LIM蛋白KyoT在小鼠胚胎发育中的表达 被引量：1

1

作者 李荣 程轶梦 +5 位作者 陈蕾 胡静 孙强 黄红艳 王键 韩骅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第1期95-98,共4页

IM结构域蛋白KyoT可与转录因子RBP J相互作用而修饰Notch信号途径 .以往发现KyoT在成年小鼠肺脏、肾脏和睾丸中有特异性表达 ,为进一步明确KyoT在小鼠胚胎阶段的表达 ,故分析了KyoT在小鼠不同胚胎阶段的表达水平变化和胚胎 17天时各组... IM结构域蛋白KyoT可与转录因子RBP J相互作用而修饰Notch信号途径 .以往发现KyoT在成年小鼠肺脏、肾脏和睾丸中有特异性表达 ,为进一步明确KyoT在小鼠胚胎阶段的表达 ,故分析了KyoT在小鼠不同胚胎阶段的表达水平变化和胚胎 17天时各组织的表达分布 .采用RNA印迹发现KyoT在小鼠胚胎的各阶段均表达 ,而且胚胎 17天时表达水平最高 .进一步RNA印迹和免疫组织化学检测发现 ,KyoTmRNA和蛋白质在胚胎17天小鼠的肺、肾以及肌肉中均有高水平的表达 .上述结果提示 ,KyoT在小鼠胚胎发育过程中有特异性表达 ,且在胚胎 17天时KyoT表达器官分布与成年小鼠相似 ,特异性定位于肺、肾和肌肉等脏器 . 展开更多

关键词 LIM结构域蛋白 KyoT 小鼠 胚胎发育 表达

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B淋巴细胞发育的基因调控 被引量：3

2

作者 李军林 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期34-36,共3页

关键词 B淋巴细胞 发育 基因调控

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牙齿发育相关基因adam28多克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1

3

作者 赵征 文玲英 +2 位作者 金岩 杨曦 轩东英 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期166-170,共5页

目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28... 目的制备及鉴定抗ADAM28的多克隆抗体。方法采用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)扩增出adam28基因的蛋白编码区序列,克隆到中间载体pMD18-T Vector中,再经双酶切得到adam28片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-ADAM28融合蛋白,经过初步纯化及SDS-PAGE电泳,在35300的新蛋白带处直接割胶,作为抗原免疫新西兰大白兔后获取抗体。结果成功构建融合表达载体pGEX-4T-adam28,得到初步纯化的GST-ADAM28融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,盐析法纯化得到多克隆抗体。Western印迹结果显示所得到的抗体具有较高的特异性,ELISA分析证实其效价可达1∶16000。结论成功制备出高效价的抗ADAM28多克隆抗体,为进一步研究ADAM28在牙齿发育中的作用和表达分布奠定基础。 展开更多

关键词 adam28基因 融合蛋白 多克隆抗体 免疫印迹

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食管癌组织的遗传不稳定性研究

4

作者 舒青 周鹏 +2 位作者 李军林 马群风 张素珍 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期219-221,225,共4页

目的:探讨食管癌组织遗传多态性及基因组甲基化改变在其发生或发展中的作用。方法:1)用PCR-AFLP和基因扫描的方法,对食管癌组织与癌旁组织AR基因、Rb基因(intron16、17)、ER基因(PvuII和XbaI)和cbl2基因6个多态位点的检测。2)用HPLC的方... 目的:探讨食管癌组织遗传多态性及基因组甲基化改变在其发生或发展中的作用。方法:1)用PCR-AFLP和基因扫描的方法,对食管癌组织与癌旁组织AR基因、Rb基因(intron16、17)、ER基因(PvuII和XbaI)和cbl2基因6个多态位点的检测。2)用HPLC的方法,对食管癌组织与癌旁组织基因组DNA甲基化的水平检测。结果:35例患者中至少一个位点发生改变者占74.29%,在不同级别的食管癌组织中多态性改变各为:Ⅰ:9/12(75%);Ⅱ:13/15(85%);Ⅲ:4/8(50%)。在食管癌早期癌组织基因组甲基化水平比癌旁组织低,随着肿瘤的进程甲基化水平逐渐上升,甚至超过了癌旁组织。结论:从食管癌组织早期基因组低甲基化与大量的多态性改变,推测遗传不稳定性是食管癌发生发展中普遍事件,早期基因组甲基化的降低可能与其遗传不稳定性的产生关系密切。 展开更多

