兔源内毒素结合蛋白的提取纯化及体外生物学活性研究 被引量：1

1

作者 葛晓冬 刘友生 +2 位作者 王晓东 潘峰 周萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期514-518,共5页

目的　从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白 (Lipopolysaccharide BindingProteinLBP) ,以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用。方法　兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶... 目的　从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白 (Lipopolysaccharide BindingProteinLBP) ,以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用。方法　兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶过滤来分离纯化 ,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定 ,再将LBP作用于体外培养的人单核细胞 (U93 7) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的状况。结果　获得一种分子量为 60× 10 3蛋白质 ,其N端 10个氨基酸序列为TNPGLITRIT ,与NCBI蛋白质库中有关兔的氨基酸序列进行比较 ,发现其与LBP的序列相同 ,它能促进脂多糖 (LipopolysaccharideLPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合 ,并能促进U93 7在极低浓度的LPS用下分泌TNFα。结论　从血清中分离纯化带有生物活性、全长LBP是可行的 ,LBP能促进极低浓度的LPS与单核细胞结合 ,介导炎性因子的分泌 ,从而促进炎症反应的发生。 展开更多

关键词 内毒素结合蛋白 脂多糖 二步离子交换层析 凝胶过滤 肿瘤坏死因子Α

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纳米级金微粒在DNA生物传感器研究中的应用

2

作者 鲁卫平 周元国 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期50-53,共4页

纳米金颗粒具有独特的物理、化学性质和良好的生物兼容性,已广泛应用于生命科学研究中的示踪技术。将该技术与DNA传感器相结合,可显著提高生物传感器的灵敏度,缩短检测时间和提高检测通量,已成为近年来的研究重点。

关键词 纳米金 生物传感器 DNA传感器

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基于纳米金的显色基因芯片快速检测病原微生物 被引量：3

3

作者 鲁卫平 顾大勇 +2 位作者 王华 安琳 周元国 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期95-98,共4页

为构建一种新型的比色芯片,以实现对临床常见感染病原微生物的快速、准确地检测和鉴定。采用纳米金标记巯基修饰的各待检病原微生物的特异性基因片段,与相应的以各待检靶序列的特异性寡核苷酸探针构建成的基因芯片杂交,并通过结合银染... 为构建一种新型的比色芯片,以实现对临床常见感染病原微生物的快速、准确地检测和鉴定。采用纳米金标记巯基修饰的各待检病原微生物的特异性基因片段,与相应的以各待检靶序列的特异性寡核苷酸探针构建成的基因芯片杂交,并通过结合银染反应将杂交信号被放大形成裸眼可见的显色信息来判读检测结果。该芯片技术检测时间短,最低检测值达100fmol/L。操作方法简单,不需要特殊设备,能部分满足临床检测的通量要求,具有很好的临床应用前景。 展开更多

关键词 纳米金 基因芯片 病原体 微生物

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纳米金基因芯片技术快速检测丝状真菌的研究 被引量：2

4

作者 鲁卫平 陈星云 杨楠 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期61-62,共2页

目的:建立并评价一种快速检测和鉴定丝状真菌的方法。方法:利用通用引物一次PCR法扩增待检丝状真菌核糖体基因内部间隔区2序列,扩增产物与基因芯片上特异性探针杂交,杂交信号通过纳米金标记和银染反应放大形成裸眼可见的显色信息来判读... 目的:建立并评价一种快速检测和鉴定丝状真菌的方法。方法:利用通用引物一次PCR法扩增待检丝状真菌核糖体基因内部间隔区2序列,扩增产物与基因芯片上特异性探针杂交,杂交信号通过纳米金标记和银染反应放大形成裸眼可见的显色信息来判读检测结果。结果:通用PCR扩增方法成功扩增出11种受试菌株的靶DNA,所设计选用的各探针特异性强、可靠性好。所有模拟样品均获得正确的鉴定。结论:该技术方法操作简单、快速、不需要特殊设备,能部分满足临床检测通量的基本要求,具有很好的临床应用前景。 展开更多

关键词 纳米金 基因芯片 快速检测 真菌

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室温保存白细胞凋亡的时相变化及分子机制初探

5

作者 袁玲 刘建忠 +3 位作者 周萍 熊仁平 陈利群 陈方祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第13期1185-1187,共3页

