细胞生物学双语教学初探 被引量：4

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作者 胡劲松 党娜娜 宋土生 《西北医学教育》 2004年第4期307-308,共2页

介绍了在<细胞生物学>课中开展双语教学的一些做法与体会,从与双语教学密切相关的授课类型,教材的选择与利用,语言环境的营造,教学方法的选择,有效考核机制的建立等几个方面进行了探索.

关键词 双语教学 初探 语言环境 教学方法 授课 教材 探索 细胞生物学 做法与体会 利用

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抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析 被引量：4

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作者 袁建林 王智 +3 位作者 武国军 王禾 王栋 郝晓柯 《西安医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期197-200,共4页

目的　扩增出抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单克隆抗体 (mAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并进行原核表达及空间构象分析。方法　从分泌抗γ SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,经RT PCR扩增VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达... 目的　扩增出抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单克隆抗体 (mAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并进行原核表达及空间构象分析。方法　从分泌抗γ SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,经RT PCR扩增VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达载体 pGEX 4T 1中进行表达 ,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果　VH 单域抗体基因全长 363bp ,含起始码和终止码。将其克隆到 pGEX 4T 1内 ,转化大肠杆菌DH5α ,获得高效表达 ,表达量占全菌总蛋白质的 38% ,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后 ,用谷胱甘肽 (GST)亲和色谱纯化 ,再经凝血酶水解获得抗γ SmVH 单域抗体。竞争结合抑制实验证明 ,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示 ,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论　构建成功抗γ Sm的VH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。 展开更多

关键词 人γ-精浆蛋白 单域抗体 克隆 表达 前列腺癌

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两种菌落聚合酶链反应在抗体库筛选中的应用比较 被引量：3

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作者 薛国柱 窦科峰 +1 位作者 吕勇刚 药立波 《医学研究生学报》 CAS 2004年第12期1057-1058,1061,共3页

目的 :探讨两种菌落PCR方法在抗体库筛选中的应用价值。　方法 :分别以 5个阳性克隆细菌菌落直接悬浮于去离子水中及悬浮于含 0 .1%的TritonX 10 0后经水浴煮沸作为模板 ,进行PCR反应。同时提取质粒DNA ,进行双酶切鉴定。　结果 :5个克... 目的 :探讨两种菌落PCR方法在抗体库筛选中的应用价值。　方法 :分别以 5个阳性克隆细菌菌落直接悬浮于去离子水中及悬浮于含 0 .1%的TritonX 10 0后经水浴煮沸作为模板 ,进行PCR反应。同时提取质粒DNA ,进行双酶切鉴定。　结果 :5个克隆的菌落PCR及酶切鉴定均检测到目的基因。　结论 :菌落PCR可用于筛选阳性重组克隆。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 菌落 抗体库 目的基因

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抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体/人p53四价功能域融合基因的构建及空间构象分析 被引量：2

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作者 武国军 王智 +3 位作者 王栋 袁建林 王禾 郝晓柯 《西安医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第6期505-509,共5页

目的　构建抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)重链可变区 (VH)单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因 ,并进行空间构象分析。方法　选用人IgG3上游铰链区作为抗体和人p5 3四价功能域之间连接的linker。利用回归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p5 3... 目的　构建抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)重链可变区 (VH)单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因 ,并进行空间构象分析。方法　选用人IgG3上游铰链区作为抗体和人p5 3四价功能域之间连接的linker。利用回归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p5 3四价功能域融合基因 ,并在融合基因 5’端和 3’端引入SalⅠ与HindⅢ酶切位点 ,将融合基因克隆入 pUC1 9载体中构建pUC1 9/IgG3 /p5 3克隆载体。将抗人γ SmVH 单域抗体克隆入 pUC1 9/IgG3 /p5 3载体中 ,构建抗人γ SmVH 单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因。经酶切鉴定及序列测定证实后 ,利用计算机软件进行空间构象分析。结果　获得了抗人γ SmVH 单域抗体 /人 p5 3四价功能域融合基因 ,基因全长 5 2 8bp ,可编码 1 76个氨基酸 ,与已发表的抗人γ SmVH 单域抗体、人IgG3上游铰链区和人p5 3四价功能域基因cDNA序列一致。计算机软件分析结果显示 ,融合基因表达产物可自动装配成四聚体抗体 ,并具有四条长的、柔性好的多肽 ,可确保每个抗体空间构象的独立性。结论　构建成功四价抗人γ SmVH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。 展开更多

