DnaJ类分子伴侣PBP的基因克隆及亚细胞定位研究 被引量：6

1

作者 刘缨 朱美财 +2 位作者 王荫静 占志 刘成刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期531-534,共4页

目的:从人骨骼肌cDNA文库中,分离、鉴定视网膜感光受体外周蛋白的结合蛋白(PBP)-DnaJ(HSP40)类分子伴侣,并初步分析其在转染的哺乳动物细胞中的表达及分布。方法:以33p-dCTP标记探针杂交筛选人骨骼肌cDNA文库,对阳性克隆进行序列分析,... 目的:从人骨骼肌cDNA文库中,分离、鉴定视网膜感光受体外周蛋白的结合蛋白(PBP)-DnaJ(HSP40)类分子伴侣,并初步分析其在转染的哺乳动物细胞中的表达及分布。方法:以33p-dCTP标记探针杂交筛选人骨骼肌cDNA文库,对阳性克隆进行序列分析,并以脂质体介导转染哺乳动物细胞,用免疫印迹及间接免疫荧光染色法检测目的蛋白的表达。结果:筛选出全长pbp基因,经与GenBank中的序列比较分析证实,与DnaJ家族的1个成员-mrj(1.5 kb)的序列相同,且含140 bp左右富含GC的非编码区上游序列。在COS-7细胞 中瞬时表达的PBP,大多呈典型的胞浆分布,而J-domain缺失的pbp片段多为胞核分布。而在CHO细胞中稳定表达的PBP,在处于不同细胞周期时相的细胞中的分布不同。结论:DnaJ除与HSP70(DnaK)协同发挥重要功能外,其本身作为分子伴侣也可能发挥着重要作用,且与细胞周期可能存在某种密切联系。 展开更多

关键词 DnaJ分子伴侣蛋白 基因 转染细胞 外周蛋白结合蛋白

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飞行员中血管紧张素转换酶基因插入或缺失多态性研究 被引量：5

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作者 蔡庆 刘红巾 +4 位作者 朱美财 姜树强 王荫静 占志 姜建东 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期6-8,共3页

为了解飞行员血管紧张素转换酶 (ACE)基因插入或缺失 (I/D)多态性情况 ,探讨ACE基因多态性与飞行员耐力可能的关系 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增技术检测 118例飞行员和 96例健康对照者的ACE基因I/D多态性。结果位于ACE基因内含子 16的I/... 为了解飞行员血管紧张素转换酶 (ACE)基因插入或缺失 (I/D)多态性情况 ,探讨ACE基因多态性与飞行员耐力可能的关系 ,用聚合酶链反应 (PCR)扩增技术检测 118例飞行员和 96例健康对照者的ACE基因I/D多态性。结果位于ACE基因内含子 16的I/D多态性经PCR扩增后呈三种基因型 :纯合子插入型 (II)、纯合子缺失型(DD)和杂合子插入或缺失型 (I/D)。飞行员组II基因型 (4 4.0 7%)和I等位基因频率 (0 .6 5 )显著高于健康对照组 (分别为 31.2 5 %和 0 .5 2 )。结果表明ACEI基因有可能在飞行员的飞行耐力中起重要作用。 展开更多

关键词 血管紧张素转换酶 基因多态性 飞行员 基因缺失 飞行耐力

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特异性提高TNFR55在内皮细胞中的表达量的研究

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作者 孙晓文 胡晓旻 刘丽 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2001年第2期58-62,共5页

