期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到74篇文章
< 1 2 … 4 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
中国姥鲨软骨源新生血管抑制因子(Sp8)的分离纯化及生物学活性 被引量：15
1
作者 陈建鹤 焦炳华 +3 位作者 缪为民 王路 王梁华 缪辉南 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 2000年第2期107-110,共4页
目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细... 目的 :从中国姥鲨软骨组织抽提蛋白质中筛选具有新生血管抑制活性和抗肿瘤活性的分子。方法 :盐酸胍抽提姥鲨软骨蛋白 ,采用超滤和分子筛柱层析等方法分离纯化获得相对分子质量为 8.3× 10 3的蛋白质 (Sp8) ,以体外抑制血管内皮细胞增殖、体内抑制新生血管生长和抑制小鼠移植 S180肉瘤生长作为筛选指标。 结果 :Sp8可在体外抑制血管内皮细胞增殖 ,40μg/ml浓度时抑制率为 2 0 % ;在体内具有抑制新生血管生长的作用 ,兔角膜模型抑制率为 72 .7% ,鸡胚模型 (CAM)抑制率为 79% ;并能明显抑制小鼠体内移植 S180肉瘤的生长 (P<0 .0 0 1)。结论 :Sp8介导了鲨鱼软骨中的抗肿瘤活性 ,其作用可能是通过抑制肿瘤诱生新生血管形成这一途径来实现的。 展开更多
关键词 鲨鱼软骨 抑制因子 新生血管 抗肿瘤活性
在线阅读 下载PDF
重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a的制备及纯化 被引量：6
2
作者 王梁华 焦炳华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期324-327,共4页
目的：制备符合临床应用标准的高纯度重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）。方法：高效表达ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ的Ｅ．ｃｏｌｉ工程菌经过超声破碎、硫酸铵分段盐析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００层析，得到电泳... 目的：制备符合临床应用标准的高纯度重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）。方法：高效表达ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ的Ｅ．ｃｏｌｉ工程菌经过超声破碎、硫酸铵分段盐析、ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００层析，得到电泳纯ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ，其比活性为１．８８×１０８ＩＵ／ｍｇ。进一步超滤浓缩，ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０纯化，比活性达２×１０８ＩＵ／ｍｇ。结果：纯度＞９８．２％，回收率约为６５％，内毒素＜２Ｅｕ·（１０６ＩＵ）－１·ｍｌ－１。结论：建立了适宜的ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ纯化方法，连续三批原料和制剂通过国家卫生部药品生物制品检定所检定，符合ＷＨＯ有关基因工程产品临床用药标准，为过渡到临床验证打下了基础。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 衍生物 纯化 制备 rh-TNFαD3a
在线阅读 下载PDF
重组人肿瘤坏死因子α衍生物3a突变区的氨基酸序列分析 被引量：1
3
作者 缪为民 陈建鹤 +3 位作者 王梁华 周丙荣 娄永华 焦炳华 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期309-312,共4页