关键词 人γ-精浆蛋白 单域抗体 p53四价功能域 融合基因

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生理低氧对人晶状体上皮细胞系基因表达谱的影响 被引量：2

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作者 王嵩 梅林 +3 位作者 闫博 杨安钢 赵晶 严宏 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第5期409-412,共4页

目的探讨生理低氧条件下与常规氧环境下培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)在抗氧化能力及基因表达谱上的差异。方法 HLEC传代培养24 h后,分别置于体积分数21%常氧培养箱、体积分数1%低氧培养箱孵育24 h,消化、... 目的探讨生理低氧条件下与常规氧环境下培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cell,HLEC)在抗氧化能力及基因表达谱上的差异。方法 HLEC传代培养24 h后,分别置于体积分数21%常氧培养箱、体积分数1%低氧培养箱孵育24 h,消化、超速离心后收集细胞上清分别检测SOD、CAT活性以及GSH含量,Trizol提取细胞总RNA进氉行基因表达谱检测,生物信息学软件DAVID分析差异基因的功能聚类,qRT-PCR验证差异基因。结果低氧组细胞的SOD、CAT酶活性及GSH含量均低于常氧组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。表达谱芯片结果显示:符合差异表达标准的基因中,在低氧组细胞上调的基因有319个,下调的基因有83个。Gene Ontology分析显示:319个上调基因聚类于148个功能分类中,富集值最高的功能分类为低氧反应。选取5个上调基因进行qRT-PCR验证显示:DDIT4、VEGFA、EDN1、VLDLR、EGLN1在低氧组中的表达量均高于常氧组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论生理低氧状态下HLEC的抗氧化能力弱于常氧组,两种氧环境下细胞的基因表达谱不同,提示相应的抗氧化损伤机制可能存在差异。 展开更多

关键词 人晶状体上皮细胞 生理低氧 基因表达谱

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丙型肝炎病毒核心蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定 被引量：1

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作者 刘敏 张伟 +5 位作者 陈天艳 蔺淑梅 赵良 刘锦锋 赵英仁 张树林 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期20-22,45,共4页

目的用含丙型肝炎病毒核心(HCV core)蛋白的cDNA片段构建酵母双杂交诱饵载体,并进行人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定。方法PCR扩增含HCV core蛋白不同大小的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交诱饵载体p... 目的用含丙型肝炎病毒核心(HCV core)蛋白的cDNA片段构建酵母双杂交诱饵载体,并进行人胎肝cDNA文库的扩增、纯化和鉴定。方法PCR扩增含HCV core蛋白不同大小的cDNA片段,分别克隆入pUC19质粒,经测序正确后,再亚克隆入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中。扩增人胎肝cDNA文库并纯化、鉴定。结果获得含HCVcore蛋白的cDNA片段,并成功克隆入pGBKT7中。待转化的人肝cDNA文库滴度在5×108左右,纯化后的质粒DNA质量浓度约1 g/L。用EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切显示插入片段大小不一。结论成功构建了核心蛋白的酵母双杂交诱饵载体;扩增、纯化的人胎肝cDNA文库的多样性很好,适合于筛选。为用酵母双杂交技术研究与HCV core蛋白相互作用的蛋白打下坚实基础。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒核心蛋白 酵母双杂交 CDNA文库

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稳定表达MRG15基因的人晶状体上皮细胞株的建立 被引量：1

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作者 张自峰 张健 +6 位作者 周健 惠延年 惠玲 刘新平 药立波 王雨生 崔志利 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第3期555-557,共3页

