚丙烯酰胺凝胶电泳,市售ELISA试剂盒平行检测对比分析。方法设计并合成第九基因序列... 目的设计A组轮状病毒RV特异性引物,应用Tth酶,建立一步法RT-PCR扩增方案,检测西安地区腹泻幼儿196份粪便标本,并与本室研制建立的反向间接血凝法RPHA,聚丙烯酰胺凝胶电泳,市售ELISA试剂盒平行检测对比分析。方法设计并合成第九基因序列保守区互补的特异性引物,在经典法RT-PCR试验成功的基础上,建立合理的一步法RT-PCR。结果四种检测结果阳性率分别为33.16%,23.47%,21.94%和25%,X2检验表明,RT-PCR最为敏感。结论反转录和PCR由Tth酶一步完成,克服了经典法中AMV、RNasin等试剂昂贵,操作繁锁等缺点,很适合临检需要。 展开更多

关键词 轮状病毒 逆转录一聚合酶链反应 反向间接血凝试验

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外源核酸促核辐射鼠肠腺细胞修复的基因分析 被引量：14

7

作者 崔大祥 曾桂英 +6 位作者 王枫 田芙蓉 郭晏海 徐俊荣 闫小君 任东清 苏成芝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期353-357,共5页

初步探讨外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺细胞修复的分子机理 .建立BALB/c小鼠电离辐射后给予外源RNA与生理盐水治疗的 6h、 12h、 2 4h、 4d和 8d的模型 ,采集空肠组织标本后采用消减杂交基础上的LD PCR技术 ,获取与受照小鼠肠腺损... 初步探讨外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺细胞修复的分子机理 .建立BALB/c小鼠电离辐射后给予外源RNA与生理盐水治疗的 6h、 12h、 2 4h、 4d和 8d的模型 ,采集空肠组织标本后采用消减杂交基础上的LD PCR技术 ,获取与受照小鼠肠腺损伤修复相关的基因克隆 ,对其进行全自动序列分析与GenBank检索 . 6h治疗组同源性较高的序列主要为 :热休克蛋白mRNA、NmimRNA、Dutt1蛋白mRNA、Na ,K ATPaseγ亚单位mRNA等 ;12h治疗组同源性较高的序列为 :碱性磷酸酶mRNA、碱性磷酸酶 2、glkA基因、单链复制着丝粒基因等 ;2 4h治疗组同源性较高的序列为 :抗CEA单链抗体重链可变区基因、抗DNA重链可变区基因、Igkappa链mRNA等 ;4d治疗组同源性较高的序列为 :双特异性磷酸酶、端粒酶相关蛋白家族mRNA、β GABA转运基因、紧张激活蛋白mRNA、FK5 0 6结合蛋白、Ca2 +/Ca2 +调蛋白依赖性基因等 ;8d治疗组同源性较高的序列为 :免疫球蛋白可变区基因、鼠免疫球蛋白DNA、易弯曲肽DNA、tsrglkA基因、修复蛋白A等 .新发现的 18个基因片段递交给GeneBank ,接受号为AF2 40 16 4 AF2 40 181.结果表明 :外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺修复的机理可能与一些基因、蛋白质的异常表达有关 ,与免疫系统的作用可能有关 . 展开更多

关键词 小鼠 电离辐射 细胞修复 表达基因 外源核酸 肠道辐射损伤

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caspase-6基因诱导成骨肉瘤细胞凋亡 被引量：5

8

作者 丁勇 范清宇 +2 位作者 崔大祥 张殿忠 殷剑宁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第4期261-264,共4页

目的:探讨caspase-6对成骨肉瘤细胞株的凋亡诱导作用。方法:应用RT-PCR方法检测成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中caspase-6基因的表达水平。以腺病毒adv5作载体,构建含caspase-6基因的转基因载体,用脂质体包裹法转染SOSP-9607细胞株,用RT-PCR... 目的:探讨caspase-6对成骨肉瘤细胞株的凋亡诱导作用。方法:应用RT-PCR方法检测成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中caspase-6基因的表达水平。以腺病毒adv5作载体,构建含caspase-6基因的转基因载体,用脂质体包裹法转染SOSP-9607细胞株,用RT-PCR方法检测转染后SOSP-9607细胞中caspase-6基因的表达。用MTF法检测转染caspase-6对SOSP-9607细胞株生长的影响。结果:成骨肉瘤细胞株SOSP-9607中未检出caspase-6表达。RT-PCR法证实转染。caspase-6后SOSP-9607中caspase-6表达显著增强,MTT检测显示对SOSP-9607细胞的生长有抑制作用,形态学观察及DNA电泳证实转染后的细胞株存在细胞凋亡特征。结论:caspase-6对成骨肉瘤细胞的生长有抑制作用,并可诱导成骨肉瘤细胞凋亡。 展开更多

