毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1的特征研究 被引量：13

1

作者 杨湘越 兰小鹏 +2 位作者 颜宏利 陈蕊雯 孙树汉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期241-243,253,共4页

目的　研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化。方法　对表达产物行SDS -PAGE ,FPLC离子交换层析和分子筛 ,等电聚焦 ,脱磷酸反应 ,N端氨基酸测序 ,小鼠免疫接种。结果　毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大 ,... 目的　研究毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征变化。方法　对表达产物行SDS -PAGE ,FPLC离子交换层析和分子筛 ,等电聚焦 ,脱磷酸反应 ,N端氨基酸测序 ,小鼠免疫接种。结果　毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的分子量较原核的大 ,易于纯化 ,等电点较理论值低 ,重组cC1已被磷酸化 ,N端携带了来自载体的 4个氨基酸 ,免疫原性较原核的明显增强。结论　毕赤酵母重组猪囊尾蚴抗原cC1蛋白的特征较原核的有了明显变化 ,尤其是蛋白易于纯化及免疫原性的增强 ,表明毕赤酵母表达系统非常适合重组亚单位疫苗的生产制备。 展开更多

关键词 抗原cCl 特征 猪囊尾蚴 巴斯德毕赤酵母

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白血病抑制因子受体中gp130细胞内区诱导白血病细胞Meg-01内c-myc的表达 被引量：5

2

作者 刘厚奇 汤淑萍 +2 位作者 刘善荣 胡世杰 傅继梁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期522-525,共4页

目的 :观察人白血病细胞系 Meg- 0 1白血病抑制因子 (L IF)受体α亚基 (gp190 )和另一亚基 gp130细胞内区与 c- m yc的关系 ,以探明白血病细胞过度增殖和晚期分化异常的机制。 方法 :用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体... 目的 :观察人白血病细胞系 Meg- 0 1白血病抑制因子 (L IF)受体α亚基 (gp190 )和另一亚基 gp130细胞内区与 c- m yc的关系 ,以探明白血病细胞过度增殖和晚期分化异常的机制。 方法 :用基因重组技术将两基因细胞内区互换以构成两嵌合体受体 (190 /130 ,130 /190 ) ,并分别在 Meg- 0 1表达 ,其与野生型受体竞争性结合 L IF,用免疫组化和蛋白质印迹法分析受体细胞内区形成同源性二聚体 (190 cyt- 190 cyt,130 cyt- 130 cyt)后的细胞状况和细胞内 c- m yc的表达。结果 :转染 p ED 190 /130后用 L IF作用 6 h,Meg- 0 1细胞 c- myc表达量增加 ,细胞增殖明显 ;而另一嵌合体受体对 Meg- 0 1细胞 c- myc的表达无影响。 结论 :L IF受体中 gp130亚基的细胞内区参与白血病 Meg- 0 1细胞内增殖信号的传递。 展开更多

关键词 白血病 抑制因子 免疫 受体 信号传导

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癌胚抗原与IL-2真核双表达质粒的构建及体外表达 被引量：4

3

作者 王中川 傅传刚 +2 位作者 王庆敏 车文良 戴建新 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第3期193-196,共4页

目的 :构建癌胚抗原 (CEA)与白细胞介素 2 (IL 2 )的真核双表达质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 :利用分子生物学技术 ,将CEA基因片段和IL 2基因片段连接于真核双表达质粒 pIRES中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用ELISA双抗... 目的 :构建癌胚抗原 (CEA)与白细胞介素 2 (IL 2 )的真核双表达质粒 ,并检测其在体外的表达。方法 :利用分子生物学技术 ,将CEA基因片段和IL 2基因片段连接于真核双表达质粒 pIRES中 ,测定序列后 ,用脂质体包裹转染细胞 ,采用ELISA双抗体夹心法检测CEA和IL 2的表达。结果 :核酸序列测定证实本实验所构建的质粒正确 ,质粒上所接入的CEA和IL 2的碱基序列与标准序列的同源性分别为 99.8%和 99.9%。该双表达质粒在体外转染细胞内后可表达CEA和IL 2分子。结论 :实验所构建的 pIRES CEA IL 2双表达质粒能在体外同时表达CEA和IL 2分子 ,说明本质粒具有在细胞水平同时表达两种生物大分子的活性 。 展开更多

