巩膜胚后发育过程中巩膜组织结构及生物力学特性变化 被引量：1

1

作者 郝爽 邓爱军 王国辉 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第1期21-24,29,共5页

目的探讨兔巩膜组织在不同月龄期的形态结构及生物力学性能变化。方法选择1、2、3月龄新西兰大白兔,取眼球,测量眼球直径和眼轴长度;获取巩膜组织,测量巩膜组织厚度,一部分巩膜组织固定后进行HE染色观察巩膜结构,一部分巩膜组织固定后... 目的探讨兔巩膜组织在不同月龄期的形态结构及生物力学性能变化。方法选择1、2、3月龄新西兰大白兔,取眼球,测量眼球直径和眼轴长度;获取巩膜组织,测量巩膜组织厚度,一部分巩膜组织固定后进行HE染色观察巩膜结构,一部分巩膜组织固定后通过电镜观察胶原原纤维,另一部分巩膜组织制成巩膜条带,用Instron 5544试验机检测巩膜的弹性模量。结果眼球直径、眼轴长度和巩膜的厚度随月龄增加而增大。巩膜组织的弹性模量随月龄增加而增大。巩膜组织中巩膜成纤维细胞数量随月龄增加而减少,纤维束增多变粗。胶原原纤维直径随月龄增加而增大。结论在巩膜胚后生长过程中,眼球和巩膜的结构不断发生变化,胶原纤维不断增多、变粗,巩膜组织的生物力学性能也随之提高,了解巩膜胚后生长发育机制可为巩膜相关疾病的防治提供理论指导。 展开更多

关键词 巩膜 胶原原纤维 成纤维细胞 弹性模量

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基于生物信息学分析研究miR-182-5p通过靶向调控EP300促进乳腺癌细胞的侵袭和转移 被引量：8

2

作者 陈智凯 李春涛 +5 位作者 王晓栋 王玉 王雪婷 张琳 李洪利 尹崇高 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期421-428,共8页

近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3... 近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3个数据库中,在乳腺癌组织中存在26个相同的microRNA,其中8个上调,而我们实验验证发现hsa-miR-182在8例病理组织中的表达上调差异最显著(P=0.001),选定目的基因hsa-miR-182;qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达,结果显示,与MCF-10A相比,miR-182-5p在MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-453、MCF-7中表达上调(P<0.05);转染miR-182-5p干扰质粒,qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达情况。结果显示,miR-182-5p表达显著降低(P=0.003),提示转染成功;Transwell侵袭结果显示,MDAMB-231细胞敲低miR-182-5p,与对照组相比,体外侵袭能力明显降低(P=0.002);Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒时,MDA-MB-231中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况,结果显示,与对照组相比,敲低miR-182-5p使细胞中上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达上调,神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调。为研究探讨miR-182-5p的靶蛋白,采用在线预测软件预测可能与miR-182-5p结合的靶蛋白,cytoscape构建蛋白质互作网络图并筛选出hub基因;双荧光素酶结果证实,miR-182-5p可与EP300靶向结合(P=0.001);采用qRT-PCR、Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒后EP300在mRNA及蛋白质水平的表达,结果显示,与对照组相比,在敲低miR-182-5p组中EP300在mRNA及蛋白质的表达上调(P=0.001)。综上所述,miR-182-5p可靶向调节EP300,促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。 展开更多

关键词 乳腺癌 miR-182-5p EP300 侵袭 转移

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Gab2通过PI3K/Akt/ARK5/MMP途径影响乳腺癌的侵袭和转移 被引量：16

3

作者 田红艳 陈萍萍 +5 位作者 李笑 李洪利 任甜甜 张宝刚 尹崇高 刘雨清 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1014-1018,共5页

目的探讨Gab2在乳腺浸润性导管癌侵袭和转移中的分子机制,为临床预防乳腺癌的侵袭和转移提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁相对正常组织(>5 cm)中Gab2蛋白表达情况,并分析其表达与乳腺浸润... 目的探讨Gab2在乳腺浸润性导管癌侵袭和转移中的分子机制,为临床预防乳腺癌的侵袭和转移提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁相对正常组织(>5 cm)中Gab2蛋白表达情况,并分析其表达与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的相关性,分析浸润性导管癌中Gab2、MMP-2及MMP-9蛋白表达的相关性。采用Western blot检测乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中Gab2蛋白的表达情况。采用RNAi技术将小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,应用Western blot检测转染成功后各组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况,应用Transwell体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭性,用EGF刺激细胞后Western blot检测Akt及ARK5的磷酸化情况。结果浸润性导管癌组织中Gab2蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),浸润性导管癌中Gab2蛋白的表达与ER、组织学分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),且其表达与MMP-2及MMP-9蛋白的表达呈正相关;MDA-MB-231细胞系中Gab2蛋白表达量高于MCF-7细胞系中表达量;转染干扰质粒24 h后,与转染空载细胞组相比,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功。同时,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组穿过Transwell小室人工基膜数量明显减少(P<0.05),并伴有MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。用EGF刺激各组细胞,结果显示:在SiG ab2/MDAMB-231细胞组Akt及ARK5的磷酸化明显受到抑制。结论Gab2通过PI3K/Akt/ARK5信号通路影响MMP-2、MMP-9的表达从而促进乳腺癌的侵袭与转移。 展开更多

