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KLF4通过抑制脂肪酸合成抑制MASLD的发生
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作者 陈雨婷 樊丽君 +3 位作者 潘紫妍 王翠喆 张婷 张君 《石河子大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期397-404,共8页
目的研究KLF4在代谢功能障碍相关脂肪变性肝病(Metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease,MASLD)发生过程中的作用,并初步探究其可能的分子机制。方法将12只C57BL/6雄性小鼠分为普通饮食组(Normal Chow Diet,ND,n=6)... 目的研究KLF4在代谢功能障碍相关脂肪变性肝病(Metabolic dysfunction-associated steatotic liver disease,MASLD)发生过程中的作用,并初步探究其可能的分子机制。方法将12只C57BL/6雄性小鼠分为普通饮食组(Normal Chow Diet,ND,n=6)和高脂饮食组(High Fat Diet,HFD,n=6),监测其生理指标变化,分析肝脏组织中KLF4的蛋白和mRNA表达水平。使用游离脂肪酸(Free fatty acids,FFA)处理人肝癌细胞HepG2和小鼠肝癌细胞Hepa1-6构建脂代谢紊乱细胞模型。体外细胞实验分为过表达KLF4并用游离脂肪酸处理组(OE-KLF4-FFA)及其对照组(NC-FFA),敲低KLF4并用游离脂肪酸处理组(Si-KLF4-FFA)及其对照组(NC-FFA),通过酶法检测细胞内甘油三酯(Triglyceride,TG)和胆固醇(Cholesterol,CHO)水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测KLF4以及脂质合成相关因子脂肪酸合酶(Fatty acid synthase,FASN)、甾醇调节元件结合蛋白1(Sterol-regulatory element binding proteins,SREBP1)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的mRNA表达水平;蛋白质免疫印记法检测KLF4以及脂质合成相关因子FASN、SREBP1和PPARγ的蛋白表达水平;油红O染色观察细胞内脂滴积累情况。结果HFD组小鼠肝脏组织中KLF4的蛋白和mRNA表达水平显著低于ND组,FASN、SREBP1和PPARγ的mRNA表达水平显著高于ND组(P<0.05,P<0.01,P<0.001);HepG2细胞和Hepa1-6细胞FFA处理组KLF4的mRNA和蛋白表达水平低于对照组(P<0.05,P<0.01);HepG2细胞和Hepa1-6细胞中过表达KLF4改善脂质积累,降低脂质合成相关因子的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与之相反,HepG2细胞和Hepa1-6细胞中敲低KLF4加剧脂质积累,增加脂质合成相关因子的mRNA和蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论KLF4通过负调控脂肪酸的合成抑制MASLD的发生。 展开更多
关键词 KLF4 代谢功能障碍相关脂肪变性肝病 转录因子 脂质合成
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腹部脂肪组织脂联素表达与新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病的相关性研究 被引量:4
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作者 王婷婷 张君 +3 位作者 刘宗智 许彭 徐文静 谢建新 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2014年第5期555-559,共5页
为探讨脂联素(adiponectin,APN)m RNA表达与新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病的相关性。将样本分为3组:正常组(18.5 kg/m2≤BMI≤24 kg/m2)50例,肥胖组(BMI≥28 kg/m2)48例,2型糖尿病组(餐后2 h血糖≥11.1mmol/L空腹血糖≥7.0 mmol/L)16例,... 为探讨脂联素(adiponectin,APN)m RNA表达与新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病的相关性。将样本分为3组:正常组(18.5 kg/m2≤BMI≤24 kg/m2)50例,肥胖组(BMI≥28 kg/m2)48例,2型糖尿病组(餐后2 h血糖≥11.1mmol/L空腹血糖≥7.0 mmol/L)16例,腹部择期手术时取其网膜脂肪组织,采用实时定量RT-PCR(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)对上述3组样本中的脂联素m RNA表达进行检测。采用SPSS17.0进行统计学分析。结果显示,肥胖及糖尿病组个体体重、腰围、臀围、腰臀比及体质指数均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。肥胖组男女性别间差异有统计学意义(P<0.01)。比较各组脂联素m RNA相对拷贝数后发现,正常对照组显著高于肥胖及糖尿病组,差异均有统计学意义(P<0.01)。同时肥胖组高于糖尿病组,但差异无统计学意义(P=0.753)。腹部脂肪组织脂联素m RNA相对拷贝数与BMI显著负相关(r=-0.334,P=0.045),与腰围显著负相关(r=-0.053,P=0.047),与血糖水平显著负相关(r=-0.129,P=0.017)。由此可知,腹部脂肪组织中脂联素m RNA的低表达是新疆维吾尔族肥胖及2型糖尿病发生的危险因素之一。 展开更多
关键词 维吾尔族2型糖尿病 肥胖 脂联素
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转录因子KLF7高表达与前列腺癌发生的相关性及其靶基因预测 被引量:4
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作者 李雪 唐慧 +4 位作者 桑海明 李伟 王竞州 庞槐 张君 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2021年第1期92-101,共10页