关键词 食菅癌 遗传不稳定性 甲基化

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单核-巨噬细胞的分化和功能研究进展 被引量：13

5

作者 杨继乐 张莉 王莉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1213-1216,共4页

单核-巨噬细胞系统的发现已愈百年。近年发现单核-巨噬细胞系统不仅在机体的自身稳态、免疫监视和抗感染等方面发挥关键作用,还参与了众多疾病的发生和发展。在发育来源上,成年个体的单核-巨噬细胞系统的成员不仅来源于骨髓造血,还来源... 单核-巨噬细胞系统的发现已愈百年。近年发现单核-巨噬细胞系统不仅在机体的自身稳态、免疫监视和抗感染等方面发挥关键作用,还参与了众多疾病的发生和发展。在发育来源上,成年个体的单核-巨噬细胞系统的成员不仅来源于骨髓造血,还来源于胚胎原始造血;在功能上,单核-巨噬细胞系统更是展现出广泛的异质性,尤其是近年来发现该系统具有重要的免疫调节功能。阐明单核-巨噬细胞系统的分化、激活、效应的细胞和分子机制,对深刻认识机体自身稳态、免疫应答、以及相关疾病发生发展,最终建立有效的干预手段,具有重要的理论和实际意义。 展开更多

关键词 单核-巨噬细胞系统 巨噬细胞 树突状细胞 髓系来源抑制细胞 综述

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人纤溶酶原饼环区5基因的原核表达及活性测定 被引量：6

6

作者 范彬 张英起 +4 位作者 颜真 赵宁 陈长生 药立波 苏成芝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期710-714,共5页

人纤溶酶原饼环区 5 (hPgnK5 )是新的血管生成抑制因子 .PCR法改造hPgnK5基因 ,所得hPgnK5基因包括编码人纤溶酶原C4 62 到P54 4共 83个氨基酸残基 ,而且在 5′ ,3′分别引入了EcoRⅠ和BamHⅠ位点 .以pThiohisA构建hPgnK5基因原核表达载... 人纤溶酶原饼环区 5 (hPgnK5 )是新的血管生成抑制因子 .PCR法改造hPgnK5基因 ,所得hPgnK5基因包括编码人纤溶酶原C4 62 到P54 4共 83个氨基酸残基 ,而且在 5′ ,3′分别引入了EcoRⅠ和BamHⅠ位点 .以pThiohisA构建hPgnK5基因原核表达载体 ,在大肠杆菌TOP10中表达该蛋白 .通过柱层析法获得hPgnK5纯化蛋白 .免疫印迹反应表明该蛋白具有hPgnK5免疫活性 .体外实验表明 ,该蛋白具有抑制血管内皮细胞增殖活性 . 展开更多

关键词 人纤溶酶原饼环区5 血管生成抑制因子 生物活性 基因表达

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p27^(Kip1)反义寡核苷酸对B淋巴瘤细胞WEHI-231细胞周期的影响 被引量：8

7

作者 王骊丽 梁英民 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期320-322,326,共4页

目的　探讨p2 7Kip1在抗原受体介导的B淋巴瘤细胞WEHI- 2 31细胞周期停止信号中的作用。方法　用抗IgM抗体诱导WEHI- 2 31细胞细胞周期停止。用合成的p2 7Kip1反义寡核苷酸抑制p2 7Kip1基因的表达。采用流式细胞仪 ,分析细胞核的DNA含... 目的　探讨p2 7Kip1在抗原受体介导的B淋巴瘤细胞WEHI- 2 31细胞周期停止信号中的作用。方法　用抗IgM抗体诱导WEHI- 2 31细胞细胞周期停止。用合成的p2 7Kip1反义寡核苷酸抑制p2 7Kip1基因的表达。采用流式细胞仪 ,分析细胞核的DNA含量和细胞周期的变化。用体外激酶实验检测Cdk2的活性 ,Westernblot检测Rb蛋白的磷酸化水平。结果　合成的p2 7Kip1反义寡核苷酸能阻断抗IgM抗体诱导的p2 7Kip1基因表达的上调。用p2 7Kip1反义寡核苷酸处理WEHI-2 31细胞 ,可恢复抗原受体交联引起的周期素依赖性激酶Cdk2活性的降低 ,以及Rb蛋白磷酸化水平的下降 ,并使细胞周期恢复运转。结论　p2 7Kip1可能在抗原受体信号介导的WEHI-2 展开更多