目的：对重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）突变区进行氨基酸序列分析。方法：通过ＰＣＲ扩增，获得５＇端含ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ突变区的半分子。用融合蛋白表达系统对该半分子进行大肠杆菌表达。表达产物经亲... 目的：对重组人肿瘤坏死因子α衍生物３ａ（ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ）突变区进行氨基酸序列分析。方法：通过ＰＣＲ扩增，获得５＇端含ｒｈ－ＴＮＦαＤ３ａ突变区的半分子。用融合蛋白表达系统对该半分子进行大肠杆菌表达。表达产物经亲和层析法纯化，用Ⅹａ因子酶切，去除载体多肽，然后进行Ｎ末端２０个氨基酸顺序分析。结果和结论：氨基酸序列符合预想突变序列，即发生下列氨基酸替换：８０位Ｉｌｅ→Ｓｅｒ，９０位Ｌｙｓ→Ｈｉｓ，９２位Ａｓｎ→Ｖａｌ。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 衍生物 突变 氨基酸 顺序
在线阅读 下载PDF
重组人白细胞介素2的抗原特性鉴定和部分氨基酸序列分析
4
作者 郑杭民 杜平 +2 位作者 戚中田 曹广文 杨文国 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第6期525-527,共3页
以包含体形式由大肠杆菌表达的基因重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ－２），经纯化后其纯度已达９５％以上［１］。我们采用免疫印迹法和部分氨基酸序列分析等较特异、敏感和准确的检测手段，对纯化ｒｈＩＬ－２的抗原特性和Ｎ末端１５个... 以包含体形式由大肠杆菌表达的基因重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ－２），经纯化后其纯度已达９５％以上［１］。我们采用免疫印迹法和部分氨基酸序列分析等较特异、敏感和准确的检测手段，对纯化ｒｈＩＬ－２的抗原特性和Ｎ末端１５个氨基酸序列进行检测分析，获得了满意的结果。 展开更多
关键词 白细胞介素2 免疫印迹法 氨基酸 序列分析
在线阅读 下载PDF
庚型肝炎病毒基因组全长cDNA的拼接及克隆 被引量：13
5
作者 朱分禄 戚中田 +2 位作者 任浩 宋燕斌 邵力 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期301-306,共6页
目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３和Ｉｗ３为起始材料... 目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３和Ｉｗ３为起始材料，采用重叠延伸ＰＣＲ拼接和连接酶连接的方法，构建ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆。结果：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆的酶切图谱与预期一致；核苷酸序列分析显示，克隆的ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ的核苷酸及推测的氨基酸序列与原ＨＧＶ－Ｉｗ序列一致。结论：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ的克隆已经构建成功。该克隆的构建，为深入研究ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的致病性及致病机制、复制及转录和翻译机制。 展开更多
关键词 全长CDNA 拼接 克隆 庚型肝炎病毒 基因组
在线阅读 下载PDF
噬菌体展示protein A及protein L Ig结合单结构域随机组合文库及Ig亲和筛选 被引量：10
6
作者 徐容 沈毅臖 +6 位作者 邓松华 蔡春晓 陈秋莉 贾建安 王锦红 潘欣 潘卫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期535-543,共9页
ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,... ProteinA和proteinL是细菌产生的两种结构和功能均不同的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)结合分子,在细菌的致病中起重要作用.用含SacⅠ位点的特定引物PCR分别扩增制备proteinA的A、B、C、D抗体结合结构域和proteinL的B3抗体结合结构域,各结构域DNA片段经SacⅠ酶切后,再随机连接形成各种不同长度的分子组合文库,将该文库呈现在噬菌体表面构建了噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库,所建组合文库容量为2.3×106个菌落形成单位,滴度为4.1×1011TU/ml,包含各种单结构域片段,并以随机方式连接.用人Ig对该文库进行4轮亲和筛选,随机挑选36个代表性的阳性克隆进行序列测定分析表明,亲和筛选获得了多种非天然形式存在的新的Ig结合分子结构,其中32个克隆具有由proteinL的单结构域和proteinA的单结构域间隔重复排列而成的特征性(MDPL-MDPA)n结构.对噬菌体展示Ig结合分子单结构域随机组合文库的体外分子进化研究的尝试,为Ig结合分子的结构和功能研究提供了一新的途径,也为Ig结合分子的定向改造打下基础. 展开更多
