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人皮下脂肪来源脂肪干细胞的分离培养及鉴定 被引量:9
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作者 张迅轶 仵敏娟 刘厚奇 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期813-816,共4页
目的:建立从切除得到的人皮下脂肪组织分离及培养脂肪干细胞(ADSC)的方法。方法:以人皮下脂肪组织为材料来源,分离、培养、扩增ADSC,并应用针对相对特异性分子的免疫组化、流式细胞术及多向诱导分化等方法鉴定干细胞特性。结果:本实验... 目的:建立从切除得到的人皮下脂肪组织分离及培养脂肪干细胞(ADSC)的方法。方法:以人皮下脂肪组织为材料来源,分离、培养、扩增ADSC,并应用针对相对特异性分子的免疫组化、流式细胞术及多向诱导分化等方法鉴定干细胞特性。结果:本实验培养的ADSC具有干细胞生长特性并表达相对特异分子,有多向分化的潜能,并且具有遗传稳定性。结论:从切取的人皮下脂肪组织可成功分离得到ADSC,为组织工程提供了新的来源丰富、提取方便的种子细胞。 展开更多
关键词 脂肪组织 间质干细胞 细胞分离 组织工程
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CNTF对应激大鼠行为障碍和海马CA1神经元损害的作用 被引量:8
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作者 严进 路长林 +7 位作者 汤淑萍 何成 王成海 王雪琦 黄爱军 孟玲 鲍璇 张铁峰 《心理学报》 CSSCI CSCD 北大核心 2000年第2期210-216,共7页
实验采用 open field测定、 Nissl染色、 Bielschowsky-Gros-Lawrentjew染色和常规透射电镜技术,观察急性和慢性足底电击应激大鼠的open field行为和海马CA1神经元形态的变化... 实验采用 open field测定、 Nissl染色、 Bielschowsky-Gros-Lawrentjew染色和常规透射电镜技术,观察急性和慢性足底电击应激大鼠的open field行为和海马CA1神经元形态的变化,及双侧海马注射睫状神经营养因子(CNTF)对它的影响。结果表明,急性应激大鼠open field行为活动增加,海马CA1神经元形态无明显变化;慢性应激大鼠open field行为活动减少,海马CA1神经元出现明显的损伤性形态变化;睫状神经营养因子对对照组大鼠和急性应激大鼠的open field行为和海马CA1神经元形态均无明显作用,但可显著减轻慢性应激大鼠海马CA1神经元损伤程度,改善其行为障碍。实验结果提示睫状神经营养因子可能通过保护海马神经元从而改善慢性应激大鼠的行为障碍。 展开更多
关键词 CNTF 应激 海马 CA1神经元
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P44/42 MAPK和STAT3在γ射线诱发的小鼠白血病骨髓细胞中的表达 被引量:2
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作者 傅志超 蔡建明 +5 位作者 韩玲 王凤玫 黄定德 黄越承 李百龙 高建国 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期199-203,共5页
为了观察P4 4 / 4 2MAPK和STAT3在γ射线诱发的小鼠白血病骨髓细胞中的变化情况 ,首先利用γ射线诱发Balb/C小鼠发生白血病 ,成功地建立了辐射致癌模型 .在此基础上 ,将动物分为三组 :癌变组、辐射未癌变组和对照组 ,利用免疫沉淀和免... 为了观察P4 4 / 4 2MAPK和STAT3在γ射线诱发的小鼠白血病骨髓细胞中的变化情况 ,首先利用γ射线诱发Balb/C小鼠发生白血病 ,成功地建立了辐射致癌模型 .在此基础上 ,将动物分为三组 :癌变组、辐射未癌变组和对照组 ,利用免疫沉淀和免疫印迹技术 ,检测各组骨髓细胞的P4 4 / 4 2MAPK和STAT3蛋白及磷酸化水平变化情况 .结果显示 :癌变组骨髓细胞P4 4 / 4 2MAPK蛋白及磷酸化水平均高于辐射未癌变组和对照组 (P <0 0 5 ) ;而STAT3蛋白及磷酸化水平在三组骨髓细胞之间无显著差异 (P >0 0 5 ) .说明Ras/P4 4 / 4 2MAPK途径可能在γ射线诱发的小鼠白血病中发挥一定的作用 。 展开更多
