黄瓜霜霉病和白粉病病原菌的rDNA-ITS序列分析 被引量：17

1

作者 王娜 马雅军 +1 位作者 代光辉 王喆之 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第10期155-158,共4页

为了应用分子特征确定黄瓜霜霉病和白粉病的病原菌种类,扩增、测定了上海地区黄瓜霜霉病菌和白粉病菌的核糖体DNA内转录间隔区(rDNA-ITS)序列,依据rDNA-ITS序列特征分析了两种病原菌种类,以及与近缘种的差异性。结果显示,黄瓜霜霉病菌的... 为了应用分子特征确定黄瓜霜霉病和白粉病的病原菌种类,扩增、测定了上海地区黄瓜霜霉病菌和白粉病菌的核糖体DNA内转录间隔区(rDNA-ITS)序列,依据rDNA-ITS序列特征分析了两种病原菌种类,以及与近缘种的差异性。结果显示,黄瓜霜霉病菌的rDNA-ITS1和rDNA-ITS2长度分别为141和406 bp,rDNA-ITS1 GC含量为41.13%,rDNA-ITS2 GC含量为46.80%(闵行区株和金山区株)或46.55%(浦东新区株),rDNA-ITS序列在种内保守性很高,种间差异性与亲缘关系呈正相关,分子特征证实研究的黄瓜霜霉病病原菌为古巴拟霜霉菌;黄瓜白粉病菌的rDNA-ITS1和rDNA-ITS2长度分别为136和89 bp,GC含量分别为59.56%和66.29%,rDNA-ITS序列在研究材料中保守,与瓜类单囊壳(Sphaerotheca cucurbitae)完全相同,但与形态鉴别的结果Sphaerotheca fuliginea差异高达4.5%,提示黄瓜白粉病病原菌的种类需进一步澄清和确定。 展开更多

关键词 黄瓜霜霉病菌 黄瓜白粉病菌 核糖体DNA

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PCR相关技术方法在植物病害检测中的应用(综述) 被引量：17

2

作者 王娜 马雅军 +1 位作者 王喆之 代光辉 《上海农业学报》 CSCD 2004年第4期112-115,共4页

PCR和建立在PCR基础上的分子生物学技术以其灵敏、快速、简便等优点在植物病害检测中得到了广泛应用。本文综述PCR相关技术 (RT PCR、IC PCR、PCR SSCP、实时荧光PCR、RAPD和RFLP)的原理及其在植物病害检测中的应用现状 ,同时概述我国... PCR和建立在PCR基础上的分子生物学技术以其灵敏、快速、简便等优点在植物病害检测中得到了广泛应用。本文综述PCR相关技术 (RT PCR、IC PCR、PCR SSCP、实时荧光PCR、RAPD和RFLP)的原理及其在植物病害检测中的应用现状 ,同时概述我国已检测的植物病害病原体的种类。 展开更多

关键词 植物病害 检测方法 病原学 反转录聚合酶链式反应 突变 随机扩增多态性DNA

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基于mtDNA和rDNA基因序列的中国按蚊属塞蚊亚属种类的系统发育研究(双翅目:蚊科) 被引量：12