关键词 P27^KIPL B淋巴瘤细胞 细胞周期 抗原受体 反义寡核苷酸

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Notch信号途径在血管形成和内皮细胞中的作用 被引量：5

8

作者 王莉 刘向东 +1 位作者 赵星成 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期888-891,共4页

Notch信号途径除了可以直接调控免疫细胞的发生和功能外,还可以通过血管内皮细胞影响免疫应答。血管形成(angiogenesis)是成年个体血管生长最重要的方式,不仅参与组织的发育与再生,还参与多种疾病如肿瘤的发生和进展。血管形成最主要的... Notch信号途径除了可以直接调控免疫细胞的发生和功能外,还可以通过血管内皮细胞影响免疫应答。血管形成(angiogenesis)是成年个体血管生长最重要的方式,不仅参与组织的发育与再生,还参与多种疾病如肿瘤的发生和进展。血管形成最主要的调控信号是血管内皮生长因子及其受体组成的信号途径。近年来的研究表明,进化上高度保守的Notch信号途径也是血管形成的重要调控信号途径。Notch信号途径可参与血管形成中的多个步骤,如顶端细胞的分化、内皮细胞的增殖、成熟血管结构的形成等。此外,Notch信号途径还参与血管形成相关疾病的发生和进展。尤为引人注目的是,近来发现Notch信号途径是肿瘤新生血管的重要调控信号,提示深入揭示Notch信号在血管形成中的作用和机制极有可能为开发新生血管靶向治疗提供靶点。 展开更多

关键词 NOTCH信号途径 血管形成 血管内皮生长因子 内皮细胞

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核糖体蛋白L6/Taxreb107的核定位信号的分析 被引量：2

9

作者 王冀姝 杨曦 +3 位作者 李荣 周鹏 张淼丽 韩骅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期144-148,共5页

核糖体蛋白L6 (RpL6 ,Taxreb10 7)含有三个具有核定位信号特征的基序 .用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能 .将RpL6 /Taxreb10 7分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵... 核糖体蛋白L6 (RpL6 ,Taxreb10 7)含有三个具有核定位信号特征的基序 .用作者构建的核定位信号捕获系统分析了这些核定位信号是否具有介导蛋白质进行核转位的功能 .将RpL6 /Taxreb10 7分段插入核定位信号捕获载体的克隆位点后转化宿主酵母 ,发现其前两个核定位信号可以介导融合蛋白进入细胞核 ,而第三个核定位信号无此作用 .将RpL6 /Taxreb10 7分段与绿色荧光蛋白融合后转染培养的哺乳类细胞 ,证实了以上在酵母中所得的结果 .进一步发现RpL6 /Taxreb10 7的前两个核定位信号同时具有核仁定位的功能 .当在细胞中表达的早期 ,进入核内的融合蛋白优先定位于核仁 .这些结果一方面有助于理解RpL6 /Taxreb10 7核转位的机理 ,同时说明作者构建的核定位信号捕获系统也可用在蛋白质中寻找核定位信号 . 展开更多