目的探讨KLF7高表达与前列腺癌(PCa)发生的相关性,并对其可能的下游靶基因进行筛选。方法比较前列腺增生(BPH)患者(n=22)以及PCa患者(n=30)血糖、血脂及一般资料的差异;调取石蜡包埋的前列腺组织标本,运用免疫组织化学法检测组织中KLF7... 目的探讨KLF7高表达与前列腺癌(PCa)发生的相关性,并对其可能的下游靶基因进行筛选。方法比较前列腺增生(BPH)患者(n=22)以及PCa患者(n=30)血糖、血脂及一般资料的差异;调取石蜡包埋的前列腺组织标本,运用免疫组织化学法检测组织中KLF7及其下游因子IL-6,以及肿瘤发生相关因子E-钙粘蛋白、Ki67的表达量。运用统计学方法,比较各因子在BPH和PCa患者前列腺组织中的表达差异,并分析KLF7表达与各因子之间的相关性。运用Cistrome Data Browser数据库对KLF7可能的下游靶基因进行预测。结果 PCa患者血清中总前列腺特异性抗原(TPSA)含量显著高于正常体检及BPH个体(P<0.001);PCa患者前列腺组织中KLF7及IL-6表达量显著高于BPH患者前列腺组织(P<0.05),肿瘤发生相关因子Ki67表达量显著高于BPH患者前列腺组织(P<0.05),E-钙粘蛋白的表达量在两组间无显著差异。相关性分析结果显示:前列腺癌组织中KLF7的表达与患者血清中TPSA含量显著正相关(r=0.465,P=0.001),与癌组织中IL-6的表达显著正相关(r=0.437,P=0.014),与癌组织中Ki67的表达显著正相关(r=0.434,P=0.002),与癌组织中E-钙粘蛋白的表达显著正相关(r=0.473,P=0.009)。生物信息学分析结果显示:转录因子KLF7可能通过调控肿瘤相关基因STAT3,DDX20,ZNF233,ZNF581,ZNF487,ZNF580,ZNF391,ZNF793,HMGB1,DMAP1,CTNNB1,ZBTB45等参与肿瘤的发生发展。结论 KLF7高表达可能是前列腺癌发生的危险因素,前列腺癌组织中KLF7的表达与IL-6、Ki67以及E-钙粘蛋白的表达显著正相关。KLF7可能通过调控一系列肿瘤相关基因的表达参与肿瘤发生发展的过程。 展开更多
关键词 KLF7 IL-6 KI67 E钙粘蛋白 前列腺癌
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基于转录组测序对GULP1下游靶基因筛选及分析 被引量:1
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作者 温馨 梅锦 +5 位作者 钱美玉 蒋一丹 王娟 许士博 王翠喆 张君 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期860-870,共11页
GULP1是一种含磷酸化酪氨酸结合(phosphotyrosine-binding,PTB)结构域的吞噬衔接蛋白,已有的研究表明它可促进脂肪细胞3T3-L1的糖摄取。为进一步挖掘GULP1下游关键的代谢相关差异基因,本研究对过表达GULP1的脂肪细胞和骨骼肌细胞进行转... GULP1是一种含磷酸化酪氨酸结合(phosphotyrosine-binding,PTB)结构域的吞噬衔接蛋白,已有的研究表明它可促进脂肪细胞3T3-L1的糖摄取。为进一步挖掘GULP1下游关键的代谢相关差异基因,本研究对过表达GULP1的脂肪细胞和骨骼肌细胞进行转录组分析,然后对表达异常基因进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)与转录组测序进行相互验证。结果表明:以P<0.05和|Log_(2)Foldchange|≥1为阈值筛选差异表达基因,发现与对照细胞相比,过表达GULP1的脂肪细胞中有278个上调基因和263个下调基因,与代谢相关的GO(Gene Ontology)条目包括胆固醇生物合成过程、胆固醇代谢过程、对脂多糖的反应、脂质代谢过程等,有52个代谢相关差异表达基因富集到10条KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路,其中脂质代谢被高度富集;过表达GULP1的骨骼肌细胞有280个上调基因和302个下调基因,与代谢相关的GO条目包括激素代谢过程、对脂多糖的反应、单碳代谢过程等,有86个代谢相关差异表达基因富集到10条KEGG通路,其中氨基酸代谢、脂质代谢、碳水化合物代谢被高度富集。GULP1的生物学功能涉及广泛,包括脂代谢、肿瘤等方面。本研究通过转录组学以及生物信息学分析,筛选出GULP1下游关键的代谢相关差异基因,获得了过表达GULP1后的代谢相关差异基因及信号通路,为今后GULP1下游靶基因的研究提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 GULP1 转录组 差异表达基因 代谢 生物信息学
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抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)淀粉分支酶SBEⅡa和SBEⅡb基因多态性分析 被引量:4
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作者 王昊龙 韩俊杰 +1 位作者 李卫华 刘伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期981-987,共7页
【目的】克隆抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)中淀粉合成酶关键基因SBEⅡa和SBEⅡb进行多态性分析,从分子水平阐述不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。【方法】根据Gene Bank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)和SBEⅡb(AY740401.1... 【目的】克隆抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)中淀粉合成酶关键基因SBEⅡa和SBEⅡb进行多态性分析,从分子水平阐述不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。