关键词 乳腺癌 Gab2 AKT ARK5 MMP 侵袭 转移

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miR-186-5p通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化 被引量：19

4

作者 张国新 徐新伟 +4 位作者 孟斌 朱优秀 曾国栋 尹崇高 李洪利 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期380-385,共6页

先前研究表明,miR-186-5p在人类许多恶性肿瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用并不明确。本研究旨在证明,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转... 先前研究表明,miR-186-5p在人类许多恶性肿瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用并不明确。本研究旨在证明,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化。我们首先分析了miR-186-5p在人肺癌细胞中的表达。荧光定量PCR(QRT-PCR)结果显示,与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺腺癌细胞SPC-A1、A549中的miR-186-5p表达量明显降低。为研究miR-186-5p在肺腺癌细胞中的功能,利用GV369-miR-186-5p表达载体,实现了在A549细胞中的过表达。基因转染结合Transwell侵袭结果显示,与对照质粒转染的A549细胞相比,过表达miR-186-5p的A549细胞的体外侵袭能力明显下降。Western印迹检测细胞中EMT相关标志物揭示,GV369-miR-186-5p转染的A549细胞中的上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达明显上调,而神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达明显下调。同时,GV369-miR-186-5p转染引起其靶基因——垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG1)编码蛋白在A549细胞中明显降低。重要的是,过表达miR-186-5p与敲减PTTG1均可导致上皮-钙黏着蛋白表达上调,而神经-钙黏着蛋白和波形蛋白下调;而miR-186-5p和PTTG1表达载体共转染后,3种EMT相关标志物在A549的表达与对照细胞的表达无明显差异,提示过表达PTTG1可抵消miR-186-5p对EMT相关标志物表达的影响。综上所述,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制EMT的发生,进而抑制肺腺癌细胞的侵袭转移。 展开更多

关键词 肺腺癌 miR-186-5p 侵袭 转移 上皮-间质转化

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EBP50通过Wnt3a/β-catenin信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移 被引量：9

5

作者 孙志亮 张胜超 +1 位作者 李洪利 尹崇高 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1027-1032,共6页

EBP50通过抑制LIMK/cofilin信号通路和PI3K/Akt/m TOR/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。然而,EBP50是否可以通过其他机制抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移尚未可知。本研究发现,EBP50能通过Wnt3a/β-catenin信号通路影响乳腺癌细胞... EBP50通过抑制LIMK/cofilin信号通路和PI3K/Akt/m TOR/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。然而,EBP50是否可以通过其他机制抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移尚未可知。本研究发现,EBP50能通过Wnt3a/β-catenin信号通路影响乳腺癌细胞的侵袭和转移。Western印迹结果显示,EBP50在低转移细胞株MCF-7和正常乳腺细胞株MCF-10A中高表达,而在高转移细胞株MDA-MB-231低表达。采用RNAi技术将小RNA质粒瞬时转染乳腺癌细胞株MCF-7,同时将质粒pc DNA3.1-EBP50转入乳腺癌细胞株MDA-MB-231。Western印迹结果显示,Si EBP50/MCF-7细胞组的EBP50表达水平明显下调,MDA231/EBP50细胞组的EBP50表达水平明显上调。Transwell侵袭实验和划痕实验结果显示,用Wnt3a刺激后,Si EBP50/MCF-7细胞组体外迁移和侵袭能力明显增强,MDA231/EBP50细胞组体外迁移和侵袭能力明显减弱。Western印迹结果显示,与未用Wnt3a或同时用Wnt3a和抑制剂Dkk1刺激的相比,Si EBP50/MCF-7细胞组上皮-钙粘蛋白(Ecadherin)下调,波形蛋白(vimentin)上调,细胞核中β-联蛋白(β-catenin)的表达水平升高,而MDA231/EBP50细胞组上皮-钙粘蛋白上调,波形蛋白下调,细胞核中β-联蛋白表达下降。上述结果表明,EBP50通过Wnt3a/β-catenin信号通路影响β-联蛋白的转核,抑制EMT的发生,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。 展开更多

关键词 乳腺癌 EBP50 Wnt3a/β-catenin 侵袭 转移

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TGF-β1通过F-actin聚合促进乳腺癌细胞MCF-7发生上皮-间质转化 被引量：10