关键词 核定位信号 核糖体蛋白L6 核转位 绿色荧光蛋白

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分泌蛋白特异性基因陷阱的设计与验证 被引量：7

10

作者 孙强 韩骅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第4期328-333,共6页

蛋白质分子向细胞外分泌的过程有赖于信号肽的介导 .基因陷阱是功能性基因克隆的一种有效方法 ,经典的基因陷阱以geo作为报告基因 ,对所克隆的基因类型没有选择性 .将绿脓杆菌外毒素、 2A序列、IL 2受体穿膜区以及新霉素磷酸转移酶的基... 蛋白质分子向细胞外分泌的过程有赖于信号肽的介导 .基因陷阱是功能性基因克隆的一种有效方法 ,经典的基因陷阱以geo作为报告基因 ,对所克隆的基因类型没有选择性 .将绿脓杆菌外毒素、 2A序列、IL 2受体穿膜区以及新霉素磷酸转移酶的基因依次融合构建新型报告基因——— peo ,该报告基因能够特异性地甄别具有信号肽编码序列的基因 .为验证 peo对信号肽编码序列的特异性甄别作用 ,以 peo为报告基因 ,构建了 3种质粒载体 ,分别模拟用基因陷阱载体进行筛选时可能出现的 3种情况 ,通过转染HeLa细胞、G4 18筛选以及碱性磷酸酶检测 ,证明 peo能够有效地区分信号肽和非信号肽编码序列 ,以 peo为报告基因改造的基因陷阱载体可以用于分泌蛋白基因的筛选 . 展开更多

关键词 基因陷阱 信号肽 绿脓杆菌外毒素 新霉素磷酸转移酶

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天然角蛋白自身反应性B细胞亚群及功能的分析 被引量：2

11

作者 邢影 李巍 +3 位作者 付萌 韩骅 王刚 刘玉峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期653-656,共4页

目的:明确天然角蛋白反应性B细胞的亚群及解剖定位,初步分析其分泌天然抗角蛋白自身抗体(anti-keratinautoantibody,AKautoAb)的能力。方法:取SPF级C57BL/6小鼠的脾细胞和腹腔细胞,荧光抗体染色后用流式细胞仪分析角蛋白反应性B细胞亚... 目的:明确天然角蛋白反应性B细胞的亚群及解剖定位,初步分析其分泌天然抗角蛋白自身抗体(anti-keratinautoantibody,AKautoAb)的能力。方法:取SPF级C57BL/6小鼠的脾细胞和腹腔细胞,荧光抗体染色后用流式细胞仪分析角蛋白反应性B细胞亚群。将脾脏和腹腔淋巴细胞体外培养后,用ELISA分析AKautoAb的滴度,用ELISPOT法分析分泌AKautoAb的B细胞数。结果:腹腔中几乎所有结合角蛋白的B细胞均为B-1a细胞,脾脏中结合角蛋白的B细胞以边缘带B细胞为主。腹腔细胞中分泌AKautoAb的细胞数显著多于脾细胞,其培养上清中AKautoAb的滴度显著高于脾细胞。结论:角蛋白反应性B细胞存在于3个成熟B细胞亚群:B-1细胞、滤泡B细胞和边缘带B细胞,其中CD5+的B-1a细胞具有活跃的分泌AKautoAb的能力。 展开更多

关键词 天然自身抗体 角蛋白 B-1细胞 边缘带B细胞

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肿瘤相关巨噬细胞的研究进展 被引量：4

12

作者 秦鑫 张萍 +1 位作者 张毓飞 龚文容 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1004-1007,共4页

肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是一群具有免疫抑制功能的细胞,作为肿瘤微环境的重要组成成分,TAM以多种方式在肿瘤的发生、发展和转移中发挥着重要的作用。本文总结了TAM的表型,调控TAM在肿瘤组织中富集和分化的因素,TAM在肿瘤生长和转移中的... 肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是一群具有免疫抑制功能的细胞,作为肿瘤微环境的重要组成成分,TAM以多种方式在肿瘤的发生、发展和转移中发挥着重要的作用。本文总结了TAM的表型,调控TAM在肿瘤组织中富集和分化的因素,TAM在肿瘤生长和转移中的作用以及以TAM为靶点的抗肿瘤策略等方面的研究进展,以期为肿瘤的生物治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 肿瘤相关巨噬细胞 肿瘤 综述

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雄激素受体基因微卫星CAG多态与食管癌的分级 被引量：3