【方法】根据Gene Bank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)和SBEⅡb(AY740401.1)基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡa和SBEⅡb基因序列,利用Clustal.W进行测序结果的比对分析,NCBI Conserved domain和inte Pro在线网站对SBEⅡa和SBEⅡb氨基酸序列进行结构域预测,寻找影响抗性淀粉含量的主效基因位点。【结果】克隆了SBEⅡa(2 471 bp)、SBEⅡb(2 510 bp)基因ORF(open reading frame,ORF)全长。序列分析表明:SBEⅡa、SBEⅡb基因与公布的序列同源性分别为98.64%和99.07%。【结论】SBEⅡa基因ORF的三个结构域中未发现影响籽粒抗性淀粉含量的候选差异位点。在SBEⅡb基因编码区羧基C-末端的3个候选差异位点和α-淀粉催化酶结构域的1个候选差异位点可能是造成小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。SBEⅡa、SBEⅡb氨基N-末端前面序列中共计10个单碱基变异作为潜在差异位点,也可能参与SBE基因的表达。 展开更多
关键词 小麦 抗性淀粉 SBEⅡa SBEⅡb 多态性分析
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小鼠精原干细胞体外分化中Stra8、mina53表达的研究 被引量:5
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作者 王宝峰 王菊 +1 位作者 谢松松 周宗瑶 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2010年第6期717-721,共5页
为检测Stra8、mina53在小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cells,mSSCs)体外分化中的表达,采用1)体外培养mSSCs并通过全反式视黄酸(ATRA,all-trans retinoic acid)进行诱导分化;2)通过间接免疫荧光反应鉴定mSSCs体外分化前后情... 为检测Stra8、mina53在小鼠精原干细胞(mouse spermatogonial stem cells,mSSCs)体外分化中的表达,采用1)体外培养mSSCs并通过全反式视黄酸(ATRA,all-trans retinoic acid)进行诱导分化;2)通过间接免疫荧光反应鉴定mSSCs体外分化前后情况;3)通过RT-PCR检测mSSCs诱导分化前后(0h,2h,72h)Stra8、mina53mRNA的水平,初步了解Stra8、mina53的表达状况。结果表明:1)形态学变化显示ATRA使mSSCs向精母细胞方向发生了分化,并通过间接免疫荧光反应进行鉴定。2)Stra8在mSSCs诱导分化2h、72h的水平高于成年小鼠和未诱导分化的水平,其中72h时水平低于2h,各对照组间差异具有统计学意义。3)mina53的表达在诱导后增加,其水平高于成年小鼠和未诱导mSSCs的水平,但差异无统计学意义。这表明ATRA在体外使mSSCs向精母细胞方向分化,Stra8基因呈高表达,但mina53基因呈高表达不确定。 展开更多
关键词 精原干细胞 Stra8 MINA53 全反式视黄酸 分化 增殖
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生殖细胞核因子及其相关因子在恶性生殖细胞肿瘤中的表达 被引量:8
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作者 高启云 王菊 +1 位作者 尹亚西 周宗瑶 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第5期616-621,共6页
为研究生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中的表达,揭示GCNF及Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中关系。运用免疫组化SP法分别检测41例男女生殖系统恶性肿瘤及8例无瘤变卵巢组织及10例无瘤变睾丸组织中GCNF及Oct-4的表达。结果显示... 为研究生殖细胞核因子(GCNF)及Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中的表达,揭示GCNF及Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中关系。运用免疫组化SP法分别检测41例男女生殖系统恶性肿瘤及8例无瘤变卵巢组织及10例无瘤变睾丸组织中GCNF及Oct-4的表达。结果显示GCNF在所有的恶性生殖细胞肿瘤及无瘤变的睾丸组织均呈阳性表达,定位于肿瘤细胞的细胞核,Oct-4在未成熟畸胎瘤,无性细胞瘤及精原细胞瘤呈阳性表达,定位于肿瘤细胞的细胞核,在其他类别的恶性生殖细胞肿瘤及无瘤变卵巢组织及睾丸组织中不表达。由此可知,GCNF和Oct-4在恶性生殖细胞肿瘤中的表达呈负相关,二者的表达强度可能与肿瘤细胞的分化状态有关。 展开更多
关键词 生殖细胞肿瘤 生殖细胞核因子 OCT-4 免疫组织化学
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肥胖/糖尿病过程中大鼠不同部位脂肪细胞大小的比较 被引量:5
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作者 张君 褚志华 +4 位作者 徐文静 陆环 丁毓磊 杨丽 谢建新 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第6期726-730,共5页
为比较大鼠肥胖/糖尿病过程中脂肪分布及脂肪细胞大小的变化,初步阐明脂肪细胞大小与2型糖尿病发生相关性。将Wistar雄性大鼠随机分为3组,每组12只:普通饮食组(正常对照),高脂饮食组(肥胖),高脂饮食+链脲佐菌素组(糖尿病组)。第0周随机... 为比较大鼠肥胖/糖尿病过程中脂肪分布及脂肪细胞大小的变化,初步阐明脂肪细胞大小与2型糖尿病发生相关性。将Wistar雄性大鼠随机分为3组,每组12只:普通饮食组(正常对照),高脂饮食组(肥胖),高脂饮食+链脲佐菌素组(糖尿病组)。第0周随机抽取6只大鼠处死后,取皮下脂肪及腹膜内脂肪,用2.5%甲醛乙醇溶液固定,进行石蜡包埋,HE染色,制成切片。在400倍光学显微镜下随机选取10个视野检测统计脂肪细胞数量及面积大小(mm^2)。在饲养过程中分别选取第6、9、12、14周等4个时间点,每个时间点各组随机处死2只大鼠,取皮下脂肪及腹膜内脂肪进行相同处理。同时,在各个时间点对大鼠体重、血糖进行检测。各组大鼠皮下脂肪细胞与腹膜内脂肪细胞大小差异均有统计学意义(F=9.653,P=0.001;F=160.605,P=0.000),其中正常组与肥胖组、正常组与糖尿病组差异都有统计学意义,而肥胖组与糖尿病组差异无统计学意义。不同部位脂肪细胞大小的差异无统计学意义。脂肪细胞的体积增大,与大鼠体重及血糖变化相平行。大鼠脂肪细胞的体积增大与肥胖/糖尿病的演进过程相平行,大鼠脂肪组织的分布与脂肪细胞的大小无明显相关性。 展开更多
