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miR-362-3p调控垂体肿瘤转化基因1抑制口腔鳞状细胞癌侵袭及增殖的研究 被引量:1
1
作者 丁啸 陈嘉雯 +4 位作者 曲鹏宇 孙晨雨 李洪利 胡温庭 范欣 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期46-55,共10页
目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PT... 目的探讨垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)在miR-362-3p作用下对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞Cal-27、HN-30侵袭以及增殖能力的影响。方法生物信息学在线数据库查询PTTG1在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达。蛋白质印迹法(Western blot)实验检测PTTG1在Cal-27、HN-30以及HOK细胞系中的表达。划痕愈合实验、Transwell侵袭实验及5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)细胞增殖实验检测PTTG1对Cal-27、HN-30细胞迁移、侵袭、增殖的影响。生物信息学在线数据库预测PTTG1的上游miRNA,双荧光素酶实验检测结合情况,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测该miRNA在组织中的表达。结果ENCORI数据库结果显示PTTG1在OSCC组织中表达上调;Western blot实验显示Cal-27、HN-30细胞中PTTG1表达量较HOK细胞中高。转染Si-PTTG1质粒的Cal-27、HN-30细胞的迁移能力、侵袭能力和细胞增殖能力均较对照组降低(P<0.05)。通过网站预测出PTTG1的上游miRNA为miR-362-3p,双荧光素酶实验检测出PTTG1与miR-362-3p存在结合位点;qRT-PCR检测结果显示miR-362-3p在OSCC肿瘤组织中相对于正常组织表达下调(P<0.05);并且敲低miR-362-3p的表达后能够促进敲低PTTG1后的Cal-27、HN-30侵袭和增殖。结论miR-362-3p可通过靶向PTTG1抑制Cal-27、HN-30细胞侵袭、增殖。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 垂体肿瘤转化基因1 微小RNA 侵袭 增殖
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PTTG1影响胶质瘤细胞侵袭力机制的研究 被引量:7
2
作者 陈为一 李小龙 +5 位作者 齐岳亮 李洪利 尹崇高 刘晓丽 张宝刚 郭文君 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期329-332,共4页
背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用... 背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用蛋白质印迹法(Western blot)检测PTTG1蛋白在不同胶质瘤细胞系中的表达;采用小RNA质粒干扰技术抑制U87细胞中PTTG1蛋白的表达,应用Western blot技术检测转染的效率;通过体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭力的变化;采用Western blot技术检测经过表皮细胞生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后敲除PTTG1的细胞组(siPTTG1/U87)与转染空载的细胞组(Scr/U87)中Akt、ARK5磷酸化的情况。结果:PTTG1蛋白在各恶性胶质瘤细胞系中均高表达;敲除PTTG1后U87细胞的侵袭力明显下降;对Scr/U87细胞进行EGF刺激5 min后,Akt、ARK5的磷酸化情况显著增强,而无论有无EGF的刺激,siPTTG1/U87中Akt、ARK5的磷酸化情况都没有明显改变。结论:在恶性胶质瘤细胞中,PTTG1蛋白呈高表达状态并且与侵袭性显著相关,其对侵袭性的调控可能是通过Akt-ARK5通路实现的。 展开更多
关键词 胶质瘤 侵袭 垂体肿瘤转化基因1 ARK5 SIRNA
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靶向阻断Snail逆转非小细胞肺癌多药耐药的研究 被引量:4
3
作者 张丽娜 刘菲 +6 位作者 孙磊 田慧玲 陈为一 李洪利 张宝刚 尹崇高 郭文君 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期345-348,共4页
目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)与多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的相互关系,为临床肺癌治疗提供实验和理论依据。方法:采用免疫组织化学SP法... 目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)与多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因的相互关系,为临床肺癌治疗提供实验和理论依据。方法:采用免疫组织化学SP法检测52例肺癌组织中Snail、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、肺耐药蛋白(lung resistance p rotein,LRP)的表达并分析它们的相关性。用RNA干扰技术稳定敲除肺腺癌细胞系A549中的Snail,采用Western blot法检测稳定转染后Snail蛋白的表达情况。Snail下降后,Western blot法检测P-gp、LRP蛋白表达情况。结果:Snail、P-gp、LRP在NSCLC组织中的表达率分别是73.1%、53.8%、51.9%,P-gp及LRP的蛋白表达与Snail的表达呈正相关。采用RNA干扰的方法成功敲除肺腺癌细胞系A549中Snail基因;A549细胞中Snail基因被敲除后耐药相关蛋白P-gp和LRP的表达明显降低。结论:在NSCLC中,Snail蛋白的表达与耐药相关基因的表达呈正相关;阻断肺癌细胞系A549细胞中的Snail能有效逆转肺癌的多药耐药特性。 展开更多