关键词 DNA疫苗 癌胚抗原 共表达质粒 白细胞介素2 CEA IL-2

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^(99m)Tc-Annexin B1的制备及其探测细胞凋亡的实验研究 被引量：4

4

作者 罗全勇 张志勇 +4 位作者 王芳 张毅 陆汉魁 孙树汉 朱瑞森 《中国医学影像技术》 CSCD 北大核心 2008年第8期1177-1181,共5页

目的制备99mTc-Annexin B1并对其体外、体内生物分布以及探测体内细胞凋亡的潜力进行评价。方法应用99mTc直接标记蛋白质的方法制备99mTc-Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检测99mTc-Annexin B1的体外生物活性。在正常小鼠体内... 目的制备99mTc-Annexin B1并对其体外、体内生物分布以及探测体内细胞凋亡的潜力进行评价。方法应用99mTc直接标记蛋白质的方法制备99mTc-Annexin B1。采用与活化人血小板结合实验检测99mTc-Annexin B1的体外生物活性。在正常小鼠体内进行生物分布研究。采用地塞米松诱导小鼠胸腺凋亡的动物模型和anti-Fas单抗诱导小鼠肝脏凋亡的动物模型检测99mTc-Annexin B1探测体内细胞凋亡的潜力,并用TUNEL染色证实细胞凋亡。结果直接标记法制备的99mTc-Annexin B1具有很高的放射化学纯度和很好体外稳定性。与活化人血小板的结合实验表明,99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性。99mTc-Annexin B1在体内具有较快的清除特性,主要聚集于肾脏。地塞米松诱导18h后,小鼠胸腺对99mTc-Annexin B1的摄取显著高于对照小鼠胸腺的摄取。Anti-Fas诱导后2h时后,小鼠肝脏对99mTc-AnnexinB1的摄取显著高于为对照动物的肝脏摄取。结论99mTc-Annexin B1具有与PS结合的体外生物活性和探测体内细胞凋亡的潜力,是一种新的细胞凋亡显像剂。 展开更多

关键词 细胞凋亡 膜联蛋白B1 生物分布 放射性核素显像

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DNA疫苗诱导的小鼠抗肿瘤特异性细胞免疫和体液免疫 被引量：3

5

作者 王中川 傅传刚 +3 位作者 王庆敏 何天霖 郝立强 孙树汉 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2005年第4期309-312,共4页

目的:检测以双表达质粒pIRES为载体构建的带有全序列癌胚抗原(CEA)基因和IL-2基因的核苷酸疫苗对机体特异性抗肿瘤免疫反应的激活效果。方法:利用分子生物学技术,将CEA基因片段和IL-2基因片段连接于真核双表达质粒pIRES中,用肌内注射方... 目的:检测以双表达质粒pIRES为载体构建的带有全序列癌胚抗原(CEA)基因和IL-2基因的核苷酸疫苗对机体特异性抗肿瘤免疫反应的激活效果。方法:利用分子生物学技术,将CEA基因片段和IL-2基因片段连接于真核双表达质粒pIRES中,用肌内注射方法接种核酸疫苗;检测疫苗在小鼠肌肉组织中的表达情况及其对小鼠脾细胞CEA特异性细胞免疫和体液免疫反应的激活效果。结果:小鼠经肌内注射质粒后,免疫组化证实该核酸疫苗可在体内有效表达CEA分子;免疫检测显示注射后小鼠血清中出现抗CEA抗体,脾细胞IL-4分泌增强,特异性淋巴细胞增值反应明显并伴有自然杀伤细胞NK活性显著增高。结论:实验所构建的核酸疫苗pIRES-CEA,pIRES-IL-2,pIRES-IL-2等可在小鼠体内高效表达并表现出良好的免疫原性。 展开更多