关键词 肥胖 糖尿病 脂肪细胞大小
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钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用 被引量:2
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作者 王腊梅 钟华 +3 位作者 唐娜 庞丽娟 张春军 何芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1773-1780,共8页
目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受... 目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+Ca SR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs;利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位;免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用;取2~3代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(sh STIM1+sh Orai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组),将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激,采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca^(2+)浓度的变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果:STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆,与control组相比,加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后,STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少,且二者的相互作用均减弱;在4种不同处理因素作用下,sh STIM1+sh Orai1组细胞内Ca^(2+)浓度和NO净荧光强度均明显降低(P<0.05)。结论:STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节Ca SR,并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。 展开更多
关键词 基质相互作用分子1 钙释放激活钙通道蛋白1 钙敏感受体 一氧化氮
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As_2O_3联合γ分泌酶抑制剂MW167对人肝癌HepG_2/ADM细胞耐药性的影响 被引量:1
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作者 杨莉 王雪雯 +1 位作者 周明 张帆 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期1-7,共7页
目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)和γ分泌酶抑制剂MW167单独及联合作用对HepG_2/ADM细胞耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度As_2O_3(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00mg·L-1)和MW167(10、20和40μmol·L... 目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)和γ分泌酶抑制剂MW167单独及联合作用对HepG_2/ADM细胞耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度As_2O_3(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00mg·L-1)和MW167(10、20和40μmol·L-1)处理HepG_2/ADM细胞24、48和72h后细胞的吸光度(A)值,计算细胞增殖抑制率,确定药物作用浓度和时间;将HepG_2/ADM细胞分为空白组、As_2O_3组、MW167组、As_2O_3和MW167联合组;根据MTT结果选取无细胞毒剂量的As_2O_3、MW167干预各组细胞48h后,FCM法检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)、Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达水平。结果:在同一浓度时,As_2O_3和MW167对HepG_2/ADM细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长而升高(P<0.05或P<0.01);在同一时间点,As_2O_3和MW167对HepG_2/ADM细胞的增殖抑制率随药物浓度的增加而升高(P<0.05);确定As_2O_3和MW167的无毒剂量分别为0.25mg·L-1和10μmol·L-1,干预时间为48h。药物干预48h后,与空白组比较,各干预组细胞凋亡率均升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显(P<0.01)。与空白组比较,各干预组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)和Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05),其中以联合组降低最为明显(P<0.01);与空白组比较,各干预组Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显(P<0.01)。结论:As_2O_3可逆转HepG_2/ADM细胞的耐药性,其作用机制可能与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、下调细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)和Bcl-2基因及蛋白表达水平及上调Bax基因和蛋白表达水平有关。 展开更多