关键词 非小细胞肺 转录因子 SNAIL 上皮一间质转化 P-gp LRP
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CCL18通过与Nir1结合促进胶质瘤细胞侵袭的研究 被引量:3
4
作者 陈萍萍 田红艳 +4 位作者 李洪利 史立宏 任甜甜 翟丽敏 张宝刚 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期921-925,共5页
背景与目的:Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法:应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶... 背景与目的:Nir1是CCL18的跨膜受体,CCL18能与之特异性结合而促进乳腺癌细胞的侵袭与转移,但其在胶质瘤细胞中的作用尚不清楚。该文旨探讨Nir1在胶质瘤侵袭中的作用及分子机制。方法:应用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测Nir1在不同胶质瘤细胞系中的表达;利用siRNA技术抑制U251细胞中Nir1的表达;采用Western blot检测转染后Nir1蛋白的表达和转染前后U251细胞中Akt磷酸化的情况;使用体外侵袭实验检测转染后细胞的运动和侵袭能力;采用F-actin聚合实验检测F-actin的聚合能力。结果:Nir1在各胶质瘤细胞中均呈高表达;小RNA干扰技术沉默Nir1基因后,U251细胞中Nir1的蛋白表达量明显下降,侵袭并穿透Matrigel胶的细胞数目明显比对照组少(P=0.00);在CCL18刺激后细胞内的F-actin聚合量比对照组减少;Akt磷酸化试验结果显示,对照组细胞在CCL18的刺激下Akt更易发生磷酸化,实验组细胞无论是否存在CCL18,Akt磷酸化都受到抑制。结论:在胶质瘤细胞中存在Nir1蛋白高表达,通过与细胞膜上CCL18特异性结合来调节胶质瘤细胞的F-actin聚合和Akt的磷酸化进而调控胶质瘤细胞的运动和侵袭能力。 展开更多
关键词 胶质瘤 Nir1 AKT 侵袭 SIRNA
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无花果枝提取物体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究 被引量:4
5
作者 解美娜 李锋杰 《天然产物研究与开发》 CAS CSCD 2010年第2期219-222,共4页
为探讨新鲜无花果枝提取物(FBE)对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响,用不同浓度FBE处理胃癌BGC-823细胞,采用细胞形态学观察,细胞活力测定(MTT法)及免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况来评价FBE对BGC-823细... 为探讨新鲜无花果枝提取物(FBE)对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响,用不同浓度FBE处理胃癌BGC-823细胞,采用细胞形态学观察,细胞活力测定(MTT法)及免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况来评价FBE对BGC-823细胞体外增殖的影响,应用流式细胞术的膜联蛋白V/碘化丙啶技术(Annexin V/PI法)检测FBE诱导BGC-823细胞体外凋亡的情况。形态学观察发现中高剂量(>0.5mg/mL)组处理4h细胞出现明显凋亡,24h检测到中高剂量(>0.5mg/mL)组细胞增殖活力和增殖细胞核抗原表达显著降低(P<0.05),流式细胞仪检测到FBE处理4h所有剂量组细胞平均凋亡率(9.76%,10.87%,14.29%,49.67%,71.37%)均高于对照组(6.1%)(P<0.05或P<0.01),以上作用效果呈现剂量依赖性。以上结果说明无花果枝提取物能够通过诱导胃癌BGC-823细胞凋亡从而抑制其体外的生长与增殖。 展开更多
关键词 无花果枝提取物 胃癌细胞 增殖 凋亡
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脱脂乳发酵体系中混合乳酸菌的HPLC研究 被引量:2
6
作者 张天亮 王霞 饶平凡 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2012年第6期19-21,25,共4页
研究了对脱脂乳发酵体系中Hansen DVS发酵后混合乳酸菌的HPLC分析过程中,不同色谱条件对分离效果的影响。确立了最佳色谱条件:样品上样于Toyopearl TSKgel SuperQ-650c强阴离子交换树脂柱,以浓度为0.02 mol/L哌嗪-HC1缓冲液平衡,洗脱盐... 研究了对脱脂乳发酵体系中Hansen DVS发酵后混合乳酸菌的HPLC分析过程中,不同色谱条件对分离效果的影响。确立了最佳色谱条件:样品上样于Toyopearl TSKgel SuperQ-650c强阴离子交换树脂柱,以浓度为0.02 mol/L哌嗪-HC1缓冲液平衡,洗脱盐浓度为1.0 mol/L的NaC1,洗脱梯度为0~0.75 mol/L的NaCl线性梯度洗脱30 min,再经浓度为0.75~1 mol/L的NaCl线性梯度洗脱10 min以及浓度为1 mol/L的NaC1洗脱10 min,流速定为1 mL/min;并对脱脂乳中不同培养时间的Hansen DVS混合乳酸菌进行了色谱表征。首次对脱脂乳发酵体系中混合乳酸菌的HPLC分析最佳色谱条件的建立,为深入研究发酵过程中乳酸菌混合菌群的动态变化提供了一种快速有效的方法。 展开更多