关键词 成骨肉瘤细胞 细胞凋亡 基因转染 caspase-6基因

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克隆差异表达基因的新策略 被引量：6

9

作者 崔大祥 闫小君 +1 位作者 王枫 苏成芝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第4期362-364,共3页

基因表达的变化有两种 ,即新出现的基因表达与表达量差异的基因表达 .表达量差异的基因克隆技术主要有mRNA差异展示 ,此技术是目前筛选差异表达基因最有效的方法之一 ,但主要存在假阳性率高的不足 ,针对此缺点 ,近几年提出了新的策略与... 基因表达的变化有两种 ,即新出现的基因表达与表达量差异的基因表达 .表达量差异的基因克隆技术主要有mRNA差异展示 ,此技术是目前筛选差异表达基因最有效的方法之一 ,但主要存在假阳性率高的不足 ,针对此缺点 ,近几年提出了新的策略与方法 ,如差异消减展示、基于PCR和减法杂交基础上的差异表达基因克隆技术 ,这些技术具有显著优势 . 展开更多

关键词 基因表达 克隆 差异表达基因

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甲基化特异性PCR检测FMR1和XIST基因甲基化实验方法的建立 被引量：4

10

作者 杨芳 赵新 +3 位作者 张文红 薛丽 王琰 白玉杰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期914-918,共5页

建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因(fragile X mental retardation,FMR1)、X染色体失活基因(Xchromosome inactivation,XIST)甲基化的方法.用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰.以修饰后的DNA为模板,用两套不同的引物... 建立一种快速、灵敏的检测脆性X智障基因(fragile X mental retardation,FMR1)、X染色体失活基因(Xchromosome inactivation,XIST)甲基化的方法.用亚硫酸氢钠和对苯二酚对基因组DNA进行脱氨基修饰.以修饰后的DNA为模板,用两套不同的引物对:1对甲基化特异性引物和1对非甲基化特异性引物扩增FMR1基因(CGG)n重复序列区、FMR1和XIST基因的启动子区.PCR产物进一步克隆、测序.以亚硫酸氢钠和对苯二酚脱氨基修饰后的DNA为模板进行PCR扩增后的产物与预期基因目的基因片段大小相符合,无非特异性扩增产物.测序结果表明,FMR1、XIST基因中的非甲基化的C碱基转变为U碱基,而CpG岛被甲基化的C碱基不改变.成功地建立了检测FMR1、XIST甲基化的方法,为实验室诊断脆性X综合征提供了新的方法. 展开更多

关键词 脆性X智障基因 X染色体失活基因 甲基化特异性PCR 甲基化检测

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乙脑病毒核酸诊断方法的建立及应用 被引量：7

11

作者 郭进军 张国英 +1 位作者 赵中夫 阎小君 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第5期67-69,共3页

目的　建立一种新的乙脑病毒基因诊断方法 ,并进行大样本检测。方法　使用一步反转录巢式PCR进行乙脑患者血液及脑脊液的病毒核酸检测 ,并与 2 -巯基乙醇耐性试验进行对比检测。结果　 2 16例乙脑就诊患者血清的PCR阳性率为 77.8% ,2 -M... 目的　建立一种新的乙脑病毒基因诊断方法 ,并进行大样本检测。方法　使用一步反转录巢式PCR进行乙脑患者血液及脑脊液的病毒核酸检测 ,并与 2 -巯基乙醇耐性试验进行对比检测。结果　 2 16例乙脑就诊患者血清的PCR阳性率为 77.8% ,2 -ME阳性率为 4 5 .3 7% ,脑脊液的PCR阳性率为 93 .2 0 % ,2 -ME阳性率为 3 7.3 8% ,有显著性差异。对不同病程日乙脑患者的检测 ,在初期和极期早期PCR的阳性检测率高 ,在极期后期和恢复期 2 -ME的阳性检测率高。结论　PCR法为一种适合于乙脑早期特异性诊断的新型基因诊断技术。 展开更多