关键词 三氧化二砷 肝肿瘤 NOTCH信号通路 多药耐药 细胞凋亡 细胞增殖
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As_2O_3联合γ分泌酶抑制剂对HepG_2细胞凋亡的诱导作用及其机制 被引量:1
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作者 周明 王雪雯 +2 位作者 杨莉 宋海林 段晶晶 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期470-475,共6页
目的:探讨As2O3通过Notch信号通路对HepG2细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG2细胞分为空白组、As2O3组、MW167组和联合组;采用不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结果... 目的:探讨As2O3通过Notch信号通路对HepG2细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG2细胞分为空白组、As2O3组、MW167组和联合组;采用不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结果选取无细胞毒剂量As2O3和MW167(As2O30.25mg·L-1、MW167 10μmol·L-1)分组干预HepG2细胞48h;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法检测Notch-1、Bcl-2和Caspase-3mRNA和蛋白表达水平。结果:不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞均可抑制细胞增殖,呈剂量效应关系;无细胞毒剂量As2O3和MW167处理不同分组HepG2细胞48h后,与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞凋亡率升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显;与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞中Bcl-2、Notch-1mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05),其中以联合组降低最为明显;与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞中Caspase-3mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),其中以联合组升高最为明显。结论:As2O3可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与通过Notch信号通路下调细胞中Bcl-2、Notch-1基因和蛋白表达水平以及上调细胞中Caspase-3基因和蛋白表达水平有关联。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 γ分泌酶抑制剂 三氧化二砷 细胞凋亡
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小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制 被引量:1
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作者 钟华 龚艳 +5 位作者 吴玲玲 赵慧 王静 孙志萍 邓峰美 何芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期577-583,共7页
目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2~3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激... 目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2~3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激动剂精胺(spermine)和负性变构调节剂Calhex 231。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)。Western blotting检测HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达,免疫共沉淀技术检测Cav-1和CaR相互作用。用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae,Western blotting检测caveolae的标志蛋白Cav-1和浮舰蛋白1(flotillin-1)及CaR表达。同时检测胞膜、胞浆和高尔基体标志蛋白:转铁蛋白受体(TfR)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-外被体蛋白(β-COP)。检测富含Cav-1膜(CEM)区、非caveolae I区(NCF I)和II区(NCF II)的Cav-1和CaR表达。结果:(1)细胞外液为含钙液时,Calhex 231完全阻断精胺刺激引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),MβCD可加强精胺升高[Ca2+]i的作用(P<0.05)。