关键词 发酵 乳酸菌 HPLC 色谱条件
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miR-185-5p影响小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移的研究 被引量:1
7
作者 刘璐 赵燕乔 +4 位作者 王晓娜 王坤 尹崇高 刘清华 李洪利 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1126-1132,共7页
目的 探讨miR-185-5p对小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法 通过前期研究获得乳腺癌中表达显著下调的miR-185-5p, NCBI查询人源与鼠源miR-185-5p基因序列;EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术... 目的 探讨miR-185-5p对小鼠乳腺癌PY8119细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。方法 通过前期研究获得乳腺癌中表达显著下调的miR-185-5p, NCBI查询人源与鼠源miR-185-5p基因序列;EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术检测过表达和敲低miR-185-5p对PY8119细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡能力的影响;利用C57BL/6小鼠建立皮下肿瘤模型和肺转移模型,观察过表达miR-185-5p对体内肿瘤增殖能力以及肺部转移情况的变化。结果 EdU增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕愈合实验、流式细胞术结果分别显示,敲低miR-185-5p使PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力显著增强,抑制细胞凋亡;而过表达miR-185-5p抑制PY8119细胞的增殖、侵袭、迁移能力,促进细胞凋亡;C57BL/6小鼠体内成瘤实验显示,过表达miR-185-5p减缓C57BL/6小鼠体内肿瘤生长速度;肺转移实验显示,过表达miR-185-5p抑制C57BL/6小鼠肺转移能力。结论 miR-185-5p作为抑癌基因抑制小鼠乳腺癌PY8119细胞体内外增殖、侵袭迁移的能力。 展开更多
关键词 乳腺癌 miR-185-5p 增殖 侵袭 皮下肿瘤模型
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全脂乳中2种乳酸菌的HPLC研究
8
作者 张天亮 王霞 饶平凡 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2012年第7期8-11,共4页
研究了可应用于高效液相离子交换色谱分析的嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌的培养方法,同时探讨了全脂乳中培养的乳酸菌HPLC上样菌悬液的制备方法。对全脂乳中培养不同时间的嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌进行色谱表征,并首次发现保加利亚乳... 研究了可应用于高效液相离子交换色谱分析的嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌的培养方法,同时探讨了全脂乳中培养的乳酸菌HPLC上样菌悬液的制备方法。对全脂乳中培养不同时间的嗜热链球菌及保加利亚乳杆菌进行色谱表征,并首次发现保加利亚乳杆菌在全脂乳培养过程中菌体形态变化与色谱表征的一致性。 展开更多
关键词 嗜热链球菌 保加利亚乳杆菌 全脂乳 色谱
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miR-186-5p调控PRKAA2促进肺腺癌细胞铁死亡的机制研究
9
作者 刘璐 管欣 +4 位作者 赵燕乔 王晓娜 尹崇高 刘清华 李洪利 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期813-821,共9页
背景与目的肺腺癌是最常见的非小细胞肺癌组织学类型,miRNAs作为基因表达的调控分子调控细胞增殖、凋亡和分化,从而影响细胞内稳态。本研究通过实验验证miR-186-5p通过调控其下游靶蛋白PRKAA2影响铁死亡途径从而抑制肺腺癌细胞增殖、迁... 背景与目的肺腺癌是最常见的非小细胞肺癌组织学类型,miRNAs作为基因表达的调控分子调控细胞增殖、凋亡和分化,从而影响细胞内稳态。本研究通过实验验证miR-186-5p通过调控其下游靶蛋白PRKAA2影响铁死亡途径从而抑制肺腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。方法前期研究获得肺癌中表达显著下调的miRNA,即miR-186-5p;生物信息学方法预测其下游铁死亡相关靶蛋白并查询其在肺腺癌中的表达水平及对患者生存预后的影响;双荧光素酶验证两者结合位点;实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)和Western blot检测过表达miR-186-5p后PRKAA2的基因和蛋白表达情况;EdU、Transwell、划痕实验验证miR-186-5p在A549、H1299细胞中的增殖、侵袭迁移能力的影响以及miR-186-5p对Fer-1抑制铁死亡敏感性的作用机制;活性氧(reactive oxygen species,ROS)实验检测miR-186-5p对肺腺癌细胞ROS含量的影响;丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)实验检测miR-186-5p、PRKAA2对肺腺癌细胞铁死亡指标变化的影响;脂质ROS(lipid ROS,L-ROS)实验检测miR-186-5p、PRKAA2对肺腺癌细胞L-ROS含量的影响。结果PRKAA2在肺腺癌中表达上调;过表达miR-186-5p使PRKAA2的基因和蛋白表达量下降;过表达miR-186-5p通过调控PRA2促进铁死亡抑制肺腺癌细胞增殖、侵袭迁移能力;miR-186-5p能够增加A549细胞ROS含量;过表达miR-186-5p和敲低PRKAA2上调肺腺癌细胞MDA含量,下调还原型GSH含量;miR-186-5p通过靶向PRKAA2增加肺腺癌细胞L-ROS含量,促进肺腺癌细胞铁死亡敏感性。结论miR-186-5p通过靶向调控PRA2促进肺腺癌A549、H1299细胞铁死亡,从而抑制肺腺癌增殖、侵袭和迁移能力。 展开更多