6

作者 孙志亮 李洪利 尹崇高 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期735-736,共2页

上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是上皮细胞失去极性,获得间质形态的一个过程.肿瘤细胞中,EMT的激活促进了肿瘤的侵袭转移.转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-1）属于TGF家族,它能够调节... 上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是上皮细胞失去极性,获得间质形态的一个过程.肿瘤细胞中,EMT的激活促进了肿瘤的侵袭转移.转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-1）属于TGF家族,它能够调节细胞增殖、分化、细胞凋亡及细胞外基质的生成等. 展开更多

关键词 TGF-Β1 上皮-间质转化 肌动蛋白丝聚合 LIM激酶 肌动蛋白解聚因子 乳腺癌

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Gab2通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的上皮-间质转化 被引量：6

7

作者 田红艳 李笑 +3 位作者 孙志亮 李洪利 刘雨清 尹崇高 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期134-139,共6页

背景与目的:越来越多的证据显示,Grb2协同结合蛋白2(Grb2 binding protein-2,Gab2)与肿瘤的侵袭转移相关,但Gab2与乳腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系尚不清楚。本研究旨在探讨Gab2对乳腺癌EMT标志物的... 背景与目的:越来越多的证据显示,Grb2协同结合蛋白2(Grb2 binding protein-2,Gab2)与肿瘤的侵袭转移相关,但Gab2与乳腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系尚不清楚。本研究旨在探讨Gab2对乳腺癌EMT标志物的影响,明确Gab2在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法:采用免疫组织化学染色法检测80例乳腺癌组织中Gab2及EMT标记物上皮性钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达情况并分析其相关性,用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测乳腺组织Gab2的表达情况,采用小干扰RNA(siRNA)技术降低乳腺癌细胞系MDA-MB-231中Gab2的表达,采用划痕实验检测表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后转染细胞的侵袭能力变化,用Western blot检测敲低Gab2后MDAMB-231细胞中E-cadherin及vimentin的表达情况,同时检测p-GSK-3β的表达情况、转录因子Snail转核情况。结果:Gab2在乳腺癌组织中的表达与E-cadherin的表达呈负相关,而与vimentin的表达呈正相关(P<0.05);乳腺癌组织中Gab2的表达量明显高于正常乳腺组织;siRNA质粒转染后,Si Gab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功,划痕实验显示细胞的侵袭能力减弱,表明Gab2影响乳腺癌细胞系的侵袭能力;敲低Gab2后,MDA-MB-231细胞中的E-cadherin的表达明显升高,而vimentin的表达明显降低;GSK-3β的磷酸化受到抑制,而Snail在敲低Gab2的细胞核中的表达明显下调。结论:Gab2可以通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的EMT,从而促进乳腺癌的侵袭和转移。 展开更多

关键词 乳腺癌 侵袭 Grb2协同结合蛋白2 上皮-间质转化 信号通路

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TGF-β_1通过PI3K/AKT/ARK5/Snail信号通路促进非小细胞肺癌SPC-A1细胞的上皮-间质转化 被引量：12

8

作者 李笑 李洪利 尹崇高 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期710-715,共6页

上皮-间质转化(EMT)在肿瘤侵袭转移发展进程中起着重要的作用.转化生长因子-β(TGF-β)已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂.然而,其分子机制仍有待深入研究.该研究旨在探讨TGF-β1促进非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系SPC-A1上皮-间质转化过程中... 上皮-间质转化(EMT)在肿瘤侵袭转移发展进程中起着重要的作用.转化生长因子-β(TGF-β)已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂.然而,其分子机制仍有待深入研究.该研究旨在探讨TGF-β1促进非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系SPC-A1上皮-间质转化过程中的分子机制.细胞的形态学检查结果显示,TGF-β1刺激SPC-A1细胞后细胞形态变成梭形.Transwell侵袭实验揭示,TGF-β1刺激后细胞侵袭能力明显增强.Western印迹结果证明,与未经TGF-β1刺激的SPC-A1细胞比较,EMT上皮标志物上皮-钙粘蛋白(E-cadherin)表达明显下调,而间质标志物波形蛋白(vimentin)明显上调,p-AKT、p-ARK5的表达也明显增强.此外,转录因子Snail在细胞核内的表达水平明显增强.TGF-β1和PI3K抑制剂LY294002同时刺激SPC-A1细胞后,p-AKT、p-ARK5较只加TGF-β1时表达明显降低,Snail在核内的表达水平也明显降低.结果提示,TGF-β1通过激活AKT、ARK5磷酸化,促进转录因子Snail入核,进而导致SPC-A1细胞EMT. 展开更多

关键词 转化生长因子-β(TGF-β1) 非小细胞肺癌 上皮一间质转化 分子机制

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miR-504靶向CHD1L抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制 被引量：6

9

作者 王照岩 杨志一 +5 位作者 林祥博 陈智凯 李洪利 尹崇高 牟青杰 刘雨清 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1302-1307,共6页