13

作者 舒青 张素珍 马群风 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期121-123,共3页

目的：探讨食管癌组织中雄性激素受体(AR)基因外显子1微卫星位点(CAG)n的多态性与食管癌分级的关系,及其与肿瘤生物学特性的相关性。方法:应用PCR扩增方法,对41例食管癌组织和30例癌旁组织AR的第一外显子CAG微卫星数量进行测定,并进行... 目的：探讨食管癌组织中雄性激素受体(AR)基因外显子1微卫星位点(CAG)n的多态性与食管癌分级的关系,及其与肿瘤生物学特性的相关性。方法:应用PCR扩增方法,对41例食管癌组织和30例癌旁组织AR的第一外显子CAG微卫星数量进行测定,并进行不同级别间的比较分析。结果:食管癌组织AR基因(CAG)n重复范围8～28,癌旁组织n范围在8～24;食管癌组织n范围在≤10或≥22的占34.1%,比癌旁组织高(13.3%),经χ2检验有显著性差异;在29对配对的标本中,多态性发生改变的占48.3%;AR基因CAG微卫星的数量随着食管癌细胞分化程度的降低而减少,其低分化食管癌(13.6)均数低于高分化食管癌(17.5),短组AR基因CAG微卫星分布比例随着食管癌的分化程度的升高而降低,长组AR基因CAG微卫星分布比例随着食管癌的分化程度的升高而增加。结论:在食管癌组织AR基因(CAG)n重复多态的改变是高发事件,AR基因的(CAG)n微卫星数量的减少与食管癌的恶性程度相关。 展开更多

关键词 食管癌 雄性激素受体基因 CAG微卫星 多态性

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可溶型人干细胞因子cDNA的克隆表达、复性与纯化 被引量：2

14

作者 王骊丽 耿信笃 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期402-405,共4页

目的 :构建可溶型人干细胞因子 (hSCF)基因的表达载体。优化培养条件 ,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达。方法 :利用PCR技术 ,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因。用简并PCR对hSCF基因 5′端的序列进行修饰 ,以实现在大肠杆菌... 目的 :构建可溶型人干细胞因子 (hSCF)基因的表达载体。优化培养条件 ,实现hSCF基因在大肠杆菌中的高表达。方法 :利用PCR技术 ,以人淋巴结cDNA为模板扩增并克隆hSCF基因。用简并PCR对hSCF基因 5′端的序列进行修饰 ,以实现在大肠杆菌中的高效表达 ;用MTT比色法测定初步复性和纯化的hSCF蛋白的生物学活性。结果 :扩增并克隆了hSCF成熟肽cDNA。将其插入表达载体pBV2 2 0构建了hSCF基因的表达质粒 ,并在大肠菌中初步表达。表达量占总菌体的 2 0 %以上 ,优化培养条件后表达量可达到 4 0 %以上 ,表达产物为包涵体。将包涵体溶解在 8mol/L脲或 7mol/L盐酸胍中 ,用疏水色谱法进行复性并同时纯化 ,得到具有天然生物学活性的rhSCF蛋白。结论 :成功地克隆hSCF基因 ,并实现在原核系统中的高表达 ,所获表达菌株可用于生产以获得具有生物学活性的rhSCF蛋白产品。 展开更多

关键词 PCR 人干细胞因子 大肠杆菌包含体 高效疏水色谱 色谱饼 重组蛋白

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小鼠CXCR4基因启动子的克隆和报告基因载体构建 被引量：2

15

作者 王莉 何飞 王耀春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期660-661,共2页

目的:克隆小鼠CXCR4基因启动子,并建立CX-CR4报告基因系统。方法:设计合成PCR引物,从小鼠基因组DNA中扩增并克隆小鼠CXCR4基因的启动子区。序列测定确认后,用克隆的启动子片段构建CXCR4荧光素酶报告基因载体pGL-CXCR4。转染细胞,用双报... 目的:克隆小鼠CXCR4基因启动子,并建立CX-CR4报告基因系统。方法:设计合成PCR引物,从小鼠基因组DNA中扩增并克隆小鼠CXCR4基因的启动子区。序列测定确认后,用克隆的启动子片段构建CXCR4荧光素酶报告基因载体pGL-CXCR4。转染细胞,用双报告基因系统检测报告基因载体的活性。结果:成功扩增了小鼠CXCR4基因的启动子区。克隆入质粒载体后经DNA序列测定证实了其序列。通过转染细胞和荧光素酶分析,证实所构建的报告基因可以反映CXCR4启动子的活性。结论:成功扩增、克隆了小鼠CXCR4基因启动子,并成功建立起其报告基因系统,为后续的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 CXCR4 基因 启动子 报告基因

