本文建立了液相色谱-高分辨质谱鉴定玛卡中蛋白的方法。从缓冲液浓度、提取料液比、提取温度、提取pH以及提取时间5个因素优化了提取条件,通过响应面试验预测其蛋白提取最优方案并验证。最终确定在1 g样品中,加入45 mL pH=10的Tris-HCl...本文建立了液相色谱-高分辨质谱鉴定玛卡中蛋白的方法。从缓冲液浓度、提取料液比、提取温度、提取pH以及提取时间5个因素优化了提取条件,通过响应面试验预测其蛋白提取最优方案并验证。最终确定在1 g样品中,加入45 mL pH=10的Tris-HCl缓冲液,提取温度70℃,时间40 min,酸沉pH=2.5,提取率为45.69%,与预测值46.69%基本一致。以UPLC-Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用仪分析,所得肽段在Uniprot上进行Blast序列对比,其中明确生物来源与分子功能的有6条。本文建立的方法提取效率高,可为玛卡多肽的结构与活性功能之间的研究提供技术手段。展开更多
为阐明BbRho5对球孢白僵菌生防潜能的作用,构建了Bbrho5单基因敲除菌株ΔBbrho5,以野生型菌株WT作为对照,在不同培养基上测定菌落生长速率,并测定了菌株对多菌灵胁迫耐受性及对大蜡螟幼虫体壁侵染能力。进一步获取和分析了ΔBbrho5和WT...为阐明BbRho5对球孢白僵菌生防潜能的作用,构建了Bbrho5单基因敲除菌株ΔBbrho5,以野生型菌株WT作为对照,在不同培养基上测定菌落生长速率,并测定了菌株对多菌灵胁迫耐受性及对大蜡螟幼虫体壁侵染能力。进一步获取和分析了ΔBbrho5和WT细胞内基因转录组数据。结果表明,BbRho5蛋白功能缺陷显著抑制球孢白僵菌菌丝生长速率,同时微弱影响其多菌灵胁迫抗逆性及生防能力。相较于WT,ΔBbrho5中具有770个差异表达基因(DEGs),其中上调基因395个,下调基因375个。GO分析显示,ΔBbrho5 VS WT中DEGs主要富集于氧化还原酶活力(oxidoreductase activity)和单加氧酶活力(monooxygenase activity)功能。KEGG通路富集结果显示,DEGs主要富集于氮代谢及多种氨基酸代谢通路。在氮代谢通路中富集到7个功能基因,其中有5个上调,2个下调,说明敲除菌株可能采用增强氮源利用及谷氨酸合成以应对Bbrho5缺陷引起的生长迟缓。以上研究结果揭示了球孢白僵菌中小GTP酶BbRho5对球孢白僵菌生长速率具有重要影响,且氮代谢和氨基酸代谢可能为其重要的响应代谢通路。展开更多
文摘本文建立了液相色谱-高分辨质谱鉴定玛卡中蛋白的方法。从缓冲液浓度、提取料液比、提取温度、提取pH以及提取时间5个因素优化了提取条件,通过响应面试验预测其蛋白提取最优方案并验证。最终确定在1 g样品中,加入45 mL pH=10的Tris-HCl缓冲液,提取温度70℃,时间40 min,酸沉pH=2.5,提取率为45.69%,与预测值46.69%基本一致。以UPLC-Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用仪分析,所得肽段在Uniprot上进行Blast序列对比,其中明确生物来源与分子功能的有6条。本文建立的方法提取效率高,可为玛卡多肽的结构与活性功能之间的研究提供技术手段。
文摘为阐明BbRho5对球孢白僵菌生防潜能的作用,构建了Bbrho5单基因敲除菌株ΔBbrho5,以野生型菌株WT作为对照,在不同培养基上测定菌落生长速率,并测定了菌株对多菌灵胁迫耐受性及对大蜡螟幼虫体壁侵染能力。进一步获取和分析了ΔBbrho5和WT细胞内基因转录组数据。结果表明,BbRho5蛋白功能缺陷显著抑制球孢白僵菌菌丝生长速率,同时微弱影响其多菌灵胁迫抗逆性及生防能力。相较于WT,ΔBbrho5中具有770个差异表达基因(DEGs),其中上调基因395个,下调基因375个。GO分析显示,ΔBbrho5 VS WT中DEGs主要富集于氧化还原酶活力(oxidoreductase activity)和单加氧酶活力(monooxygenase activity)功能。KEGG通路富集结果显示,DEGs主要富集于氮代谢及多种氨基酸代谢通路。在氮代谢通路中富集到7个功能基因,其中有5个上调,2个下调,说明敲除菌株可能采用增强氮源利用及谷氨酸合成以应对Bbrho5缺陷引起的生长迟缓。以上研究结果揭示了球孢白僵菌中小GTP酶BbRho5对球孢白僵菌生长速率具有重要影响,且氮代谢和氨基酸代谢可能为其重要的响应代谢通路。
