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基因工程技术在肽抗生素制备中的应用进展 被引量:5
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作者 胡金川 饶贤才 +1 位作者 汪正清 胡福泉 《医学研究生学报》 CAS 2003年第8期611-613,共3页
肽抗生素是由生物体基因编码的肽类物质 ,广泛存在于自然界中 ,是生物体非特异性免疫的重要组成部分 ,具有抗菌活性强、抗菌谱广、不易产生耐药性等优点。在未来抗感染治疗中有广阔的应用前景。肽抗生素的制备是制约其开发应用的关键环... 肽抗生素是由生物体基因编码的肽类物质 ,广泛存在于自然界中 ,是生物体非特异性免疫的重要组成部分 ,具有抗菌活性强、抗菌谱广、不易产生耐药性等优点。在未来抗感染治疗中有广阔的应用前景。肽抗生素的制备是制约其开发应用的关键环节。作者对肽抗生素工程制备的有关进展进行综述 ,包括酵母、杆状病毒、大肠杆菌等表达技术在肽抗生素制备中的应用 ,以及转基因动。 展开更多
关键词 肽抗生素 基因工程技术 制备 编码 抗感染治疗
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分泌型重组铜绿假单胞菌外毒素A基因工程菌的发酵研究
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作者 胡晓梅 黄建军 +2 位作者 饶贤才 胡金川 胡福泉 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期46-46,共1页
关键词 重组铜绿假单胞菌 外毒素 基因工程菌 发酵 表达
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人肽抗生素hPAB-β多拷贝串联基因工程菌的筛选及发酵研究
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作者 胡金川 汪正清 +7 位作者 金晓琳 黎庶 谭银玲 李明 申晓冬 张椿 胡福泉 饶贤才 《医学研究生学报》 CAS 2004年第3期193-196,共4页
目的 :对已构建的人肽抗生素hPAB β 1~ 8拷贝串联基因工程菌进行筛选 ,并对其优势菌株进行发酵研究 ,为hPAB β的规模生产奠定基础。  方法 :对 1~ 8拷贝串联基因工程菌的目标蛋白表达率进行比较后 ,选择 2~ 5拷贝菌进行菌产量、... 目的 :对已构建的人肽抗生素hPAB β 1~ 8拷贝串联基因工程菌进行筛选 ,并对其优势菌株进行发酵研究 ,为hPAB β的规模生产奠定基础。  方法 :对 1~ 8拷贝串联基因工程菌的目标蛋白表达率进行比较后 ,选择 2~ 5拷贝菌进行菌产量、目标蛋白表达率、包涵体溶解性、亲和层析效果比较 ,确定最佳多拷贝菌 ;对其摇瓶条件下发酵的培养液、温度、气体条件、IPTG诱导时机、浓度及时间进行研究。 结果 :在相同条件下 ,3拷贝菌产量(3.15 3g/L)最高 ,目标蛋白表达率 (2 7.8% )接近最高水平 ,包涵体能溶解完全 ;利用亲和层析能成功捕获融合蛋白 ,后者经羟胺裂解 ,可获得相对分子质量与合成hPAB β成熟肽大小相符的小肽 ,筛选出的优势菌传代稳定 ,其最佳摇瓶发酵条件为 37℃ ,16 0r/min条件下 ,在改良M 9 CAA培养液中培养至吸光值 (A60 0 )≈ 2 .5时 ,以终浓度为10 0 μmol/L的IPTG诱导表达 5h。 结论 :确定了 3拷贝菌为最佳多拷贝菌 ,并确定了其最佳摇瓶发酵参数。 展开更多
关键词 肽抗生素 hPAB-β 串联拷贝 发酵
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耐药机制指导下的抗金葡菌药物开发现状 被引量:8
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作者 杨杰 饶贤才 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期83-86,共4页
金黄色葡萄球菌是全球院内感染的首要病原菌,临床分离的金葡菌80%以上为耐甲氧西林(MRSA)菌株,因其耐药性,尤其是多重耐药性的快速增长,抗MRSA感染日益成为抗感染治疗的难点和热点。近年来,人们在充分认识金葡菌耐药机制的基础上,积极... 金黄色葡萄球菌是全球院内感染的首要病原菌,临床分离的金葡菌80%以上为耐甲氧西林(MRSA)菌株,因其耐药性,尤其是多重耐药性的快速增长,抗MRSA感染日益成为抗感染治疗的难点和热点。近年来,人们在充分认识金葡菌耐药机制的基础上,积极开发新型抗MRSA药物,取得了长足发展。对MRSA的耐药机制及该机制指导下抗金葡菌药物开发现状作一综述。 展开更多
关键词 MRSA 耐药性 药物
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基因串联体的构建策略及其表达模式 被引量:8
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作者 饶贤才 胡福泉 《医学研究生学报》 CAS 2006年第6期557-560,共4页
为了获取足够的DNA片段或得到基因的表达产物,常需要构建基因串联体,将目的基因按头尾相连随机串联起来,克隆入克隆载体以制备需要的目的基因片段或克隆入表达载体进行高效表达。串联的策略包括定向串联法、PCR扩增串联法、化学拼接法... 为了获取足够的DNA片段或得到基因的表达产物,常需要构建基因串联体,将目的基因按头尾相连随机串联起来,克隆入克隆载体以制备需要的目的基因片段或克隆入表达载体进行高效表达。串联的策略包括定向串联法、PCR扩增串联法、化学拼接法、同尾酶法等,不同方法构建的串联体基因表达模式也有一定差异。 展开更多
关键词 串联体 构建 表达
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pQE-EGFP原核表达载体的构建及其表达和鉴定 被引量:3
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作者 李欢 胡晓梅 +6 位作者 杨杰 饶贤才 丛延广 黎庶 周莹冰 朱军民 胡福泉 《医学研究生学报》 CAS 2008年第4期349-352,449,共5页
目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定。方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转... 目的:利用分子克隆技术构建原核表达载体pQE-EGFP,在大肠埃希菌中高效表达与鉴定。方法:以质粒pEGFP-N2为模板,采用PCR方法特异性扩增增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,将其克隆于原核表达载体pQE-31,所构建的重组质粒经测序鉴定后转化大肠埃希菌JM109,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导表达;十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting鉴定表达蛋白质。结果:PCR扩增得到了EGFP全长结构基因。所构建的pQE-EGFP重组质粒经酶切及测序鉴定结果与设计序列一致;转化大肠埃希菌JM109,经IPTG诱导后,目的蛋白表达率约为25%;SDS-PAGE、Western blotting初步测定目的蛋白的相对分子质量约为28 500,与理论预期值一致。结论:pQE-EGFP重组质粒的成功构建、表达和鉴定为TAT-EGFP融合蛋白穿透细胞能力的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 增强型绿色荧光蛋白 基因克隆 蛋白表达 蛋白鉴定
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