mRNA差异展示研究胃癌差异表达基因 被引量：6

1

作者 崔大祥 闫小君 +2 位作者 王枫 赵锦荣 苏成芝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第4期379-382,共4页

以胃癌细胞株GC790 1与胃粘膜细胞株GES 1为对比材料 ,利用mRNA差异展示技术 ,研究胃粘膜至胃癌过程的差异表达基因 ,为建立胃癌预警系统打下基础 .获得 8个未知的与胃癌相关的cDNA ,命名为GCYS 1,2 ,3,4,5 ,6 ,7,2 0 ,完成其克隆及序... 以胃癌细胞株GC790 1与胃粘膜细胞株GES 1为对比材料 ,利用mRNA差异展示技术 ,研究胃粘膜至胃癌过程的差异表达基因 ,为建立胃癌预警系统打下基础 .获得 8个未知的与胃癌相关的cDNA ,命名为GCYS 1,2 ,3,4,5 ,6 ,7,2 0 ,完成其克隆及序列分析 ,RNA印迹证实GCYS 1至 7片段与GCYS 2 0基因在GC790 1细胞株中呈高表达 ,在GES 1细胞株中呈低表达 .此 8个序列在GenBank数据库中登录 ,接受号为AF0 5 416 2～AF0 5 6 16 8及AF2 19140 . 展开更多

关键词 胃癌 细胞株 mRNA差异展示 基因克隆

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应用TDI-FP技术分析宫颈癌组织HPV16 E7基因A647G点突变(英文) 被引量：1

2

作者 高艳娥 张菊 +2 位作者 樊江波 陈中灿 阎小君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1199-1203,共5页

模板指导的末端碱基掺入反应结合荧光偏振检测技术(templatedirectdye-terminatorincorporationwithfluorescence-polarization,TDI-FP)是SNP检测新技术.应用TDI-FP方法分析中国陕西HPV16阳性宫颈组织HPV16E7基因第647位核苷酸A→G热点... 模板指导的末端碱基掺入反应结合荧光偏振检测技术(templatedirectdye-terminatorincorporationwithfluorescence-polarization,TDI-FP)是SNP检测新技术.应用TDI-FP方法分析中国陕西HPV16阳性宫颈组织HPV16E7基因第647位核苷酸A→G热点突变(即A647G),首先在HPV16阳性的91例宫颈癌及49例正常/宫颈炎妇女宫颈DNA标本中,PCR扩增含647位点在内的HPV16E7部分基因,然后将紧邻647位点5′端的寡核苷酸探针与PCR产物内的模板杂交,并延伸一个与647位点碱基互补的荧光标记碱基:TAMRA-ddTTP或R110-ddCTP.用荧光偏振仪读取荧光偏振(FP)值,根据升高的相应FP值判断647位点碱基.结果表明,宫颈组织HPV16E7A647G的总体检出率为35.71%(50/140).宫颈癌组的A→G突变率为42.86%(39/91),显著高于正常/宫颈炎组22.45%(11/49)的突变率(x2=5.778,P=0.016),两组间的OR值为2.59(95%CI=1.17￣5.71).提示TDI-FP可用于HPV有意义点突变的分析;我国陕西地区妇女HPV16A647G突变率及其对宫颈癌的警示性与其他地区相比有明显差异,该地区携带此突变病毒株的妇女患宫颈癌的风险可能较高. 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒16型 E7基因 突变 荧光偏振 宫颈癌

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外源核酸促核辐射鼠肠腺细胞修复的基因分析 被引量：14

3

作者 崔大祥 曾桂英 +6 位作者 王枫 田芙蓉 郭晏海 徐俊荣 闫小君 任东清 苏成芝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期353-357,共5页

