太子参多糖经Let-7d-3p下调伪狂犬病病毒感染小鼠的炎症基因转录水平

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作者 罗诗师 陈蓓蕾 +9 位作者 张蕾 冯启贤 吴瑞森 陈佳祺 王媛 简子昕 许丽惠 陈秋勇 马玉芳 王全溪 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2438-2450,共13页

本研究旨在探究太子参多糖(Radix pseudostellariae polysaccharide,RPP)调控微小核糖核酸(microRNA,miRNA)Let-7d-3p对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染引起炎症基因表达的影响及其机理。体外培养猪肾细胞(porcine kidney 15,... 本研究旨在探究太子参多糖(Radix pseudostellariae polysaccharide,RPP)调控微小核糖核酸(microRNA,miRNA)Let-7d-3p对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)感染引起炎症基因表达的影响及其机理。体外培养猪肾细胞(porcine kidney 15,PK-15),使用不同浓度RPP(0.5~32.0 mg·mL^(-1))处理PK-15细胞,通过细胞增殖与活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)法检测细胞存活率。接着将PK-15细胞分为空白组、PRV组、0.5 mg·mL^(-1)RPP组、1.0 mg·mL^(-1)RPP组、2.0 mg·mL^(-1)RPP组,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-17的mRNA转录水平。转染Let-7d-3p抑制物至PK-15细胞,经0或0.5 mg·mL^(-1)RPP干预后,采用qPCR检测Let-7d-3p和炎症因子mRNA转录水平。选择15只健康小鼠随机分为空白组、PRV组、RPP(10 mg·kg^(-1))组(每组5只),qPCR检测小鼠肾组织中Let-7d-3p和炎症因子mRNA转录水平。结果显示,在0~4.0 mg·mL^(-1)浓度RPP无细胞毒性。与空白组相比,PRV感染PK-15细胞会显著上调炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平(P<0.01),显著下调Let-7d-3p转录水平(P<0.01)。与PRV组相比,三个浓度的RPP作用细胞后均显著上调Let-7d-3p的转录水平(P<0.01),同时显著下调3个炎症因子的mRNA转录水平(P<0.01)。抑制Let-7d-3p后,与PRV组相比Let-7d-3p抑制组的IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平呈现显著上调(P<0.01)。而与PRV+RPP组相比,抑制Let-7d-3p后加入RPP干预,细胞炎症因子的mRNA转录水平显著上调(P<0.01)。体内试验结果表明,与空白组相比,PRV感染组小鼠肾中Let-7d-3p的转录水平显著下降(P<0.01),且炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的mRNA转录水平显著上调(P<0.01)。与PRV组相比,RPP处理小鼠后肾脏中Let-7d-3p转录水平显著上升(P<0.01),炎症因子IL-6、TNF-α、IL-17的转录水平显著下降(P<0.01)。体内体外结果表明,RPP可通过Let-7d-3p下调PRV感染引起的炎症基因转录水平,在mRNA水平上发现RPP具有一定的抗炎效用,为后续研究太子参多糖缓解PRV引起的炎症提供思路。 展开更多

关键词 太子参多糖 伪狂犬病病毒 Let-7d-3p 炎症

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芪蓝复方对围产期母猪免疫、繁殖及排便功能的影响

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作者 臧欣怡 张偌益 +2 位作者 陈泽晗 范舒钰 李健 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2341-2352,共12页

【目的】揭示芪蓝复方对围产期母猪免疫、繁殖及排便功能的影响,为提高围产期母猪健康水平提供参考。【方法】选取25头二元母猪(30~40胎龄),均分为空白组(N),0.1%、0.2%和0.4%芪蓝复方组(L、M和H)及阳性对照组(A),每组5个重复,每个重复... 【目的】揭示芪蓝复方对围产期母猪免疫、繁殖及排便功能的影响,为提高围产期母猪健康水平提供参考。【方法】选取25头二元母猪(30~40胎龄),均分为空白组(N),0.1%、0.2%和0.4%芪蓝复方组(L、M和H)及阳性对照组(A),每组5个重复,每个重复1头母猪。空白组母猪饲喂基础饲粮,芪蓝复方组分别在基础饲粮中添加0.1%、0.2%和0.4%芪蓝复方,阳性对照组在基础饲粮中添加50 mg/kg爱乐新。试验自妊娠91 d开始,至断奶(产后21 d)结束,妊娠91 d、产后4和21 d采血,检测芪蓝复方对母猪血清中总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活性或和丙二醛(MDA)、免疫球蛋白(IgG、IgM和IgA)、炎症因子(白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β)、胃肠激素(血清P物质(SP)、胃动素(MTL)和血管活性肠肽(VIP)含量)及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体水平的影响,统计繁殖功能指标和便秘率,并于产后21 d收集试验猪粪便,检测芪蓝复方对粪便短链脂肪酸(SCFAs)的影响。【结果】产后4和21 d,与N组相比,芪蓝复方组母猪血清中T-AOC、GSH-Px和SOD活性显著升高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05);免疫球蛋白IgG、IgM和IgA含量显著提高(P<0.05),IL-6和IL-1β含量显著降低(P<0.05),其中H组效果最显著;PRRSV抗体S/P值显著降低(P<0.05);VIP含量显著降低(P<0.05),SP和MTL含量显著上升(P<0.05)。与N组相比,芪蓝复方组死胎率和弱仔率显著降低(P<0.05),初生窝重和断奶窝重显著提升(P<0.05),母猪便秘率显著降低(P<0.05);芪蓝复方组母猪粪便SCFAs含量显著上升(P<0.05)。【结论】芪蓝复方对围产期母猪免疫、繁殖及排便功能具有显著促进作用,饲粮中添加0.4%芪蓝复方效果最佳,可用于围产期母猪保健。 展开更多