以KDRp为启动子 ,实现TNFR5 5基因在内皮细胞中的特异表达 ,提高其表达量 .构建特异表达TNFR5 5的逆转录病毒载体pLXN D2 99 KDRp TNFR5 5 ,将编码TNFR5 5的cDNA转入内皮细胞中 ,检测感染后的内皮细胞中TNFR5 5表达量的变化及其对TNF细... 以KDRp为启动子 ,实现TNFR5 5基因在内皮细胞中的特异表达 ,提高其表达量 .构建特异表达TNFR5 5的逆转录病毒载体pLXN D2 99 KDRp TNFR5 5 ,将编码TNFR5 5的cDNA转入内皮细胞中 ,检测感染后的内皮细胞中TNFR5 5表达量的变化及其对TNF细胞毒作用的影响 .结果显示 ,TNFR5 5在内皮细胞中的表达量有显著提高 (P <0 .0 1) ,TNF对内皮细胞的细胞毒作用增强 .而同样经病毒感染的NIH3T3细胞表面TNFR的表达量无明显变化 .编码TNFR5 5的cDNA能够在KDRp指导下实现在内皮细胞中的特异表达 ;内皮细胞表面TNFR数量提高后能加强TNF对其的细胞毒作用 . 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子受体 基因治疗 内皮细胞 基因表达 肿瘤

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炎性细胞因子拮抗剂研究与应用新进展

4

作者 陆承荣 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期438-440,共3页

炎性细胞因子拮抗剂研究与应用新进展陆承荣（空军总医院分子生物学研究中心，北京１０００３６）炎性细胞因子参与许多自身免疫性疾病以及其它炎性疾病的发病过程，甚至与癌症和ＨＩＶ感染等有关。如果能够特异性地抑制这些细胞因子中... 炎性细胞因子拮抗剂研究与应用新进展陆承荣（空军总医院分子生物学研究中心，北京１０００３６）炎性细胞因子参与许多自身免疫性疾病以及其它炎性疾病的发病过程，甚至与癌症和ＨＩＶ感染等有关。如果能够特异性地抑制这些细胞因子中的一种或多种在体内的存在水平，这将... 展开更多

关键词 炎性细胞因子 拮抗剂 临床应用

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抗PAI抑制作用的组织纤溶酶原激活剂在大肠杆菌中的表达 被引量：5

5

作者 朱美财 占志 +3 位作者 王雅静 刘成刚 石缨 蔡庆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期565-569,共5页

目的: 构建t-PA活性不被PAI-1抑制的新一代t-PA突变体.方法: 根据t-PA的结构特点,去除t-PA分子中的指状区、表皮生长因子和Kringle1区,以含全长t-PA编码区序列的pUC18质粒为模板,经PCR扩增编码氨基酸1～3和176～527位的截短式t-PA DNA序... 目的: 构建t-PA活性不被PAI-1抑制的新一代t-PA突变体.方法: 根据t-PA的结构特点,去除t-PA分子中的指状区、表皮生长因子和Kringle1区,以含全长t-PA编码区序列的pUC18质粒为模板,经PCR扩增编码氨基酸1～3和176～527位的截短式t-PA DNA序列; 并将该t-PA分子中的PAI-1结合位点,即第373～384位核苷酸(AAG CAC AGG AGG)突变为(GCG GCC GCG GCG),相应的氨基酸KHRR则变为AAAA.结果:测序证实,t-PA突变体的DNA序列正确,将其克隆于大肠杆菌表达载体中,并在大肠杆菌中得到高效表达.表达蛋白占总菌体蛋白的30%,以包涵体形式存在.经蛋白质变性、复性,得到有活性的t-PA突变体.t-PA突变体与PAI-1反应后t-PA的活性未受到抑制.结论:t-PA突变体可能是一种用于治疗心肌梗死和脑血栓等血栓性疾病的强效且剂量要求低的新型生物工程药物. 展开更多

关键词 组织型纤溶酶原激活剂 突变体 基因克隆 表达 纯化

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白细胞介素-18基因肌肉注射产生明显抗肿瘤作用(英文) 被引量：5

6

作者 张国荣 赵建增 +6 位作者 张晋东 王小平 陈涛 朱美财 刘亚宁 姜树强 王哲 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期7-13,共7页