关键词 DNN疫苗 癌胚抗原 大肠癌 白细胞介素-2

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基因修饰小鼠肿瘤模型研究进展 被引量：3

6

作者 王水良 傅继梁 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第4期300-302,共3页

动物模型在肿瘤病因的揭示、发病机理的探索以及治疗措施的评估中有着不可替代的重要作用。继常规转基因之后,可诱导表达转基因、基因打靶和条件性基因打靶等技术革新及其在肿瘤模型建立中的应用为我们提供了大量能较好模拟人体相应肿... 动物模型在肿瘤病因的揭示、发病机理的探索以及治疗措施的评估中有着不可替代的重要作用。继常规转基因之后,可诱导表达转基因、基因打靶和条件性基因打靶等技术革新及其在肿瘤模型建立中的应用为我们提供了大量能较好模拟人体相应肿瘤的动物模型。而对它们的分析极大地深化了我们对肿瘤生物学行为的认识,并有助于人们找到攻克肿瘤的办法而造福人类。 展开更多

关键词 基因修饰 肿瘤 动物模型 转基因 基因打靶 条件性打靶

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泛素结合酶E2C与肿瘤的关系研究进展 被引量：6

7

作者 王少冰 王芳 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第5期543-548,共6页

越来越多的证据提示肿瘤细胞内紊乱的泛素化过程调控了肿瘤的发生发展。泛素结合酶E2C(ubiquitinconjugating enzyme E2 C,UBE2 C)是泛素结合酶家族的重要成员,是细胞有丝分裂中期向后期转变的关键调节分子。近年来,UBE2C与肿瘤的关系... 越来越多的证据提示肿瘤细胞内紊乱的泛素化过程调控了肿瘤的发生发展。泛素结合酶E2C(ubiquitinconjugating enzyme E2 C,UBE2 C)是泛素结合酶家族的重要成员,是细胞有丝分裂中期向后期转变的关键调节分子。近年来,UBE2C与肿瘤的关系研究较多,文中就该分子在肿瘤中的表达情况、对肿瘤发生发展的影响及内在机制的研究现状作一综述。 展开更多

关键词 泛素结合酶 UBE2C 有丝分裂 肿瘤

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印记基因调控肿瘤的研究进展 被引量：5

8

作者 刘岩 王芳 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第1期87-91,共5页

在胚胎生长和行为发育的过程中,印记基因起到了关键的调控作用,往往是潜在的癌基因或者抑癌基因。而肿瘤是由于异常的细胞生长而导致的一类疾病,其特征是遗传变异和表观遗传改变,如DNA序列的突变和DNA甲基化。基因印记一旦发生错误,将... 在胚胎生长和行为发育的过程中,印记基因起到了关键的调控作用,往往是潜在的癌基因或者抑癌基因。而肿瘤是由于异常的细胞生长而导致的一类疾病,其特征是遗传变异和表观遗传改变,如DNA序列的突变和DNA甲基化。基因印记一旦发生错误,将扰乱个体的生长和发育,导致遗传性疾病,甚至可引发恶性肿瘤。文中就印记基因调控肿瘤的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 印记基因 肿瘤 胚系肿瘤 肿瘤干性 肿瘤转移

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钩端螺旋体鞭毛蛋白B(FlaB)基因flaB在大肠杆菌内的表达 被引量：1

9

作者 寇志华 张毅 +3 位作者 郭瀛军 陈祖欢 施柯 孙树汉 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期180-182,共3页

目的　在大肠杆菌中高效表达钩端螺旋体内鞭毛蛋白 (FlaB)用于钩体病的诊断和预防。方法　将目的基因flaB定向克隆至原核表达载体 pGEX - 5T ,构建重组融合表达质粒 pGF ;Western -blot鉴定其特异性 ,ELISA法判定其用于钩体病诊断的可... 目的　在大肠杆菌中高效表达钩端螺旋体内鞭毛蛋白 (FlaB)用于钩体病的诊断和预防。方法　将目的基因flaB定向克隆至原核表达载体 pGEX - 5T ,构建重组融合表达质粒 pGF ;Western -blot鉴定其特异性 ,ELISA法判定其用于钩体病诊断的可行性。结果　GST -FlaB主要以包涵体形式表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 4 0 % ;Western -blot结果显示该蛋白与FlaB抗血清能呈现明显的单一条带 ;包涵体经TritonX - 10 0及尿素纯化后 ,纯度可达 90 % ,并且能溶于包被缓冲液中 ;ELISA检测显示纯化后的GST -FlaB具有较好的特异性。结论　钩端螺旋体FlaB可以高效表达并可能用于ELISA检测及钩体病的预防。 展开更多