目的探讨miR-504靶向染色质解旋酶DNA结合蛋白(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制。方法 qRT-PCR检测人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)中m... 目的探讨miR-504靶向染色质解旋酶DNA结合蛋白(chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene,CHD1L)抑制乳腺癌细胞侵袭的分子机制。方法 qRT-PCR检测人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)与乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)中miR-504的表达量,同时检测miR-504在MDA-MB-231细胞中的转染效率;双荧光素酶实验检测miR-504与CHD1L是否存在结合靶点;qRT-PCR及Western blot法检测CHD1L mRNA和蛋白的表达水平;Transwell侵袭实验检测MDAMB-231细胞的侵袭能力;Western blot法检测p-Akt、MMP-2和MMP-9的表达情况。结果乳腺癌细胞中miR-504的表达量明显低于人正常乳腺上皮细胞(P <0. 05);miR-504在MDA-MB-231/miR-504组中的表达水平明显增高(P <0. 05);双荧光素酶实验检测显示miR-504能与CHD1L mRNA的3'-UTR结合;此外,过表达miR-504后CHD1L mRNA的表达水平无显著变化,但CHD1L蛋白表达水平显著降低(P <0. 05);与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组侵袭能力明显降低,而MDA-MB-231/miR-504+CHD1L组侵袭能力比MDA-MB-231/miR-504+Con组明显增加;用表皮生长因子分别刺激转染不同质粒的MDA-MB-231细胞,与MDA-MB-231/NC组相比,MDA-MB-231/miR-504组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平明显降低(P <0. 05),而MDA-MB-231/miR-504+CHD1L组中p-Akt、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平与MDA-MB-231/miR-504+Con组相比明显增加(P <0. 05)。结论 miR-504靶向CHD1L通过PI3K/Akt/MMP信号通路抑制乳腺癌细胞的侵袭。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 miR-504 CHD1L PI3K/Akt/MMP 侵袭

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不同使用类型红壤中DEHP的降解研究 被引量：2

10

作者 王冠 翁丽云 +7 位作者 张红艳 张松 郑晨禧 温美婷 胡汉桥 史延华 任磊 刘斌 《农业与技术》 2020年第9期5-7,19,共4页

邻苯二甲酸酯类塑化剂是全球用量最大的塑化剂,同时也是常见的一类环境内分泌干扰物,其对生态环境和人体健康的影响得到了广泛的关注与研究。邻苯二甲酸(2-乙基已基)酯(Di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)作为邻苯二甲酸酯中用量最大的一... 邻苯二甲酸酯类塑化剂是全球用量最大的塑化剂,同时也是常见的一类环境内分泌干扰物,其对生态环境和人体健康的影响得到了广泛的关注与研究。邻苯二甲酸(2-乙基已基)酯(Di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP)作为邻苯二甲酸酯中用量最大的一种,在环境中被普遍检出,其在环境中的降解过程受到了广泛关注,但在不同使用类型红壤中的降解情况还未见报道。本研究以DEHP为材料,研究其在不同使用类型红壤中的降解情况,建立了土壤中DEHP的萃取方法及气相色谱检测方法;对不同使用类型红壤进行了理化特征分析,并人为添加DEHP至50mg/kg后分别在不同时间取样,测定DEHP含量,从而评估不同使用类型红壤对DEHP的降解能力。结果表明,林地与果园土壤中DEHP基本无降解,菜地与稻田土壤中DEHP存在缓慢降解,其中稻田土壤中50mg/kg的DEHP在30d内的降解率最高为11.3%。本研究结果为研究邻苯二甲酸酯类在红壤中的降解及毒性评估提供了理论参考。 展开更多

关键词 邻苯二甲酸酯 邻苯二甲酸(2-乙基已基)酯 红壤 降解

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基于脉冲占空比调节灵敏度的光电开关传感器 被引量：7

11

作者 陈可 季超 +2 位作者 蔡占秀 刘洪英 邱召运 《传感技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期77-81,共5页

调整光电开关传感器的检测距离可通过调节其灵敏度来实现。该研究讨论了脉冲占空比对红外光电开关传感器灵敏度的影响,提出了基于脉冲占空比调节红外光电开关传感器灵敏度的技术方法。以连续周期矩形脉冲信号为例进行了傅里叶级数展开,... 调整光电开关传感器的检测距离可通过调节其灵敏度来实现。该研究讨论了脉冲占空比对红外光电开关传感器灵敏度的影响,提出了基于脉冲占空比调节红外光电开关传感器灵敏度的技术方法。以连续周期矩形脉冲信号为例进行了傅里叶级数展开,得到了直流电压分量和倍频信号电压幅值与占空比的正弦函数关系,并仿真分析了占空比与基频信号电压幅值的相关性,实验测量了占空比对传感器相对灵敏度影响的关系曲线。结果证明,在不改变矩形脉冲电压幅度和频率的情况下,通过调节占空比δ可以改变传感器的灵敏度。即当0<δ<50%时,灵敏度随δ增大而增大;当δ=50%时,灵敏度最大;当50%<δ<100%时,灵敏度随δ增大而减小。在红外光电开关传感器上应用该技术方法,实现了利用软件控制占空比来调节传感器的检测距离。 展开更多