3

作者 吴静 马雅军 马颖 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1030-1038,共9页

【目的】应用mtDNA和rDNA基因特征重建中国按蚊属塞蚊亚属已知种类的系统发育关系,以阐明亚属内各蚊种的亲缘关系。【方法】对采自中国的按蚊属塞蚊亚属Anopheles（Cellia）20种蚊的mtDNA-COⅡ和rDNA-28S-D3序列进行测定和分析,以按蚊... 【目的】应用mtDNA和rDNA基因特征重建中国按蚊属塞蚊亚属已知种类的系统发育关系,以阐明亚属内各蚊种的亲缘关系。【方法】对采自中国的按蚊属塞蚊亚属Anopheles（Cellia）20种蚊的mtDNA-COⅡ和rDNA-28S-D3序列进行测定和分析,以按蚊属按蚊亚属Anopheles（Anopheles）的中华按蚊An.（An.）sinensis和赫坎按蚊An.（An.）hyrcanus为外群,采用COⅡ和D3单基因,以及＂COⅡ＋D3＂联合数据组以邻接法（NJ）、最大简约法（MP）、最大似然法（ML）和贝叶斯法（BI）等重建这些种类的系统发育树。【结果】mtDNA-COⅡ和rDNA-28S-D3序列的长度范围分别为685bp和375~410bp,在塞蚊亚属蚊种间的遗传距离分别为0.015~0.117和0.003-0.111。各系统树显示外群被合理分开,除在COⅡ树中新塞蚊系为并系外,各系均聚为单系群,新迈蚊系和迈蚊系亲缘关系最近。联合数据组构建的系统合意树显示中国塞蚊亚属各蚊种形成4支,除伪威氏按蚊与多斑按蚊种团未聚为单系群外,其他各种团和复合体成员种均分别聚在一起,各分支的置信值均大于50%。【结论】本研究获得的分子系统发育树清楚地显示了中国按蚊属塞蚊亚属各种类及系之间的系统发育关系,对其分类和防治研究具有参考价值。 展开更多

关键词 按蚊属 塞蚊亚属 分子系统学 MTDNA rDNA 系统发育

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我国多斑按蚊复合体mtDNA-COⅡ基因序列分析及系统发育关系研究(双翅目:蚊科) 被引量：6

4

作者 李石柱 马雅军 郑哲民 《陕西师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期84-88,共5页

测定并比较分析了我国多斑按蚊复合体5成员种(多斑按蚊、威氏按蚊、伪威氏按蚊、达罗毗按蚊及塞沃按蚊)mtDNA COⅡ的基因序列,并依据该分子特征构建了其系统发育关系.结果显示,多斑按蚊复合体5成员种的COⅡ基因序列长度均为684bp,GC含... 测定并比较分析了我国多斑按蚊复合体5成员种(多斑按蚊、威氏按蚊、伪威氏按蚊、达罗毗按蚊及塞沃按蚊)mtDNA COⅡ的基因序列,并依据该分子特征构建了其系统发育关系.结果显示,多斑按蚊复合体5成员种的COⅡ基因序列长度均为684bp,GC含量范围为24.85%～26.02%;其中多斑按蚊、威氏按蚊和达罗毗按蚊种内差异极小,为0.15%～0.58%;而种间序列差异较大,为3.66%～9.63%.以中华按蚊为外群,分析多斑按蚊复合体5成员种的系统发育关系显示,威氏按蚊和达罗毗按蚊亲缘关系最近,伪威氏按蚊与其它4种的亲缘关系较远. 展开更多

关键词 中国 多斑按蚊 复合体 mtDNA-COⅡ 基因序列分析 系统发育关系 双翅目 蚊科 亲缘关系

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结核分枝杆菌特异性蛋白片段Rv3388和6种特异抗原在结核抗体检测中的应用价值 被引量：7

5

作者 周鹏 丁莹莹 +7 位作者 林子玉 冯娇娇 高彩霞 王锦红 杨华 温宗梅 潘卫 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第10期1404-1409,共6页

目的 对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病... 目的 对结核分枝杆菌（ MTB） PE家族的所有成员的结构进行分析,预测其抗原表位,截取Rv3388蛋白的优势抗原片段,对重组Rv3388蛋白及其它6种MTB特异性抗原进行评估,探讨不同结核特异性抗原与血清抗体的反应模式,评价血清学检测在结核病诊断中的价值. 方法 利用基因合成技术重叠延伸PCR扩增Rv3388蛋白637-731位的编码基因片段, 原核表达并纯化重组蛋白pET32a/Rv3388637-731 ,将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA法对该抗血清进行免疫原性分析. 同时对这7种MTB特异性蛋白的特异性及敏感性进行评价. 结果 重组蛋白pET32a/Rv3388637-731在大肠杆菌中的表达量占全菌蛋白的80%,ELISA显示有较强的免疫原性. 7 种 MTB特异性抗原具有不同的反应模式,单个抗原检测敏感性较差. 结论 对MTB PE家族的蛋白结构分析,表达并纯化重组蛋白pET32a/ Rv3388637-731 ,7种蛋白在血清抗体检测中具有抗原互补性,不同抗原与机体反应存在不同反应模式,提高结核抗体检测敏感性应多种抗原联合检测. 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Rv3388 特异性 敏感性