关键词 噬菌体展示 分子进化 结构域 组合文库 PROTEIN A PROTEIN L
在线阅读 下载PDF
人胚胎生殖系细胞分离与体外培养的初步研究 被引量：8
7
作者 刘善荣 刘厚奇 +5 位作者 汤淑萍 惠宁 冀凯宏 熊俊 蒋正 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期941-943,共3页
目的 :初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养。 方法 :体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织 ,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为 5种不同的方式培养后 ,用碱性磷酸酶标记 ,计数阳性克隆并进行比较。 ... 目的 :初步探讨人胚胎生殖系细胞的分离与体外培养。 方法 :体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织 ,按单纯机械分离、酶消化分离、二者结合法及是否有饲养层将组织分为 5种不同的方式培养后 ,用碱性磷酸酶标记 ,计数阳性克隆并进行比较。 结果 :酶消化法培养所获得的克隆较单纯机械分离方法多 ,原代培养时种植到饲养层上效果较好。将分离到的组织用0 .2 5 %胰酶消化 3min ,种植到丝裂霉素C处理过的小鼠胚胎成纤维细胞上培养 3d ,挑取克隆传代 ,在第 1 0天形成 30 .7个阳性克隆 ,显著高于其他方法获得的阳性克隆数。用碱性磷酸酶标记的细胞 (克隆 )具有多样性 ,细胞胞体为圆形 ,分为有突起和无突起两种 ;阳性细胞克隆呈圆球形、条带形和块形 ,与周围细胞分界清楚。 结论 :人胚胎体内的微环境限制生殖系细胞的体外扩增培养 。 展开更多
关键词 胚胎 生殖系细胞 细胞分离 体外培养 碱性磷酸酶
在线阅读 下载PDF
HCV核心蛋白噬菌体随机展示肽库的构建 被引量：8
8
作者 潘卫 戚中田 +2 位作者 贺祥 陈秋莉 潘欣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期857-860,共4页
目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p ... 目的 :为了探讨噬菌体展示技术在筛选和鉴定病毒抗原表位研究中的应用前景。 方法 :利用随机引物 PCR法以HCV核心基因为模板合成随机 DNA片段 ,再经特定引物二次扩增后获得高丰度的 HCV核心蛋白随机 DNA片段 ,将该片段插入噬菌粒载体 p CANTAB5 X的 Xba 位点 ,转化大肠杆菌 TG1,辅助噬菌体拯救 ,建立噬菌体随机肽展示文库。结果 :所构建的随机文库含 1.2 3× 10 5个不同克隆 ,库容噬菌体滴度为 2× 10 1 2 TU/ m l(转导单位 / ml) ,PCR法检测插入阳性为 2 8.1% ,核酸杂交证实 40 %的克隆为 HCV核心基因阳性克隆。 结论 :所建的随机文库有足够大的库容和较好的多样性 ,可以满足HCV C抗原表位的筛选。 展开更多
关键词 噬菌体随机展示肽库 核心蛋白 丙型肝炎 HCV
在线阅读 下载PDF
含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建 被引量：10
9
作者 崔龙 曹广文 +6 位作者 王元和 屠岳 孟荣贵 高军 仇小芳 吴宗娣 谢苏庆 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期289-291,共3页
含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠... 含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠杆菌等ＤＮＡ嘧啶补救合成途径中的关... 展开更多
关键词 大肠肿瘤 CD基因 逆转录病毒载体 病毒载体
在线阅读 下载PDF
献血员中TT病毒感染的检测及序列分析 被引量：6
10
作者 任浩 钱宝华 +2 位作者 朱分禄 倪武 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第9期605-607,F003,共4页