关键词 芪蓝复方 围产期母猪 免疫功能 繁殖功能 排便功能

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太子参皂苷对卵清白蛋白免疫小鼠肠道应答的影响

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作者 陈颖清 曾丽 +8 位作者 赵佳梅 杜蓥蓥 曾靖棋 周梦圆 秦凤远 江珊 李健 潘慧青 马玉芳 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期130-134,共5页

为研究太子参皂苷(pseudostellaria heterophylla saponins,PHS)对模式抗原卵清白蛋白(OVA)免疫小鼠肠道免疫应答的影响,将72只雌性小鼠随机分为6组,分别为空白组(CK组)、OVA免疫对照组(OVA组)、铝佐剂对照组(OVA+Al组)、PHS低剂量组(OV... 为研究太子参皂苷(pseudostellaria heterophylla saponins,PHS)对模式抗原卵清白蛋白(OVA)免疫小鼠肠道免疫应答的影响,将72只雌性小鼠随机分为6组,分别为空白组(CK组)、OVA免疫对照组(OVA组)、铝佐剂对照组(OVA+Al组)、PHS低剂量组(OVA+PHS-L,50 mg/kg)、PHS中剂量组(OVA+PHS-M,100 mg/kg)、PHS高剂量组(OVA+PHS-H,200 mg/kg)(在第1~5天和第16~20天,除PHS各剂量组按体重灌胃相应剂量PHS外,其余各组灌胃相应体积的双蒸水;在第6天和第21天,于腹股沟处对CK组每只小鼠进行皮下注射0.2 mL/只的无菌PBS,对OVA+Al组注射含100μg OVA和200μg Alum的PBS混合液,对PHS各剂量组小鼠注射含100μg OVA的PBS溶液)。第36天处死小鼠,检测各项指标。结果显示,与OVA组相比,OVA+PHS-L组可显著提高回肠绒隐比和十二指肠单位长度内淋巴细胞个数(P<0.05),显著提升十二指肠中IL-6、空肠中sIgA和回肠中TNF-α含量(P<0.05);OVA+PHS-M组可显著提高十二指肠绒毛高度、绒隐比以及单位长度内淋巴细胞个数(P<0.05),显著提升空肠和回肠中TNF-α含量(P<0.05);OVA+PHS-H组可显著提升空肠中sIgA含量(P<0.05)。上述结果表明,PHS能在一定程度上强化肠道组织形态,调节相关免疫球蛋白和细胞因子的分泌,增强肠道黏膜免疫功能,提高小鼠对OVA的免疫应答,具有成为佐剂的潜力。 展开更多

关键词 太子参皂苷 卵清白蛋白 佐剂 肠道免疫应答

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基于HPLC指纹图谱和网络药理学的白屈菜缓解IPEC-J2细胞炎性损伤作用研究

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作者 陈泽晗 张偌益 +3 位作者 林惠莹 曾春丽 林福 李健 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2466-2480,共15页

白屈菜可用于治疗多种消化道和呼吸道炎症,但其作用机制尚不明确。本研究基于指纹图谱和网络药理学预测分析白屈菜的药效成分及作用机制。采用HPLC法建立15批白屈菜指纹图谱并进行相似度评价和主成分分析;通过网络药理学方法建立白屈菜... 白屈菜可用于治疗多种消化道和呼吸道炎症,但其作用机制尚不明确。本研究基于指纹图谱和网络药理学预测分析白屈菜的药效成分及作用机制。采用HPLC法建立15批白屈菜指纹图谱并进行相似度评价和主成分分析;通过网络药理学方法建立白屈菜活性成分-靶点网络,分析其核心抗炎成分,通过蛋白互作网络分析其核心靶点,并进行GO和KEGG富集分析;将指纹图谱指认的共有峰与网络药理学筛选出的核心成分取交集,MTT法和ELISA法研究其对IPEC-J2细胞炎症损伤的影响。结果发现,15批次白屈菜中有12批次相似度>0.9,标定出21个共有峰,指认出其中6个分别为原阿片碱、白屈菜碱、黄连碱、血根碱、小檗碱和白屈菜红碱;网络药理学筛选出8个核心抗炎成分,分别为异紫堇定碱、(s)-金罂粟碱、(s)-氢化小檗碱、小檗碱、白屈菜碱、白屈菜红碱、氧化血根碱和(+/-)-高白屈菜碱;上述2组成分交集为白屈菜碱、小檗碱和白屈菜红碱,参考中国药典规定,选取白屈菜红碱,研究其对IPEC-J2细胞炎症的影响,发现2.5~10μg·mL^(-1)白屈菜红碱能显著提高细胞存活率,显著升高IL-4和IL^(-1)0含量,降低NO、IL^(-1)β、IL-6、IL-8、TNF-α和TGF-β1含量。综上,本研究建立了白屈菜HPLC指纹图谱,结合网络药理学方法初步揭示了白屈菜的药效成分及作用机制,为其质量控制与深入开发提供参考。 展开更多

关键词 白屈菜 指纹图谱 网络药理学 白屈菜红碱 抗炎作用

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福建白羽肉鸡鸡毒支原体的分离鉴定及最小抑菌浓度测定 被引量：8

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作者 吴春琳 黄宝钦 +5 位作者 蓝天韵 林琳 张立根 李健 罗忠宝 吴异健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第4期1489-1497,共9页