为了探讨人白细胞介素 (h IL ) - 1 8基因转导的抗肿瘤作用 ,构建了 h IL- 1 8c DNA真核表达质粒载体 pc DNA3/h IL- 1 8.将 pc DNA3/h IL- 1 8经脂质体包裹 ,按照 1 0 0μg/只的剂量注射入雄性Balb/c小鼠后肢肌肉 ,在设定时间处死小鼠... 为了探讨人白细胞介素 (h IL ) - 1 8基因转导的抗肿瘤作用 ,构建了 h IL- 1 8c DNA真核表达质粒载体 pc DNA3/h IL- 1 8.将 pc DNA3/h IL- 1 8经脂质体包裹 ,按照 1 0 0μg/只的剂量注射入雄性Balb/c小鼠后肢肌肉 ,在设定时间处死小鼠取注射部位肉提取总 RNA,应用半定量反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)及免疫组化法检测了 h IL- 1 8m RNA及其蛋白质在小鼠肌肉中不同时间点的表达水平 .随后 30只雄性 Balb/c小鼠于基因注射后第 7d腹部皮下 (i.d.)或腹腔内 (i.p.)接种 1×1 0 5个同系小鼠 S- 1 80肉瘤细胞 .观察了 S- 1 80肿瘤细胞在腹腔及皮下的生长情况、小鼠体重、肿瘤重量及存活时间 .结果发现 ,pc DNA3/h IL- 1 8注射后 2 d能检测到 h IL- 1 8m RNA表达 ,第 7d表达量较高 ,第 2 8d仍有 h IL- 1 8m RNA表达 .免疫组化染色显示了注射部位散在有 h IL- 1 8蛋白质颗粒 .h IL- 1 8基因注射组小鼠体重、肿瘤重量均比对照组轻 (P值分别小于 0 .0 0 5、0 .0 5) ,存活时间比对照组延长 .结果显示 ,真核表达系统 pc DNA3/h IL - 1 8经脂质体包裹肌注后能有效表达 ,具有明显的抑制肿瘤生长作用 . 展开更多

关键词 人白细胞介素-18 肌肉注射 肿瘤 基因治疗

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牛肾上腺毛细血管内皮细胞的长期培养及用于测定内皮细胞抑素活性 被引量：2

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作者 王荫静 朱美财 +3 位作者 占志 李文 向培德 刘成刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期88-89,共2页

关键词 肾上腺 毛细胞血管内皮细胞 内皮细胞抑素 测定

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正加速度重复暴露大鼠脑差异表达基因的筛选 被引量：2

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作者 林凯 蔡庆 +2 位作者 卞修武 刘红巾 朱美财 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期956-960,共5页

目的　筛选大鼠经正加速度 (Gositiveacceleration ,+Gz)重复暴露后脑的差异表达基因 ,探讨 +Gz重复暴露致脑损伤的分子机制。方法　应用抑制性消减杂交技术 ,构建高消减效率的 +Gz重复暴露大鼠脑cDNA消减文库 ;用差异筛选技术筛选阳性... 目的　筛选大鼠经正加速度 (Gositiveacceleration ,+Gz)重复暴露后脑的差异表达基因 ,探讨 +Gz重复暴露致脑损伤的分子机制。方法　应用抑制性消减杂交技术 ,构建高消减效率的 +Gz重复暴露大鼠脑cDNA消减文库 ;用差异筛选技术筛选阳性克隆 ;用序列分析确定阳性克隆的性质 ;用RT -PCR证实阳性克隆的可靠性。结果　从消减库中获得70个阳性克隆 ;经差异筛选后 ,选取其中 10个阳性克隆 ,序列分析表明 ,7个克隆与已知基因高度同源 ,3个为新的候选基因。RT -PCR证实了差异表达基因在 +Gz重复暴露大鼠脑中高表达。结论　用抑制性消减杂交技术筛选发现的 3个新的cDNA可能在 展开更多

关键词 正加速度(+Gz) 脑损伤 差异表达基因 抑制性消减杂交

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重组人白细胞介素－6与肿瘤坏死因子突变体融合蛋白的构建及表达 被引量：2