目的： 研究 Ａ Ｌ Ｔ 正常的献血员中 Ｔ Ｔ Ｖ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｍ ｉｔｔｅｄ ｖｉｒｕｓ） 的感染情况，探讨 Ｔ Ｔ Ｖ 感染的传播途径和致病性。方法： 设计 Ｔ Ｔ Ｖ 保守区域的特异性引物，聚合酶链反应（ Ｐ ... 目的： 研究 Ａ Ｌ Ｔ 正常的献血员中 Ｔ Ｔ Ｖ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ｔｒａｎｓｍ ｉｔｔｅｄ ｖｉｒｕｓ） 的感染情况，探讨 Ｔ Ｔ Ｖ 感染的传播途径和致病性。方法： 设计 Ｔ Ｔ Ｖ 保守区域的特异性引物，聚合酶链反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）方法检测 １２０ 例 Ａ Ｌ Ｔ 正常的献血员，对 １ 例 Ｔ Ｔ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 阳性标本（ Ｔ Ｔ Ｖ Ｄ０２６）进行 Ｐ Ｃ Ｒ产物测序，并与已知 Ｔ Ｔ Ｖ 核苷酸序列比较同源性。结果： １２０ 例 Ａ Ｌ Ｔ 正常献血员中有２０ 例为 Ｔ Ｔ Ｖ Ｄ Ｎ Ａ 阳性，感染率为１６．７％ 。同源性分析表明 Ｔ Ｔ Ｖ Ｄ０２６ 与 Ｔ Ａ２７８， Ｇ Ｈ１， Ｔ Ｔ Ｖ Ｃ Ｈ Ｎ１ 和 Ｔ Ｔ Ｖ Ｃ Ｈ Ｎ２ 的核苷酸同源性分别为９９％ ，９９％ ，９９％ 和 ８９％ 。结论： Ａ Ｌ Ｔ 正常的献血员中存在 Ｔ Ｔ Ｖ 的感染； Ｔ Ｔ Ｖ Ｄ０２６ 与 Ｔ Ｔ Ｖ Ｔ Ａ２７８， Ｇ Ｈ１， Ｔ Ｔ Ｖ Ｃ Ｈ Ｎ１ 和 Ｔ Ｔ Ｖ Ｃ Ｈ Ｎ２ 可能属于同一个基因型；输血可能是 Ｔ Ｔ Ｖ 传播的主要途径。 展开更多
关键词 肝炎病毒 TT病毒 序列分析 献血员 DNA病毒
在线阅读 下载PDF
假单孢杆菌外毒素基因的克隆及用于裸鼠大肠癌基因治疗 被引量：8
11
作者 曹广文 戚中田 +3 位作者 粟山茂树 潘欣 张晓琴 杜平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期106-109,共4页
目的：建立假单孢杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）基因的组织特异性抗大肠癌基因疗法。方法：用ＰＣＲ法从绿脓杆菌基因组ＤＮＡ中克隆ＰＥＡⅡ＋Ⅲ区基因，引入Ｋｏｚａｋ序列、终止信号和酶切位点，测序。构建ＰＥＡ基因转录受人癌胚抗原（Ｃ... 目的：建立假单孢杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）基因的组织特异性抗大肠癌基因疗法。方法：用ＰＣＲ法从绿脓杆菌基因组ＤＮＡ中克隆ＰＥＡⅡ＋Ⅲ区基因，引入Ｋｏｚａｋ序列、终止信号和酶切位点，测序。构建ＰＥＡ基因转录受人癌胚抗原（ＣＥＡ）启动子调控的逆转录病毒载体。共转染法体外研究ＰＥＡ基因表达对报告基因表达的特异抑制作用。用ＤＮＡ体内直接转染法于裸鼠体内观察ＰＥＡ基因的抗人类肿瘤作用。结果：所克隆的ＰＥＡ序列与已报道序列基本相同。ＣＥＡ启动子调控的ＰＥＡ基因可在大肠癌细胞中特异性抑制荧光素酶基因表达，在裸鼠体内对人大肠癌模型的直接转染能特异抑制人大肠肿瘤的生长。结论：ＰＥＡⅡ＋Ⅲ区基因作为治疗基因。 展开更多
关键词 假单孢杆菌外毒素 大肠肿瘤 基因疗法
在线阅读 下载PDF
新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建 被引量：7
12
作者 沈毅珺 潘卫 +7 位作者 易进华 徐容 陈秋莉 潘欣 冯春芝 邓松华 戚中田 刘彦君 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期298-302,共5页
目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ... 目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。 结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。 结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。 展开更多
关键词 噬菌体展示 噬菌粒载体 多克隆位点 多肽接头
在线阅读 下载PDF
不同发育阶段人胚胎原始生殖细胞的定位及体外培养 被引量：4
13
作者 刘善荣 刘厚奇 +5 位作者 汤淑萍 惠宁 冀凯宏 蒋正 戚中田 冯根生 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期944-946,共3页