目的　研究室温保存下白细胞凋亡的时相变化及Bcl 2和Bax在其中的作用。方法　采用Annexin V FITC -PI双标染色 ,结合流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡 ;以Westernblot检测Bcl 2和Bax蛋白表达变化。结果　 1～ 2 4h凋亡细胞百分数逐渐增加 ... 目的　研究室温保存下白细胞凋亡的时相变化及Bcl 2和Bax在其中的作用。方法　采用Annexin V FITC -PI双标染色 ,结合流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡 ;以Westernblot检测Bcl 2和Bax蛋白表达变化。结果　 1～ 2 4h凋亡细胞百分数逐渐增加 ,在 2 4h时达到峰值 ;72h时凋亡细胞反而降低。随着保存时间的延长 ,坏死细胞呈由低到高的变化 ,而活细胞则越来越少。Westernblot结果显示 ,1～ 2 4hBax表达逐渐增加 ,条带越来越清晰 ;72h时表达反而降低。 1～ 72h内 ,Bcl 2表达逐渐降低。结论　室温保存下 ,白细胞逐渐凋亡坏死 ,活细胞数量逐渐减少 ;Bcl 2和Bax在调节白细胞凋亡的机制中起着重要的作用。临床应用以输用保存 3～ 展开更多

关键词 白细胞 细胞凋亡 WESTERN BLOT

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MTT法与BrdU ELISA法检测成纤维细胞增殖的可靠性比较 被引量：12

6

作者 刘苹 李平 +1 位作者 熊仁平 周元国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1262-1263,共2页

目的比较MTT法与B rdU ELISA法检测成纤维细胞增殖的可靠性。方法原代培养大鼠成纤维细胞,分别在细胞60%汇合和80%汇合时,以250 pg/m lTGF-β刺激细胞增殖,48 h后分别用MTT法和B rdU ELISA法,以及免疫组化方法检测细胞增殖情况。结果细... 目的比较MTT法与B rdU ELISA法检测成纤维细胞增殖的可靠性。方法原代培养大鼠成纤维细胞,分别在细胞60%汇合和80%汇合时,以250 pg/m lTGF-β刺激细胞增殖,48 h后分别用MTT法和B rdU ELISA法,以及免疫组化方法检测细胞增殖情况。结果细胞60%汇合时MTT检测组和B rdU ELISA检测组与各自的对照组比较,比值分别为1.46和1.70,检测值近似;细胞80%汇合时二者分别为1.0和2.5,免疫组化结果显示TGF-β刺激组蓝染的增殖细胞明显高于对照组。结论与MTT法相比,B rdU ELISA更能客观地反映细胞增殖情况。 展开更多

关键词 MTT法 BRDU ELISA法 细胞增殖

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糖皮质激素非基因组效应及其信号转导机制 被引量：15

7

作者 王霞 李萍 +1 位作者 周元国 陈星云 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第3期205-209,共5页

糖皮质激素具有多种重要的生理和药理作用,其经典作用途径为“基因组机制”,通过调节基因转录发挥作用.近年来,其“非基因组机制”在生理和药理学方面的作用越来越受重视.在这一作用途径中,可能有多种受体、激酶、信号分子的参与,“基... 糖皮质激素具有多种重要的生理和药理作用,其经典作用途径为“基因组机制”,通过调节基因转录发挥作用.近年来,其“非基因组机制”在生理和药理学方面的作用越来越受重视.在这一作用途径中,可能有多种受体、激酶、信号分子的参与,“基因组机制”和“非基因组机制”间还可能存在交互调节,对非基因组机制进行深入研究有利于糖皮质激素的临床合理应用. 展开更多

关键词 糖皮质激素 糖皮质激素受体 非基因组效应

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TGF-β1受体1和2在TGF-β1调节细胞增殖中的作用 被引量：27