不同浓度MβCD处理后各组Cav-1和CaR相互作用的差异无统计学意义(P>0.05);(2)免疫共沉淀结果显示,各组Cav-1和CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05);(3)与control组比较,spermine+Ca2+组、filipin+spermine+Ca2+组和MβCD+spermine+Ca2+组CEM区的Cav-1和CaR蛋白表达均降低(P<0.05),NCF I区的Cav-1和CaR蛋白表达增加(P<0.05),NCF II区Cav-1蛋白表达增加(P<0.05),而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在HUVECs中,Cav-1和CaR共定位于同一caveolae区,同时Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1抑制CaR膜定位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关。 展开更多
关键词 小凹蛋白-1 人脐静脉内皮细胞 受体 钙敏感 钙信号
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FFA对巨噬细胞UCP2蛋白的影响
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作者 冯晓朋 王铁鹏 +5 位作者 张君 徐文静 陆环 王金保 王婷婷 谢建新 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第4期468-472,共5页
为检测游离脂肪酸对巨噬细胞解耦连蛋白2的影响,探讨肥胖与巨噬细胞解耦连的关系。采用培养RAW264.7巨噬细胞,分为空白对照组(基础培养液)、FFA组(基础培养液中加入FFA,终浓度为100μmol/L)和京尼平组(基础培养液中加入京尼平,终浓度为1... 为检测游离脂肪酸对巨噬细胞解耦连蛋白2的影响,探讨肥胖与巨噬细胞解耦连的关系。采用培养RAW264.7巨噬细胞,分为空白对照组(基础培养液)、FFA组(基础培养液中加入FFA,终浓度为100μmol/L)和京尼平组(基础培养液中加入京尼平,终浓度为10μmol/L)。用Western blot的方法检测药物干预后UCP2与NF-κB磷酸化的表达水平。结果显示,与空白对照组相比,FFA作用于巨噬细胞24h后细胞内UCP2与NF-κB磷酸化水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);而京尼平作用于巨噬细胞24h后细胞内UCP2与NF-κB磷酸化水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。由此可知,FFA能诱导巨噬细胞的线粒体发生解耦连,NF-κB磷酸化水平升高。 展开更多
关键词 FFA 巨噬细胞 UCP2 NF—κB
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KLF9和KLF15在维吾尔族网膜脂肪中的表达及其与炎症相关性分析 被引量:3
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作者 王翠喆 哈晓丹 +3 位作者 谢建新 许彭 李伟 张君 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1653-1656,1660,共5页
目的:检测维吾尔族网膜脂肪组织KLF9及KLF15 m RNA表达水平,分析KLF9、KLF15与炎症信号通路关键因子的相关性。方法:选取维吾尔族个体NC组50例、OB组45例,检测一般资料和生化指标。采集网膜脂肪组织,RT-PCR法检测KLF9、KLF15及NF-κB炎... 目的:检测维吾尔族网膜脂肪组织KLF9及KLF15 m RNA表达水平,分析KLF9、KLF15与炎症信号通路关键因子的相关性。方法:选取维吾尔族个体NC组50例、OB组45例,检测一般资料和生化指标。采集网膜脂肪组织,RT-PCR法检测KLF9、KLF15及NF-κB炎症信号通路关键因子m RNA表达水平。结果:OB组BMI、WC、HC、WHR、TG和LDL显著高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05)。维吾尔族网膜脂肪组织中,OB组NF-κB、TNF-α和IL-6 m RNA表达水平显著高于NC组(P<0.05),NF-κB m RNA表达与体重和TG显著正相关(P<0.05),TNF-αm RNA表达与TG和TC显著正相关(P<0.05),IL-6 m RNA表达与HC、TG和LDL显著正相关(P<0.05);OB组网膜脂肪组织KLF15 m RNA表达水平显著低于NC组(P<0.05),与BMI、WC、WHR显著负相关(P<0.05),与HDL正相关,与TG负相关。KLF9 m RNA表达水平高于NC组,与NF-κB显著正相关(P<0.01),与IL-6正相关。结论:KLF15可能通过调控脂代谢发挥抗炎作用;肥胖状态下脂代谢紊乱可能间接上调KLF9的表达,而KLF9作为转录激活因子可能通过调控下游炎症因子的转录活性,从而促进炎症因子的表达和释放。 展开更多
关键词 维吾尔族 网膜脂肪组织 KLF9 KLF15 炎症
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大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞诱导分化及破骨细胞培养方法的建立 被引量:3
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作者 李伟 王翠喆 +5 位作者 许彭 哈小丹 刘宗智 王婷婷 谢建新 张君 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2016年第2期181-186,共6页