目的 :对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞 (PGC)进行定位并比较其体外培养的差异。 方法 :取 4～ 7周发育阶段的人胚胎 ,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶 (AP)以对其定位。体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养 ,第 1次传代... 目的 :对不同发育阶段的人胚胎原始生殖细胞 (PGC)进行定位并比较其体外培养的差异。 方法 :取 4～ 7周发育阶段的人胚胎 ,应用组织化学法检测PGC内碱性磷酸酶 (AP)以对其定位。体外分离人胚胎生殖嵴和肠系膜组织进行培养 ,第 1次传代后 ,用AP标记 ,计数不同发育阶段AP阳性的PGC和体外培养的阳性克隆并进行比较。 结果 :在卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处有AP强阳性细胞 ,阳性信号位于胞质内。阳性细胞散在分布 ,在生殖嵴处聚集成团。不同发育阶段的胚胎组织培养均有阳性克隆出现。统计学分析结果表明 ,4～ 7周人胚胎内AP阳性的PGC数目及细胞内信号强度无明显差异(P >0 .0 5 ) ;由胚胎组织培养获得的AP阳性克隆数也无显著差异。 结论 :人PGC位于卵黄囊、原肠、背侧肠系膜和生殖嵴处。 4～ 7周发育阶段 。 展开更多
关键词 胚胎 原始生殖细胞 定位 体外培养 碱性磷酸酶 组织化学法
在线阅读 下载PDF
噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库的构建 被引量：4
14
作者 杨华 李连青 +6 位作者 王蓓霞 徐容 沈毅珺 贾建安 潘欣 陈秋莉 潘卫 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期396-401,共6页
目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构... 目的:构建由免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合的噬菌体展示文库,为应用各种类型免疫球蛋白对该文库进行体外分子进化筛选研究打下基础。方法:PCR扩增制备分别编码Protein A 的A、D结构域、Protein G的B2 结构域和Pro tein L的B3结构域的序列片段,片段两端引入XbaⅠ酶切位点,3′端引入分别编码0、1、2、3个氨基酸大小随机连接肽的序列,并克隆于pMD 18T载体构建重组质粒。以上述16种重组质粒为模板,PCR扩增分别制备各种单结构域片段及两端部分T载体序列,XbaⅠ酶切,各种酶切片段混合后连接,并克隆于噬菌体展示载体pCANTAB5S,构建噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,挑取单克隆进行序列测定,评价文库的随机性。结果:噬菌体展示免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库库容量为2×107,滴度为1.3×1011;文库中含77%以上的阳性克隆,其中由2个以上单结构域组成的阳性克隆占24%;序列分析显示组合文库包含上述4种单结构域序列,连接方式符合随机连接的特点,随机连接肽的编码核酸也呈随机分布。结论:成功构建了免疫球蛋白结合分子单结构域随机组合文库,该文库库容、多样性和随机性完全可满足进行体外分子进化研究的要求。 展开更多
关键词 免疫球蛋白结合分子 噬菌体展示 组合文库 结构域 随机连接肽
在线阅读 下载PDF
血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究 被引量：3
15
作者 贺祥 王路 +3 位作者 潘卫 曹明媚 芮耀诚 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期36-39,共4页
目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。 方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2... 目的 :将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素 endostatin基因进行原核表达、纯化 ,检测重组 endostatin的生物学活性。 方法 :利用原核表达载体 p BV 2 2 0在大肠杆菌 DH5α中表达 endostatin,利用肝素 Sepharose亲和层析及 Sephacryl S- 2 0 0分子筛纯化 ;通过体外内皮细胞 (ECV30 4)增殖实验及体内鸡胚尿囊膜 (CAM)新生血管实验检测其抑制活性。 结果 :Endo-statin在 DH5α中的表达率为 2 8.5 % ,纯化后纯度可达 90 .5 %。 Endostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖 ,IC5 0 为 72μg/ m l;2 0μg/ ml时使细胞于 48h发生明显凋亡 ;2 0 0μg/ ml的 endostatin可使 CAM新生血管化率下降 30 %。结论 :研究结果表明 endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用 。 展开更多