关键词 肺肿瘤 miR-186-5p PRKAA2 增殖 侵袭 迁移 铁死亡
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肺癌患者恶病质的药物治疗与营养支持研究进展 被引量:11
10
作者 王杰敏 贾维慧 +5 位作者 厉丹阳 宋艳梅 孙宁鑫 杨科 李洪利 尹崇高 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期420-424,共5页
恶病质是肺癌患者的一种常见并发症,它会加重化疗毒副作用、阻碍治疗计划、削弱化疗反应性、降低生活质量,增加并发症及死亡率,严重危害肺癌患者的生理、心理健康。肿瘤恶病质的发病原因与发病机制都极为复杂,使其治疗具有艰巨性与复杂... 恶病质是肺癌患者的一种常见并发症,它会加重化疗毒副作用、阻碍治疗计划、削弱化疗反应性、降低生活质量,增加并发症及死亡率,严重危害肺癌患者的生理、心理健康。肿瘤恶病质的发病原因与发病机制都极为复杂,使其治疗具有艰巨性与复杂性。控制肺癌患者的恶病质需要采取抗肿瘤治疗、抑制炎症反应、营养支持、体育锻炼、缓解症状等多种手段,发挥多模式治疗的协同作用对抗肿瘤恶病质的多种机制。迄今为止,学科内已就任何单一疗法都不能控制恶病质的发生发展达成了一致共识。有些疗法取得了一定的研究进展,但需要在充分评估肺癌患者个体特征后结合多模式治疗实施。本文重点综述了肿瘤恶病质的药物治疗与营养支持等干预方法在肺癌患者人群中的应用,并对肺癌患者恶病质控制的研究方向进行展望。 展开更多
关键词 肺肿瘤 恶病质 药物治疗 营养支持 多模式治疗
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基于生物信息学分析研究miR-182-5p通过靶向调控EP300促进乳腺癌细胞的侵袭和转移 被引量:8
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作者 陈智凯 李春涛 +5 位作者 王晓栋 王玉 王雪婷 张琳 李洪利 尹崇高 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期421-428,共8页
近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3... 近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3个数据库中,在乳腺癌组织中存在26个相同的microRNA,其中8个上调,而我们实验验证发现hsa-miR-182在8例病理组织中的表达上调差异最显著(P=0.001),选定目的基因hsa-miR-182;qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达,结果显示,与MCF-10A相比,miR-182-5p在MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-453、MCF-7中表达上调(P<0.05);转染miR-182-5p干扰质粒,qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达情况。结果显示,miR-182-5p表达显著降低(P=0.003),提示转染成功;Transwell侵袭结果显示,MDAMB-231细胞敲低miR-182-5p,与对照组相比,体外侵袭能力明显降低(P=0.002);Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒时,MDA-MB-231中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况,结果显示,与对照组相比,敲低miR-182-5p使细胞中上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达上调,神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调。为研究探讨miR-182-5p的靶蛋白,采用在线预测软件预测可能与miR-182-5p结合的靶蛋白,cytoscape构建蛋白质互作网络图并筛选出hub基因;双荧光素酶结果证实,miR-182-5p可与EP300靶向结合(P=0.001);采用qRT-PCR、Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒后EP300在mRNA及蛋白质水平的表达,结果显示,与对照组相比,在敲低miR-182-5p组中EP300在mRNA及蛋白质的表达上调(P=0.001)。综上所述,miR-182-5p可靶向调节EP300,促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。 展开更多
关键词 乳腺癌 miR-182-5p EP300 侵袭 转移
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岩藻黄素抗D-gal诱导SH-SY5Y细胞衰老作用及机制研究 被引量:1
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作者 朱敏敏 李云鹏 +4 位作者 张淼 李晓双 成敏 周珍琼 刘顺梅 《广西科学》 CAS 北大核心 2021年第3期310-320,共11页