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基于mtDNA-COI基因序列的雷氏按蚊分子群体遗传结构研究 被引量：13

6

作者 杨曼尼 马雅军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1000-1007,共8页

【目的】探讨我国雷氏按蚊Anopheles lesteri的群体差异和分化程度。【方法】采用PCR方法,从分子水平鉴别了采自我国和韩国的雷氏按蚊共9个群体139个样本,扩增其线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因,并进行序列测定和分析。【结果】本研... 【目的】探讨我国雷氏按蚊Anopheles lesteri的群体差异和分化程度。【方法】采用PCR方法,从分子水平鉴别了采自我国和韩国的雷氏按蚊共9个群体139个样本,扩增其线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因,并进行序列测定和分析。【结果】本研究共获得49个单倍型,各单倍型呈高水平的平行演化,来自云南群体的单倍型显示是扩张的源头。分子变异等级分析(AMOVA)的计算结果显示,群体内变异占总变异的比例(64.95%)大于群体间(35.05%),FST值为0.3504,各群体间出现遗传分化。Mantel检验结果显示基因流水平与地理距离呈负相关关系(R2=0.1322),群体遗传结构符合距离隔离模型。【结论】雷氏按蚊韩国和辽宁群体与其他分布地群体间差异大,已出现明显分化,我国其他分布地群体间的遗传差异小。 展开更多

关键词 雷氏按蚊 群体遗传结构 线粒体DNA 单倍型 中国

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孕妇血浆中游离胎儿DNA短串联重复序列检测 被引量：6

7

作者 陈晓蕾 李新伟 +3 位作者 李杨 陈辉 雷冬梅 李晓文 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第4期589-591,共3页

目的:建立一种简便、不依赖于胎儿性别和父本DNA的无创性产前诊断方法。方法:应用降落PCR和二次PCR扩增技术,结合母源DNA对照,以34例孕妇外周静脉血血浆作为标本,口腔上皮细胞拭子作为母源对照,孕妇配偶外周血DNA作为父源对照,检测正常... 目的:建立一种简便、不依赖于胎儿性别和父本DNA的无创性产前诊断方法。方法:应用降落PCR和二次PCR扩增技术,结合母源DNA对照,以34例孕妇外周静脉血血浆作为标本,口腔上皮细胞拭子作为母源对照,孕妇配偶外周血DNA作为父源对照,检测正常孕妇血浆中游离胎儿DNAD17S1293、D21S11及DXS8377等基因位点。结果:34例孕妇血浆DNA中均检出非母源性等位基因条带,其中17例经父源DNA验证。结论:采用降落PCR和二次PCR扩增技术,可以提高孕早期微量游离胎儿DNA的扩增效率,准确、快捷地获得不依赖于父本DNA的胎儿遗传信息。 展开更多

关键词 胎儿DNA 短串联重复序列 降落PCR

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Cre/loxP介导的伤寒杆菌染色体上插入基因的切除 被引量：1

8

作者 钱锋 潘卫庆 杜景伶 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期732-735,共4页

来源于P1噬菌体的位点专一性重组系统loxP/Cre,已成为一种新的DNA操作的有用工具 ,在体内外都获得了成功的应用 .为了将四环素诱导表达系统引入减毒伤寒杆菌CVD90 8株中 ,tetR loxP neo串联基因已通过同源重组被定位插入在CVD90 8株的△... 来源于P1噬菌体的位点专一性重组系统loxP/Cre,已成为一种新的DNA操作的有用工具 ,在体内外都获得了成功的应用 .为了将四环素诱导表达系统引入减毒伤寒杆菌CVD90 8株中 ,tetR loxP neo串联基因已通过同源重组被定位插入在CVD90 8株的△aroC位点中 .构建一Cre酶表达受启动子PLtetO 1控制的自杀质粒 pJG9/Cre ,以切除CVD90 8株△aroC中同向loxP序列之间的neo基因 .质粒pJG9/Cre电转化入菌中 ,加入去水四环素诱导Cre酶表达 ,通过重组切除neo基因 ,再通过自杀质粒上SacB基因的启动 ,使质粒清除出菌细胞 .抗生素鉴定和PCR扩增都证明 ,CVD90 展开更多