关键词 钩端螺旋体 鞭毛蛋白B 基因 flaB 大肠杆菌 表达

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白血病抑制因子在CHO细胞中的表达及其对U937细胞增殖的抑制作用(英文) 被引量：2

10

作者 朱奎 刘厚奇 +4 位作者 刘小萍 张树忠 邹祝英 刘建国 傅继梁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期190-193,共4页

构建白血病抑制因子(LIF)表达质粒pEDr-LIF并通过磷酸钙-DNA共沉淀的方法转入CHO-dhfr细胞。使用不同浓度的MTX筛选高表达株。获得的最高表达株经ELISA试剂盒检测上清中LIF含量3天内达到0.2μg/ml。Southern blot检测表明LIF cDNA已经... 构建白血病抑制因子(LIF)表达质粒pEDr-LIF并通过磷酸钙-DNA共沉淀的方法转入CHO-dhfr细胞。使用不同浓度的MTX筛选高表达株。获得的最高表达株经ELISA试剂盒检测上清中LIF含量3天内达到0.2μg/ml。Southern blot检测表明LIF cDNA已经稳固整合到了宿主细胞的基因组DNA中。MTT试验表明CHO-LIF的培养上清可以显著地抑制U937的细胞增殖。 展开更多

关键词 白血病抑制因子 基因表达 CHO细胞 U937细胞

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膜联蛋白B2基因的克隆及其真核表达载体的构建 被引量：2

11

作者 王义会 闫强 +2 位作者 王平 王凯慧 陈明勇 《动物医学进展》 CSCD 2007年第3期31-33,共3页

根据GenBank已登录的猪囊尾蚴膜联蛋白B2基因序列,设计合成1对特异性引物,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从猪囊尾蚴中扩增出膜联蛋白B2基因,将其克隆至pcDNA3.1表达载体上,经酶切鉴定和基因测序表明,目的基因AnnexinB2已正确地... 根据GenBank已登录的猪囊尾蚴膜联蛋白B2基因序列,设计合成1对特异性引物,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从猪囊尾蚴中扩增出膜联蛋白B2基因,将其克隆至pcDNA3.1表达载体上,经酶切鉴定和基因测序表明,目的基因AnnexinB2已正确地整合至表达质粒中,成功构建了膜联蛋白B2基因的真核表达载体。 展开更多

关键词 膜联蛋白B2基因 真核表达载体 克隆

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膜联蛋白A2与消化系统肿瘤的研究进展 被引量：1

12

作者 江泓蝶 王梁华 +1 位作者 焦炳华 王凯慧 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期556-560,共5页

膜联蛋白A2(annexin A2,AXⅡ)是依赖钙离子调节的膜磷脂结合的蛋白质多基因家族中的一员,具有多种生物学功能,包括参与细胞增殖、凋亡、信号转导、细胞迁移、DNA的合成复制、RNA结合等。AXⅡ在肝癌、胰腺癌、骨肉瘤等组织尤其是消化系... 膜联蛋白A2(annexin A2,AXⅡ)是依赖钙离子调节的膜磷脂结合的蛋白质多基因家族中的一员,具有多种生物学功能,包括参与细胞增殖、凋亡、信号转导、细胞迁移、DNA的合成复制、RNA结合等。AXⅡ在肝癌、胰腺癌、骨肉瘤等组织尤其是消化系统肿瘤中高表达,而在食管癌、前列腺癌组织中表达下调,说明AXⅡ在不同肿瘤发生、发展中起不同作用。AXⅡ在肿瘤细胞中主要发挥分子调节作用,如血管生成、增殖、凋亡、细胞侵袭、转移和黏附,因此,AXⅡ与肿瘤的临床诊断分期与预后、治疗密切相关。 展开更多

关键词 膜联蛋白A2 肿瘤 消化道肿瘤

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