关键词 P44/42MAPK STAT3 白血病 骨髓细胞 辐射致癌 信号转导 肿瘤 生长因子 丝裂活化蛋白激酶
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黑素瘤细胞诱导人胚上皮干细胞的恶性转化 被引量:2
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作者 孙红玉 胡凯猛 刘厚奇 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1161-1164,共4页
目的:探索体外肿瘤微环境中正常成体干细胞是否可以发生恶性转化而具有相关肿瘤学特性。方法:利用共培养池建立黑素瘤A-375细胞诱导表皮干细胞转化的模型,应用相差显微镜观察诱导前后表皮干细胞形态变化,免疫荧光法检测诱导后表皮干细... 目的:探索体外肿瘤微环境中正常成体干细胞是否可以发生恶性转化而具有相关肿瘤学特性。方法:利用共培养池建立黑素瘤A-375细胞诱导表皮干细胞转化的模型,应用相差显微镜观察诱导前后表皮干细胞形态变化,免疫荧光法检测诱导后表皮干细胞E-钙黏着蛋白、肿瘤相关抗原P53突变蛋白的表达变化和双层软琼脂实验鉴定诱导后表皮干细胞克隆形成能力情况。结果:7d后与黑素瘤细胞A-375直接接触共培养的表皮干细胞开始克隆样生长,细胞E-钙黏着蛋白表达下降,部分细胞表达P53突变蛋白,软琼脂培养克隆形成率为0.55%。结论:表皮干细胞经黑素瘤细胞直接诱导后,可以具有肿瘤细胞的相关生物学特性。结果表明,肿瘤微环境可以造成干细胞自我更新能力的失控。 展开更多
关键词 黑素瘤 表皮干细胞 肿瘤干细胞 钙黏着蛋白 蛋白质P53 突变
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LIF受体胞内功能域调节白血病细胞增殖分化 被引量:2
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作者 姚云 王静 刘厚奇 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1165-1168,共4页
目的:探讨白血病抑制因子受体(LIFR)浕亚基胞内游离功能域gp190CT3对启动靶细胞内信号转导通路(JAK/STAT3),使白血病细胞HL-60向粒细胞方向分化的作用。方法:采用免疫细胞化学、RT-PCR以及流式细胞术等技术和方法,观测pcDNA3.0-gp190CT... 目的:探讨白血病抑制因子受体(LIFR)浕亚基胞内游离功能域gp190CT3对启动靶细胞内信号转导通路(JAK/STAT3),使白血病细胞HL-60向粒细胞方向分化的作用。方法:采用免疫细胞化学、RT-PCR以及流式细胞术等技术和方法,观测pcDNA3.0-gp190CT3重组质粒稳定转染CHO细胞中靶基因的表达;以及稳定转染的CHO细胞与HL-60细胞共培养后,HL-60细胞的形态学、STAT3磷酸化水平、细胞表面抗原CD15表达的变化。结果:(1)重组质粒转染的CHO细胞表达目的基因gp190CT3,并获得稳定表达目的基因的细胞株;(2)重组质粒转染的CHO细胞与野生型HL-60细胞共培养可使HL-60细胞体积变大,形态不规则,STAT3磷酸化水平和细胞表面抗原CD15表达升高。结论:LIF受体α亚基胞内游离片段表达的功能蛋白gp190CT3能够启动靶细胞内JAK/STAT3信号转导通路,从而发挥其调节白血病细胞增殖分化的效能。 展开更多
关键词 白血病 白血病抑制因子受体 细胞分化 信号转导
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转录因子GATA4和甲胎蛋白在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达对比及相关性 被引量:2
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作者 任传路 季健 +1 位作者 沈红石 刘厚奇 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1309-1313,共5页