为了解福建白羽肉鸡中鸡毒支原体(MG)对临床常用药物的敏感性,本研究从2个商品代白羽肉鸡养殖场采集了疑似患慢性呼吸道病(CRD)的鸡喉拭子40份,接种于适宜的支原体培养基上进行纯化。通过对菌株生物学特性分析、细菌形态学观察、PCR测... 为了解福建白羽肉鸡中鸡毒支原体(MG)对临床常用药物的敏感性,本研究从2个商品代白羽肉鸡养殖场采集了疑似患慢性呼吸道病(CRD)的鸡喉拭子40份,接种于适宜的支原体培养基上进行纯化。通过对菌株生物学特性分析、细菌形态学观察、PCR测序及动物回归试验进行鉴定,并利用最低抑菌浓度(MIC)测定了分离株对临床常用抗菌药的敏感性。结果显示,本试验成功获得2株MG,命名为MX和HY。将分离株接种于含有酚红的支原体液体培养基中能分解葡萄糖产酸使培养基颜色由红变黄;固体培养基于低倍镜下观察到典型的“荷包蛋”状菌落;分离株经过Dienes染色后的菌落中心呈致密深蓝色,边缘淡蓝,且30 min后不褪色,并具有较强吸附红细胞的能力,呈现典型MG培养特征;动物回归试验和分离株pvpA基因测序结果显示,2株MG分离株均具有较强致病性,证实其与R株的亲缘关系最近;药敏试验结果显示,MX和HY对泰妙菌素、氟苯尼考和泰乐霉素表现出了高度敏感性,其次是盐酸恩诺沙星、盐酸大观霉素,而对具有与泰乐霉素类似分子结构和抗菌谱的畜禽专用抗生素替米考星敏感性较差,此差异可能与临床上长期应用该药有关。研究结果表明,福建地区商品代白羽肉鸡中存在致病性MG流行,泰妙菌素可以作为临床防治MG的首选药物。 展开更多

关键词 鸡毒支原体(MG) 分离鉴定 生物学特性 最低抑菌浓度(MIC)

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蛋鸡的产业发展现状及中药在蛋鸡非传染性疾病防治中的作用 被引量：4

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作者 孙倩倩 李健 +2 位作者 蓝天韵 詹玉琳 彭松 《中兽医医药杂志》 2020年第3期97-101,共5页

中药具有增强蛋鸡免疫、提高产蛋率、改善蛋品质的作用。概述国内外蛋鸡产业的发展现状,总结影响蛋鸡生产的非传染性因素及其机制,对中药调节营养吸收和缓解应激的进行分析,为阐明中药在治疗蛋鸡非传染性疾病的作用提供参考。

关键词 中药 蛋鸡 非传染性疾病 防治

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猪源葡萄球菌的分离鉴定及耐药性分析 被引量：1

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作者 李燕玲 陈渊泉 +5 位作者 谢明杰 周伦江 陈秋勇 连春红 李健 王隆柏 《动物医学进展》 北大核心 2024年第5期8-13,共6页

为明确从福建某规模猪场分离到的病原菌及其生物学特性、致病性与耐药等特征,为疫病的防治提供参考依据。对分离菌进行纯化,采用革兰氏染色、PCR鉴定、药敏试验、消毒剂消杀试验、耐药基因检测及动物攻毒试验等,对分离菌进行生物学特性... 为明确从福建某规模猪场分离到的病原菌及其生物学特性、致病性与耐药等特征,为疫病的防治提供参考依据。对分离菌进行纯化,采用革兰氏染色、PCR鉴定、药敏试验、消毒剂消杀试验、耐药基因检测及动物攻毒试验等,对分离菌进行生物学特性、耐药等相关检测。结果显示,分离菌为猪源葡萄球菌。该菌对30种常用抗菌药物中的苯唑西林、诺氟沙星、头孢类等14种药物高度敏感,对阿米卡星、庆大霉素、四环素、万古霉素、氟苯尼考5种药物中度敏感,对氨苄西林、哌拉西林、卡那霉素等11种药物不敏感,检测cfr、tetM、floR、mcr-1、bla NDM-1、optrA 6种耐药基因均为阴性;该菌对26种中药中的单宁酸高度敏感,对五味子、五信子多酚中度敏感,对叶下珠、厚朴、虎杖低度敏感,对半边莲、铁苋菜、艾叶、重楼等20种中药不敏感;在8种消毒剂中,84消毒液对该分离菌的消杀效果差,新洁尔灭、月苄三甲氯铵、复合酚3种消毒剂对该分离菌消杀效果好;动物攻毒试验表明,该菌对25日龄健康断奶仔猪具有强致病性,能导致猪出现典型的葡萄球菌病临床症状和病理特征,攻菌猪组织病理可见脾脏红髓淤血、肺泡腔内见红细胞渗出及少量粉染的渗出物。研究结果可为在养殖饲料端禁止添加抗生素的背景下,为猪葡萄球菌病的防治提供理论参考和技术支撑。 展开更多

关键词 猪 葡萄球菌 分离鉴定 致病性 耐药性

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芪蓝复方对妊娠母猪免疫增强作用研究 被引量：4

8

作者 杨黎宇 李燕玲 +1 位作者 范舒钰 李健 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期64-73,共10页