目的:克隆人15号染色体上死亡相关因子(MORF4-re-latedgeneonchromosome15,MRG15)基因的编码区全长,构建真核表达载体,建立稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株,为MRG15在年龄相关性白内障(agerelatedcataract,ARC)发生中相关功能的研究... 目的:克隆人15号染色体上死亡相关因子(MORF4-re-latedgeneonchromosome15,MRG15)基因的编码区全长,构建真核表达载体,建立稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株,为MRG15在年龄相关性白内障(agerelatedcataract,ARC)发生中相关功能的研究奠定基础。方法:采用RT-PCR由人ARC晶状体前囊膜标本中扩增MRG15的编码区全长,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,采用脂质体法对培养人晶状体上皮细胞进行稳定转染,挑取单克隆,用Westernblot进行MRG15表达的鉴定。结果:测序证实,由ARC晶状体前囊膜中扩增出的MRG15编码区全长序列正确。重组质粒pcDNA3.1(+)-MRG15经酶切后释放出与理论长度相符的片段。培养人晶状体上皮细胞稳定转染挑取单克隆后,经Westernblot检测,30个克隆中有19个MRG15的表达量明显增高。结论:克隆了人MRG15的编码区全长,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-MRG15,并建立了稳定表达MRG15的人晶状体上皮细胞株。 展开更多

关键词 MRG15基因 年龄相关性白内障 晶状体上皮细胞 克隆

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重组LacZ复制缺陷型腺病毒的构建和鉴定 被引量：1

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作者 裘秀春 许彦鸣 +7 位作者 马保安 周勇 单乐群 杨彤涛 于翠娟 孟艳玲 杨安钢 范清宇 《医学研究生学报》 CAS 2006年第11期963-966,I0009,共5页

目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复... 目的:构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。方法:用AdEasy-1TM系统,在大肠杆菌中同源重组,构建表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-LacZ)。重组腺病毒在HEK293细胞内包装并扩增,测定病毒滴度、电镜鉴定病毒存在、斑点杂交检测其复制缺陷性,然后感染HeLa细胞X-gal染色检测LacZ的表达情况。结果:成功构建了重组LacZ腺病毒表达载体,包装获得的重组腺病毒的滴度为1.58×109PFU/m l。在转染的细胞和感染的靶细胞内均可检测到LacZ的表达。电镜下可见感染的HEK293细胞核内含晶格状结构的腺病毒包函体。斑点杂交提示重组病毒为复制缺陷型,其基因转移百分率和感染强度和感染时间有一定的相关性。结论:成功构建了表达LacZ基因的复制缺陷型腺病毒。 展开更多

关键词 腺病毒表达载体 LACZ

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抗人CD3单链抗体四聚体基因在HeLa细胞中的表达和活性鉴定

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作者 武国军 王禾 +5 位作者 王栋 于磊 王智 袁建林 张波 药立波 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期545-548,共4页

目的　将抗人CD3单链抗体 (scFv) /人 p5 3四聚功能域融合基因转染到HeLa细胞 ,进行真核表达和活性测定。方法　将抗人CD3scFv /人 p5 3四聚功能域融合基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化... 目的　将抗人CD3单链抗体 (scFv) /人 p5 3四聚功能域融合基因转染到HeLa细胞 ,进行真核表达和活性测定。方法　将抗人CD3scFv /人 p5 3四聚功能域融合基因克隆入真核分泌表达载体 pSecTag2 B中 ,转染HeLa细胞进行表达 ,表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果　表达产物经SDS PAGE和Westernblot证实 ,为Mr约35 0 0 0的特异蛋白条带。纯化后经流式细胞仪检测 ,可特异性地结合人外周血单个核细胞 (PBMCs) ,亲和力高于scFv。结论　获得了可与PBMCs特异性结合的抗人CD3scFv四聚体 。 展开更多

关键词 SCFV 抗人CD3单链抗体 基因 HELA细胞 T细胞抗原受体 TCR

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氧化损伤诱导的人晶状体上皮细胞系基因表达谱的差异和表型改变

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作者 梅林 王嵩 +3 位作者 闫博 杨安钢 赵晶 严宏 《国际眼科杂志》 CAS 2016年第5期822-825,共4页