初步探讨外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺细胞修复的分子机理 .建立BALB/c小鼠电离辐射后给予外源RNA与生理盐水治疗的 6h、 12h、 2 4h、 4d和 8d的模型 ,采集空肠组织标本后采用消减杂交基础上的LD PCR技术 ,获取与受照小鼠肠腺损... 初步探讨外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺细胞修复的分子机理 .建立BALB/c小鼠电离辐射后给予外源RNA与生理盐水治疗的 6h、 12h、 2 4h、 4d和 8d的模型 ,采集空肠组织标本后采用消减杂交基础上的LD PCR技术 ,获取与受照小鼠肠腺损伤修复相关的基因克隆 ,对其进行全自动序列分析与GenBank检索 . 6h治疗组同源性较高的序列主要为 :热休克蛋白mRNA、NmimRNA、Dutt1蛋白mRNA、Na ,K ATPaseγ亚单位mRNA等 ;12h治疗组同源性较高的序列为 :碱性磷酸酶mRNA、碱性磷酸酶 2、glkA基因、单链复制着丝粒基因等 ;2 4h治疗组同源性较高的序列为 :抗CEA单链抗体重链可变区基因、抗DNA重链可变区基因、Igkappa链mRNA等 ;4d治疗组同源性较高的序列为 :双特异性磷酸酶、端粒酶相关蛋白家族mRNA、β GABA转运基因、紧张激活蛋白mRNA、FK5 0 6结合蛋白、Ca2 +/Ca2 +调蛋白依赖性基因等 ;8d治疗组同源性较高的序列为 :免疫球蛋白可变区基因、鼠免疫球蛋白DNA、易弯曲肽DNA、tsrglkA基因、修复蛋白A等 .新发现的 18个基因片段递交给GeneBank ,接受号为AF2 40 16 4 AF2 40 181.结果表明 :外源核酸促电离辐射损伤的小鼠肠腺修复的机理可能与一些基因、蛋白质的异常表达有关 ,与免疫系统的作用可能有关 . 展开更多

关键词 小鼠 电离辐射 细胞修复 表达基因 外源核酸 肠道辐射损伤

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克隆差异表达基因的新策略 被引量：6

4

作者 崔大祥 闫小君 +1 位作者 王枫 苏成芝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第4期362-364,共3页

基因表达的变化有两种 ,即新出现的基因表达与表达量差异的基因表达 .表达量差异的基因克隆技术主要有mRNA差异展示 ,此技术是目前筛选差异表达基因最有效的方法之一 ,但主要存在假阳性率高的不足 ,针对此缺点 ,近几年提出了新的策略与... 基因表达的变化有两种 ,即新出现的基因表达与表达量差异的基因表达 .表达量差异的基因克隆技术主要有mRNA差异展示 ,此技术是目前筛选差异表达基因最有效的方法之一 ,但主要存在假阳性率高的不足 ,针对此缺点 ,近几年提出了新的策略与方法 ,如差异消减展示、基于PCR和减法杂交基础上的差异表达基因克隆技术 ,这些技术具有显著优势 . 展开更多

关键词 基因表达 克隆 差异表达基因

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高危HPV16 E4基因的表达纯化及临床应用 被引量：1

5

作者 高艳娥 惠慧 +2 位作者 张菊 樊江波 阎小君 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期676-681,共6页

目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16 E4重组表达体并表达纯化获得HPV16 E4重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16 E4血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E4基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E4表达重组体,转... 目的:构建人乳头瘤病毒(HPV)16 E4重组表达体并表达纯化获得HPV16 E4重组蛋白,用于检测不同人群血清相应抗体,初步探讨本地区HPV16 E4血清抗体反应与宫颈癌的相关性。方法:将HPV16E4基因与pRSET-A融合表达载体连接,获得E4表达重组体,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG诱导表达。表达的包涵体变性后经Ni柱纯化,复性并经活性鉴定后,用以包被酶联免疫吸附实验(ELISA)板,检测正常女性、慢性宫颈炎和宫颈癌患者血清抗体。结果:pRSET-16E4表达重组体的工程菌经IPTG诱导后可表达Mr15×103的HPV16 E4组氨酸融合蛋白,表达量占菌体蛋白的30%。表达形式为包涵体,重组蛋白经Ni-NTA琼脂糖树脂纯化后,纯度达95%以上,其活性经ELISA法证实。80例正常女性、46例慢性宫颈炎和32例宫颈癌患者中,其血清抗体阳性率分别为10.00%,39.13%和28.13%,宫颈癌患者HPV16 E4血清抗体阳性率显著高于正常人,且慢性宫颈炎患者HPV16 E4血清抗体阳性率也显著高于正常人,但宫颈癌组HPV16 E4血清抗体阳性率与慢性宫颈炎组间的差异无统计学意义。结论:在pRSET-A/BL21中表达获得的HPV16 E4融合蛋白,可用于宫颈癌相关HPV的血清学研究;宫颈癌和慢性宫颈炎患者HPV16E4血清抗体阳性率均明显高于正常人。 展开更多