关键词 乙型脑炎 聚合酶链反应 PCR 免疫学 诊断学 核酸

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宫颈癌患者人乳头瘤病毒16型E6基因的克隆及序列分析 被引量：3

12

作者 高艳娥 张菊 +2 位作者 阎小君 宋天保 李丁 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期17-19,共3页

目的　分析中国陕西地区宫颈癌患者人乳头瘤病毒 16型 (HPV16型 )E6基因的结构特点。方法　采用PCR技术扩增了 1例HPV16阳性宫颈癌患者癌组织中HPV16E6基因 ,并对其进行了克隆及全序列分析。结果　成功地克隆了HPV16E6基因 ,与GenBank... 目的　分析中国陕西地区宫颈癌患者人乳头瘤病毒 16型 (HPV16型 )E6基因的结构特点。方法　采用PCR技术扩增了 1例HPV16阳性宫颈癌患者癌组织中HPV16E6基因 ,并对其进行了克隆及全序列分析。结果　成功地克隆了HPV16E6基因 ,与GenBank收录的原型相比 ,E6基因中有 2个碱基发生突变 ,推导其编码的氨基酸有 1个发生了变化。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒16型 E6基因 宫颈癌 序列分析

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TNFα基因-863位点单核苷酸多态性与宫颈癌以及HPV感染的关系 被引量：3

13

作者 尉春艳 吴静 +2 位作者 张熙 张菊 高艳娥 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期225-228,243,共5页

目的探讨TNFα基因-863位点的单核苷酸多态性与宫颈癌以及HPV感染的关系。方法采用模板介导的染料终止物掺入一荧光偏振检测（TDI-FP）的方法对59例宫颈癌以及22例对照进行TNFα基因一863位点的单核苷酸多态性检测。结果宫颈癌组的TNF... 目的探讨TNFα基因-863位点的单核苷酸多态性与宫颈癌以及HPV感染的关系。方法采用模板介导的染料终止物掺入一荧光偏振检测（TDI-FP）的方法对59例宫颈癌以及22例对照进行TNFα基因一863位点的单核苷酸多态性检测。结果宫颈癌组的TNFα基因-863位点A等位基因频率（39．0％）较对照组（14．6％）明显升高（P〈0．01，OR=2．673，95％CI：1．300～5．497）；AA基因型在宫颈癌组和对照组中分别为15．3％和0，差异显著（P〈0．05）；CA基因型在两组中分别为47．5％和29．2％，差异显著（P〈O．05）；A等位基因频率在HPV阳性者与HPV阴性者之间没有显著性差异（P〉0．05，OR：1．950，95％CI：0．840～4．527），但是在HPV阳性者中具有增高趋势（37．5％），高于HPV阴性者（19．2％）。结论TNFα基因863位点A等位基因以及CA、AA基因型与宫颈癌的危险性升高有关，与HPV感染危险性无关。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子Α 宫颈肿瘤 人乳头瘤病毒 单核苷酸多态性 荧光偏振

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人胃癌细胞一种高表达基因的克隆及序列测定 被引量：2

14

作者 赵锦荣 阎小君 +4 位作者 韩锋产 崔大祥 侯瑜 严泉剑 苏成芝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期99-102,共4页

采用DDRT PCR法 ,以人胃上皮细胞GES 1为对照 ,从人胃癌细胞SGC 790 1中克隆高表达基因 ,并对所克隆的基因进行斑点杂交分析 ,序列测定 ,序列相似性分析及开放读框分析 .斑点杂交分析结果表明所获克隆YA6 1为人胃癌细胞SGC 790 1中高表... 采用DDRT PCR法 ,以人胃上皮细胞GES 1为对照 ,从人胃癌细胞SGC 790 1中克隆高表达基因 ,并对所克隆的基因进行斑点杂交分析 ,序列测定 ,序列相似性分析及开放读框分析 .斑点杂交分析结果表明所获克隆YA6 1为人胃癌细胞SGC 790 1中高表达基因 .序列相似性分析结果表明该基因序列为一新基因序列 .GenBank收录号为AF2 2 0 415 .开放读框分析结果表明该基因序列有一完全开放读框 . 展开更多

关键词 胃上皮细胞 胃癌 差异表达基因 序列测定

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L1抗原冲击的树突细胞治疗尖锐湿疣的初步研究 被引量：2