关键词 传感器 光电开关 占空比 灵敏度 调制光

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间质表皮转化因子通过PI3K/AKT/MMPs信号通路促进肺腺癌细胞的侵袭转移 被引量：16

12

作者 林祥博 石文静 +5 位作者 杨志一 张丽萍 周丹丹 郑荃 尹崇高 李洪利 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期648-654,共7页

间质表皮转化因子(mesenchymal to epithelial transition factor,MET)在多种癌症中异常表达,影响肿瘤的发生发展,但MET影响肺腺癌的分子机制并不明确。本研究收集3例淋巴结转移的肺腺癌组织(lung adenocarcinoma tissues,LAD)和3例无... 间质表皮转化因子(mesenchymal to epithelial transition factor,MET)在多种癌症中异常表达,影响肿瘤的发生发展,但MET影响肺腺癌的分子机制并不明确。本研究收集3例淋巴结转移的肺腺癌组织(lung adenocarcinoma tissues,LAD)和3例无淋巴结转移的肺腺癌组织,用于微阵列基因芯片分析。结果显示,与无淋巴结转移的肺腺癌组织相比,有淋巴结转移的肺腺癌组织中有1 314条mRNAs表达上调,400条mRNAs表达下调。其中,MET在有淋巴结转移的肺腺癌组织中表达显著升高。随机选取8个差异表达基因,对收集的潍坊医学院附属医院2014年2月至2017年2月间有淋巴结转移的肺腺癌组织和无淋巴结转移的肺腺癌组织各30例通过qRT-PCR实验进行微阵列基因芯片验证。结果显示,所选mRNAs的表达与微阵列结果一致,验证了微阵列基因芯片结果的准确性。通过Western印迹进一步检测MET的表达。结果显示,相较于正常肺上皮细胞,肺腺癌细胞中MET的表达显著升高。利用质粒转染,敲减肺腺癌细胞A549中的MET,Transwell侵袭实验结果显示,敲减MET后肺腺癌细胞的侵袭能力明显降低;对各细胞组进行EGF(epidermal growth factor)处理并检测PI3K/AKT/MMPs信号通路,Western印迹检测结果显示,敲减MET后,肺腺癌细胞中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和MMP-9的表达显著下降,AKT的磷酸化水平也显著下降。上述结果表明,MET可通过激活PI3K/AKT信号通路进而增加MMPs的表达促进肺腺癌的侵袭转移。 展开更多

关键词 肺腺癌 基因芯片 间质表皮转化因子 PI3K/AKT/MMPs信号通路

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香椿子多酚通过抑制P38MAPK信号通路减轻帕金森病大鼠的神经炎症反应 被引量：12

13

作者 庄文欣 陈超 +3 位作者 马一闻 宋乐乐 吕娥 付文玉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期794-799,共6页

目的探讨香椿子多酚(PTSS)对帕金森病(PD)大鼠神经炎症的抑制作用及机制。方法成年雄性SD大鼠单侧纹状体内注射6-疑多巴胺(6-OHDA)造模。造模成功大鼠随机分为模型组、PTSS处理组,另设一组正常大鼠为对照组,每组10只。30 d后,采用阿朴吗... 目的探讨香椿子多酚(PTSS)对帕金森病(PD)大鼠神经炎症的抑制作用及机制。方法成年雄性SD大鼠单侧纹状体内注射6-疑多巴胺(6-OHDA)造模。造模成功大鼠随机分为模型组、PTSS处理组,另设一组正常大鼠为对照组,每组10只。30 d后,采用阿朴吗啡(APO)腹腔注射诱导大鼠的旋转行为,检测各组大鼠的行为改变。免疫组织化学染色法观测各组大鼠黑质酪氨酸務化酶(TH)阳性的多巴胺(DA)能神经元、钙离子结合接头蛋白分子l(Ibal)阳性的小胶质细胞、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的星形胶质细胞形态和数量变化;免疫组织化学染色法检测黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子KBp65(NF-KBp65)、P38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)的表达;Western blot法检测大鼠黑质TH、GFAP、p38MAPK、p-p38MAPK蛋白水平。结果PTSS处理组大鼠的旋转圈数较模型组明显减少。模型组大鼠损毁侧黑质TH阳性细胞较对照组显著减少,PTSS处理后,TH阳性细胞数量以及蛋白表达明显增加。与对照组相比,模型组大鼠损毁侧黑质Ibal、GFAP、iNOS、NF-kB、p38MAPK和p-p38MAPK蛋白含量显著增加。PTSS处理后,上述蛋白的表达均明显减弱,蛋白含量显著降低。结论PTSS通过抑制p38MAPK信号通路,减少炎症因子的表达,对PD大鼠DA能神经元起保护作用。 展开更多