关键词 人乳头瘤病毒16型 E4蛋白 基因表达 血清抗体 宫颈癌

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食管鳞状上皮细胞癌及癌旁组织中HPV11 L1基因克隆及序列比较

6

作者 马群风 江红 +4 位作者 刘锟 冯永强 周勇安 王小平 李谨瑜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期251-254,共4页

目的克隆食管癌组织和癌旁组织中HPV11型主要衣壳蛋白L1基因,并比较两个序列间的同源性。方法以食管癌组织和癌旁组织纯化的总DNA为模板,根据HPV11型L1基因的保守区分段设计引物。分两段扩增HPVL1基因,克隆入质粒载体中,pGEM-3Zf(-)以... 目的克隆食管癌组织和癌旁组织中HPV11型主要衣壳蛋白L1基因,并比较两个序列间的同源性。方法以食管癌组织和癌旁组织纯化的总DNA为模板,根据HPV11型L1基因的保守区分段设计引物。分两段扩增HPVL1基因,克隆入质粒载体中,pGEM-3Zf(-)以双脱氧法双向测定目的片段的序列,并拼接出该片段的全序列,比较两个序列间的同源性,以及与已知基因序列的差异性。结果从1例食管癌患者食管癌组织和癌旁组织中,分别克隆到1株HPV11型L1的编码序列M1和M2,两序列间的同源性极高,仅在个别位点存在差异。与GenBank中登录的HPV序列NC001525.1(HPV-11)、M14119.1(HPV-11)和AF217526.1(HPV-11)相比较大部分相同。结论成功地构建了HPV11型L1基因上游片段pGEM-3Zf(-)和下游片段pGEM-3Zf(-)的重组克隆,为深入研究HPV的感染与食管癌发病机制的关系奠定了基础。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 人乳头状瘤病毒 聚合酶链反应 分子克隆 序列分析

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人α型叶酸受体基因融合表达载体的构建和表达

7

作者 张潍 辛晓燕 +2 位作者 张菊 李丁 阎小君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期267-269,共3页

目的　采用反转录聚合酶链反应 (RT -PCR)法获得人α型叶酸受体 (folatereceptoralpha,FOLR - 1,FR - 1)基因序列 ,构建融合表达载体 pGEXFR - 1并进行表达。 方法将RT -PCR法扩增的FOLR - 1基因 ,克隆入融合表达载体 pGEX - 4T - 2中 ... 目的　采用反转录聚合酶链反应 (RT -PCR)法获得人α型叶酸受体 (folatereceptoralpha,FOLR - 1,FR - 1)基因序列 ,构建融合表达载体 pGEXFR - 1并进行表达。 方法将RT -PCR法扩增的FOLR - 1基因 ,克隆入融合表达载体 pGEX - 4T - 2中 ,使其受控于Ptac启动子 ,转化大肠杆菌DH5α。经异丙基 - β -D -硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,用SDS -PAGE检测表达产物。结果SDS -PAGE显示 ,FOLR - 1表达产物的相对分子质量 (Mr)约为 5 5 0 0 0 ,与预期的结果相符。Western -blot证实 ,在相应Mr处 ,有GST-FR1融合蛋白的显示条带。结论成功地构建了FOLR -1基因的融合表达载体并获得表达 。 展开更多

关键词 叶酸结构蛋白 叶酸受体 融合表达

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hBMP2转基因载体的构建及其在兔骨髓基质细胞中的表达 被引量：1

8

作者 陈峻江 刘丹平 +4 位作者 崔大祥 王伟 张正 郭韬 张男 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2006年第1期44-46,T0005,共4页

目的构建hBMP2真核表达载体pcDNA3-hBMP2,将其转染兔骨髓基质细胞(Marrow Stromal Cells,MSCs)并检测其表达效率。方法将hBMP2的cDNA构建于真核表达载体pcDNA3,形成重组真核表达载体pcDNA3-hBMP2,酶切鉴定后体外转染培养状态下的兔骨髓... 目的构建hBMP2真核表达载体pcDNA3-hBMP2,将其转染兔骨髓基质细胞(Marrow Stromal Cells,MSCs)并检测其表达效率。方法将hBMP2的cDNA构建于真核表达载体pcDNA3,形成重组真核表达载体pcDNA3-hBMP2,酶切鉴定后体外转染培养状态下的兔骨髓基质细胞,用原位杂交和免疫组织化学方法鉴定表达情况并用计算机图像分析系统测定其表达效率。结果pcDNA3-hBMP2载体酶切鉴定与预期片段相符,表明成功构建了pcDNA3-hBMP2转基因载体。用该载体转染兔骨髓基质细胞后获得了瞬时表达和稳定表达。结论载体pcDNA3-hBMP2可以在骨髓基质细胞中表达,为下一步将其用于转基因骨组织工程研究奠定基础。 展开更多

