PadR对须糖多孢菌丁烯基多杀菌素生物合成及转运相关蛋白表达的影响 被引量：4

1

作者 何思颖 柏丹 +4 位作者 夏伦 万千千 罗粤雯 邱玉玲 夏立秋 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2019年第5期44-51,共8页

为研究padR基因表达对须糖多孢菌(Saccharopolyspora pogona)次级代谢产物生物合成及相关蛋白表达的影响,在对须糖多孢菌基因组测序结果的基础上,从基因组中克隆了padR基因上、下游同源臂,利用融合PCR将硫链丝菌素抗性基因插入上、下游... 为研究padR基因表达对须糖多孢菌(Saccharopolyspora pogona)次级代谢产物生物合成及相关蛋白表达的影响,在对须糖多孢菌基因组测序结果的基础上,从基因组中克隆了padR基因上、下游同源臂,利用融合PCR将硫链丝菌素抗性基因插入上、下游同源臂之间,将融合片段与穿梭载体pOJ260连接,构建敲除载体pOJ260-UHA-tsr-DHA。通过接合转移将其导入野生型须糖多孢菌中,通过同源臂双交换获得须糖多孢菌敲除菌株S.pogona-ΔpadR。经HPLC检测分析,敲除菌株次级代谢产物丁烯基多杀菌素产量与原始菌株相比提高了27.3%,且有7个转运相关蛋白出现表达上调。这一研究表明padR基因的敲除能够有效促进须糖多孢菌丁烯基多杀菌素的生物合成。该研究对优化须糖多孢菌丁烯基多杀菌素的生物合成途径具有一定的指导意义,为研究padR基因表达在链霉菌次级代谢产物合成中的作用打下了基础。 展开更多

关键词 须糖多孢菌 PadR 转录调控因子 转运蛋白 丁烯基多杀菌素

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藠头提取物对氟尿嘧啶的增效减毒作用的研究 被引量：6

2

作者 孙运军 刘卓灵 +3 位作者 丁学知 钱荣华 莫湘涛 夏立秋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期462-465,共4页

研究了藠头提取物对人宫颈癌Hela细胞和人胃癌BGC-823细胞体外生长的影响、该提取物与5-FU对抑制这两种癌细胞中的协同作用,探讨了该提取物对5-FU所致小鼠免疫功能抑制的保护作用,并测定了药物对两种癌细胞增殖抑制率的影响和检测药物... 研究了藠头提取物对人宫颈癌Hela细胞和人胃癌BGC-823细胞体外生长的影响、该提取物与5-FU对抑制这两种癌细胞中的协同作用,探讨了该提取物对5-FU所致小鼠免疫功能抑制的保护作用,并测定了药物对两种癌细胞增殖抑制率的影响和检测药物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能及淋巴细胞活性的影响。发现药物作用48h后,联合用药对胃癌细胞的抑制率高于单药组,并表现明显的协同作用;联合用药且能明显拮抗5-FU所致体重降低、腹腔巨噬细胞功能降低及淋巴细胞活性降低等毒副作用。表明藠头提取物与5-FU联合使用能有明显提高5-FU抗肿瘤及降低其毒副作用。 展开更多

关键词 藠头提取物 氟尿嘧啶 癌细胞 增效作用 免疫

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苏云金芽胞杆菌晶体毒素的多样性 被引量：6

3

作者 赵新民 刘淑云 +4 位作者 周攀登 徐玲 夏莉 夏立秋 成飞雪 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-7,共7页

苏云金芽胞杆菌是生物防治中应用最为广泛的一种杀虫剂,它对多种昆虫和其他一些无脊椎动物具有特异的毒杀活性。苏云金芽胞杆菌的杀虫活性主要来自于菌体在形成芽胞期间生成的伴胞晶体毒素,这些晶体毒素在结构和生物学功能方面表现高度... 苏云金芽胞杆菌是生物防治中应用最为广泛的一种杀虫剂,它对多种昆虫和其他一些无脊椎动物具有特异的毒杀活性。苏云金芽胞杆菌的杀虫活性主要来自于菌体在形成芽胞期间生成的伴胞晶体毒素,这些晶体毒素在结构和生物学功能方面表现高度的多样性。本文介绍了苏云金芽胞杆菌晶体毒素的分类、命名方法,深入讨论了晶体毒素的氨基酸序列、三维结构、靶标生物和杀虫机理的多样性。评价了各种分类方法的特点,并展望了晶体毒素作用机制研究和未来晶体毒素新基因的发掘。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 毒素 多样性

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蛋白改造提高苏云金杆菌杀虫活力的研究进展 被引量：4

4

作者 王发祥 刘永乐 +1 位作者 丁学知 夏立秋 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期8-12,共5页

苏云金杆菌(Bt)已被广泛应用于农林害虫防治,但传统制剂仍然存在很大局限性,利用蛋白质工程对其改造能有效的克服这些缺点。主要概述了近年来利用结构域转换和定点突变技术改造BtCry蛋白并增强其杀虫活性的研究进展。

关键词 苏云金杆菌 晶体蛋白 结构域转换 定点突变 杀虫活力

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W544F定点突变提高苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的稳定性 被引量：2

