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人重组LIGHT-Fc分子的真核表达及其抗肿瘤活性研究 被引量:1
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作者 黄钢 白云 +1 位作者 姜曼 黎万玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期499-502,共4页
目的 :构建人LIGHT Fc基因的真核表达质粒 ,并表达获得有较高生物学活性的纯化人LIGHT Fc融合蛋白。方法 :从cDNA文库中PCR扩增LIGHT全长编码基因 ,并导入克隆载体。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,用重叠延伸技术(SOE)引入CD... 目的 :构建人LIGHT Fc基因的真核表达质粒 ,并表达获得有较高生物学活性的纯化人LIGHT Fc融合蛋白。方法 :从cDNA文库中PCR扩增LIGHT全长编码基因 ,并导入克隆载体。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,用重叠延伸技术(SOE)引入CD137信号肽基因。将SOE产物与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,瞬时转染 2 93T细胞 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE检测其纯度与Mr,并以肿瘤细胞为靶细胞 ,检测其生物学活性。结果 :测序证实构建的LIGHT与LIGHT FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA和SDS PAGE证实LIGHT Fc融合蛋白的表达与纯度 ;MTT证明人LIGHT Fc蛋白对一些肿瘤细胞系具有生长抑制作用。结论 :获得了有抗肿瘤活性的纯化hLIGHT Fc融合蛋白 ,为探讨LIGHT在免疫自稳调节中的地位、结合相应受体后的动力学与信号转导机制 。 展开更多
关键词 LIGHT LIGHT-Fc 信号肽 重叠延伸 蛋白A亲和层析 抗肿瘤 生物学活性
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PCR及Real-time PCR评价细菌DNA提取方法 被引量:41
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作者 胡晓红 彭惠民 +2 位作者 刘昕 黄正根 袁科 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第2期155-158,共4页
目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提... 目的:比较几种不同的细菌DNA提取方法,建立一种适于PCR和Real-time PCR的细菌DNA提取方法。方法:分别用蛋白酶K法、碱裂解法、Chelex-100+NP40、Chelex-100+TritonX-100法和水煮法提取同种浓度大肠杆菌DNA,测定OD260/280;用不同方法提取不同浓度的大肠杆菌DNA,进行PCR和实时荧光定量PCR扩增,比较灵敏度。结果:5种方法提取细菌DNA,其中Chelex-100+NP40法纯度(OD260/280=1.79±0.03)最高,此方法所提取的DNA产物进行PCR及Real-time PCR扩增未见假阳性及假阴性,其灵敏度为10个/ml细菌浓度。结论:Chelex-100+NP40的细菌DNA提取方法纯度及灵敏度高,且适应于PCR及Real-time PCR。 展开更多
关键词 DNA提取 PCR 实时荧光定量PCR
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抗氧化蛋白Peroxiredoxin家族研究进展 被引量:41
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作者 章波 向渝梅 白云 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期352-355,共4页
Peroxiredoxin是新近发现的抗氧化酶系 ,广泛存在于各种生物体内。根据分子所具有保守半胱氨酸数目的不同 ,哺乳动物的 6个Peroxiredoxin分为 2个亚类。Peroxiredoxin除了具有共同的抗氧化功能外 ,它还具有其它的功能如细胞增殖与分化... Peroxiredoxin是新近发现的抗氧化酶系 ,广泛存在于各种生物体内。根据分子所具有保守半胱氨酸数目的不同 ,哺乳动物的 6个Peroxiredoxin分为 2个亚类。Peroxiredoxin除了具有共同的抗氧化功能外 ,它还具有其它的功能如细胞增殖与分化、细胞信号转导及保护其它蛋白的氧化等。对该类蛋白分子结构的深入研究已初步揭示其抗氧化的作用机制。Peroxiredoxin与肿瘤关系密切 ,它可能成为一个肿瘤标记物 ,可为肿瘤的治疗提供新的思路。 展开更多
关键词 PEROXIREDOXIN 抗氧化 蛋白家族
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采用RNAi技术抑制PeroxiredoxinⅠ的表达 被引量:3
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作者 章波 艾国平 +3 位作者 王燕 王峰超 白云 粟永萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期709-712,共4页
Peroxiredoxin Ⅰ(PrxⅠ) is involved in many important cellular progresses such as cell proliferation and differentiation. To further elucidate its roles in ionizing radiation, eukaryotic expression vector containing s... Peroxiredoxin Ⅰ(PrxⅠ) is involved in many important cellular progresses such as cell proliferation and differentiation. To further elucidate its roles in ionizing radiation, eukaryotic expression vector containing siRNA targeting mRNA of peroxiredoxin 1 gene was constructed and transected into NIH3T3 cell line following sequencing.Western blot analysis showed that this siRNA significantly inhibited PrxⅠ expression by 65% at protein level; cell proliferation experiment demonstrated that the double proliferation time of NIH 3T3PrxⅠ cells was postponed for 1.8 hours as compared with control group. MTT results showed that 12 and 48 hours after irradiation the survival rate of NIH 3T3PrxⅠ was dramatically decreased when comparing with sham-irradiated group.These results suggested that peroxiredoxin 1 has radiation-cytoprotection role. 展开更多
关键词 RNAI技术 硫氧还蛋白 过氧化物 哺乳动物 真核生物 原核生物 超氧化物 生化功能 肿瘤细胞 NK细胞
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染色质隔离子研究进展 被引量:5
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作者 章波 刘昕 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期551-555,共5页
染色质隔离子是真核生物染色质上的顺式调控元件,它将染色质隔离成不同的转录功能域,使其一侧的基因免受另一侧调控元件的影响。染色质隔离子发挥作用是通过与其相结合的蛋白质来实现,它能阻断增强子和沉默子的作用,并使插入在两个隔离... 染色质隔离子是真核生物染色质上的顺式调控元件,它将染色质隔离成不同的转录功能域,使其一侧的基因免受另一侧调控元件的影响。染色质隔离子发挥作用是通过与其相结合的蛋白质来实现,它能阻断增强子和沉默子的作用,并使插入在两个隔离子间的外源基因不受染色体位置效应影响。目前存在多种有关隔离子的作用机理的假说,比较成熟的是loop假说。随着研究的深入,染色质隔离子的应用也将受到更大的重视。 展开更多
关键词 染色质隔离子 增强子 沉默子 染色质边界元件
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真核生物染色质隔离子
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作者 章波 刘昕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第2期315-315,共1页
关键词 真核生物 染色质隔离子 基因表达 调控
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