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作者 刘丽 欧阳应斌 +1 位作者 黄培堂 刘及 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第5期529-534,共6页

针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实，根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息，利用ＰＣＲ技术，对人ＴＮＦα基因进行了改造，并将其与人ＩＬ... 针对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在肿瘤治疗剂量下产生的严重毒副作用及一些肿瘤细胞上白细胞介素－６（ＩＬ－６）受体明显增高的事实，根据ＴＮＦ结构与功能研究的最新信息，利用ＰＣＲ技术，对人ＴＮＦα基因进行了改造，并将其与人ＩＬ－６成熟肽编码区ｃＤＮＡ通过人工接头进行融合。融合蛋白在大肠杆菌中表达后，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析表明，分子量约为３７ｋＤ；活性检测结果证实，该融合蛋白兼具有ＴＮＦ抗肿瘤活性和结合ＩＬ－６受体的能力，在高表达ＩＬ－６受体的人骨髓瘤细胞上测得的细胞毒活性较同样位点突变的ＴＮＦ高约３倍。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 白细胞介素-6 突变体 融合蛋白

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人睫状神经营养因子突变体基因克隆及高效表达

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作者 马红雨 蔡庆 +2 位作者 朱美财 占志 陈友纯 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第4期372-376,共5页

为了提高人睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）的生物学活性，用ＰＣＲ方法获取Ｎ端缺失１４个氨基酸的ＣＮＴＦ基因片段，经酶切鉴定、核酸测序证实突变体的核苷酸序列，将其重组至表达质粒ｐＢＶ２２０，构建了ＣＮＴＦ突变体表达载体ｐＢ... 为了提高人睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）的生物学活性，用ＰＣＲ方法获取Ｎ端缺失１４个氨基酸的ＣＮＴＦ基因片段，经酶切鉴定、核酸测序证实突变体的核苷酸序列，将其重组至表达质粒ｐＢＶ２２０，构建了ＣＮＴＦ突变体表达载体ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其表达水平，鸡胚背根节无血清培养法检测表达蛋白的生物学活性．结果表明，ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ能表达生物学活性高于天然ＣＮＴＦ的约２６ｋＤ蛋白质，表达水平达３０％．为今后通过基因工程方法获得ＣＮＴＦ突变体，从而制备高效的ＣＮＴＦ制剂创造了条件． 展开更多

关键词 CNTF突变体 高效表达 生物学活性

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血小板生成素基因在体内的表达及对造血祖细胞增殖活性的影响 被引量：5

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作者 赵建增 刘丽 +1 位作者 陈惠仁 梅英杰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第2期117-121,共5页

探讨了从肌肉组织植入的人血小板生成素（ＴＰＯ）基因在小鼠体内的表达规律，以及对造血祖细胞增殖活性的影响．基因在导入后的２４小时内就开始转录，先于血小板、血液ＴＰＯ浓度、及造血祖细胞的变化．所表达的ＴＰＯ在血液中的聚积... 探讨了从肌肉组织植入的人血小板生成素（ＴＰＯ）基因在小鼠体内的表达规律，以及对造血祖细胞增殖活性的影响．基因在导入后的２４小时内就开始转录，先于血小板、血液ＴＰＯ浓度、及造血祖细胞的变化．所表达的ＴＰＯ在血液中的聚积可持续４周以上．巨核祖细胞，粒系祖细胞都出现２周左右的增殖增长，长于血小板计数的升高，但红系祖细胞的变化不明显．这些结果显示，基因治疗过程中血小板计数等变化源于ＴＰＯ的表达及刺激，而在此期间一些调控机制被激活，对血小板形成的平衡发挥作用． 展开更多

关键词 血小板生成素 基因治疗 造血祖细胞 细胞增殖

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人白血病抑制因子基因cDNA的克隆及分析 被引量：2

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作者 涂强 王永俊 +6 位作者 李文 谢宝树 朱元晓 阎玉河 余竟源 兰兰 林万明 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1993年第1期41-42,共2页