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人IFN-γ在大肠杆菌中高效表达和色谱复性研究 被引量：2

16

作者 王骊丽 耿信笃 韩骅 《西北大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期540-544,共5页

从健康人外周血分离单核细胞,经LPS刺激后提取总RNA,用RT-PCR扩增hIFN-γ的cDNA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明,克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外,与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现... 从健康人外周血分离单核细胞,经LPS刺激后提取总RNA,用RT-PCR扩增hIFN-γ的cDNA。将扩增产物克隆后进行序列分析证明,克隆的hIFN-γcDNA除存在2个序列多态性位点外,与天然的干扰素氨基酸序列完全一致。利用温控表达系统在大肠杆菌中实现了hIFN-γ的高效表达,表达的目的蛋白可占菌体总蛋白的55%。用5L和50L发酵罐放量生产的产物,经高效疏水色谱HPHIC直接复性和纯化得到了重组hIFN-γ纯品,其比活性与天然蛋白相近。 展开更多

关键词 人干扰素-γ 反转录聚合酶链反应 重组蛋白表达 复性与纯化 高效疏水色谱

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小鼠CXCR4基因的克隆和慢病毒介导的表达 被引量：1

17

作者 王莉 胡轶阳 +1 位作者 王耀春 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期652-653,656,共3页

目的:克隆小鼠CXCR4基因并建立其慢病毒表达系统。方法:设计合成PCR引物,从小鼠骨髓有核细胞来源的cDNA中扩增并克隆小鼠CXCR4基因的编码区。构建CX-CR4-IRES-GFP表达单元后通过转染细胞,观察GFP的表达证实其表达效能。然后建立慢病毒... 目的:克隆小鼠CXCR4基因并建立其慢病毒表达系统。方法:设计合成PCR引物,从小鼠骨髓有核细胞来源的cDNA中扩增并克隆小鼠CXCR4基因的编码区。构建CX-CR4-IRES-GFP表达单元后通过转染细胞,观察GFP的表达证实其表达效能。然后建立慢病毒表达载体,包装慢病毒后感染培养的细胞,用流式细胞术分析其在被感染的细胞中的表达。结果:成功扩增了小鼠CXCR4基因的编码区。克隆入质粒载体后经DNA序列测定证实了其序列。通过转染细胞和流式细胞术以及荧光显微镜观察证实了CXCR4-IRES-GFP的表达效能。成功构建了CXCR4慢病毒表达载体,感染细胞后经流式细胞术分析,证实被感染的细胞可以表达小鼠CX-CR4。结论:成功扩增、克隆了小鼠CXCR4基因,并成功建立起其慢病毒表达系统,为后续的基础和应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 CXCR4 基因 表达 慢病毒

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几种细胞因子对小鼠核糖体蛋白L6表达的调控 被引量：1

18

作者 王冀姝 韩骅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期533-537,共5页

小鼠的核糖体蛋白RpL6启动子除了具有看家基因启动子的特点外 ,还含有多种转录因子的识别位点 .如GATA序列 1,γ干扰素核心序列 ,α干扰素应答序列 2等 ,提示RpL6的表达可为细胞外因子所诱导 .为了证实这一点 ,分别用促红细胞生成素、... 小鼠的核糖体蛋白RpL6启动子除了具有看家基因启动子的特点外 ,还含有多种转录因子的识别位点 .如GATA序列 1,γ干扰素核心序列 ,α干扰素应答序列 2等 ,提示RpL6的表达可为细胞外因子所诱导 .为了证实这一点 ,分别用促红细胞生成素、γ干扰素和α干扰素处理K5 6 2和Jurkat细胞 ,并用RNA印迹和荧光素酶报告试验检测了RpL6的mRNA水平和启动子活性 .RNA印迹结果显示 ,在上述细胞因子作用下 ,RpL6的mRNA水平均有所提高 .利用荧光素酶报告系统 ,用含有不同细胞因子识别位点启动子序列的报告质粒转染Jurkat和K5 6 2细胞 ,比较了启动子在细胞因子诱导前后的转录激活活性 .结果显示 ,细胞因子诱导后启动子活性明显升高 ,且与应答序列的存在与否有直接关系 .这些结果表明 ,细胞因子对RpL6转录的提高 ,是通过作用于启动子上相应的识别位点提高启动子活性而实现的 . 展开更多