关键词 血管生成抑素 基因表达 内皮细胞 生物学效应 ENDOSTAIN 胶原蛋白
在线阅读 下载PDF
含HSV－tk基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建 被引量：5
16
作者 崔龙 曹广文 +5 位作者 王元和 屠岳 孟荣贵 高军 仇小芳 吴宗娣 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期216-218,共3页
目的：为使自杀基因在大肠癌细胞中特异性表达，以达到靶向基因治疗的目的，首先构建以ＣＥＡ基因转录调控序列驱动的重组逆转录病毒载体。方法：将目的基因片段ＨＳＶ－ｔｋ定向克隆入ｐＵＣ１１８质粒载体中，以相应的内切酶取出合适... 目的：为使自杀基因在大肠癌细胞中特异性表达，以达到靶向基因治疗的目的，首先构建以ＣＥＡ基因转录调控序列驱动的重组逆转录病毒载体。方法：将目的基因片段ＨＳＶ－ｔｋ定向克隆入ｐＵＣ１１８质粒载体中，以相应的内切酶取出合适的酶切片段后，与来自ｐＣＥＡ４２４／２ＣＡＴ质粒的ＣＥＡ５＇转录调控序列相连接，克隆入逆转录病毒载体中。结果：经鉴定及筛选，构建成重组逆转录病毒载体Ｇ１ＣＥＡｔｋＮａ。结论：Ｇ１ＣＥＡｔｋＮａ的成功构建，为进一步研究大肠癌组织特异性基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 大肠肿瘤 逆转录病毒 病毒载体
在线阅读 下载PDF
HCV核心蛋白DNA疫苗诱导的小鼠体液免疫应答 被引量：3
17
作者 赵平 戚中田 +3 位作者 潘卫 崔晓红 朱诗应 陈景山 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期209-211,共3页
目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ... 目的：观察丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心蛋白ＤＮＡ疫苗诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠体液免疫应答的效力，为研制应用于人类的ＨＣＶＤＮＡ疫苗提供实验依据。方法：将全长ＨＣＶ核心蛋白基因插入真核表达质粒载体ｐｃＤＮＡ３．１，构建ＨＣＶ核心蛋白重组表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＨＣＶｃｏｒｅ，肌注ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，以ＥＬＩＳＡ法检测小鼠血清ＨＣＶ抗体。以此重组质粒转染小鼠ＮＩＨ３Ｔ３细胞，以ＨＣＶ抗体阳性小鼠血清为捕获抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ，检测ＤＮＡ疫苗编码的ＨＣＶ核心蛋白的表达。结果：３０％（３／１０）免疫小鼠产生ＨＣＶ核心蛋白抗体，该抗体能检测到重组质粒在ＮＩＨ３Ｔ３细胞表达的ＨＣＶ核心蛋白。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白基因 DNA疫苗 体液免疫应答
在线阅读 下载PDF
肝癌组织特异性小鼠IL─3、TNF逆转录病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达 被引量：6
18
作者 曹广文 杜平 +3 位作者 杨文国 吴清璇 戚中田 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 1995年第2期104-104,共1页