8

作者 王秋实 李平 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期122-127,共6页

转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一种多功能细胞因子,在细胞增殖、分化、伤口愈合和肿瘤生成转移等过程中均发挥重要调控作用。TGF-β1对细胞增殖的调节可因细胞类型、刺激剂量不同而不同,但其差异调节的机... 转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)是一种多功能细胞因子,在细胞增殖、分化、伤口愈合和肿瘤生成转移等过程中均发挥重要调控作用。TGF-β1对细胞增殖的调节可因细胞类型、刺激剂量不同而不同,但其差异调节的机制还不清楚。现普遍认为,TGF-β1在TGFBR2/TGFBR1二聚体参与下通过经典的Smad信号通路抑制增殖,而通过非Smad信号通路促进细胞周期,但是机体是如何调控这种不同增殖调节作用转化的还不明确。TGFBR1和TGFBR2在细胞中的分布和比例变化可能是TGF-β1差异性调控细胞增殖作用的一个重要机制。 展开更多

关键词 转化生长因子β1 TGF-β1受体1 TGF-β1受体2 细胞增殖 Smad信号系统 非Smad信号系统

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从少量培养细胞中同时提取微量蛋白和RNA的方法探讨 被引量：3

9

作者 熊仁平 刘苹 +2 位作者 周元国 陈星云 王华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期256-260,共5页

为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2～ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍 苯酚 氯... 为建立一项从少量培养细胞中同时提取RNA和蛋白质的技术 ,向 2～ 3× 10 5细胞中加入 1ml自制RNA提取试剂 ,RNA抽提后剩下的中下两相 ,用异丙醇、盐酸胍和无水乙醇抽提蛋白质 .同时用进口Tripure试剂、经典的异硫氰酸胍 苯酚 氯仿一步抽提RNA法和分子克隆实验手册裂解液制备蛋白质的方法 ,作为对照 .自制试剂提取的总RNA ,18S、2 8S清晰可见 ,2 8S比 18S带亮度强 2～ 3倍 ,带与带之间无拖尾现象 ,5S隐约可见 ,而且成功地进行了Northern印迹、RT PCR分析 ,与经典方法差异不大 ;用此法所提蛋白质 ,经SDS PAGE检测 ,蛋白分离效果很好 ,无杂质 ,且Western印迹检测Giα蛋白 ,可见一条清晰的特异带 ,与常规提取蛋白质 ,结果相似 .从微量细胞中同时提取的RNA和蛋白质 ,得率高、纯度好 。 展开更多

关键词 微量蛋白 RNA 提取方法 细胞培养 同时提取

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坐骨神经火器伤后神经元凋亡与脂质过氧化反应 被引量：4

10

作者 周萍 王建民 +2 位作者 王贵波 陈志强 张良潮 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期309-311,共3页

目的　了解火器性周围神经损伤后神经元凋亡与脂质过氧化反应的关系。方法　采用火器性坐骨神经损伤模型 ,通过流式细胞仪检测神经损伤后脊髓细胞凋亡 ,通过丙二醛 (MDA)含量与超氧化物歧化酶 (SOD)活性检测脊髓组织的脂质过氧化反应。... 目的　了解火器性周围神经损伤后神经元凋亡与脂质过氧化反应的关系。方法　采用火器性坐骨神经损伤模型 ,通过流式细胞仪检测神经损伤后脊髓细胞凋亡 ,通过丙二醛 (MDA)含量与超氧化物歧化酶 (SOD)活性检测脊髓组织的脂质过氧化反应。结果　伤后 1、3d、1、2周的凋亡细胞百分比分别为 1 4%、2 7%、7 8%、4 4% ;火器性神经损伤后 1dSOD即有明显增高 ,至 2周左右达最高峰。MDA则在伤后 2周内呈持续性增高的趋势。结论　火器性坐骨神经伤后的脂质过氧化反应是神经元凋亡的重要原因之一。 展开更多

关键词 坐骨神经损伤 火器伤 神经元凋亡 脂质过氧化反应 超氧化物歧化酶

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Wistar大鼠c-ski基因部分序列的克隆、测序及实时荧光定量PCR的建立 被引量：2

11

作者 李平 刘苹 +3 位作者 熊仁平 赵艳 朱敏 周元国 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1221-1224,共4页