【目的】揭示芪蓝复方对妊娠母猪免疫功能的增强作用,为缓解妊娠母猪免疫抑制提供参考,为芪蓝复方的临床应用提供数据支撑。【方法】采用加热回流、浓缩冻干工艺制备芪蓝复方提取物,利用硫酸-苯酚法、高效液相色谱法和紫外分光光度法检... 【目的】揭示芪蓝复方对妊娠母猪免疫功能的增强作用,为缓解妊娠母猪免疫抑制提供参考,为芪蓝复方的临床应用提供数据支撑。【方法】采用加热回流、浓缩冻干工艺制备芪蓝复方提取物,利用硫酸-苯酚法、高效液相色谱法和紫外分光光度法检测芪蓝复方的主要有效成分含量。选取25头长白二元母猪(30~40胎龄),分为空白组(N),0.1%(L)、0.2%(M)和0.4%(H)芪蓝复方组以及阳性对照组(A),5头/组,试验期30 d,分别于试验开始后1、15和29 d采集血液,检测血清生化指标(总蛋白、白蛋白、尿素氮、葡萄糖、血钙、血磷和甘油三酯)、血清抗氧化指标(总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶和丙二醛)、免疫球蛋白(IgG、IgM和IgA)、炎症因子(白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β)以及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体水平。【结果】芪蓝复方中多糖、(R,S)-告依春以及淫羊藿苷含量分别为56.0%、0.035%和0.39%。妊娠15、29 d,与N组相比,A组猪血清白蛋白、IgM、IgA含量及总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶活性均显著升高(P<0.05);L、H组谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性均显著升高(P<0.05);各组丙二醛、IL-1β含量均显著降低(P<0.05);M、H组S/P值均显著降低(P<0.05)。与A组相比,妊娠15 d, L组血清总蛋白、血钙水平、总抗氧化能力及IgM、IgA含量均显著降低(P<0.05);H组超氧化物歧化酶活性显著升高,血清总蛋白、血钙、甘油三酯水平及IgM、IL-6含量、S/P值均显著降低(P<0.05)。妊娠29 d, L组血清总抗氧化能力、血钙水平、IgG、IgA含量均显著降低(P<0.05);M组血钙水平、超氧化物歧化酶活性、IL-1β含量均显著降低(P<0.05)。【结论】芪蓝复方对妊娠母猪免疫功能具有显著增强作用,可用于妊娠母猪免疫抑制疾病防控。 展开更多

关键词 芪蓝复方 妊娠母猪 免疫功能 免疫抑制

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猴头菇多糖对氧化应激状态下仔猪回肠形态结构及通透性的影响 被引量：12

9

作者 张建龙 丘富安 +4 位作者 董星 秦韬 马玉芳 黄一帆 李健 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期203-210,共8页

本试验旨在探究氧化应激状态下猴头菇多糖(HEP)对断奶仔猪回肠形态结构及通透性的影响。将45头健康的(28±3)d断奶仔猪按体重相近原则分为5组,空白组和模型组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加0.2%、0.4%、0.6%的HEP。于试验... 本试验旨在探究氧化应激状态下猴头菇多糖(HEP)对断奶仔猪回肠形态结构及通透性的影响。将45头健康的(28±3)d断奶仔猪按体重相近原则分为5组,空白组和模型组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加0.2%、0.4%、0.6%的HEP。于试验第21天,对模型组和HEP组按体重注射100μg·kg-1脂多糖(LPS),空白组注射等剂量灭菌生理盐水;前腔静脉采血15mL,分离血清,用于检测抗氧化指标和肠黏膜完整性指标;宰杀试验猪,分离回肠,HE染色观察其形态变化;qPCR和Western blot法检测回肠紧密连接蛋白的表达情况。结果显示,同模型组比较,HEP能显著改善LPS应激造成的血清抗氧化指标下降(P<0.05);显著提高仔猪血清中谷氨酰胺(GLN)含量(P<0.05),降低二胺氧化酶(DAO)活性(P<0.05),缓解LPS导致的仔猪回肠黏膜损伤;使得LPS应激诱导的回肠上皮细胞紧密连接蛋白表达下降显著回升(P<0.05)。饲料中添加HEP能够有效改善氧化应激状态下仔猪的回肠形态结构及通透性。 展开更多

关键词 猴头菇多糖 断奶仔猪 氧化应激 回肠形态结构 紧密连接

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猴头菇多糖对氧化应激的IPEC-J2细胞抗氧化能力及紧密连接蛋白ZO-1的影响 被引量：6

10

作者 陈新瑶 张建龙 +3 位作者 董星 陈景杰 黄一帆 李健 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1769-1776,共8页

旨在探究在H_2O_2诱导的氧化应激损伤状态下,猴头菇多糖(HEPs)对IPEC-J2细胞的保护作用。将IPEC-J2细胞分为5组:空白组、模型组、HEPs低剂量组、HEPs中剂量组、HEPs高剂量组。采用MTT法分别选取试验用的H_2O_2和HEPs的最佳剂量;利用DCFH... 旨在探究在H_2O_2诱导的氧化应激损伤状态下,猴头菇多糖(HEPs)对IPEC-J2细胞的保护作用。将IPEC-J2细胞分为5组:空白组、模型组、HEPs低剂量组、HEPs中剂量组、HEPs高剂量组。采用MTT法分别选取试验用的H_2O_2和HEPs的最佳剂量;利用DCFH-DA染色观察并测定细胞内活性氧簇(ROS)的含量;通过比色法检测培养细胞上清液中丙二醛(MDA)的含量,细胞中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活力以及乳酸脱氢酶(LDH)的释放率;应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测紧密连接蛋白ZO-1基因的转录水平。结果显示,(1)构建IPEC-J2细胞氧化应激模型的H_2O_2浓度为0.4mmol·L-1。(2)H_2O_2能够极显著地增加细胞内的ROS含量,诱导细胞凋亡,同时极显著地降低了SOD和CAT的活力,极显著地升高MDA含量与LDH释放率。但是,与模型组相比,经过HEPs预处理后,细胞内ROS的含量极显著地降低(P<0.01);同时极显著地提高了SOD和CAT的活力(P<0.01),极显著地降低了MDA含量与LDH释放率(P<0.01)。(3)实时荧光定量PCR结果显示,H_2O_2能够极显著地降低ZO-1基因的转录量(P<0.01),与模型组比较,HEPs能够极显著的提高ZO-1基因的转录量(P<0.01);Western blot结果显示ZO-1蛋白的表达量与ZO-1基因类似。可见,猴头菇多糖对H_2O_2诱导氧化损伤状态下的IPEC-J2细胞具有保护作用。 展开更多