15

作者 张菊 阎小君 +3 位作者 尹国武 何玉宪 段杰 苏成芝 《实用医学杂志》 CAS 2002年第2期129-131,共3页

目的 :观察体外表达的HPV6 ,11L1抗原冲击的自身树突细胞免疫治疗 ,对人乳头状瘤病毒感染致反复复发生殖器尖锐湿疣的免疫及病理学作用及疗效。方法 :2 0 9例反复复发 3次以上 ,顽固型尖锐湿疣患者 ,按知情同意原则 ,分别予常规或L1抗... 目的 :观察体外表达的HPV6 ,11L1抗原冲击的自身树突细胞免疫治疗 ,对人乳头状瘤病毒感染致反复复发生殖器尖锐湿疣的免疫及病理学作用及疗效。方法 :2 0 9例反复复发 3次以上 ,顽固型尖锐湿疣患者 ,按知情同意原则 ,分别予常规或L1抗原冲击的树突细胞免疫治疗。全体患者随访 6个月 ,疗程前后取疣体 ,分别行PCR ,HE及免疫组化染色观察。结果 :L1抗原冲击的自身树突细胞免疫治疗后 ,患者细胞免疫功能较常规疗法有显著改善 ,病灶处组织中大量免疫细胞浸润 ,空泡细胞减少 ,病毒感染清除或减轻。结论 :L1抗原冲击的树突细胞免疫对于改善反复复发、顽固型人乳头状瘤病毒感染的生殖器尖锐湿疣患者的细胞免疫功能 ,及病变局部免疫状态有显著作用。 展开更多

关键词 树突细胞 治疗 尖锐湿疣 研究 L1抗原冲击 乳头状瘤病毒

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HPV58 E6的基因克隆及HLA-DQB1*03限制性T细胞表位分析 被引量：2

16

作者 陈凌 沈柱 +3 位作者 伍津津 张菊 周杨 范雪莉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1004-1006,共3页

目的:克隆HPV58E6的基因,并对其HLA-DQB1*03限制性T细胞表位进行分析。方法:从宫颈癌组织中提取基因组DNA,通过PCR方法扩增HPV58E6基因,常规方法将目的基因插入pGEM-TEasy载体中。酶切和测序鉴定后,利用位置特异性分数矩阵(PSSM)理论、... 目的:克隆HPV58E6的基因,并对其HLA-DQB1*03限制性T细胞表位进行分析。方法:从宫颈癌组织中提取基因组DNA,通过PCR方法扩增HPV58E6基因,常规方法将目的基因插入pGEM-TEasy载体中。酶切和测序鉴定后,利用位置特异性分数矩阵(PSSM)理论、支持向量机(SVM)理论和蛋白酶体酶切位点预测算法分析HPV58E6的HLA-DQB1*03限制性T细胞表位。结果:成功克隆了1株HPV58E6基因(GenBank EF060239),表位47FADLRIAY-RDGNPFA和表位102RCIICQRPLCPQEKK理论上是其HLA-DQB1*03限制性T细胞表位。结论:这两个表位可望作为后续相关实验中表位筛选、鉴定和多肽疫苗研制的候选对象。 展开更多

关键词 HPV58 E6 基因克隆 T细胞表位

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高危HPV16 E4基因的表达纯化及临床应用 被引量：1

17

作者 高艳娥 惠慧 +2 位作者 张菊 樊江波 阎小君 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期676-681,共6页

目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16 E4重组表达体并表达纯化获得HPV16 E4重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16 E4血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E4基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E4表达重组体,转... 目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16 E4重组表达体并表达纯化获得HPV16 E4重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16 E4血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E4基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E4表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被酶联免疫吸附实验(ELISA)板,检测正常女性、慢性宫颈炎和宫颈癌患者血清抗体。结果:pRSET-16E4表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr15×103的HPV16 E4组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的30%。表达形式为包涵体,重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者中,其血清抗体阳性率分别为10.00%,39.13%和28.13%,宫颈癌患者HPV16 E4血清抗体阳性率显著高于正常人,且慢性宫颈炎患者HPV16 E4血清抗体阳性率也显著高于正常人,但宫颈癌组HPV16 E4血清抗体阳性率与慢性宫颈炎组间的差异无统计学意义。结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16 E4融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌和慢性宫颈炎患者HPV16E4血清抗体阳性率均明显高于正常人。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒16型 E4蛋白 基因表达 血清抗体 宫颈癌