目的测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PCR的建立。方法提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序。根据获得的c-ski基因部分序列设... 目的测定Wistar大鼠c-ski基因部分序列,并应用于检测大鼠c-ski基因表达的实时荧光定量PCR的建立。方法提取培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞总RNA,通过RT-PCR扩增,将扩增产物克隆到PMD-18T载体上并测序。根据获得的c-ski基因部分序列设计实时荧光定量PCR引物,建立SYBRgreen定量PCR检测方法,并检测培养的大鼠皮肤成纤维细胞c-skimRNA表达水平。结果获得的Wistar大鼠c-ski基因cDNA序列长561bp,为未曾报道的新序列,其与人、小鼠具有较高的同源性,Gen-Bank收录(收入号DQ409171)。建立的SYBRgreen定量PCR检测标准品在103～109拷贝范围内的相关系数为0.99149。体外培养的Wistar大鼠皮肤成纤维细胞样品中c-skimRNA水平为(1.02±0.18)×106拷贝/μl。结论新获得了Wistar大鼠c-ski基因部分序列,该序列可用于实时荧光定量PCR的建立。 展开更多

关键词 c-ski 克隆 分子 序列分析 聚合酶链反应

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Smad3基因siRNA对TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖的影响 被引量：2

12

作者 李平 刘苹 +4 位作者 陈星云 赵艳 宁亚蕾 杨楠 周元国 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期690-694,699,共6页

目的构建大鼠Smad3基因特异性siRNA沉默质粒,并探讨其在TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖中的作用。方法构建大鼠Smad3基因沉默质粒,荧光纤维镜观察转染效率,定量PCR、免疫组化法检测Smad3基因和蛋白的变化,BrdU ELISA法和EMSA法分别检测... 目的构建大鼠Smad3基因特异性siRNA沉默质粒,并探讨其在TGF-β1双向调节成纤维细胞增殖中的作用。方法构建大鼠Smad3基因沉默质粒,荧光纤维镜观察转染效率,定量PCR、免疫组化法检测Smad3基因和蛋白的变化,BrdU ELISA法和EMSA法分别检测转染siRNA及联合大小剂量TGF-β1刺激后细胞增殖和Smad3结合活性变化。结果沉默质粒转染效率为41.2%,瞬时转染后具有促增殖作用且与转染剂量成正比,并使其mRNA表达下调50%、蛋白表达明显降低,还可降低大小剂量TGF-β1双向调节细胞增殖和Smad3结合活性的变化程度。结论pSUPERSmad3沉默质粒构建成功,TGF-β1可通过调节Smad3来达到双向调节成纤维细胞增殖作用。 展开更多

关键词 SMAD3基因 RNA干扰 TGF-Β1 成纤维细胞 细胞增殖

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实时荧光定量RT-PCR在小鼠及人G蛋白mRNA检测中的应用 被引量：2

13

作者 熊仁平 周元国 +3 位作者 陈星云 刘苹 夏季 陈建国 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期685-690,共6页

用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10μmol/LGqαmRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作... 用自行设计的TaqMan双标探针和扩增引物建立检测鸟苷酸结合蛋白(G-protein)mRNA的实时荧光定量RT-PCR技术.用G蛋白纯品绘制定量标准曲线,实时荧光定量PCR仪检测ECV304细胞和小鼠G蛋白mRNA水平.10μmol/LGqαmRNA反义寡核苷酸(GqαODN)作用ECV304细胞24h后,Gqα的mRNA表达显著下降(3.18×108±1.75×108拷贝下降到1.44×106±4.82×105拷贝),48h和72h下降更明显;Gsα和Gi2α的mRNA表达变化不显著.10μmol/LGsαmRNA反义寡核苷酸(GsαODN)作用ECV304细胞24h后,Gsα的mRNA表达显著下降(2.97×108±2.68×107拷贝下降到4.16×106±2.00×106拷贝),48h和72h下降更明显;Gqα、Gi2α表达变化不显著.小白鼠油酸致伤后6h,GqαmRNA表达显著下降(1.16×108±8.73×106拷贝下降到3.30×106±1.68×106拷贝),24h下降更显著(9.32×107±1.47×107拷贝下降到4.14×106±1.67×106拷贝);Gsα和Gi2α表达变化的趋势同GqαmRNA.结果准确可靠,重现性好.说明建立的实时荧光定量RT-PCR方法成功地实现了对ECV304细胞和小白鼠肺组织G蛋白不同亚型不同丰度基因表达的检测. 展开更多