为建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞诱导分化及破骨细胞培养的方法,为后续细胞共培养奠定实验基础。采用通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞的方法,进行形态学观察,并应用流式细胞术检测BMSC... 为建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞诱导分化及破骨细胞培养的方法,为后续细胞共培养奠定实验基础。采用通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞的方法,进行形态学观察,并应用流式细胞术检测BMSCs免疫学表型,对其进行鉴定;将获得的第三代BMSCs向脂肪细胞和成骨细胞方向进行诱导分化,诱导21 d后的脂肪细胞应用油红O染色进行鉴定,成骨细胞应用茜素红染色进行鉴定;将获取的骨髓细胞液按照造血系单核干细胞诱导培养法向破骨细胞方向进行诱导分化,于28 d后进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色进行鉴定。结果显示,BMSCs体外培养14 d具有独特的细胞免疫学表型,流式细胞术检测,CD29+、CD44+表达量分别为97.92%和89.32%;在脂肪培养基诱导下,油红O染色阳性。在成骨培养基诱导下,茜素红染色阳性;骨髓细胞液在破骨培养基诱导下,抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性。由此可知,建立了稳定的大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞诱导分化及破骨细胞诱导分化的培养方法。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 脂肪细胞 成骨分化 破骨细胞
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游离脂肪酸通过FFAR4抑制脂肪细胞KLF15的表达和葡萄糖消耗 被引量:5
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作者 仇同同 邓玉春 +3 位作者 王翠喆 唐慧 杨欣 张君 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2020年第6期734-740,共7页
目的通过体外诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,探讨肥胖个体中高水平的血清游离脂肪酸(FFA)是否抑制Krüppel样因子15(KLF15)的表达,并尝试探索其可能的分子通路。方法0.8 mmol·L^-1 FFA混合液(棕榈酸∶油酸=1∶2),... 目的通过体外诱导3T3-L1前脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞,探讨肥胖个体中高水平的血清游离脂肪酸(FFA)是否抑制Krüppel样因子15(KLF15)的表达,并尝试探索其可能的分子通路。方法0.8 mmol·L^-1 FFA混合液(棕榈酸∶油酸=1∶2),刺激体外培养的3T3-L1成熟脂肪细胞,同时运用阻断剂AH7614和GW1100分别阻断游离脂肪酸受体4(FFAR4)和游离脂肪酸受体1(FFAR1),qRT-PCR和Western Blot技术检测脂肪细胞FFAR4、FFAR1、KLF15、Adipolin、GLUT4和磷酸化的p38 MAPK水平,葡萄糖氧化酶法检测上清液中葡萄糖浓度。结果(1)0.8 mmol·L^-1 FFA混合液能够显著促进脂肪细胞FFAR4的表达,抑制KLF15、Adipolin、GLUT4和FFAR1的表达和脂肪细胞葡萄糖消耗(P<0.05),同时对磷酸化的p38 MAPK无影响;(2)阻断FFAR4后,0.8mM FFA混合液对脂肪细胞KLF15、Adipolin、GLUT4的表达和葡萄糖消耗的抑制作用消失(P<0.05),对磷酸化水平的p38 MAPK无影响;(3)0.8 mmol·L^-1 FFA混合液作用于脂肪细胞的同时阻断FFAR1后,脂肪细胞KLF15和GLUT4的mRNA表达水平进一步降低(P<0.01),而Adipolin的表达,磷酸化的p38 MAPK和上清液葡萄糖浓度无明显变化。结论高浓度FFA可能通过FFAR4通路抑制脂肪细胞KLF15的表达和葡萄糖消耗。 展开更多
关键词 肥胖 脂肪细胞 游离脂肪酸 FFAR4/FFAR1 KLF15
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RS102895通过阻断CCL2/CCR2通路抑制PC-3前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移 被引量:4
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作者 王竞州 陈柯茹 +4 位作者 李雪 杨冰琪 庞槐 王翠喆 张君 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期781-787,共7页
目的探讨RS102895特异性拮抗CC趋化因子受体2(CCR2),对不同恶性程度前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法体外培养非雄激素依赖性PC-3前列腺癌细胞和雄激素依赖性22RV1前列腺癌细胞,设立空白对照组、重组CC趋化因子配体2(rCCL2)处理组、r... 目的探讨RS102895特异性拮抗CC趋化因子受体2(CCR2),对不同恶性程度前列腺癌细胞生物学行为的影响。方法体外培养非雄激素依赖性PC-3前列腺癌细胞和雄激素依赖性22RV1前列腺癌细胞,设立空白对照组、重组CC趋化因子配体2(rCCL2)处理组、rCCL2联合RS102895处理组。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell^(TM)法检测细胞侵袭和迁移能力,实时定量PCR检测细胞KI-67抗原(ki67)与基质金属蛋白酶2(MMP2)的mRNA表达水平,Western blot法检测细胞ki67、MMP2的蛋白表达水平。结果与对照组相比,rCCL2处理能够显著增强PC-3细胞的增殖、侵袭及迁移能力,对22RV1细胞的增殖能力具有显著增强作用;同时,rCCL2处理可显著上调PC-3细胞中ki67和MMP2的mRNA及蛋白表达水平。RS102895处理后,可逆转rCCL2的以上作用。结论RS102895可通过特异性阻断PC-3前列腺癌细胞中CCL2/CCR2通路,下调ki67及MMP2的表达,抑制细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 RS102895 CC趋化因子配体2 CC趋化因子受体2 前列腺癌细胞 细胞增殖、侵袭及迁移
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FFA上调AMPK/Vimentin促进前列腺癌细胞PC-3的增殖、侵袭和迁移 被引量:1
