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发卡样NF-κB特异性RNA干扰表达载体的构建及体外效应研究 被引量:2
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作者 王明海 王锋超 +4 位作者 陆建华 麦跃 刘晓宏 程天民 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期655-657,共3页
目的 采用RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)技术 ,通过构建人NF κBp65基因的特异性siRNA真核表达载体 ,体外观察对NF κB基因的沉默作用 ,以及对内毒素 (LPS)刺激后NF κB活性的调控作用。方法 采用基因克隆技术 ,将合成的发卡样特异... 目的 采用RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)技术 ,通过构建人NF κBp65基因的特异性siRNA真核表达载体 ,体外观察对NF κB基因的沉默作用 ,以及对内毒素 (LPS)刺激后NF κB活性的调控作用。方法 采用基因克隆技术 ,将合成的发卡样特异性p65RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体 (pPUR U6) ,构建p65siRNA的表达载体 ,转染体外ECV 3 0 4细胞 ,48h后观测胞内NF κBp65亚单位蛋白水平 (Westernblotting)、及对LPS ( 10 μg ml)刺激后NF κB活化的抑制作用。结果 ①成功构建发卡样p65siRNA(smallinterfereRNA)真核表达载体 (pPUR U6 p65siRNA) ;②pPUR U6 p65siRNA转染 (脂质体法 )ECV 3 0 4细胞 ,48h后明显下调胞内P65蛋白水平 ;③转染pPUR U6 p65siRNA的细胞 ,明显抑制LPS ( 10μg ml)刺激后NF κB的活化。 结论 该RNA干扰真核表达载体能明显干扰p65蛋白的表达、释放 ,进而抑制NF κB的活化 ,可望进一步抑制细胞的过度炎症反应 ,减轻创伤组织的受损程度 。 展开更多
关键词 NF-ΚB RNA干扰 ECV-304 LPS
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L-carnitine对缺氧/复氧新生大鼠心肌细胞能量生成及CPT-Ⅱ mRNA表达的影响 被引量:5
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作者 朱光旭 谢燕 +3 位作者 王小华 周舟 楼淑芬 余争平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期201-204,共4页
目的 探讨L 肉毒碱 (L carnitine ,L Car)对缺氧 复氧培养新生大鼠心肌细胞能量生成的影响及其机制。方法 以原代培养新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,高效液相色谱检测单纯缺氧 复氧以及L Car预处理缺氧 复氧心肌细胞ATP... 目的 探讨L 肉毒碱 (L carnitine ,L Car)对缺氧 复氧培养新生大鼠心肌细胞能量生成的影响及其机制。方法 以原代培养新生大鼠心肌细胞建立缺氧 复氧损伤模型 ,高效液相色谱检测单纯缺氧 复氧以及L Car预处理缺氧 复氧心肌细胞ATP、ADP、AMP生成改变 ;RT PCR方法检测心肌细胞肉毒碱脂酰基转移酶 Ⅱ (carnitinepalmitoyltransferase Ⅱ ,CPT Ⅱ )mRNA表达。结果 与正常对照组比较 ,培养心肌细胞缺氧 2 4h复氧 0、2、4、8h后 ,心肌细胞ATP、ADP均明显下降。与单纯缺氧 复氧组比较 ,L Car预处理组心肌细胞缺氧 复氧后ATP含量明显增高 ;培养心肌细胞缺氧 2 4h后 ,CPT ⅡmRNA表达除复氧 2h有所上升外 ,复氧 4、8h表达渐次降低。L Car预处理使缺氧 2 4h复氧 4h心肌细胞CPT ⅡmRNA表达呈浓度依赖性增高 ,5 0nmol L处理组CPT ⅡmRNA表达显著高于 0nmol L处理组。结论 心肌细胞缺氧 复氧过程中能量生成明显降低 ,其损伤可能与三羧酸循环中呼吸酶CPT Ⅱ表达降低有关 ;L Car对培养仔鼠心肌细胞缺氧复氧损伤具有显著保护作用 ,其机制可能是与L Car从转录调控水平改善CPT Ⅱ合成有关。 展开更多
关键词 缺氧/复氧 L-camitine 能量代谢 CPT-Ⅱ 心肌细胞 新生大鼠
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Red/ET同源重组介导细菌人工染色体的快速修饰 被引量:4
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作者 王军平 张友明 粟永萍 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第5期468-473,共6页
随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSC101-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL... 随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSC101-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL鄄neo为正/反向筛选系统,可以快速、高效地对BAC进行剪切、插入、替换等操作,其中能够进行抗性筛选的一步BAC修饰只需一周时间,以插入非抗性标记基因Cre为代表的两步BAC修饰在两周内即可完成.通过阿拉伯多糖诱导调控和简单地变化培养温度,能使pSC101-BAD-gbaA依托质粒在发挥完Red/ET同源重组作用后自然消失,最终获得完整而纯净的修饰后BAC,为加快功能基因组学研究提供了一个可靠的实验平台. 展开更多
关键词 Red/ET同源重组 BAC修饰 功能基因组
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小鼠全身照射后血中造血祖细胞水平变化 被引量:1
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作者 宫立众 孙士红 +3 位作者 程天民 粟永萍 罗成基 郭朝华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期363-364,共2页
关键词 辐射损伤 粒细胞巨噬细胞集落形成单位 早期红系祖细胞
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某教研室天然外照射和表面沾染情况调查
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作者 卢雪涛 张国庆 +8 位作者 李涛 柏杨 丁艳凯 薛春洪 蔡同建 孙斌 王伟华 郭朝华 李蓉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期134-134,138,共2页
关键词 天然外照射 空气吸收剂量率 β表面沾染
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