关键词 实时PCR 定量 TAQMAN探针 G蛋白 RNA

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C-ski和Smad3在大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤中的变化及意义 被引量：2

14

作者 刘霞 李平 +2 位作者 张恩 刘苹 周元国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第15期1455-1457,共3页

目的研究C-ski和Smad3在大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤中的变化和意义。方法软X线照射诱导大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤,Western blot和RT-PCR观察C-ski、Smad3蛋白和mRNA水平的变化,EMSA检测Smad3转录活性的变化。结果辐射后2h,C-ski... 目的研究C-ski和Smad3在大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤中的变化和意义。方法软X线照射诱导大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤,Western blot和RT-PCR观察C-ski、Smad3蛋白和mRNA水平的变化,EMSA检测Smad3转录活性的变化。结果辐射后2h,C-ski、Smad3蛋白和mRNA水平、Smad3转录活性无显著变化,4h开始,C-ski表达逐渐下降,Smad3表达和转录活性逐渐升高,在8h分别达到峰谷和峰顶。结论C-ski和Smad3参与大鼠皮肤成纤维细胞辐射性损伤的病理过程,辐射后C-ski下降,Smad3升高,并导致Smad3转录活性增强,细胞增殖受抑,凋亡增加。 展开更多

关键词 C—ski SMAD3 成纤维细胞 辐射

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人热休克蛋白90β基因沉默质粒的构建及转染效率的观察 被引量：2

15

作者 季业伟 聂滨 +2 位作者 李平 徐晓玉 周元国 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第1期8-11,共4页

目的:构建能表达小发夹RNA,从而特异、有效抑制人Hsp90βmRNA水平的质粒,比较该质粒对不同细胞株的转染效率。方法:合成3条对应于靶基因3个区域的64nt寡聚核苷酸,插入pSUPEREGFP1质粒,用DH5α细菌扩增,用酶切和测序法鉴定。以绿色荧光... 目的:构建能表达小发夹RNA,从而特异、有效抑制人Hsp90βmRNA水平的质粒,比较该质粒对不同细胞株的转染效率。方法:合成3条对应于靶基因3个区域的64nt寡聚核苷酸,插入pSUPEREGFP1质粒,用DH5α细菌扩增,用酶切和测序法鉴定。以绿色荧光蛋白表达为标记,比较不同比例脂质体和质粒条件下,HepG2、HUVEC、HeK2933种细胞株的转染效率。结果:构建的pSuper-Hsp90β1、pSuper-Hsp90β2、pSuper-Hsp90β33个重组沉默质粒,插入片段碱基完全正确。在相同条件下,所构建的质粒对HeK293细胞转染效率最高,HepG2细胞最低。结论:利用pSUPER质粒可成功构建人Hsp90β基因沉默质粒,该质粒对细胞株的转染效率可因细胞的不同而有显著差异。 展开更多

关键词 热休克蛋白90 RNAI 基因转染 应激

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纳米金基因芯片结合通用PCR同时检测多个病原性真菌 被引量：6

16

作者 鲁卫平 涂植光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期119-122,共4页

基于致病性真菌rDNA基因分型技术,构建采用通用引物的一次PCR法,并结合纳米金新型基因芯片检测系统实现一次对多个临床常见致病性酵母菌的检测分析。用生物素标记的通用引物扩增各真菌DNA片段并与基因芯片杂交,然后将链酶亲和素标记的... 基于致病性真菌rDNA基因分型技术,构建采用通用引物的一次PCR法,并结合纳米金新型基因芯片检测系统实现一次对多个临床常见致病性酵母菌的检测分析。用生物素标记的通用引物扩增各真菌DNA片段并与基因芯片杂交,然后将链酶亲和素标记的纳米金结合到杂交体上,杂交信号通过银染反应被放大形成裸眼可见的显色信息。结果表明,通用引物可扩增临床常见的真菌DNA,选用的各探针特异性强、可靠性好,芯片的最低检测值达50 fmol/L。临床样品检测结果与常规鉴定方法结果一致。该技术检测时间短、操作简单、不需要特殊设备,能部分满足临床检测的通量要求,具有很好的临床应用前景。 展开更多