关键词 香椿子多酚(PTSS) 神经炎症 帕金森病 大鼠 黑质 P38MAPK通路

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Exendin-4对胰岛素抵抗人肝癌HepG_2细胞脂代谢相关因子基因表达的影响 被引量：2

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作者 苏寒 张美家 +7 位作者 王怀杰 李娜 霍连广 李桂芝 戴功 高志芹 杨晓云 曲梅花 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期36-40,共5页

目的:探讨Exendin-4(Ex-4)对胰岛素抵抗(IR)人肝癌HepG2细胞脂代谢相关因子表达的影响,阐明Ex-4改善IR的作用。方法:选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞制备IR模型(HepG2-IR细胞),再将其分为对照组(不... 目的:探讨Exendin-4(Ex-4)对胰岛素抵抗(IR)人肝癌HepG2细胞脂代谢相关因子表达的影响,阐明Ex-4改善IR的作用。方法:选取处于对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞制备IR模型(HepG2-IR细胞),再将其分为对照组(不含胰岛素的HepG2细胞)、IR组(IR模型,即HepG2-IR细胞)和Ex-4组(IR模型中加入10nmol·L-1 Ex-4)。采用葡萄糖氧化酶法(GOD-POD)检测细胞中葡萄糖消耗量,采用油红O染色观察细胞形态及胞内脂滴形成情况,应用甘油三酯(TG)试剂盒检测细胞中TG水平,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)和载脂蛋白B100(apoB100)等脂代谢相关因子mRNA表达水平。结果:HepG2细胞建立IR模型后,与对照组比较,IR组HepG2-IR细胞葡萄糖消耗量明显降低(P<0.01);与IR组比较,Ex-4组HepG2-IR细胞葡萄糖消耗量明显增加(P<0.05)。油红O染色法,与对照组比较,IR组细胞含脂率明显升高(P<0.05);与IR组比较,Ex-4组细胞中含脂率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,IR组细胞中TG水平明显升高(P<0.01);与IR组比较,Ex-4组细胞中TG水平明显降低(P<0.05)。qRT-PCR检测,与对照组比较,IR组细胞中ACC、FAS和SREBP-1cmRNA表达水平明显升高(P<0.01),apoB100mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与IR组比较,Ex-4组细胞中ACC、FAS和SREBP-1cmRNA表达水平降低(P<0.05),apoB100mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论:Ex-4可通过调节人肝癌HepG2细胞脂类代谢相关因子的表达进而改善IR。 展开更多

关键词 EXENDIN-4 HepG2细胞 胰岛素抵抗 乙酰辅酶A羧化酶 脂肪酸合成酶 脂代谢

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miR-625-5p通过靶向调控PRKACA促进肺腺癌细胞的增殖和侵袭 被引量：3

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作者 胡雅琼 白俊 +7 位作者 陈琳 陈新璐 张丽萍 周丹丹 王玉 尹崇高 李洪利 刘雨清 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期447-454,共8页

背景与目的:肺腺癌是非小细胞肺癌的一种亚型,虽在诊断和治疗方面已经取得了很大进展,但晚期肺腺癌临床预后和总生存仍较差。近年来多项研究表明,miRNA在多种癌症中发挥作用,并在细胞增殖、转移、炎症等生物学过程中发挥重要作用。探究m... 背景与目的:肺腺癌是非小细胞肺癌的一种亚型,虽在诊断和治疗方面已经取得了很大进展,但晚期肺腺癌临床预后和总生存仍较差。近年来多项研究表明,miRNA在多种癌症中发挥作用,并在细胞增殖、转移、炎症等生物学过程中发挥重要作用。探究miR-625-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制,旨在为后续肺腺癌的诊断和治疗提供新的思路。方法:利用GEO数据库查找肺腺癌组织中差异表达的miRNA。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测miR-625-5p在各肺腺癌细胞系中的表达情况,采用EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验研究miR-625-5p对肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响;通过生物信息学预测miR-625-5p靶向结合的关键基因;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测对蛋白激酶cAMP激活催化亚基α(protein kinase cAMP-activated catalytic subunit alpha,PRKACA)在肺腺癌细胞中的表达情况进行验证,采用双荧光素酶报告基因实验和Western blot分析miR-625-5p与PRKACA之间的靶向关系。Western blot检测共转染敲低PRKACA质粒和敲低miR-625-5p质粒后各组细胞PRKACA的表达情况。采用EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验检测共转染以后各组肺腺癌细胞增殖和侵袭能力的改变。结果:miR-625-5p在肺腺癌组织(P<0.0001)和各组肺腺癌细胞(P<0.0001)中表达上调。EdU细胞增殖实验和transwell侵袭实验结果显示,miR-625-5p能够促进肺腺癌细胞的增殖(P=0.0023)和侵袭(P=0.0003)能力。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-625-5p能与PRKACA靶向结合(P=0.0008)。在肺腺癌细胞中,miR-625-5p与PRKACA的表达呈负相关(P<0.0001)。miR-625-5p下调能够逆转敲低PRKACA对A549细胞增殖(P=0.0119)和侵袭(P=0.0015)能力的促进作用。结论:miR-625-5p在肺腺癌组织和细胞中表达上调,并通过负向调控PRKACA促进肺腺癌细胞增殖和侵袭。 展开更多