关键词 CRE LOXP 位点专一性重组 基因切除 伤寒杆菌 染色体 疫苗

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简化的差示PCR技术在伯氏疟原虫氯喹抗性基因分离中的应用 被引量：2

9

作者 严继舟 宋关鸿 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2000年第6期13-16,共4页

目的　为探察伯氏疟原虫氯喹抗性株 (RC株 )和敏感株 (N株 )的遗传学差异。方法　先维持对 RC株连续大剂量氯喹治疗 (5 0 m g/ (kg.d) ,再通过简化逆转录差示多聚酶链反应技术 (s DDRT- PCR)寻找 RC株和 N株疟原虫 c DNA差异片段并对所... 目的　为探察伯氏疟原虫氯喹抗性株 (RC株 )和敏感株 (N株 )的遗传学差异。方法　先维持对 RC株连续大剂量氯喹治疗 (5 0 m g/ (kg.d) ,再通过简化逆转录差示多聚酶链反应技术 (s DDRT- PCR)寻找 RC株和 N株疟原虫 c DNA差异片段并对所产生的可疑差异片段进行反复的 DNA回收和 PCR鉴定 ,然后选其肯定的差异片段 (N2 5 和 R2 5 )作克隆测序和序列分析及同源性检索。结果　尽管差异片段 N2 5 和 R2 5 的克隆分子 N2 5 2 和 R2 5 1 的 DNA序列相同性为 99.8% ,但由于多点突变导致它们的编码氨基酸及其模拟二级结构出现很大差异。BL AST(2 .0 6 )检索未能在基因库中发现与 R2 5 1 和 N2 5 2 相似的基因序列 ,不过它们的部分核苷酸序列 (从 12 8nt到 189nt)与褐鼠磷脂酶 Bm RNA部分序列 (从 10 5 3nt到 1114nt)具有高度同源性 :在 R2 5 1 和N2 5 2 分别为 93.5 %和 91.9%。结论　简化的差示 PCR技术结合差异片段的反复验证和序列分析可用于氯喹抗性相关基因的分离。 展开更多

关键词 伯氏疟原虫 氯喹抗性 差示PCR 磷脂酶 基因分离

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抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

10

作者 郝文波 洪艳华 +4 位作者 孙晓敏 宁云山 张冬梅 潘卫庆 李明 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第9期1169-1171,共3页

目的制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础.方法以恶性疟原虫EBA-175(Ⅱ区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球... 目的制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础.方法以恶性疟原虫EBA-175(Ⅱ区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Western blot试验分析其特异性.结果筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175 McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4A1、4C3、4H9,6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1,1株为IgG2a,6株McAb的培养上清ELISA效价为1:256～1:512,腹水效价为1:12 800～1:25 600,间接ELISA显示其中4株McAb 1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合,而只有1F3、4A1、4H9在Western blot试验中识别恶性疟原虫Mr约35000的虫源蛋白.结论获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175 McAb的杂交瘤细胞. 展开更多

关键词 恶性疟原虫 红细胞结合抗原 单克隆抗体

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一种蛋白质纯化流程用于提纯大肠杆菌表达的蛋白片段

11

作者 钱锋 潘卫庆 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第3期34-37,共4页

用一种新的蛋白质纯化流程提纯由大肠杆菌表达的夏氏疟原虫AMA1片段。大肠杆菌表达的片段首先用镍柱提纯 ,提纯后的蛋白用DTT还原 ,对盐酸胍透析 ,再对空气氧化。用RP HPLC对片段二次提纯 ,通过冻干转换缓冲液。SDS PAGE、RP HPLC和质... 用一种新的蛋白质纯化流程提纯由大肠杆菌表达的夏氏疟原虫AMA1片段。大肠杆菌表达的片段首先用镍柱提纯 ,提纯后的蛋白用DTT还原 ,对盐酸胍透析 ,再对空气氧化。用RP HPLC对片段二次提纯 ,通过冻干转换缓冲液。SDS PAGE、RP HPLC和质谱分析都显示 ,经这种纯化流程提纯的蛋白有很高的纯度 ,且二硫键已完全正确形成。提示这一蛋白质纯化流程可用于由大肠杆菌表达的低分子量寡二硫键的蛋白。 展开更多