关键词 猴头菇多糖 过氧化氢 IPEC-J2细胞 氧化应激 ZO-1

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太子参参须多糖对免疫抑制小鼠的免疫调节作用研究 被引量：22

11

作者 闵思明 赵晓瑶 +5 位作者 陈赛红 甘思言 陈俊宇 朱晶 黄一帆 马玉芳 《动物医学进展》 北大核心 2020年第8期23-28,共6页

为研究太子参参须多糖(RPFRP)对免疫抑制小鼠功能的影响,腹腔注射环磷酰胺(CY)建立免疫抑制模型小鼠,灌胃RPFRP,称量计算器官指数(脾指数和胸腺指数),碳粒廓清法测定巨噬细胞功能,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测细胞因子... 为研究太子参参须多糖(RPFRP)对免疫抑制小鼠功能的影响,腹腔注射环磷酰胺(CY)建立免疫抑制模型小鼠,灌胃RPFRP,称量计算器官指数(脾指数和胸腺指数),碳粒廓清法测定巨噬细胞功能,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测细胞因子含量。结果显示,RPFRP能下调免疫功能低下小鼠的脾脏指数,上调胸腺指数、碳粒廓清指数K和细胞因子IL-2、IFN-γ含量。说明RPFRP能通过改善免疫器官指数、巨噬细胞吞噬功能、特异性细胞免疫和体液免疫功能,增强免疫功能低下小鼠的免疫功能。 展开更多

关键词 太子参参须多糖 环磷酰胺 免疫调节 免疫抑制小鼠

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马齿苋水提物对热应激小鼠空肠结构及吸收功能的影响 被引量：8

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作者 郭月 刘小宝 +2 位作者 李健 何欣 赵兴华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期873-880,共8页

旨在探讨马齿苋水提物(aqueous extract of Portulaca oleracea L.)对热应激小鼠空肠结构及吸收功能的影响。将40只昆明种小鼠随机分为4组(n=10):空白对照组(C)、热应激组(HS)、马齿苋水提物组(AEP)、维生素C组(Vc),HS、AEP和Vc组每天于... 旨在探讨马齿苋水提物(aqueous extract of Portulaca oleracea L.)对热应激小鼠空肠结构及吸收功能的影响。将40只昆明种小鼠随机分为4组(n=10):空白对照组(C)、热应激组(HS)、马齿苋水提物组(AEP)、维生素C组(Vc),HS、AEP和Vc组每天于(40±1)℃环境下处理0.5 h,连续热应激6 d后将小鼠转置于室温下给药治疗。给药7 d后眶窦采血,并采集小鼠空肠;测定小鼠血清中D-木糖、葡萄糖含量;HE染色观察空肠组织病理学变化;qRT-PCR法检测空肠黏膜ZO-1、SGLT1及GLUT2 mRNA的相对转录水平。结果显示,与C组比较,HS组小鼠空肠黏膜绒毛高度极显著降低(P<0.01);血清中D-木糖的含量极显著降低(P<0.01);空肠黏膜中ZO-1、SGLT1和GLUT2 mRNA的相对转录水平均极显著降低(P<0.01);与HS组相比,AEP组小鼠空肠绒毛高度极显著提高(P<0.01);血清中D-木糖及葡萄糖的含量均显著升高(P<0.01或P<0.05);空肠黏膜中ZO-1、SGLT1和GLUT2 mRNA的相对转录水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。高温处理可导致小鼠空肠黏膜脱落及吸收功能下降,而在给予马齿苋水提物治疗后可通过提高空肠ZO-1 mRNA表达量修复空肠黏膜结构,通过促进空肠黏膜SGLT1和GLUT2 mRNA的转录量改善吸收功能。马齿苋水提物能在一定程度上修复热应激导致小鼠空肠黏膜结构损伤,改善热应激小鼠肠道的吸收能力。 展开更多

关键词 热应激 小鼠 马齿苋水提物 空肠结构 空肠吸收

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CFSE标记法分析番鸭呼肠孤病毒感染对番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响 被引量：4

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作者 李明慧 廖吕燕 +6 位作者 刘珍妮 严萍 朱正 吴春琳 李健 黄一帆 吴异健 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期159-169,共11页