关键词 miR-625-5p 蛋白激酶cAMP激活催化亚基α 增殖 侵袭 肺腺癌

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FGF8辅助牙源性上皮诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞 被引量：2

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作者 刘皓 姜建萍 +6 位作者 张娟娟 潘智芳 李孟杰 梁铮 赵翔宇 孙岩 刘晓影 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期730-734,共5页

目的:研究成纤维细胞生长因子8(FGF8)对成人牙髓干细胞(hDPSCs)定向分化为成牙本质细胞及牙髓组织的影响。方法:首先分离、克隆培养hDPSCs,通过流式细胞术检测细胞表面标志物鉴定hDPSCs;矿化液中添加50μg/L的FGF8诱导hDPSCs分化,通过re... 目的:研究成纤维细胞生长因子8(FGF8)对成人牙髓干细胞(hDPSCs)定向分化为成牙本质细胞及牙髓组织的影响。方法:首先分离、克隆培养hDPSCs,通过流式细胞术检测细胞表面标志物鉴定hDPSCs;矿化液中添加50μg/L的FGF8诱导hDPSCs分化,通过real-time PCR检测分化后的细胞中牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)和核心结合因子α1(Cbfa-1)在mRNA水平的表达;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8与hDPSCs细胞团重组,再将组织块种植于裸鼠肾囊膜下培养,通过DNA原位杂交鉴定成牙本质细胞及牙髓细胞的来源。结果:成功分离培养hDPSCs,其表面标志物CD29和CD90呈阳性表达;经FGF8诱导的hDPSCs形成较明显的矿化结节,并且牙本质特异性蛋白DSPP、BSP及Cbfa-1表达量上调;E11.5小鼠牙源性上皮联合FGF8可以诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞。结论:FGF8能够辅助牙源性上皮定向诱导hDPSCs分化为成牙本质细胞及牙髓细胞,并形成牙本质及牙髓腔结构。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子8 成人牙髓干细胞 成牙本质细胞

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RhoA和ROCK2在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓中的表达 被引量：4

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作者 梁婵婵 王巧真 +4 位作者 蒋欣 刘金梦 徐进超 郑怡雯 王箐 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期29-34,共6页

目的:通过研究RhoA和ROCK2在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓内的表达变化以阐明Rho/ROCK信号通路在肌萎缩侧索硬化症(ALS)病程中的作用。方法:饲养SOD1-G93A转基因小鼠和同窝野生型小鼠至发病早期、中期和晚期,部分小鼠冰上剥离新鲜脊髓组织,... 目的:通过研究RhoA和ROCK2在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓内的表达变化以阐明Rho/ROCK信号通路在肌萎缩侧索硬化症(ALS)病程中的作用。方法:饲养SOD1-G93A转基因小鼠和同窝野生型小鼠至发病早期、中期和晚期,部分小鼠冰上剥离新鲜脊髓组织,利用RT-PCR方法检测RhoA和ROCK2 mRNA的表达,利用Western Blot方法检测RhoA和ROCK2蛋白的表达;部分小鼠行心脏灌注并剥离其脊髓组织制成冰冻切片,利用免疫组织化学染色方法检测RhoA和ROCK2蛋白的表达。结果:在SOD1-G93A鼠发病的早期、中期和晚期,转基因小鼠脊髓中RhoA和ROCK2的mRNA及蛋白表达均上调。免疫组织化学染色实验结果显示,野生型小鼠脊髓中RhoA和ROCK2弥散分布于胞质和突起中,阳性染色浅,SOD1-G93A转基因小鼠脊髓中RhoA和ROCK2阳性染色深,大量聚集在细胞膜及细胞质。结论:RhoA和ROCK2在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓中异常高水平表达与ALS脊髓区病变密切相关,可能参与ALS疾病进程。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化症 脊髓 RHOA ROCK2 SOD1-G93A转基因小鼠

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创伤后应激障碍的啮齿类动物模型研究进展 被引量：3

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作者 孙浩然 徐艳玲 +3 位作者 李长江 连波 王艳郁 孙琳 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期254-259,共6页