衰老相关的神经退行性疾病发病率不断增高,严重影响老年人生活质量,为探讨岩藻黄素(Fucoxanthin,FUCO)对神经细胞的抗衰老作用及其机制,采用D-gal诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)衰老,然后在细胞培养基中添加FUCO对细胞进行干预,... 衰老相关的神经退行性疾病发病率不断增高,严重影响老年人生活质量,为探讨岩藻黄素(Fucoxanthin,FUCO)对神经细胞的抗衰老作用及其机制,采用D-gal诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)衰老,然后在细胞培养基中添加FUCO对细胞进行干预,检测其细胞活力、SA-β-半乳糖苷酶活性及细胞内丙二醛(MDA)含量,细胞内自噬体形成及自噬(Autophagy)相关蛋白的表达。研究结果显示,5,10μmol/L FUCO可明显抑制D-gal诱导的细胞衰老,显著提高SH-SY5Y细胞活力(P<0.05),降低SH-SY5Y细胞内SA-β-半乳糖苷酶的活性(P<0.05)和MDA含量(P<0.05),但20μmol/L FUCO的抑制作用不明显(P>0.05)。光学显微镜观察结果显示,5,10,20μmol/L FUCO组细胞内自噬体数量明显比模型组增多;Western blot检测结果显示,与模型组比较,10,20μmol/L FUCO组自噬相关蛋白ATG5表达增多、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ增大、p-mTOR/mTOR减小(P<0.05)。表明FUCO具有抗D-gal诱导的SH-SY5Y细胞衰老的作用,其作用机制可能与适度调节自噬途径有关。 展开更多
关键词 岩藻黄素 SH-SY5Y细胞 抗衰老 自噬 D-GAL
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染色质解旋酶DNA结合蛋白对舌鳞状细胞癌CAL27细胞侵袭和转移影响的研究
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作者 胡凯莉 范欣 +3 位作者 胡温庭 李洪利 唐清华 孙学辉 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期81-87,共7页
目的探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白(CHD1L)影响舌鳞状细胞癌侵袭和转移的分子机制,为临床抑制舌鳞状细胞癌的侵袭和转移提供新的靶点。方法运用Ualcan网站分析CHD1L在正常上皮组织和原发性头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,分析有无淋巴... 目的探讨染色质解旋酶DNA结合蛋白(CHD1L)影响舌鳞状细胞癌侵袭和转移的分子机制,为临床抑制舌鳞状细胞癌的侵袭和转移提供新的靶点。方法运用Ualcan网站分析CHD1L在正常上皮组织和原发性头颈鳞状细胞癌组织中的表达情况,分析有无淋巴结转移对头颈鳞状细胞癌组织中CHD1L表达情况的影响;通过GEPIA网站分析CHD1L在头颈鳞状细胞癌中的表达与生存率的关系;蛋白质印迹法检测人舌鳞状细胞癌细胞CAL27和人正常皮肤细胞HaCaT中CHD1L蛋白的表达水平;用RNA干扰质粒敲低人舌鳞状细胞癌细胞CAL27中的CHD1L后,将细胞分别命名为SiCHD1L/CAL27及Scr/CAL27;蛋白质印迹法检测CHD1L在每组细胞中的表达情况;EdU增殖实验检测每组细胞增殖能力的改变;伤口愈合实验检测每组细胞迁移能力的改变;蛋白质印迹法检测上皮间质转化(EMT)标志物上皮钙黏着蛋白和波形蛋白的表达水平。结果Ualcan数据库显示:CHD1L在原发头颈鳞状细胞癌组织中表达高于正常上皮组织中的表达,在出现淋巴结转移的头颈鳞状细胞癌组织中表达更高。GEPIA网站分析显示:CHD1L表达量高的头颈鳞状细胞癌患者总生存率较表达量低的患者明显降低。蛋白质印迹结果显示:人舌鳞状细胞癌细胞CAL27中CHD1L表达高于人正常皮肤细胞HaCaT中CHD1L的表达,敲低CHD1L以后CAL27细胞中CHD1L的表达量明显低于Scr/CAL27组细胞。EdU增殖实验结果显示:SiCHD1L/CAL27组细胞增殖能力明显降低。伤口愈合实验显示:SiCHD1L/CAL27组迁移能力降低,SiCHD1L/CAL27组细胞上皮钙黏着蛋白表达量增加而波形蛋白表达量降低。结论CHD1L促进舌鳞状细胞癌细胞的EMT,促进舌鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移侵袭能力。 展开更多
关键词 舌鳞状细胞癌 染色质解旋酶DNA结合蛋白 上皮间质转化 增殖 侵袭
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miR-379-5p抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖、侵袭和迁移
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作者 宋艳梅 孙宁鑫 +3 位作者 刘晨 宋宜芬 李洪利 尹崇高 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2024年第3期85-92,共8页