旨在建立一种可靠的体外活番鸭淋巴细胞的荧光标记方法,并用于分析番鸭呼肠孤病毒感染对雏番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响。选择活细胞荧光染剂5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE,CFSE)对分离的番鸭淋巴细胞进行标记和利用流式细... 旨在建立一种可靠的体外活番鸭淋巴细胞的荧光标记方法,并用于分析番鸭呼肠孤病毒感染对雏番鸭回肠淋巴细胞归巢的影响。选择活细胞荧光染剂5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE,CFSE)对分离的番鸭淋巴细胞进行标记和利用流式细胞术对体外标记的淋巴细胞体内示踪检测分析,并利用该方法对MDRV感染雏番鸭回肠组织的淋巴细胞数量进行流式细胞术和石蜡切片免疫荧光检测分析;结果最终确定CFSE体外标记番鸭淋巴细胞的条件为以PBS为孵育液,终浓度10μmol·L^-1,37℃30 min;试验结果表明番鸭外周血内的CFSE+淋巴细胞率基本稳定在2%~5%,CFSE^+淋巴细胞峰值出现顺序依次为脾、空肠、回肠、盲肠、十二指肠、法氏囊和胸腺;此外,感染MDRV后1~10 d MDRV组中CFSE+淋巴细胞率极显著(P<0.01)高于MOCK组,该结果与α4+淋巴细胞率和石蜡切片免疫荧光检测结果一致。结果表明本试验CFSE标记的淋巴细胞可用于体内淋巴细胞示踪,初步应用结果提示MDRV感染促进番鸭淋巴细胞向回肠归巢,为进一步阐明MDRV感染的肠道组织致病机制奠定了基础。 展开更多

关键词 5(6)-羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯 番鸭 淋巴细胞 流式细胞术 归巢

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猴头菇多糖对MDRV感染RAW264.7细胞TLR3/TRIF诱导表达及病毒复制的影响 被引量：4

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作者 严萍 林绍青 +4 位作者 李明慧 孙雪宁 李健 黄一帆 吴异健 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第9期3415-3422,共8页

试验旨在探究猴头菇多糖(HEP)预处理RAW264.7细胞对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)复制的影响及其机制,从Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TLR3/TRIF)信号通路解析HEP在调节MDRV所致的雏番鸭机体免疫抑制中的作用机制并提供体外试验参考... 试验旨在探究猴头菇多糖(HEP)预处理RAW264.7细胞对番鸭呼肠孤病毒(MDRV)复制的影响及其机制,从Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TLR3/TRIF)信号通路解析HEP在调节MDRV所致的雏番鸭机体免疫抑制中的作用机制并提供体外试验参考。试验设空白对照组(BCG)、病毒感染对照组(VCG)、HEP对照组(HCG)和HEP预防病毒感染组(HPG),RAW264.7细胞在MDRV感染12和24 h后,通过Western blotting检测各组细胞中TLR3、TRIF和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)的蛋白表达量;病毒感染24 h后,用ELISA法检测各组细胞培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-10(IL-10)、IL-6、IL-1β、干扰素-β(IFN-β)的含量。TCID50检测结果表明,MDRV病毒的TCID50为103.46。病毒感染后12 h,细胞未出现明显变化;病毒感染后24 h,细胞变圆;病毒感染后36 h,细胞大量死亡。MDRV在RAW264.7细胞中的复制结果显示,在感染病毒12~24 h内,σNS的表达量呈现上升趋势;在24~36 h,σNS的表达量维持在较高水平。Western blotting结果显示,与空白对照组相比,VCG组细胞TLR3、TRIF和TRAF6蛋白的表达量在感染后12和24 h均显著升高(P<0.05),HCG组TRIF蛋白的表达量均显著升高(P<0.05);与感染组相比,HPG组的σNS、TLR3、TRIF和TRAF6蛋白表达量在病毒感染12和24 h均显著降低(P<0.05)。ELISA检测结果显示,与空白对照组相比,VCG组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β和IFN-β的含量均显著升高(P<0.05);与感染组相比,HPG组细胞培养液中TNF-α、IL-6、IL-1β含量均显著降低(P<0.05),IFN-β的含量显著升高(P<0.05)。结果表明,HEP可调节MDRV感染诱导RAW264.7细胞TLR3信号转导通路活化,抑制TLR3信号转导通路下游产物TNF-α、IL-10、IL-6和IL-1β的过度表达,同时上调IFN-β的表达,从而抑制MDRV在RAW264.7细胞中的复制。 展开更多

关键词 番鸭呼肠孤病毒 猴头菇多糖 TOLL样受体3 信号转导 病毒复制

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太子参参须多糖促进小鼠脾淋巴细胞体外增殖及细胞因子分泌的研究 被引量：9

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作者 乔石 闵思明 +4 位作者 李若南 于丛爽 张炎达 黄一帆 马玉芳 《动物医学进展》 北大核心 2022年第3期73-77,共5页

设空白对照组及太子参参须多糖(RPFRP)组,给药12.5、25、50、100、200、400μg/mL,分别与小鼠的脾细胞共同培养。经分光光度法筛选RPFRP对小鼠脾淋巴细胞的安全浓度范围,MTT法检测RPFRP对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,流式细胞术检测药物... 设空白对照组及太子参参须多糖(RPFRP)组,给药12.5、25、50、100、200、400μg/mL,分别与小鼠的脾细胞共同培养。经分光光度法筛选RPFRP对小鼠脾淋巴细胞的安全浓度范围,MTT法检测RPFRP对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,流式细胞术检测药物作用后小鼠脾淋巴细胞的凋亡,ELISA法检测药物作用后小鼠脾淋巴细胞上清液中细胞因子含量。结果与空白对照组相比,RPFRP可显著促进小鼠脾淋巴细胞的增殖(P<0.05),当RPFRP质量浓度在12.5μg/mL~400μg/mL时,其协同ConA可显著促进T淋巴细胞的增殖(P<0.05),当RPFRP质量浓度在50μg/mL~400μg/mL时,其协同LPS可显著促进B淋巴细胞的增殖(P<0.05);RPFRP处理组细胞总凋亡率较空白对照组明显下降(P<0.05),当RPFRP质量浓度在25μg/mL~100μg/mL时,处理组细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率均显著降低(P<0.05),RPFRP在刺激淋巴细胞分泌细胞因子(IL-2,IL-4,IL-6和IFN-γ)中具有不同程度的促进作用(P>0.05或P<0.05)。RPFRP可促进小鼠脾淋巴细胞增殖,一定质量浓度内能减少脾淋巴细胞的凋亡,促进脾淋巴细胞因子分泌,为RPFRP的开发应用提供参考。 展开更多