从ｐＳＶ２３ＳＭＴＮＦ和ｐＳＰＭｏＩＬ─３质粒分别切下小鼠肿瘤坏死因子（ｍＴＮＦ）和小鼠白细胞介素３（ｍＩＬ─３）ｃＤＮＡ，并切除ｍＩＬ─３ｃＤＮＡ３＇端ＡＴＴＴＡＴＴＴＡ不稳定序列，以两种细胞因子ｃＤＮＡ作为目的基... 从ｐＳＶ２３ＳＭＴＮＦ和ｐＳＰＭｏＩＬ─３质粒分别切下小鼠肿瘤坏死因子（ｍＴＮＦ）和小鼠白细胞介素３（ｍＩＬ─３）ｃＤＮＡ，并切除ｍＩＬ─３ｃＤＮＡ３＇端ＡＴＴＴＡＴＴＴＡ不稳定序列，以两种细胞因子ｃＤＮＡ作为目的基因，分别克隆到逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ多克隆位点，再于目的基因上游分别插入小鼠白蛋白启动子增强子序列（Ａｌｂｅ／ｐ），构建成功两种肝癌组织特异表达性细胞因子逆转录病毒载体，经磷酸钙共沉淀法导入包装细胞ｐＡ３１７中包装成重组病毒颗粒，并测转染率。经ＮＩＨ／３Ｔ３细胞测定重组病毒Ｎｅｃ抗性感染率后，在８μｇ／ｍｌＰｏｌｙｂｒｅｎｅ存在下感染肿瘤细胞，经４００μｇ／ｍｌ活性Ｇ４１８选择后测转基因肿瘤细胞培养上清中表达相应细胞因子，证明ｍＩＬ─２、ｍＩＬ─３特异地在表达白蛋白的小鼠肝癌细胞中表达（Ｐ＜０．００１）。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 白细胞介素 基因表达 肝肿瘤
在线阅读 下载PDF
随机多肽噬菌体展示载体pCANTAB5X的构建 被引量：12
19
作者 潘卫 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期723-725,共3页
目的：构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体。方法：在引物中加入ＸｂａⅠ识别序列，将用该引物扩增的ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ中，再将该片段插入ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中构建成噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ。结果：限制... 目的：构建适用于外源性随机多肽的噬菌体展示载体。方法：在引物中加入ＸｂａⅠ识别序列，将用该引物扩增的ＰＣＲ产物克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ中，再将该片段插入ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ中构建成噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ。结果：限制酶切点ＸｂａⅠ和ＨＧＶ Ｃ片段被引入到新构建的噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ中。结论：构建的新的噬菌体展示载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｘ能有效展示外源性随机多肽。 展开更多
关键词 噬菌体展示 随机多肽 外源性 pCANTAB5X
在线阅读 下载PDF
庚型肝炎病毒NS3蛋白在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究 被引量：3
20
作者 朱分禄 任浩 +4 位作者 朱诗应 谢南 潘卫 董辉 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期849-852,共4页
目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。 方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4... 目的 :利用 Bac- to- Bac HT杆状病毒系统在 Sf9昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒 (HGV) NS3蛋白 ,并对表达产物的免疫原性进行研究。 方法 :将 HGV NS3基因片段定向克隆至转座载体 p Fast Bac HTa,转化 DH10 Bac感受态细胞 ,37℃振荡培养 4h使发生转座 ,用抗生素平皿筛选重组 bacmid。脂质体介导转染 Sf9昆虫细胞 ,待细胞形态明显改变后收获细胞和培养上清液 ,将上清液再次感染 Sf9细胞以大量表达 HGV NS3重组蛋白。利用 SDS- PAGE和 Western- blotting方法分析重组蛋白。结果 :SDS- PAGE分析发现表达产物在 Mr43810处有一条明显的蛋白带 ,占细胞总蛋白量的 30 %以上 ;应用 Ni- NTA亲和层析柱获得了纯化的重组蛋白 ;Western- blotting显示该抗原可与 HGV RNA阳性血清发生特异反应。 结论 :获得了昆虫细胞内表达的 HGV NS3重组蛋白 ,并证明该蛋白有可能用于 HGV感染的抗体检测。 展开更多
关键词 免疫原性 杆状病毒载体 庚型肝炎 NS3蛋白
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 4 下一页 到第 页
关于我们 | 版权声明 | 联系我们 | 帮助中心| 意见反馈
主办单位：上海市教育委员会
技术支持：重庆维普资讯有限公司
渝公网安备 50019002500403号
使用帮助 返回顶部