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食管鳞状上皮细胞癌及癌旁组织中HPV11 L1基因克隆及序列比较

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作者 马群风 江红 +4 位作者 刘锟 冯永强 周勇安 王小平 李谨瑜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期251-254,共4页

目的克隆食管癌组织和癌旁组织中HPV11型主要衣壳蛋白L1基因,并比较两个序列间的同源性。方法以食管癌组织和癌旁组织纯化的总DNA为模板,根据HPV11型L1基因的保守区分段设计引物。分两段扩增HPVL1基因,克隆入质粒载体中,pGEM-3Zf(-)以... 目的克隆食管癌组织和癌旁组织中HPV11型主要衣壳蛋白L1基因,并比较两个序列间的同源性。方法以食管癌组织和癌旁组织纯化的总DNA为模板,根据HPV11型L1基因的保守区分段设计引物。分两段扩增HPVL1基因,克隆入质粒载体中,pGEM-3Zf(-)以双脱氧法双向测定目的片段的序列,并拼接出该片段的全序列,比较两个序列间的同源性,以及与已知基因序列的差异性。结果从1例食管癌患者食管癌组织和癌旁组织中,分别克隆到1株HPV11型L1的编码序列M1和M2,两序列间的同源性极高,仅在个别位点存在差异。与GenBank中登录的HPV序列NC001525.1(HPV-11)、M14119.1(HPV-11)和AF217526.1(HPV-11)相比较大部分相同。结论成功地构建了HPV11型L1基因上游片段pGEM-3Zf(-)和下游片段pGEM-3Zf(-)的重组克隆,为深入研究HPV的感染与食管癌发病机制的关系奠定了基础。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 人乳头状瘤病毒 聚合酶链反应 分子克隆 序列分析

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人类乳头瘤病毒16型早期基因178位(T→G)突变分析

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作者 樊江波 吴静 +3 位作者 高艳娥 张菊 张格林 曲群 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期773-777,共5页

目的检测宫颈癌患者高危型人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型阳性标本中早期基因(E6基因)178位(T→G)点突变情况。方法应用模板指导的染料终止子掺入-荧光偏振检测技术(TDI-FP)方法检测宫颈癌患者高危HPV16型E6基因178位点... 目的检测宫颈癌患者高危型人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16型阳性标本中早期基因(E6基因)178位(T→G)点突变情况。方法应用模板指导的染料终止子掺入-荧光偏振检测技术(TDI-FP)方法检测宫颈癌患者高危HPV16型E6基因178位点突变情况,以进一步明确此基因位点突变与宫颈癌变的相关性。结果应用TDI-FP法检测宫颈癌组织中高危HPV16型E6基因178位突变率为32.5%,与癌前病变及慢性宫颈炎患者相比,差异具有统计学意义(χ2=20.623,P<0.01)。结论宫颈癌患者HPV16型E6基因178位(T→G)突变率较高,可能是HPV致癌的一个高危因素。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒 宫颈癌 荧光偏振 基因突变

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心肌成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ刺激下表达下调基因的分离和鉴定

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作者 王新凤 高广道 +7 位作者 刘健 林元喜 国荣 楚雍烈 苏兴利 韩锋产 张文红 白玉杰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期31-34,共4页

目的:对成年大鼠心肌成纤维细胞(CF)受血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激后下调基因表达谱进行筛选及分析。方法:以受AngⅡ刺激CF为驱动方,未刺激CF为实验方,进行抑制消减杂交(SSH)建立消减cDNA文库。经斑点杂交筛选文库后将部分阳性克隆测序及... 目的:对成年大鼠心肌成纤维细胞(CF)受血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激后下调基因表达谱进行筛选及分析。方法:以受AngⅡ刺激CF为驱动方,未刺激CF为实验方,进行抑制消减杂交(SSH)建立消减cDNA文库。经斑点杂交筛选文库后将部分阳性克隆测序及进行同源性分析。结果:共获得17条下调表达基因,分别与胞内信号转导、转录抑制、纤维沉积和细胞骨架重构相关,并克隆到4条新基因表达序列标签(EST)。结论:SSH有效地克隆了成年大鼠CF受AngⅡ刺激后下调表达基因,对这些基因的研究将有助于阐明心肌改建的分子机制。 展开更多

关键词 血管紧张素Ⅱ 心肌 成纤维细胞 抑制性消减杂交 基因表达 表达下调基因

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