创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)是在经历重大创伤事件之后产生的一种高发病率且对社会经济有着重大影响的精神疾病。目前,PTSD的发病机制尚不明确,严重阻碍着临床药物的研发和应用。疾病动物模型的建立对人们了解... 创伤后应激障碍(post-traumatic stress disorder,PTSD)是在经历重大创伤事件之后产生的一种高发病率且对社会经济有着重大影响的精神疾病。目前,PTSD的发病机制尚不明确,严重阻碍着临床药物的研发和应用。疾病动物模型的建立对人们了解PTSD的临床表现、发病机制以及治疗有着至关重要的作用。近年来,研究者陆续提出了各种PTSD动物模型,并在行为学、分子生物学等方面进行了研究。本综述通过介绍以大、小鼠为代表的啮齿类动物PTSD模型的建立方法,总结国内外研究者近年来的研究现状,为PTSD动物模型的选择和疾病的进一步研究提供参考。 展开更多

关键词 动物模型 创伤后应激障碍 行为学 神经生物学机制

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转录因子12在SOD1-G93A转基因小鼠大脑皮层和纹状体中的表达与定位研究 被引量：2

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作者 丁昊宇 陈燕春 +5 位作者 郑怡雯 徐进超 周永佳 林宝勇 张皓云 刘焕彩 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期371-376,共6页

目的:检测转录因子12(TCF12)在SOD1-G93A转基因小鼠不同年龄阶段大脑皮层和纹状体中的表达情况。方法:采用成年SOD1-G93A转基因小鼠和野生型(WT)小鼠,分别在转基因小鼠肌萎缩性侧索硬化症(ALS)发病的早(95 d)、中(108 d)、晚(122 d)期... 目的:检测转录因子12(TCF12)在SOD1-G93A转基因小鼠不同年龄阶段大脑皮层和纹状体中的表达情况。方法:采用成年SOD1-G93A转基因小鼠和野生型(WT)小鼠,分别在转基因小鼠肌萎缩性侧索硬化症(ALS)发病的早(95 d)、中(108 d)、晚(122 d)期取材制备标本。使用real time RT-PCR技术检测TCF12的mRNA表达情况,使用Western Blot技术检测TCF12蛋白表达情况,使用免疫荧光双标记技术检测TCF12在大脑皮层和纹状体的表达分布以及细胞类型分布。结果:在SOD1-G93A转基因小鼠和WT小鼠的大脑皮层和纹状体中均检测到了TCF12分布,TCF12在神经元表达;在ALS发病早、中、晚期SOD1-G93A转基因小鼠大脑皮层中的TCF12 mRNA和蛋白表达较WT小鼠显著升高(P<0.05,P<0.01);在发病中、晚期SOD1-G93A转基因小鼠纹状体中的TCF12 mRNA和蛋白水平表达相较于WT小鼠显著升高(P<0.01)。结论:TCF12在SOD1-G93A转基因小鼠发病中晚期大脑皮层和纹状体中表达升高,提示TCF12分子参与大鼠了ALS发病中、晚期神经元的退变进程。 展开更多

关键词 肌萎缩性侧索硬化症(ALS) 转录因子12(TCF12) 大脑皮层 纹状体 SOD1-G93A转基因小鼠

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Nrf2/HO-1在肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中的表达变化 被引量：1

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作者 杨苓 王孝文 +2 位作者 张皓云 李映慧 刘少波 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期763-768,共6页

目的:检测不同疾病阶段肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠脊髓内Nrf2及HO-1表达变化,以探究抗氧化应激能力变化与ALS发病的关系。方法:应用免疫荧光双重标记和Western Blot技术检测Nrf2及其下游调节蛋白HO-1在ALS发病早期(95 d)、发病晚... 目的:检测不同疾病阶段肌萎缩侧索硬化症(ALS)转基因小鼠脊髓内Nrf2及HO-1表达变化,以探究抗氧化应激能力变化与ALS发病的关系。方法:应用免疫荧光双重标记和Western Blot技术检测Nrf2及其下游调节蛋白HO-1在ALS发病早期(95 d)、发病晚期(122 d)脊髓中的表达差异。结果:与同窝别野生型鼠相比较,免疫荧光双重标记结果显示:95 d、122 d ALS鼠脊髓腰段内Nrf2^+/GFAP^+星形胶质细胞增多;虽与同时间点同窝别野生型鼠比较,ALS转基因鼠脊髓中Nrf2蛋白表达略有升高,但差异无统计学意义。HO-1蛋白表达在ALS早期95 d趋势与Nrf2相同,前角神经元内表达较多;至122 d转基因鼠脊髓内HO-1^+表达多集中于星形胶质细胞内,且脊髓内HO-1蛋白总量较同窝别野生型鼠显著升高(P<0.05)。结论:ALS运动神经元退变可能与星形胶质细胞激活后Nrf2及HO-1参与的氧化应激机制有关。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化症 脊髓 NRF2 HO-1 小鼠

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