5

作者 王发祥 夏立秋 +5 位作者 丁学知 赵新民 单世平 莫湘涛 张友明 喻子牛 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1999-2002,共4页

W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个'螺旋桨状'的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的... W544是Cry1Ac蛋白上独特于其它Cry类蛋白的一个氨基酸,它与F578和F604一起组成一个'螺旋桨状'的疏水簇,通过疏水相互作用维持蛋白的三维结构稳定.本研究通过定点突变将W544保守地替换为苯丙氨酸,SDS-PAGE分析结果表明其纯化的原毒素对紫外照射、胰蛋白酶处理和室温存贮的稳定性相对于野生Cry1Ac都有一定程度的提高;经原子力显微镜观察,发现W544F产生的晶体两个顶点间的垂直距离比野生型Cry1Ac约长0.6μm,且晶体表面不及野生型光滑;此外,W544F与野生Cry1Ac的杀虫活性相似,但经过紫外光照射9 h后,其保留的杀虫活性比野生型高4倍以上.W544F突变较好地解决了Cry1Ac毒素蛋白田间应用不持久的问题,具有重要的应用价值. 展开更多

关键词 Cry1Ac蛋白 定点突变 色氨酸 苯丙氨酸 稳定性

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新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究 被引量：1

6

作者 夏立秋 曾智 +7 位作者 贺小红 付祖姣 单世平 丁学知 孙运军 李文萍 王海龙 罗玉双 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2007年第4期90-93,共4页

将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后... 将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定,GST-HWTX-11融合蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exiguaHubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3d时的LC50分别为86.6μg/mL、119.4μg/mL;其与Cry1Ac对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用. 展开更多

关键词 HWTX-11 融合表达 WESTERN BLOT 生物活性测定

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一种纯化苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的方法 被引量：1

7

作者 王发祥 刘永乐 +1 位作者 丁学知 夏立秋 《湖南农业科学》 2011年第8期117-119,共3页

Cry蛋白的纯化技术在很大程度上制约了其结构与功能的研究。为此,提出了一种以等电点沉淀方法纯化苏云金杆菌Cry1Ac的原毒素,用分子筛层析纯化其活性毒素的方法。结果表明:Cry1Ac的原毒素在pH值5.05条件下沉淀纯化效果好;以纯化的原毒... Cry蛋白的纯化技术在很大程度上制约了其结构与功能的研究。为此,提出了一种以等电点沉淀方法纯化苏云金杆菌Cry1Ac的原毒素,用分子筛层析纯化其活性毒素的方法。结果表明:Cry1Ac的原毒素在pH值5.05条件下沉淀纯化效果好;以纯化的原毒素激活进行分子筛层析,收集其最大峰便可获得较高浓度的活性毒素;该方法不仅纯化效果好,而且省去层析后的浓缩步骤,是Cry蛋白的纯化方法研究中的一次革新,对推动Cry蛋白的结构和功能研究具有重要的意义。 展开更多

关键词 苏云金杆菌 CRY1AC 纯化 等电点沉淀 分子筛层析

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苏云金芽孢杆菌伴孢晶体中20-kb DNAs上染色体基因的鉴定

8

作者 孙运军 袁志明 +5 位作者 夏立秋 魏薇 付祖姣 黄璠 丁学知 胡胜标 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2007年第4期114-118,共5页

已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中... 已有的研究表明苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株菱形晶体中含有与原毒素紧密结合的20-kb DNAs,利用PCR-RFLP分析发现在这些20-kb DNAs上含有cry1Aa、cry1Ac、cry2Aa和cry2Ab基因.本研究利用特异引物从4.0718菌株中20-kb DNAs上分别扩增出带有自身调控序列的cry1Ac和cry2Aa基因,并将其分别电转至Bt无晶体菌株Cry-B中获得重组菌株Cry-B(pHC42)和Cry-B(pHC39).SDS-PAGE和透射电镜分析表明这两种重组菌株能够分别产生由130-kDa的Cry1Ac原毒素形成的菱形晶体以及由65-kDa的Cry2Aa原毒素形成的方形晶体.毒力生测的结果显示,这两种菌株的表达产物对棉铃虫(Helicoverpa armigera)幼虫具有预期的杀虫效果.重组菌株分别形成的两种晶体经不同的缓冲液溶解后能释放出与20-kb DNAs紧密结合的原毒素,同时在20-kb DNAs上均可检测到源于Bt染色体的spo0A和nprA基因片段. 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 伴孢晶体 20-kb DNAs 染色体

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通过两种糖多孢菌属菌株原生质体融合提高多杀菌素产量研究 被引量：7

9

作者 易卓 夏立秋 +5 位作者 丁学知 胡胜标 罗玉双 王海龙 唐滢 黄鑫 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2019年第10期1148-1155,共8页