关键词 HBMP2 pcDNA3载体 构建 转染 骨髓基质细胞

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固相金斑免疫试验检测包虫病血清抗体技术的初步建立 被引量：2

9

作者 邵锡如 肖乐义 +4 位作者 易虎 侯瑜 阎小君 巩天祥 魏永灏 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第2期51-51,14,共2页

关键词 包虫病 血清诊断 抗体 固相金斑免疫法

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环氧化酶2启动子调控促凋亡基因BAX在卵巢癌细胞系的特异性高表达

10

作者 于爱芳 辛晓燕 张文红 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第2期100-104,共5页

目的:验证环氧化酶-2(COX-2)启动子能调控下游基因特异性在COX-2阳性的卵巢癌细胞系高表达;并以CMV启动子为对照,分析COX-2启动子的转录效率。方法:构建重组质粒COX-2-BAX和CMV-Lue。脂质体介导分别把质粒phPES2,CMV—Lue瞬时转染COX-2... 目的:验证环氧化酶-2(COX-2)启动子能调控下游基因特异性在COX-2阳性的卵巢癌细胞系高表达;并以CMV启动子为对照,分析COX-2启动子的转录效率。方法:构建重组质粒COX-2-BAX和CMV-Lue。脂质体介导分别把质粒phPES2,CMV—Lue瞬时转染COX-2阳性的卵巢癌细胞系SKOV-3和COX-2阴性的结肠癌细胞系SW480,检测荧光素酶报告基因的表达情况。同法把质粒COX-2-BAX、pcDNA3-BAX转染SKOV-3和SW480,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:成功构建重组质粒COX-2-BAX和CMV—Luc。COX-2-Lue转染SKOV3和SW480细胞24 h后报告基因活性分别为1554±86.5和53.7±10.9。CMV—Luc财法转染后,报告基因活性分别为9851.7±129.5和8831.0±167.3。COX-2-BAX转染SKOV-3和SW480细胞36 h后细胞凋亡率分别为10.4％,3.7％;CMV—BAX同法转染后,细胞凋亡率分别为21.7％,25.6％。结论:COX-2启动子可调控下游基因特异性地在COX-2阳性的卵巢癌细胞系中高表达,但转录效率明显低于CMV启动子。含COX-2启动子经合理修饰后可用于卵巢癌的基因治疗。 展开更多

关键词 人环氧化酶2启动子 卵巢癌 基因治疗

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UreB蛋白B细胞抗原表位快速筛选与鉴定 被引量：4

11

作者 郭慧芳 张文红 +4 位作者 温冬青 韩锋产 张虎明 罗进 阎小君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期83-86,共4页

以幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)主要抗原蛋白尿素酶B(ureaseB,UreB)为靶蛋白,建立一种新的B细胞抗原表位筛选与鉴定方法.运用Fmoc固相肽合成法合成11条HpUreB蛋白的单表位抗原肽片段,在其氨基端标记FITC荧光素,应用荧光偏振方法... 以幽门螺旋杆菌(Helicobacterpylori,Hp)主要抗原蛋白尿素酶B(ureaseB,UreB)为靶蛋白,建立一种新的B细胞抗原表位筛选与鉴定方法.运用Fmoc固相肽合成法合成11条HpUreB蛋白的单表位抗原肽片段,在其氨基端标记FITC荧光素,应用荧光偏振方法(fluorescencepolarization,FP)快速鉴定这些肽片段的抗原性,并通过FP法在大规模样品中快速筛选相应抗体滴度高、分布人群广的优势抗原表位肽.结果表明,合成的11条UreB蛋白线性抗原肽中,10条具有较强的抗原性,其中No.2、No.5和No.11抗原肽相应的特异性抗体在感染Hp的人群中分布较广,抗体滴度较高,为UreB的优势抗原表位肽.对抗原表位进行多参数综合分析与设计,通过FP技术快速鉴定抗原肽,并筛选优势抗原表位肽,对于疾病的抗原表位谱研究具有重要的意义,同时在疾病的诊断、分型及治疗中具有重要的应用前景. 展开更多

