用基因芯片研究苦丁茶甙对K562细胞基因表达的影响 被引量：2

1

作者 祝骥 马文丽 +3 位作者 李凌 宋艳斌 姚汝华 郑文岭 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第7期83-86,共4页

以人红白血病K5 6 2细胞株为材料 ,应用基因芯片技术研究苦丁茶甙对人红白血病K5 6 2细胞作用前后基因表达的差异 ,以诱导分化药物羟基脲处理作为正对照 ,分别提取药物处理前后细胞RNA进行逆转录cDNA ,使获得的cDNA分别标记上Cy3和Cy5... 以人红白血病K5 6 2细胞株为材料 ,应用基因芯片技术研究苦丁茶甙对人红白血病K5 6 2细胞作用前后基因表达的差异 ,以诱导分化药物羟基脲处理作为正对照 ,分别提取药物处理前后细胞RNA进行逆转录cDNA ,使获得的cDNA分别标记上Cy3和Cy5两种荧光物质 ;然后与由 16 32条cDNA片段制作的基因表达谱芯片杂交 ,经扫描及对获得的数据用相关软件分析 ,确定K5 6 2细胞经苦丁茶甙处理前后差异表达基因 4 8条 ,有 4 1条与羟基脲处理相同 ,其中上调表达的基因有 32条 ,下调表达的基因有 16条 . 展开更多

关键词 基因芯片 苦丁茶甙 K562细胞 基因表达 人红白血病 药物筛选模型

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RD-PCR技术在酵母基因表达谱研究中的应用 被引量：1

2

作者 刘莉扬 马文丽 +2 位作者 宋艳斌 张宝 郑文岭 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期246-248,261,共4页

目的　应用RD PCR技术分离酵母基因。方法　首先提取酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)总RNA ,纯化mRNA ;然后 ,反转录成双链cDNA ;再用限制性内切酶Sau3AI酶切 ,在酶切片段上加上接头后 ,用通用引物U进行第一次PCR扩增 ,以这一产物... 目的　应用RD PCR技术分离酵母基因。方法　首先提取酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)总RNA ,纯化mRNA ;然后 ,反转录成双链cDNA ;再用限制性内切酶Sau3AI酶切 ,在酶切片段上加上接头后 ,用通用引物U进行第一次PCR扩增 ,以这一产物为模板用选择性引物(在通用引物的 3’端延伸两个碱基 )作第二次PCR扩增。 5 %PAGE胶分离基因片段 ,选择单带割胶回收 ,做第三次PCR扩增 ,与载体连接 ,最后进行测序分析。结果　采用这种方法分离得到的基因片段 ,经Blast检索分析 ,确为来自酿酒酵母基因的cDNA片段或表达序列标签 (EST)。结论　RD PCR技术可以有效地分离EST ,可用于酵母基因表达调控的研究。 展开更多

关键词 RD-PCR技术 基因表达谱 酿酒酵母 限制性显示技术 表达序列标签

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胚胎植入前遗传学诊断的研究进展 被引量：1

3

作者 石嵘 马文丽 郑文岭 《国外医学（计划生育分册）》 2002年第2期103-106,共4页

自从1990年首例植入前遗传学诊断(PGD)应用于临床以来,这项技术在多个临床生殖中心迅速的开展起来,对于辅助生殖技术(ART)产生了巨大影响,这主要得益于人类对遗传性疾病认识的深入和分子诊断技术的不断提高,综述了这些遗传学检测技术的... 自从1990年首例植入前遗传学诊断(PGD)应用于临床以来,这项技术在多个临床生殖中心迅速的开展起来,对于辅助生殖技术(ART)产生了巨大影响,这主要得益于人类对遗传性疾病认识的深入和分子诊断技术的不断提高,综述了这些遗传学检测技术的新进展,并对存在的问题和发展的前景做了进一步的阐述和展望。 展开更多