目的 通过研究miR-379-5p对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、侵袭和迁移的影响,为临床抑制乳腺癌增殖、侵袭和转移提供新的治疗靶点。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qRT-P... 目的 通过研究miR-379-5p对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖、侵袭和迁移的影响,为临床抑制乳腺癌增殖、侵袭和转移提供新的治疗靶点。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测miR-379-5p在质粒转染后4T1细胞中的表达情况;采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine, EdU)细胞增殖实验与Transwell实验检测各组4T1细胞增殖能力与侵袭能力;然后通过伤口愈合实验来检测过表达以及敲低miR-379-5p对4T1细胞迁移能力的影响;利用BABL/c小鼠建立乳腺癌小鼠移植瘤模型,观察miR-379-5p过表达后对体内肿瘤生长状况,肺转移灶数量及大小的影响。结果 EdU结果显示,与对照组相比,敲低miR-379-5p能增强乳腺癌细胞的增殖能力,过表达miR-379-5p能够抑制乳腺癌细胞的增殖能力(P<0.05);Transwell与伤口愈合实验结果显示,敲低miR-379-5p能够增强乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力,过表达miR-379-5p显著抑制细胞的侵袭和迁移能力(P<0.01)。BABL/c小鼠体内成瘤实验显示,过表达miR-379-5p可显著减缓肿瘤的生长速度(P<0.05),对肺转移有抑制作用(P<0.01)。结论 miR-379-5p在乳腺癌中起到抑癌基因的作用,抑制小鼠乳腺癌4T1细胞的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 乳腺癌 miR-379-5p 增殖 侵袭 迁移
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Gab2通过PI3K/Akt/ARK5/MMP途径影响乳腺癌的侵袭和转移 被引量:16
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作者 田红艳 陈萍萍 +5 位作者 李笑 李洪利 任甜甜 张宝刚 尹崇高 刘雨清 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1014-1018,共5页
目的探讨Gab2在乳腺浸润性导管癌侵袭和转移中的分子机制,为临床预防乳腺癌的侵袭和转移提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁相对正常组织(>5 cm)中Gab2蛋白表达情况,并分析其表达与乳腺浸润... 目的探讨Gab2在乳腺浸润性导管癌侵袭和转移中的分子机制,为临床预防乳腺癌的侵袭和转移提供理论依据。方法采用免疫组织化学SP法检测80例乳腺浸润性导管癌组织及癌旁相对正常组织(>5 cm)中Gab2蛋白表达情况,并分析其表达与乳腺浸润性导管癌临床病理参数的相关性,分析浸润性导管癌中Gab2、MMP-2及MMP-9蛋白表达的相关性。采用Western blot检测乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中Gab2蛋白的表达情况。采用RNAi技术将小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231,应用Western blot检测转染成功后各组细胞中MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况,应用Transwell体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭性,用EGF刺激细胞后Western blot检测Akt及ARK5的磷酸化情况。结果浸润性导管癌组织中Gab2蛋白的阳性表达率明显高于癌旁正常组织(P<0.01),浸润性导管癌中Gab2蛋白的表达与ER、组织学分期及淋巴结转移密切相关(P<0.05),且其表达与MMP-2及MMP-9蛋白的表达呈正相关;MDA-MB-231细胞系中Gab2蛋白表达量高于MCF-7细胞系中表达量;转染干扰质粒24 h后,与转染空载细胞组相比,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功。同时,SiG ab2/MDA-MB-231细胞组穿过Transwell小室人工基膜数量明显减少(P<0.05),并伴有MMP-2、MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。用EGF刺激各组细胞,结果显示:在SiG ab2/MDAMB-231细胞组Akt及ARK5的磷酸化明显受到抑制。结论Gab2通过PI3K/Akt/ARK5信号通路影响MMP-2、MMP-9的表达从而促进乳腺癌的侵袭与转移。 展开更多
关键词 乳腺癌 Gab2 AKT ARK5 MMP 侵袭 转移
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miR-186-5p通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化 被引量:19
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作者 张国新 徐新伟 +4 位作者 孟斌 朱优秀 曾国栋 尹崇高 李洪利 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期380-385,共6页