目的:探讨人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)氧化刺激后基因表达谱的差异以及相应的表型改变。方法:培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3并给予H_2O_2刺激。24h后,提取细胞总RNA进行基因表达谱芯片检测,并采用生物信息学数... 目的:探讨人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)氧化刺激后基因表达谱的差异以及相应的表型改变。方法:培养人晶状体上皮细胞系HLE-B3并给予H_2O_2刺激。24h后,提取细胞总RNA进行基因表达谱芯片检测,并采用生物信息学数据库DAVID对氧化刺激组相比对照组显著上调的基因进行Gene Ontology(GO)功能富集分析。RT-q PCR对上调的基因进行验证。通过MTT和流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果:表达谱芯片结果显示,氧化刺激造成HLEC中367个基因上调,GO分析表明这些基因富集于310个功能类别中,主要包括p53信号通路、细胞凋亡通路、细胞程序性死亡通路等。RT-q PCR结果证实,6个主要参与促凋亡或抗凋亡调节的基因,包括BCL2A1、TP53I3、FAS、ZMAT3、DDB2和BCL2L1,在氧化刺激后表达水平明显上升。MTT实验和流式细胞仪检测结果显示,H_2O_2刺激后HLEC凋亡逐渐上升,是细胞氧化损伤的主要表现。结论:氧化刺激可同时诱导HLEC中促凋亡基因和抗凋亡基因表达水平上调,但最终仍然导致了细胞凋亡。 展开更多

关键词 人晶状体上皮细胞 氧化损伤 表达谱芯片 细胞凋亡

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蛋白质乙酰化修饰在肿瘤发生、治疗中的作用研究进展 被引量：3

11

作者 李惠晨 马勇政 +1 位作者 申亮亮 张健 《山东医药》 CAS 2014年第27期89-92,共4页

蛋白质分子链在乙酰基转移酶的作用下嫁接一个乙酰基，此过程称为蛋白质的乙酰化修饰，是一种普遍存在的翻译后修饰现象。蛋白质（包括组蛋白和非组蛋白）的乙酰化修饰主要发生在赖氨酸上。随后的功能研究［1］显示，蛋白质乙酰化修饰... 蛋白质分子链在乙酰基转移酶的作用下嫁接一个乙酰基，此过程称为蛋白质的乙酰化修饰，是一种普遍存在的翻译后修饰现象。蛋白质（包括组蛋白和非组蛋白）的乙酰化修饰主要发生在赖氨酸上。随后的功能研究［1］显示，蛋白质乙酰化修饰对蛋白质的功能可以产生很大的影响，包括酶的活化与失活、蛋白质稳定性、亚细胞结构定位和特殊功能复合体的形成等。最近有研究发现，大部分组蛋白在肿瘤细胞呈低乙酰化状态，组蛋白乙酰化修饰能够调控基因的表达，并且其在肿瘤发生、发展中扮演重要角色。蛋白质乙酰化修饰在肿瘤发生中的作用逐渐成为研究热点，已有研究者将其应用于肿瘤的临床治疗中。现将蛋白质乙酰化修饰在肿瘤发生、治疗中的作用综述如下。 展开更多

关键词 乙酰化修饰 组蛋白 非组蛋白 P53蛋白 乙酰化酶抑制剂

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NDRG2截短体真核表达载体的构建

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作者 李惠晨 马勇政 +2 位作者 王泽宇 胡伟 张健 《山东医药》 CAS 2014年第23期9-12,共4页

目的：构建稳定表达N-MYC下游调节基因2（NDRG2）截短体的真核表达载体。方法分别用PCR方法扩增NDRG2的截短体NDRG21～178aa和NDRG21～257aa ，以BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后，以SolutionⅠ连接酶反应体系将NDRG2截短体片段装载入pCDNA4．0表... 目的：构建稳定表达N-MYC下游调节基因2（NDRG2）截短体的真核表达载体。方法分别用PCR方法扩增NDRG2的截短体NDRG21～178aa和NDRG21～257aa ，以BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后，以SolutionⅠ连接酶反应体系将NDRG2截短体片段装载入pCDNA4．0表达载体中，并通过蛋白免疫印迹（Western blotting）验证载体的表达。结果 NDRG2截短体在pCDNA4．0表达载体中正确表达。结论成功构建了NDRG2截短体的真核表达载体。 展开更多

关键词 N-MYC下游调节基因2 截短突变体 pCNDA40载体 N-MYC downstream-regulated GENE 2

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