关键词 胚胎植入前 遗传学诊断 研究进展 体外受精 胚胎移植

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乙肝反义抑制治疗的研究进展

4

作者 黄建生 王昌才 《临床荟萃》 CAS 1996年第19期867-868,共2页

反义RNA是一种能与mRNA分子互补的RNA,可特异抑制某一mRNA的加工、翻译以及DNA的复制,特异阻断该基因的表达。 反义RNA最早在原核细胞中被发现,随后证实反义抑制为原核细胞基因表达调控的一种方式。在真核细胞中,直到1986年Williams等... 反义RNA是一种能与mRNA分子互补的RNA,可特异抑制某一mRNA的加工、翻译以及DNA的复制,特异阻断该基因的表达。 反义RNA最早在原核细胞中被发现,随后证实反义抑制为原核细胞基因表达调控的一种方式。在真核细胞中,直到1986年Williams等才首次在小鼠基因组中观察到RNA互补区,证实了真核细胞中反义抑制的存在。反义RNA的主要作用位点如下:①mRNA5’端非编码区,包括SD序列及核糖体结合位点;②mRNA5’编码区,包括起始AUG;③mRNA5’末端cap形成位点;④pre-mRNA外显子与内含子结合部位;⑤mRNApoly-A形成位点;⑥DNA复制的RNA引物;⑦外显子内部等。 反义RNA通过与RNA互补结合,在RNA的转录、蛋白质的翻译。 展开更多

关键词 乙型肝炎 反义抑制治疗

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基因芯片制作中玻璃介质表面处理对DNA固定率的影响 被引量：1

5

作者 祝骥 马文丽 +2 位作者 李凌 姚汝华 郑文岭 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第3期94-97,共4页

用显微镜载玻片作为基因芯片制作中DNA固定介质材料 ,对玻片表面分别进行醛基化、异硫氰酸基化、氨基化等不同修饰处理 ,分析其对DNA固定率的影响 ,并比较了国产与进口玻片处理间的差异 .结果表明 ,异硫氰酸基化处理玻片DNA固定率高于... 用显微镜载玻片作为基因芯片制作中DNA固定介质材料 ,对玻片表面分别进行醛基化、异硫氰酸基化、氨基化等不同修饰处理 ,分析其对DNA固定率的影响 ,并比较了国产与进口玻片处理间的差异 .结果表明 ,异硫氰酸基化处理玻片DNA固定率高于醛基化、氨基化处理 ,接近进口的氨基化玻片 。 展开更多

关键词 基因芯片 玻璃介质 表面处理 固定率 DNA 基因固定 醛基化 异硫氰酸基化

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人生长激素的功能性免疫检测 被引量：1

6

作者 赵慧 郑文岭 +1 位作者 崔东 马文丽 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期149-151,共3页

关键词 人生长激素 功能性免疫检测 内源性GH结合蛋白 干扰

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B19微小病毒70-mer寡核苷酸探针的设计 被引量：1

7

作者 刘佳 郑文岭 马文丽 《山西医科大学学报》 CAS 2004年第2期104-106,共3页

目的　设计B19微小病毒诊断基因芯片的寡核苷酸探针。方法　以微小病毒B19为例 ,利用BLAST软件对其序列进行比对并获得特异序列 ;利用软件Oligo 6设计特异性高、Tm值接近、长度均一的寡核苷酸探针。 结果　获得 12条 70 mer寡核苷酸探... 目的　设计B19微小病毒诊断基因芯片的寡核苷酸探针。方法　以微小病毒B19为例 ,利用BLAST软件对其序列进行比对并获得特异序列 ;利用软件Oligo 6设计特异性高、Tm值接近、长度均一的寡核苷酸探针。 结果　获得 12条 70 mer寡核苷酸探针 ,用于芯片打印及病毒检测。结论　利用BLAST系统和生物学软件Oligo 展开更多

关键词 BLAST软件 基因芯片 寡核苷酸探针 分子生物学 微小病毒B19

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一种酿酒酵母同源重组载体的筛选

8

作者 郑文岭 江晓曦 +2 位作者 崔东 赵慧 马文丽 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期89-92,共4页

将携有mTn-3xHA/LacZ转座子的酿酒酵母文库质粒pHSS6转化大肠杆菌DH5α,挑取单菌落并提取其质粒.将纯化质粒分别用Not I酶切后,转化尿嘧啶缺陷型(ura-)酿酒酵母菌株INVSc1,使其同源重组到酿酒酵母基因组中,于SC/ura-平板上筛选.取长有... 将携有mTn-3xHA/LacZ转座子的酿酒酵母文库质粒pHSS6转化大肠杆菌DH5α,挑取单菌落并提取其质粒.将纯化质粒分别用Not I酶切后,转化尿嘧啶缺陷型(ura-)酿酒酵母菌株INVSc1,使其同源重组到酿酒酵母基因组中,于SC/ura-平板上筛选.取长有单菌落酵母的平板进一步筛选重组后上游有强启动子酿酒酵母文库质粒,用近300个质粒转化酵母菌株INVSc1,最终得到2株前端有强启动子的酿酒酵母质粒,这2个质粒可作为酿酒酵母同源重组载体广泛应用. 展开更多