先前研究表明,miR-186-5p在人类许多恶性肿瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用并不明确。本研究旨在证明,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转... 先前研究表明,miR-186-5p在人类许多恶性肿瘤中扮演抑癌基因的作用,但其在肺腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的作用并不明确。本研究旨在证明,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制肺腺癌细胞的上皮-间质转化。我们首先分析了miR-186-5p在人肺癌细胞中的表达。荧光定量PCR(QRT-PCR)结果显示,与人正常肺上皮细胞BEAS-2B相比,肺腺癌细胞SPC-A1、A549中的miR-186-5p表达量明显降低。为研究miR-186-5p在肺腺癌细胞中的功能,利用GV369-miR-186-5p表达载体,实现了在A549细胞中的过表达。基因转染结合Transwell侵袭结果显示,与对照质粒转染的A549细胞相比,过表达miR-186-5p的A549细胞的体外侵袭能力明显下降。Western印迹检测细胞中EMT相关标志物揭示,GV369-miR-186-5p转染的A549细胞中的上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达明显上调,而神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达明显下调。同时,GV369-miR-186-5p转染引起其靶基因——垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor-transforming gene 1,PTTG1)编码蛋白在A549细胞中明显降低。重要的是,过表达miR-186-5p与敲减PTTG1均可导致上皮-钙黏着蛋白表达上调,而神经-钙黏着蛋白和波形蛋白下调;而miR-186-5p和PTTG1表达载体共转染后,3种EMT相关标志物在A549的表达与对照细胞的表达无明显差异,提示过表达PTTG1可抵消miR-186-5p对EMT相关标志物表达的影响。综上所述,miR-186-5p可通过靶向调控PTTG1抑制EMT的发生,进而抑制肺腺癌细胞的侵袭转移。 展开更多
关键词 肺腺癌 miR-186-5p 侵袭 转移 上皮-间质转化
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香椿子多酚对6-OHDA所致帕金森病大鼠模型的抗炎和神经保护作用 被引量:11
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作者 李晓健 庄文欣 +4 位作者 吕娥 费学超 刘飞 刘金城 付文玉 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期653-659,共7页
目的:观察香椿子多酚(polyphenols from toona sinensis seeds,PTSS)抑制神经炎症反应,对黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法:脑立体定向注射6-羟多巴胺(6-OHDA)至右侧纹状体,制备帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型。将成模... 目的:观察香椿子多酚(polyphenols from toona sinensis seeds,PTSS)抑制神经炎症反应,对黑质多巴胺能神经元的保护作用。方法:脑立体定向注射6-羟多巴胺(6-OHDA)至右侧纹状体,制备帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组和PTSS组,另10只正常大鼠设为对照组,PTSS组每日PTSS灌胃2 ml,另外两组大鼠等体积量生理盐水灌胃,1/d次,连续30 d。免疫组织化学法观测大鼠黑质多巴胺能(酪氨酸羟化酶TH阳性)神经元、星形胶质细胞(GFAP阳性)、小胶质细胞(CD11b阳性)形态和数量变化。RT-PCR和Western Blot分别检测黑质肿瘤坏死因子(TNF-α)和环氧化酶-2(COX-2)在mRNA和蛋白水平上的变化。结果:免疫组织化学结果显示,与对照组比较,模型组和PTSS组大鼠黑质TH阳性细胞数量显著下降、黑质CD11b和GFAP免疫反应阳性细胞数量明显增多(P<0.05)。中脑黑质TNF-α和COX-2蛋白含量显著升高;RT-PCR检测TNF-αmRNA和COX-2 mRNA表达量的结果与Western Blot一致。与模型组比较,PTSS组大鼠旋转圈数明显减少(P<0.05)、黑质TH阳性细胞数量显著增多,CD11b、GFAP阳性细胞数量明显下降,TNF-α和COX-2阳性表达光密度值降低;黑质中TNF-α和COX-2蛋白含量及其mRNA表达量显著下降。结论:PTSS能够抑制胶质细胞活化,减轻神经炎症,有效保护黑质DA能神经元。 展开更多
关键词 香椿子多酚 神经炎症 神经保护 帕金森病 大鼠
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乳腺癌中PKCζ、MMP-2、MMP-9的表达及相关性 被引量:11
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作者 杨硕 李洪利 +5 位作者 李文通 杨璐 倪明 翟丽敏 尹崇高 张宝刚 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期958-962,共5页
目的探讨乳腺癌中蛋白激酶Cζ(protein kinase Cζ,PKCζ)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及三者与其侵袭、转移的关系。方法应用免疫组化PV 9000两... 目的探讨乳腺癌中蛋白激酶Cζ(protein kinase Cζ,PKCζ)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的表达及三者与其侵袭、转移的关系。方法应用免疫组化PV 9000两步法检测PKCζ、MMP-2、MMP-9在100例乳腺癌组织及对应癌旁正常乳腺组织中的表达,并分析三者表达的相关性。应用RNAi技术将合成的PKCζ-siRNA转染入乳腺癌细胞株MDA-MB-231中,即siPKCζ/MDA-MB-231细胞组,以转染空载质粒的scr/MDA-MB-231的细胞组作为对照组,应用Transwell侵袭实验检测细胞的体外侵袭能力。利用Western blot法检测转染细胞中PKCζ蛋白的表达。酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测培养基中MMP-2、MMP-9的含量。结果PKCζ、MMP-2、MMP-9在乳腺浸润性导管癌中的阳性率分别为62.5%、37.5%、32.5%,明显高于乳腺导管内癌和癌旁正常乳腺组织(P均<0.05)。PKCζ蛋白表达与淋巴结转移、远处转移有关(P均<0.01),与患者年龄、肿瘤大小、临床分期、ER、PR等无关(P均>0.05);转染siRNA的siPKCζ/MDA-MB-231细胞组与scr/MDA-MB-231组相比,体外侵袭能力以及PKCζ蛋白的表达水平明显下降(P均<0.05),培养基中MMP-2、MMP-9蛋白表达量亦明显下降(P均<0.05)。结论 PKCζ通过影响乳腺癌细胞中MMP-2、MMP-9的分泌来促进乳腺癌的侵袭、转移。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 PKCζ MMP-2 MMP-9 侵袭 转移