目的:探讨转录因子GATA4和甲胎蛋白(AFP)在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达及二者相关性。方法:获取小鼠孕10.5d、孕13.5d、孕15.5d、孕17.5d、出生后0.5d的肝组织,半定量RT-PCR检测GATA4和AFP mRNA的表达,并以成鼠肝、正常肝细胞株和肝癌... 目的:探讨转录因子GATA4和甲胎蛋白(AFP)在小鼠胎肝和肝癌细胞中的表达及二者相关性。方法:获取小鼠孕10.5d、孕13.5d、孕15.5d、孕17.5d、出生后0.5d的肝组织,半定量RT-PCR检测GATA4和AFP mRNA的表达,并以成鼠肝、正常肝细胞株和肝癌细胞株作为对照。将小鼠GATA4真核表达载体成功转染正常肝细胞并鉴定,将多柔比星作用肝癌细胞,然后均进行以下指标监测:半定量RT-PCR法检测GATA4、AFP和胎蛋白转录因子(FTF)mRNA的表达,免疫印迹法检测GATA4和AFP蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清AFP的含量。结果:随着胎肝细胞分化的不断成熟,GATA4和AFP的表达逐渐下降,至出生后0.5d已降至成肝水平。GATA4、FTF和AFP在正常肝细胞不表达,而在肝癌细胞高表达;正常肝细胞转染GATA4后,FTF和AFP表达显著增高,其细胞上清液AFP含量亦明显增高。多柔比星作用肝癌细胞后,6h内GATA4的表达首先降低;随着时间延长(≥12h),FTF和AFP表达逐渐降低,细胞上清液AFP含量亦逐渐降低,差别具有显著的统计学意义。结论:GATA4在胎肝组织和肝癌细胞中高表达并可能对AFP也有一定的上调作用。 展开更多
关键词 GATA4转录因子 甲胎蛋白 胚胎 肝肿瘤
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蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2在乳腺癌细胞移动及粘附中的作用
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作者 王凤玫 刘厚奇 +3 位作者 刘善荣 汤淑萍 杨玲 冯根生 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1582-1583,共2页
关键词 蛋白酪氨酸磷酸酶 SHP-2 乳腺癌 癌细胞移动 癌细胞粘附
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190CT3-myc融合多肽的制备及鉴定
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作者 姚云 姜丹丹 +1 位作者 孙擎 刘厚奇 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1348-1351,1371,共5页
目的通过基因重组的方法构建带有myc标签的190CT3功能多肽(190CT3-myc)。方法采用PCR技术对编码190CT3-myc融合多肽的cDNA序列进行扩增,克隆于T载体上,酶切及测序鉴定正确后构建带有myc标签的190CT3真核表达载体,通过脂质体转染入中国... 目的通过基因重组的方法构建带有myc标签的190CT3功能多肽(190CT3-myc)。方法采用PCR技术对编码190CT3-myc融合多肽的cDNA序列进行扩增,克隆于T载体上,酶切及测序鉴定正确后构建带有myc标签的190CT3真核表达载体,通过脂质体转染入中国仓鼠卵巢癌(CHO)细胞中;经G418筛选,获得稳定表达目的基因的CHO细胞株,免疫荧光化学法鉴定。应用抗原抗体亲和层析柱纯化190CT3-myc融合多肽,SDS-PAGE后考马斯亮蓝染色和Westernblotting分析鉴定。结果 PCR扩增得到编码为190CT3-myc的cDNA片段,经酶切和测序鉴定正确。免疫荧光化学法鉴定显示,转染重组质粒的CHO细胞稳定表达190CT3-myc。考马斯亮蓝染色显示,融合多肽190CT3-myc表达量占细胞总蛋白的10%左右,纯度≥90%;Western blotting分析表明,纯化融合多肽的相对分子量约为17000,与目的蛋白大小相符。结论成功制备190CT3-myc重组多肽,为抗白血病分子医药研究提供了新的思路。 展开更多
关键词 融合多肽 真核表达载体 转染 蛋白纯化
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