关键词 纳米金 基因芯片 聚合酶链反应 真菌

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RGS与G蛋白信号转导的调节 被引量：4

17

作者 陈星云 周元国 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期317-321,共5页

RGSs(regulatorsofG proteinsignaling)是最近发现的G 蛋白信号转导的负调节子 ,大部分RGSs通过GAPs(GTPaseactivatingproteins)方式发挥作用 ,RGS的作用具有高度特异性 ,在体内受到严密的调节。

关键词 RGS G蛋白 GAP 信号转导 调节机制

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单细胞水平β地中海贫血诊断膜芯片检测技术的探讨 被引量：2

18

作者 易萍 李力 +2 位作者 邓兵 朱前勇 周元国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期778-781,共4页

目的　对在单细胞水平 β地中海贫血诊断膜芯片检测技术进行探讨。 方法　采用 15个碱基的随机引物对单个细胞的基因组进行引物延伸预扩增 (Primerextensionpreamplification ,PEP) ,取其产物 5 μl分别对 β地中海贫血的目的基因片段... 目的　对在单细胞水平 β地中海贫血诊断膜芯片检测技术进行探讨。 方法　采用 15个碱基的随机引物对单个细胞的基因组进行引物延伸预扩增 (Primerextensionpreamplification ,PEP) ,取其产物 5 μl分别对 β地中海贫血的目的基因片段进行巢式或半巢式扩增 ,然后采用反向斑点杂交 (Reversedotblot,RDB)技术检测 β地贫突变型。 结果　将这些技术应用于 4例已经确定突变基因型的 β地贫患者及 1例正常女性 ,检测结果与预料的相符。 结论　结合我们的实验结果 ,提示在单个细胞或微量DNA模板水平运用基因芯片技术进行遗传病检测是可行的 。 展开更多

关键词 Β地中海贫血 基因芯片 预扩增

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地塞米松和法舒地尔对油酸致小鼠急性肺损伤伤情的影响 被引量：1

19

作者 陈星云 杨楠 +5 位作者 赵艳 熊仁平 李平 刘苹 钟小龙 周元国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期952-954,共3页

目的探讨地塞米松和法舒地尔(fasudil)对油酸致小鼠急性肺损伤的影响及ROCK(Rho-associated coiledcoil forming kinase)在其中的作用。方法采用油酸致C57小鼠急性肺损伤模型,观察伤后24h各组肺组织病理及肺含水率、ROCK活性、ROCK1和RO... 目的探讨地塞米松和法舒地尔(fasudil)对油酸致小鼠急性肺损伤的影响及ROCK(Rho-associated coiledcoil forming kinase)在其中的作用。方法采用油酸致C57小鼠急性肺损伤模型,观察伤后24h各组肺组织病理及肺含水率、ROCK活性、ROCK1和ROCK2蛋白含量及IL-1βmRNA的变化。结果地塞米松和法舒地尔均可显著减轻油酸肺组织中炎性细胞浸润、肺出血等病理变化,降低肺含水率(P<0.05),抑制肺组织ROCK活性(P<0.05),降低IL-1βmRNA的表达水平;地塞米松对ROCK1的表达水平无影响,但可增强ROCK2的表达,法舒地尔对ROCK1和ROCK2的表达水平均无影响。结论地塞米松和法舒地尔均可通过抑制肺组织内炎性细胞浸润明显减轻油酸引起的急性肺损伤,而地塞米松的治疗作用可能与对其ROCK活性的抑制有关。 展开更多

关键词 急性肺损伤 地塞米松 法舒地尔 ROCK1 ROCK2

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Rho相关的卷曲蛋白激酶在多重细胞行为中的作用 被引量：1

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作者 刘冬 陈星云 周元国 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期276-280,共5页

Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)是一种属于AGC家族的蛋白激酶,主要通过诱导应力纤维形成、重构细胞骨架等方式参与细胞收缩、迁徙、分裂、形态变化等生物学行为,对调节细胞的多种功能发挥重要的作用。

关键词 Rho相关的卷曲蛋白激酶 细胞骨架 细胞收缩 细胞迁徙

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