白血病抑制因子(leukemia inhibitoryfactor,LIF)是80年代初发现的一种新的细胞因子。它能不可逆地抑制白血病细胞增殖、并诱导其分化,同时它还能在没有明显毒副作用的情况下在体内或体外直接刺激巨核血小板系统生成,增加外周血血小板... 白血病抑制因子(leukemia inhibitoryfactor,LIF)是80年代初发现的一种新的细胞因子。它能不可逆地抑制白血病细胞增殖、并诱导其分化,同时它还能在没有明显毒副作用的情况下在体内或体外直接刺激巨核血小板系统生成,增加外周血血小板数量。 展开更多

关键词 白血病 抑制因子 基因克隆

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KDP胞外502～764位氨基酸基因合成、表达及功能鉴定 被引量：2

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作者 刘立忠 肖畅 +5 位作者 刘丽 谢宝树 徐福 冷爱军 曹颖 朱迅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第1期86-91,共6页

应用基因搭桥法及 Taq酶聚合反应合成了编码人血管内皮生长因子受体 - ( h VEGFR- ,KDR)第 50 2～ 764位 2 62个氨基酸的基因片段 .DNA序列分析表明 ,合成的 786bp的基因片段与文献报道的 KDR相应 c DNA序列完全一致 .将该基因与原核... 应用基因搭桥法及 Taq酶聚合反应合成了编码人血管内皮生长因子受体 - ( h VEGFR- ,KDR)第 50 2～ 764位 2 62个氨基酸的基因片段 .DNA序列分析表明 ,合成的 786bp的基因片段与文献报道的 KDR相应 c DNA序列完全一致 .将该基因与原核融合蛋白表达载体 p GEX- 3X重组 ,在大肠杆菌 JM1 0 9中表达了 GST- KDR2 62融合蛋白 ,表达量约占菌体总蛋白的 35% .表达产物依次经包涵体分离、变性、复性、亲合层析纯化和 Xa因子酶解 ,获得了 KDR2 62目的蛋白纯品 .GST-KDR2 62融合蛋白和纯化产物经 Western blot分析 ,两者均可被 VEGF1 65特异性识别 ,前者分子量约 56k D,后者分子量约 30 k D;这两种蛋白用 VEGF1 65及其抗体进行的 ELISA分析结果均显示阳性 ,并有剂量依赖关系 ,而用 Xa因子酶解 GST- KDR2 62融合蛋白获得的 GST和空载体诱导产物对照均为阴性 .以上结果表明表达的 KDR2 62蛋白可特异性地与 VEGF结合 . 展开更多

关键词 基因合成 蛋白表达 KDR 肿瘤治疗 人源化Fab抗体

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抑制性差减杂交方法克隆重力适应相关基因

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作者 胡晓旻 孙晓文 +1 位作者 李喜文 刘丽 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2001年第4期82-87,共6页

采用抑制性差减杂交方法 ,分别从经重力环境改变适应性锻炼 (实验组 )和未经重力环境改变适应性锻炼 (驱动组 )的两组SD大鼠的淋巴细胞中分别提取RNA和mRNA ,并经逆转录酶合成dscDNA ,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分为 2组 ,分别与两种不... 采用抑制性差减杂交方法 ,分别从经重力环境改变适应性锻炼 (实验组 )和未经重力环境改变适应性锻炼 (驱动组 )的两组SD大鼠的淋巴细胞中分别提取RNA和mRNA ,并经逆转录酶合成dscDNA ,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分为 2组 ,分别与两种不同的接头衔接 ,再与驱动组cDNA进行 2次消减杂交及 2次抑制性PCR ,将产物与T/A载体连接构建cDNA消减文库 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 .随机挑选 80个克隆 ,通过斑点杂交 ,初步筛选出 2 展开更多

关键词 抑制性差减杂交 重力环境 基因克隆 大鼠 淋巴细胞 基因表达 CDNA消减文库

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