关键词 太子参参须多糖 脾增殖细胞 细胞因子 小鼠

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玉米赤霉烯酮对鸡胚成纤维细胞的毒性作用 被引量：7

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作者 张凯照 胡会 +3 位作者 许泽锴 王诗倩 崔红杰 黄小红 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1615-1625,共11页

旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的毒性作用机制,采用MTT法检测细胞活力变化,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA法检测Caspase-3含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,荧光显微镜观察细胞活性氧(ROS)水平,线... 旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的毒性作用机制,采用MTT法检测细胞活力变化,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA法检测Caspase-3含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,荧光显微镜观察细胞活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测内质网应激(ERs)和细胞凋亡相关基因的mRNA转录水平。结果显示,12.5~50.0μg·mL^(-1) ZEA显著抑制DF-1细胞增殖(P<0.01),且呈时间和剂量依赖性关系。25.0μg·mL^(-1) ZEA处理细胞24 h后,上清液中LDH和Caspase-3含量显著升高(P<0.01);细胞中ROS水平和细胞凋亡数量极显著升高(P<0.01);线粒体膜电位极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Caspase-3、Bax mRNA转录水平极显著上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);ERs相关基因GRP78、ATF6、ATF4、CHOP、PERK mRNA转录水平极显著上调(P<0.01)。综上表明,ZEA能通过内质网应激途径导致细胞凋亡并对鸡胚成纤维细胞发挥毒性作用。研究结果为深入研究ZEA对鸡细胞的毒性作用和解毒手段奠定基础,对相关禽类疾病治疗具有意义。 展开更多

关键词 玉米赤霉烯酮 鸡胚成纤维细胞 细胞毒性 内质网应激 细胞凋亡

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白屈菜药理作用及质量标志物预测分析 被引量：6

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作者 林惠莹 赵永兵 +3 位作者 李荣强 马玉芳 林福 李健 《中兽医医药杂志》 CAS 2022年第2期41-45,共5页

白屈菜是罂粟科白屈菜属植物,其药理活性多样。白屈菜的主要有效成分为生物碱类,分为苯并菲列啶型、阿朴菲型、原托品型和原小檗碱型等,研究热点主要集中在白屈菜红碱、原阿片碱、白屈菜碱、二氢白屈菜红碱和血根碱。白屈菜的传统功效... 白屈菜是罂粟科白屈菜属植物,其药理活性多样。白屈菜的主要有效成分为生物碱类,分为苯并菲列啶型、阿朴菲型、原托品型和原小檗碱型等,研究热点主要集中在白屈菜红碱、原阿片碱、白屈菜碱、二氢白屈菜红碱和血根碱。白屈菜的传统功效为利尿、镇痛、解毒和止咳,现代研究表明其中的生物碱成分具有镇痛、镇静、抗炎、抗肿瘤、抑菌、保肝和抗氧化等药理作用。本文对白屈菜的药理作用进行总结,并在此基础上结合质量标志物(Q-marker)概念,从质量传递与溯源、化学成分可测性、化学成分特有性及化学成分有效性等方面对白屈菜质量标志物进行预测分析,发现苯并菲列啶型生物碱中的白屈菜碱、白屈菜红碱和血根碱可作为白屈菜的主要Q-Marker,用于评价白屈菜的质量水平,该结果可为白屈菜的深入研究和开发利用提供参考。 展开更多

关键词 白屈菜 化学成分 药理作用 质量标志物 白屈菜碱 白屈菜红碱 血根碱

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余甘子多糖的结构表征及免疫增强作用 被引量：4

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作者 孟祯 孙梦珂 +2 位作者 许永得 秦韬 任喆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3627-3640,共14页

本试验旨在制备余甘子多糖(Phyllanthus emblica polysaccharide,PEP),通过对其结构表征进行分析,探索PEP对鸡新城疫(Newcastle disease,ND)疫苗免疫效果的影响。利用紫外光谱(ultraviolet spectroscopy,UV)、红外光谱(Fourier transfor... 本试验旨在制备余甘子多糖(Phyllanthus emblica polysaccharide,PEP),通过对其结构表征进行分析,探索PEP对鸡新城疫(Newcastle disease,ND)疫苗免疫效果的影响。利用紫外光谱(ultraviolet spectroscopy,UV)、红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)、高效液相色谱分析法(high performance liquid chromatography,HPLC)和扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)分析PEP结构;选取175只1日龄河田鸡,随机分成5组,每组35只,分别为空白对照组,疫苗对照组,PEP低、中、高剂量组。除空白对照组外均用ND疫苗进行免疫,7日龄首免,并于28日龄二免。在免疫的同时,PEP低、中、高剂量组分别按照10、20、30 g·L^(-1)的剂量给药PEP溶液0.5 mL,疫苗对照组和空白对照组给予等量生理盐水,每天1次,连续3 d。分别于7、14、21、28、35、42和49日龄时,测定血清中新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)特异性抗体水平以及γ-干扰素(INF-γ)和白介素4(IL-4)的水平;于28和49日龄时测定外周血淋巴细胞增殖活性和T淋巴细胞CD4+/CD8+的比值;于49日龄剖杀后采集脾、法氏囊、胸腺和肝进行组织学观察以及检测免疫器官指数。结果表明,PEP为白色棉絮状,糖含量为(86.70±1.05)%,结构分析结果表明,PEP是含α型糖苷键的多糖,其组分均一,不含核酸和蛋白质,呈片状分布,总体结构规整且致密,单糖组成为葡萄糖醛酸(glucuronic acid,GlcA)、葡萄糖(glucose,Glu)、木糖(xylose,Xyl)和岩藻糖(fucose,Fuc),其摩尔比为0.5∶8.3∶1.8∶0.3。动物试验结果表明,PEP能显著提高鸡血清中NDV特异性抗体、INF-γ和IL-4的水平(P<0.05),还能显著促进鸡外周血淋巴细胞增殖和T淋巴细胞CD4+/CD8+的比值(P<0.05),提高免疫器官指数(P<0.05),激活脾、法氏囊、胸腺和肝等器官的免疫功能。PEP糖含量高,结构稳定,可提高机体免疫活性,具有较良好的佐剂活性,对ND具有良好的防治效果。 展开更多