关键词 蛋白质 纯化流程 提纯 大肠杆菌 基因表达 蛋白纯化 质谱分析 疟疾 疟原虫顶端膜抗原

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减毒沙门氏菌——真核质粒的导入载体 被引量：5

12

作者 朱冰 钱锋 潘卫庆 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2001年第2期90-91,52,共3页

关键词 减毒沙门氏菌 真核质粒 导入载体

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不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体文库的体外进化研究 被引量：1

13

作者 徐文竹 丁莹莹 +5 位作者 吴莉莉 张婧 冯娇娇 王锦红 潘卫 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第9期1227-1233,共7页

目的判断不同亚类小鼠IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点,采用不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体展示文库进行亲和筛选。方法不同亚类小鼠IgG对噬菌体文库进行亲和筛选,获得具有结合优势的单结构域排列组合,噬菌... 目的判断不同亚类小鼠IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点,采用不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体展示文库进行亲和筛选。方法不同亚类小鼠IgG对噬菌体文库进行亲和筛选,获得具有结合优势的单结构域排列组合,噬菌体ELISA法来比较其与不同亚类小鼠IgG的结合特性,优势组合分子经原核表达蛋白,HRP标记后,ELISA法进一步来比较其与小鼠不同亚类IgG的结合特性。结果小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3分别经过5、4、5和5轮亲和筛选后,其文库的展示片段大小均为2个domain,表明进化完全。测序分析显示:小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3筛选得到的具有结合优势组合分子分别是D-D、D-D、A-C和D-C。噬菌体ELISA验证结合优势组合分子对小鼠不同亚类IgG的结合能力;蛋白经HRP标记后的ELISA结果和筛选不完全一致,但其结合强弱具有一致性,均为:IgG3>IgG2a>IgG2b>IgG1。结论得到3种不存在于天然SpA、SpG分子中,分别与不同亚类小鼠IgG具有较强结合作用的新型组合分子D-D、A-C和D-C,为进一步研究IgG Fc段构像及与SpA或SpG的结合特点提供了新的参考分子。 展开更多

关键词 噬菌体文库 定向进化 亚类 新型免疫球蛋白结合分子

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SPA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选 被引量：1

14

作者 林子玉 丁莹莹 +5 位作者 周鹏 高彩霞 冯娇娇 王锦红 潘卫 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第9期1262-1267,共6页

目的使用人免疫球蛋白G(IgG)对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)单结构域突变体组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同突变体组合的特异结合优势,探索优势组合分子结构与功能间的关系。方法通过Overlap PCR获得SPA中A和C单结构域突变体片段组... 目的使用人免疫球蛋白G(IgG)对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)单结构域突变体组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同突变体组合的特异结合优势,探索优势组合分子结构与功能间的关系。方法通过Overlap PCR获得SPA中A和C单结构域突变体片段组合构成的噬菌体文库,再使用人IgG对文库进行体外亲和筛选,期望通过对特定结合分子的定向改造及体外进化获得具有高结合优势的组合分子。结果成功构建符合体外筛选要求的SPA单结构域A在29、30位氨基酸定点突变文库(A1)、SPA单结构域C在36、37位定点突变文库(C1)和SPA单结构域A在37位后插入3个氨基酸随机肽(AI37)、SPA单结构域C在20位后插入3个随机连接肽(CI20),将A1、C1随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库A1C1,将AI37、CI20随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库AI37CI20。两个文库各自经过4、5轮亲和筛选,文库进化完全。Phage-ELISA高光密度值的单克隆,测序结果分析为A(Q29K30)A(I29I30)和AI-TQSA。结论通过定向改造技术获得了高结合能力的定点突变分子A(Q29K30)A(I29I30)和插入突变分子AI37-TQSA,为Ig结合分子的定向改造及具有新的Ig结合特性的重组Ig结合分子的进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 AC突变体 噬菌体展示文库 筛选 人免疫球蛋白G

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