关键词 细胞因子 小鼠 核糖体蛋白L6 表达 调控

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陕西老年人群与青年人群YNZ22位点多态性分布的对比分析

19

作者 舒青 张思河 +1 位作者 张素珍 李军林 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第3期198-200,204,共4页

应用 PCR- Am p- FL P技术对 75例陕西正常老年人群、94例老年动脉粥样硬化 (AS)患者与 71例陕西正常青年人群的 YNZ2 2 - VNTR(可变数目串联重复序列 variable num ber tandem repeats)位点进行多态性分析。结果显示 ,在正常青年人群中... 应用 PCR- Am p- FL P技术对 75例陕西正常老年人群、94例老年动脉粥样硬化 (AS)患者与 71例陕西正常青年人群的 YNZ2 2 - VNTR(可变数目串联重复序列 variable num ber tandem repeats)位点进行多态性分析。结果显示 ,在正常青年人群中 YNZ2 2位点共检测出 2 9种基因型 ,1 0个等位基因 ,其片段大小在 1 6 8～ 938bp,杂合度为 70 .4 % ,多态信息量 (polym orphism inform ation content,PIC)为 0 .84 ;老年人群中 YNZ2 2基因点共检测出 2 0种基因型 ,9个等位基因 ,其片段大小在 1 6 8～ 798bp,杂合度为 2 4 % ,多态信息量 (PIC)为 0 .84 ,与青年群体的基因频率分布有显著差异 ;动脉粥样硬化 (AS)人群中 YNZ2 2基因点共检测出 2 3种基因型 ,9个等位基因 ,其片段大小在 1 6 8～ 72 8bp,杂合度为 2 4 .4 7% ,多态信息量为 0 .81。表明老年群体杂合度显著降低 ,最主要的是在基因型数目与大基因片段上老年群体与青年群体差异显著。 YNZ2 2位点多态性改变或不稳定可能是引起衰老的原因之一。 展开更多

关键词 陕西 老年人群 青年人群 YNZ22基因 多态性分布 衰老 PCR-Amp-FLP技术 基因型数目 大基因片段 数目可变串联重复序列

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HCV胞膜蛋白E2基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备

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作者 杜德伟 孙脊峰 +4 位作者 杨洁 贾战生 秦鸿雁 周永兴 韩骅 《中国全科医学》 CAS CSCD 2005年第22期1834-1836,共3页

目的原核表达HCV胞膜蛋白E2,获得抗E2多克隆抗体。方法利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出831bp(384～661aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+),IPTG诱导HCVE2蛋白表达,SDS-PAGE和WesternBlot法检测蛋白表达,Ni-NTA偶... 目的原核表达HCV胞膜蛋白E2,获得抗E2多克隆抗体。方法利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出831bp(384～661aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+),IPTG诱导HCVE2蛋白表达,SDS-PAGE和WesternBlot法检测蛋白表达,Ni-NTA偶联的琼脂糖吸附柱纯化融合蛋白,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度>90%;用表达的E2蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测抗体效价,WesternBlot法检测抗体特异性。结果用原核诱导表达出HCV胞膜蛋白E2免疫新西兰兔后获得多克隆抗体的效价在1∶1280以上,能特异性识别E2蛋白。结论成功构建HCVE2基因的原核表达载体,利用原核表达HCV胞膜蛋白E2制备的多克隆抗体能特异性识别E2蛋白。为进一步开展HCVE2蛋白功能和HCV受体的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 肝炎病毒 胞膜蛋白 融合表达 金属螯合亲和层析 多克隆抗体

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