关键词 余甘子多糖 结构表征 新城疫疫苗 免疫佐剂

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鸡毒支原体MG-HY株感染鸡气管的转录组学分析 被引量：1

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作者 吴春琳 钟乐苗 +3 位作者 赵妍 李文迹 黄晓紫 吴异健 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2652-2662,共11页

旨在进一步探究鸡毒支原体(MG)感染SPF雏鸡后气管基因组转录水平的变化,筛选出MG感染后参与气管黏膜炎性损伤的差异表达基因和调控通路。使用MG-HY株菌液按0.2 mL·羽经点眼滴鼻感染SPF雏鸡,感染后收集气管组织利用RNA-Seq技术进行... 旨在进一步探究鸡毒支原体(MG)感染SPF雏鸡后气管基因组转录水平的变化,筛选出MG感染后参与气管黏膜炎性损伤的差异表达基因和调控通路。使用MG-HY株菌液按0.2 mL·羽经点眼滴鼻感染SPF雏鸡,感染后收集气管组织利用RNA-Seq技术进行测序分析。转录组分析结果显示,在MG感染期间RNA-seq共筛选出3 112个显著(P<0.01)差异表达基因(DEGs),其中,1 646个上调基因,1 466个下调基因。GO功能分析显示,差异基因主要涉及生物调节、刺激的反应、多细胞生物过程、细胞成分组织或生物发生等生物过程。KEGG-Pathway分析发现差异基因参与黏膜免疫信号传导通路,例如:细胞因子-细胞因子受体相互作用,细胞黏附分子(CAMs),细胞外基质(ECM)受体相互作用、紧密连接、PPAR信号通路和MAPK信号通路等,表明这些基因参与了MG诱导的雏鸡气管炎症反应和损伤。使用qRT-PCR验证与黏膜免疫相关的13个差异表达的基因,其结果与转录组分析一致。本研究为进一步阐明MG感染导致宿主气管黏膜上皮损伤和黏膜免疫机制提供了基础。 展开更多

关键词 鸡毒支原体 RNA-SEQ 黏膜上皮 差异表达基因 免疫应答

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短管兔耳草多糖的结构表征及其免疫调节活性研究 被引量：4

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作者 余蕊宏 孟祯 +5 位作者 孙梦珂 陈仕雄 张浚文 黄一帆 秦韬 任喆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3270-3281,共12页

本试验旨在从短管兔耳草(Lagotis brevituba Maxim)中分离纯化多糖,初步分析多糖的结构表征并研究其体外免疫调节活性。采用水提醇沉法从短管兔耳草中提取粗多糖,经DEAE-52纤维素离子交换柱进行分离纯化,得到短管兔耳草多糖(Lagotis bre... 本试验旨在从短管兔耳草(Lagotis brevituba Maxim)中分离纯化多糖,初步分析多糖的结构表征并研究其体外免疫调节活性。采用水提醇沉法从短管兔耳草中提取粗多糖,经DEAE-52纤维素离子交换柱进行分离纯化,得到短管兔耳草多糖(Lagotis brevituba Maxim polysaccharide,LMP)。采用高效凝胶色谱法(HPGPC)、傅里叶变换-红外光谱法(FT-IR)、紫外光谱法(UV)等方法对其结构进行初步分析,并以小鼠骨髓来源树突状细胞(murine bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)为靶细胞,采用MTT法、流式细胞术(FCM)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等对其免疫活性进行测定。结果显示:从短管兔耳草中分离到不含核酸和蛋白质的多糖LMP,得率为(18.5±1.7)%,糖含量为(89.7±1.9)%,平均分子量为3.18 ku,平均粒径为1483.89 nm,Zeta电位为-14.81 mV。扫描电镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)结果显示,LMP的表面光滑,呈片状分布,单链的高度在5.4 nm左右。3.13~50.00μg·mL-1 LMP能显著促进BMDCs增殖(P<0.05)及其表面分子(CD80、CD86、MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ)的表达(P<0.05)和细胞因子(TNF-α、IL-12)的分泌(P<0.05),同时显著降低BMDCs的吞噬能力(P<0.05)。LMP能促进BMDCs表型和功能的成熟,具有较好的免疫调节活性,可将其作为潜在的免疫调节剂。 展开更多

关键词 短管兔耳草 多糖 结构特征 树突状细胞 免疫活性

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