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NUAK1能促进乳腺癌上皮-间质转化的发生引起侵袭转移 被引量:7
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作者 刘菲 孙磊 +5 位作者 张丽娜 田慧玲 李洪利 李文通 张宝刚 尹崇高 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1680-1684,共5页
目的探讨NUAK1(NUAK family SNF1-like kinase 1)与上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)及乳腺癌侵袭转移之间的关系。方法应用免疫组织化学染色法检测100例乳腺癌组织及其癌旁正常组织(>5 cm)中NUAK1、EMT相关蛋... 目的探讨NUAK1(NUAK family SNF1-like kinase 1)与上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)及乳腺癌侵袭转移之间的关系。方法应用免疫组织化学染色法检测100例乳腺癌组织及其癌旁正常组织(>5 cm)中NUAK1、EMT相关蛋白上皮-钙黏素(epithelial-cadherin,E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达,并分析其相关性。应用RNAi技术将合成的小RNA干扰质粒瞬时转染乳腺癌细胞系MDA-MB-231后,进行Western blot检测转染成功后,应用Transwell侵袭实验检测细胞体外侵袭能力,再检测转染细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白的表达情况。结果浸润性导管癌组织中NUAK1蛋白的表达率明显高于导管内癌和癌旁正常组织(P<0.01);浸润性导管癌中NUAK1蛋白的表达与分化程度、淋巴结转移、远处转移、E-cadherin、Vimentin的表达有关(P<0.05),与患者的年龄、肿瘤的大小、ER、PR及c-erbB-2的表达无关(P>0.05)。转染72 h后,与Scr/MDA-MB-231细胞相比,siNUAK1/MDA-MB-231细胞中NUAK1蛋白表达水平明显降低的同时,细胞的体外侵袭能力明显降低(P<0.05)。并且伴有Vimentin蛋白表达水平的降低和E-cadherin蛋白表达水平的升高(P<0.05)。结论 NUAK1能促进乳腺癌EMT的发生,从而促进乳腺癌的侵袭转移。 展开更多
关键词 乳腺癌 NUAK1 上皮间质转化 E-CADHERIN VIMENTIN 侵袭
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吞噬细胞运动蛋白1在IL-8诱导的乳腺癌细胞的侵袭和转移中发挥重要作用 被引量:7
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作者 张长杰 徐新伟 +2 位作者 李洪利 刘雨清 尹崇高 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1452-1457,共6页
目的探讨吞噬细胞运动蛋白1(engulfment and cell motility 1,ELMO1)在IL-8诱导的乳腺癌细胞侵袭和转移过程中的作用。方法采用趋化运动实验检测不同浓度IL-8刺激下乳腺癌细胞的趋化运动能力;采用Western blot检测乳腺癌细胞中ELMO1的... 目的探讨吞噬细胞运动蛋白1(engulfment and cell motility 1,ELMO1)在IL-8诱导的乳腺癌细胞侵袭和转移过程中的作用。方法采用趋化运动实验检测不同浓度IL-8刺激下乳腺癌细胞的趋化运动能力;采用Western blot检测乳腺癌细胞中ELMO1的表达情况;利用小RNA干扰技术,瞬时转染乳腺癌细胞MDA-MB-231,用过表达质粒上调乳腺癌细胞MCF-7中ELMO1的表达;应用趋化运动实验和Transwell侵袭实验检测各组转染细胞的趋化和侵袭能力。结果趋化运动实验结果显示,在IL-8刺激下,乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的运动能力明显增强,具有剂量依赖性;Western blot结果显示ELMO1在si ELMO1/MDA-MB-231细胞中的表达明显降低,而在MCF-7/ELMO1细胞中的表达明显增高;趋化运动实验结果显示在IL-8刺激下,Si ELMO1/MDA-MB-231细胞组的趋化运动能力明显降低,MCF-7/ELMO1细胞组的趋化运动能力明显增强;Transwell侵袭实验结果显示在IL-8刺激下,敲除ELMO1明显降低MDA-MB-231细胞的侵袭能力,过表达ELMO1明显增强MCF-7细胞的侵袭能力。结论 IL-8能促进MDA-MB-231和MCF-7细胞的趋化运动和侵袭能力,而ELMO1在IL-8诱导的乳腺癌细胞趋化和侵袭作用中发挥重要作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 IL-8 ELMO1 侵袭 转移 趋化运动
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