关键词 抗原表位 尿素酶B 抗原性 鉴定 筛选 荧光偏振

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儿童幽门螺杆菌及CagA阳性幽门螺杆菌感染的流行病学调查 被引量：3

12

作者 张玲霞 张沥 +4 位作者 张宁霞 刘永国 阎小君 韩锋产 侯瑜 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期779-781,共3页

幽门螺杆菌(H.pylori)是小儿慢性胃炎、十二指肠炎及消化性溃疡的重要病因之一,小儿H.pylori的感染直接影响到成年期的身体健康.成人H.pylori相关性胃疾病的发生与儿童期H.pylori感染密切相关.许多学者认为,成人H.pylori感染率及消化道... 幽门螺杆菌(H.pylori)是小儿慢性胃炎、十二指肠炎及消化性溃疡的重要病因之一,小儿H.pylori的感染直接影响到成年期的身体健康.成人H.pylori相关性胃疾病的发生与儿童期H.pylori感染密切相关.许多学者认为,成人H.pylori感染率及消化道疾病较高是与儿童期即已发生的H.pylori感染密切相关[1,2]. 展开更多

关键词 儿童 幽门螺杆菌 CAGA阳性 幽门螺杆菌感染 流行病学

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滴金法检测幽门螺杆菌细胞毒素相关蛋白A抗体试剂盒的研制及应用

13

作者 侯瑜 张菊 +3 位作者 李质馨 田洪艳 刘晓冬 徐冶 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期520-520,共1页

目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)。方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上 ,制... 目的　建立一种快速、简易的检测血清中抗幽门螺杆菌 (Hp)细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体的胶体金免疫渗滤法 (DIGFA)。方法　采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将重组的CagA抗原固定于硝酸纤维素膜上 ,制成免疫渗滤试剂盒。血清中抗CagA抗体与试剂盒上金标记物及硝酸纤维素膜上的固相抗原结合后 ,形成肉眼可见的红色斑点。结果　用DIGFA与酶联免疫吸附试验 (ELISA)试剂盒对比检测了 32 6份血清标本中抗CagA抗体 ,本方法的特异性为 95 .8% ,敏感性为 97.3% ,两种方法符合率为 96 .6 %。结论　DIGFA检测血清中的抗CagA抗体特异性强、灵敏度高、简便快速 ,无需特殊仪器设备 。 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 细胞毒素相关蛋白A 抗体 胶体金免疫渗滤法

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多聚抗原肽免疫磁珠在制备单表位抗体中的应用 被引量：2

14

作者 徐小洁 张文红 +3 位作者 康磊 韩锋产 颜真 阎小君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期572-574,579,共4页

目的:建立用多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAP)包被磁珠制备单表位抗体的方法。方法:通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP,将其作为免疫原免疫小鼠,获得多克隆抗血清。将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠(immu... 目的:建立用多聚抗原肽(multiple antigen peptides,MAP)包被磁珠制备单表位抗体的方法。方法:通过Fmoc法固相化学合成UreB的8分支单表位MAP,将其作为免疫原免疫小鼠,获得多克隆抗血清。将MAP以共价偶联的方式包被磁珠制备免疫磁珠(immunomagnetic beads,IB),通过IB从多克隆抗血清中纯化单表位抗体,荧光偏振(fluorescence polarization,FP)法鉴定抗体的特异性,SDS-PAGE鉴定抗体纯度,紫外分光光度法测定其回收率。结果:合成的MAP具有较强的免疫原性,免疫小鼠后得到的抗体滴度高达1∶12800。MAP制备免疫磁珠的最佳包被浓度为100mg/L,包被效率最高可达79%。应用MAP免疫磁珠从抗血清中纯化得到的单表位抗体,经鉴定与其他抗原表位无反应性,其纯度为95%,抗体的回收率为5.8%。结论:MAP包被的磁珠可快速分离纯化出针对某一抗原表位的特异性抗体,其性质类似单克隆抗体。这一方案在快速制备少量高特异性抗体中具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 多聚抗原肽 免疫磁珠 单表位抗体

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