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作者 陈柯茹 王竞州 +8 位作者 王翠喆 唐慧 哈晓丹 邓玉春 张雪婷 李雪 冯家乐 谢建新 张君 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2020年第2期245-251,共7页
目的探讨游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)对人前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响及可能机制。方法1. 5mmol/L FFA混合液(油酸∶棕榈酸=2∶1)刺激体外培养的PC-3细胞,CCK-8法检测对细胞的毒性作用,流式细胞仪检测对增殖的影响,Transwel... 目的探讨游离脂肪酸(Free Fatty Acid,FFA)对人前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响及可能机制。方法1. 5mmol/L FFA混合液(油酸∶棕榈酸=2∶1)刺激体外培养的PC-3细胞,CCK-8法检测对细胞的毒性作用,流式细胞仪检测对增殖的影响,Transwell法检测对侵袭、迁移的影响。细胞转染和RNA干扰技术上/下调AMPK。qRT-PCR技术检测AMPK、Vimentin及VEGF的mRNA表达水平。Western Blot检测蛋白表达水平。结果 (1)1. 5 mmol/L FFA混合液处理48h后,PC-3细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著增强(P<0. 05),细胞内AMPK、Vimentin及VEGF的mRNA表达显著升高(P<0. 05)。(2) 1. 5 mmol/L FFA混合液作用于PC-3细胞的同时下调AMPK,PC-3细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著降低(P<0. 05),Vimentin的mRNA表达显著降低(P<0. 05)。(3)上调AMPK表达48 h后,PC-3细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著增强(P<0. 05),细胞内Vimentin的mRNA表达显著升高,VEGF的mRNA表达显著降低(P<0. 05);下调AMPK表达24 h后,PC-3细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著降低(P<0. 05),细胞内Vimentin的mRNA表达显著降低(P<0. 05),VEGF则无显著变化(P>0. 05)。结论高浓度FFA可能通过上调AMPK增加Vimentin表达,促进PC-3细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 游离脂肪酸 AMPK/Vimentin 肥胖 前列腺癌
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C17∶0激活GPR40受体的作用及信号转导分子机制研究 被引量:1
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作者 马丁凌 罗序梅 +6 位作者 唐意涵 梁毛迪 李梦环 侯艳婷 孙超月 周耐明 张君 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第3期347-353,共7页
目的研究长链脂肪酸C17∶0对GPR40受体的激活作用,并探讨其介导的信号转导分子机制。方法在体外培养HEK293T细胞的基础上,免疫荧光结合共聚焦显微镜检测受体膜定位和内吞情况;通过多功能酶标仪检测Ca^(2+)流的强弱;Western Blot检测ERK... 目的研究长链脂肪酸C17∶0对GPR40受体的激活作用,并探讨其介导的信号转导分子机制。方法在体外培养HEK293T细胞的基础上,免疫荧光结合共聚焦显微镜检测受体膜定位和内吞情况;通过多功能酶标仪检测Ca^(2+)流的强弱;Western Blot检测ERK1/2的磷酸化水平。结果免疫荧光结果显示:C17∶0可通过招募β-arrestin 2介导GPR40内吞;胞内Ca^(2+)动员检测结果证实:长链脂肪酸C17∶0可作用于GPR40引起胞内Ca^(2+)浓度升高;Western Blot结果显示:C17∶0可作用于GPR40诱导ERK1/2磷酸化。结论C17∶0是GPR40的内源性配体,通过激活Gaq和Gai/o蛋白介导的信号通路,引起胞内Ca^(2+)动员及ERK1/2的磷酸化。 展开更多
关键词 C17∶0 GPR40 Gaq和Gai/o 信号转导
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基于RNA-Seq的子宫内膜癌灶与癌旁组织差异表达基因分析 被引量:1
20
作者 杨冰琪 王竞州 +3 位作者 庞槐 袁成钢 张君 王翠喆 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第2期259-264,共6页
目的 利用转录组测序(RNA sequencing, RNA-Seq)技术分析肥胖相关子宫内膜癌(Endometrial Cancer, EC)癌灶及癌旁组织中的差异表达基因,寻找肥胖相关EC发生、发展的相关危险因素。方法 对4例超重/肥胖伴EC患者的癌灶和癌旁组织进行转录... 目的 利用转录组测序(RNA sequencing, RNA-Seq)技术分析肥胖相关子宫内膜癌(Endometrial Cancer, EC)癌灶及癌旁组织中的差异表达基因,寻找肥胖相关EC发生、发展的相关危险因素。方法 对4例超重/肥胖伴EC患者的癌灶和癌旁组织进行转录组测序,筛选差异表达基因,并运用生物信息学技术对差异基因进行功能和通路富集分析。结果 在EC癌灶及癌旁组织中共筛选出2 451个差异表达基因,包含1 697个上调基因,754个下调基因。GO功能富集分析表明:肥胖相关EC的发生发展与细胞间粘附调节、有丝分裂进程和错误蛋白折叠结合等一系列生物学进程密切相关。KEGG功能富集分析表明:肥胖相关EC的发生发展与病毒致癌、细胞周期、Hippo信号通路、细胞凋亡和p53信号通路等密切相关。结论 Hippo信号通路、p53信号通路和NETs信号通路可能在肥胖相关EC发生发展过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 RNA-SEQ 差异表达基因 通路功能富集
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