关键词 酿酒酵母 同源重组 转座子 化学转化 同源重组载体

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用PCR制备检测丁型肝炎病毒基因芯片的探针

9

作者 孙朝晖 郑文岭 +1 位作者 张宝 马文丽 《医学研究生学报》 CAS 2003年第11期803-804,810,I011,共4页

目的 :制备诊断丁型肝炎病毒 (HDV)cDNA基因芯片探针。　方法 :针对HDV病毒基因保守区域设计聚合酶链反应 (PCR)引物 ,纯化PCR扩增产物克隆 ,并测序鉴定。　结果 :序列分析表明 ,所扩增的片段均属于HDV特异基因。　结论 :利用PCR扩增产... 目的 :制备诊断丁型肝炎病毒 (HDV)cDNA基因芯片探针。　方法 :针对HDV病毒基因保守区域设计聚合酶链反应 (PCR)引物 ,纯化PCR扩增产物克隆 ,并测序鉴定。　结果 :序列分析表明 ,所扩增的片段均属于HDV特异基因。　结论 :利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便、实用的方法。 展开更多

关键词 肝炎病毒 丁型 聚合酶链反应 基因芯片 分子探针

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人生长激素基因在酿酒酵母中的同源重组及初步鉴定

10

作者 赵慧 郑文岭 +1 位作者 崔东 马文丽 《医学研究生学报》 CAS 2004年第6期481-483,F002,共4页

目的 :将人生长激素基因构建至pHSS6 mTn 3×HA/lacZ转座文库载体中 ,利用酿酒酵母同源重组稳定高效表达人生长激素。　方法 :通过两步PCR获得带有信号肽的目的基因 ,插入到文库载体的Sse8387I位点中 ,NotI酶切 ,酵母同源重组 ,SC ... 目的 :将人生长激素基因构建至pHSS6 mTn 3×HA/lacZ转座文库载体中 ,利用酿酒酵母同源重组稳定高效表达人生长激素。　方法 :通过两步PCR获得带有信号肽的目的基因 ,插入到文库载体的Sse8387I位点中 ,NotI酶切 ,酵母同源重组 ,SC Ura筛选 ,酵母菌落PCR及lacZ基因表达初步鉴定阳性重组子。　结果 :酵母菌落PCR初步鉴定 ,筛选出目的基因正确插入的重组子 ,其中两株有lacZ基因高表达。　结论 :对阳性重组子进行lacZ显色反应 ,筛选出可高水平表达x gal的菌株 ,以此推测重组位点前有强启动子 ,为目的基因的稳定高效表达奠定基础。 展开更多

关键词 酿酒酵母 人生长激素基因 同源重组 菌落多聚酶链反应

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人生长激素的酿酒酵母表达质粒构建的新方法

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作者 汪宗桂 郑文岭 马文丽 《广州医学院学报》 2004年第1期66-68,共3页

目的 :利用ECHO克隆系统建立一种更加快速、方便、通用的DNA重组技术。方法 :用常规重组法构建出ECHO系统中的携带外源基因HGH的供载体 ,再利用ECHO系统快速构建人生长激素的酿酒酵母表达载体 ,使HGH能在酿酒酵母启动子GAL的调控下进行... 目的 :利用ECHO克隆系统建立一种更加快速、方便、通用的DNA重组技术。方法 :用常规重组法构建出ECHO系统中的携带外源基因HGH的供载体 ,再利用ECHO系统快速构建人生长激素的酿酒酵母表达载体 ,使HGH能在酿酒酵母启动子GAL的调控下进行转录。结果 :基因测序表明 ,在所构建的融合质粒载体上确实含有HGH的基因序列。结论 :本方法为研究HGH的消化道基因治疗打下基础。 展开更多

关键词 ECHO克隆系统 人生长激素 消化道基因治疗 酿酒酵母

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