多杀菌素是由放线菌刺糖多孢菌产生的一种新型绿色环保杀虫剂,兼具化学农药的高效性与生物农药的安全性。本研究通过将红色糖多孢菌和刺糖多孢菌两种菌株做原生质体融合探究来得到高产多杀菌素的菌株。首先构建了不产红霉素的红色糖多... 多杀菌素是由放线菌刺糖多孢菌产生的一种新型绿色环保杀虫剂,兼具化学农药的高效性与生物农药的安全性。本研究通过将红色糖多孢菌和刺糖多孢菌两种菌株做原生质体融合探究来得到高产多杀菌素的菌株。首先构建了不产红霉素的红色糖多孢菌工程菌株,然后将其与刺糖多孢菌做原生质体融合,经加有抗生素平板培养基及发酵液HPLC分析筛选,得到了产多杀菌素的4株融合菌株。基于4株融合菌株多杀菌素产量都不及起始菌株高,接着采用不加抗生素直接筛选的方法,成功筛选到若干高产多杀菌素的融合菌株,其中菌株B-2多杀菌素产量提高最为明显,较原始菌株增加了331%,并用质谱分析做了进一步的验证。融合菌株B-2后续传代培养多杀菌素产量稳定,表明遗传稳定性较好。本文对红色糖多孢菌和刺糖多孢菌原生质体融合进行了探究并且成功提高了多杀菌素的产量,这为具有优良发酵特性的红色糖多孢菌和刺糖多孢菌融合菌株的构建提供了重要基础。 展开更多

关键词 多杀菌素 生物农药 红霉素阻断 原生质体融合 融合菌株 质谱分析

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高效液相色谱法测定刺糖多胞菌发酵液多杀菌素含量 被引量：6

10

作者 易勇 夏立秋 +3 位作者 丁学知 杨尉 王海龙 罗玉双 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2008年第4期81-85,共5页

为了建立刺糖多胞菌（Saccharopolyspora spinosa）发酵液中多杀菌素不同组分的分离与定量分析的高效液相色谱检测方法.以AQ12S05-1546WT（150×4.6 mmL.D.S-5μm,12 nm）为分析柱,以甲醇-乙腈-2%醋酸铵溶液（45∶45∶10,v/v/v）为... 为了建立刺糖多胞菌（Saccharopolyspora spinosa）发酵液中多杀菌素不同组分的分离与定量分析的高效液相色谱检测方法.以AQ12S05-1546WT（150×4.6 mmL.D.S-5μm,12 nm）为分析柱,以甲醇-乙腈-2%醋酸铵溶液（45∶45∶10,v/v/v）为流动相,流速1.5 mL/min,检测波长250 nm.结果表明多杀菌素在25-1000 mg/L范围内线性关系良好,本方法标准偏差为1.486 9,变异系数为0.79%,相关系数为0.9992,平均回收率为99.58%.多杀菌素化合物A,B,C,D,E,F的保留时间分别为7.01,3.59,3.21,8.33,5.72,4.81 min.本方法能准确测定刺糖多胞菌发酵液中多杀菌素含量,有效分离多杀菌素不同组分. 展开更多

关键词 刺糖多孢菌 高效液相色谱法 多杀菌素 定量分析

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苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白提取方法比较研究 被引量：2

11

作者 罗朝辉 夏立秋 +2 位作者 丁学知 王海龙 曾智 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2007年第3期94-98,共5页

采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白．原子力显微镜观测，发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构；等电点法提取的得率高，不能检测到完整的晶体结构．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，等电点法... 采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白．原子力显微镜观测，发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构；等电点法提取的得率高，不能检测到完整的晶体结构．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，等电点法提取的蛋白质含量是液体双相法提取的蛋白含量的1～2倍．将2种方法提取的晶体蛋白对初孵棉铃虫幼虫生物测定均表现杀虫生物活性，经统计分析，液体双相法提取的蛋白质生测毒力比等电点法的高1．5～3倍． 展开更多

关键词 苏云金芽孢杆菌 液体双相分层 等电点 伴胞晶体蛋白 原子力显微镜 聚丙烯酰胺凝胶电泳

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头蛋白质分离及抗肿瘤作用的研究 被引量：2

12

作者 刘巍 丁学知 +5 位作者 夏立秋 孙运军 禹智辉 肖秀情 罗超枝 黄少亚 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期300-302,共3页

利用Tris-HCl(pH7.5,100mmol/L)提取藠头总蛋白质,用不同饱和度硫酸铵盐析沉淀,检测饱和硫酸铵盐析后藠头蛋白质对小鼠B16黑色素瘤细胞和Meth-A细胞的抑制作用。结果表明:20%～80%饱和硫酸铵盐析制备的藠头蛋白质对白色念球菌、小鼠黑... 利用Tris-HCl(pH7.5,100mmol/L)提取藠头总蛋白质,用不同饱和度硫酸铵盐析沉淀,检测饱和硫酸铵盐析后藠头蛋白质对小鼠B16黑色素瘤细胞和Meth-A细胞的抑制作用。结果表明:20%～80%饱和硫酸铵盐析制备的藠头蛋白质对白色念球菌、小鼠黑色素瘤细胞的生长均有明显的细胞毒效应,其中80%饱和硫酸铵盐析制备藠头总蛋白质抗菌抗肿瘤活性最为明显。藠头蛋白质经液相色谱-质谱(LC-MS)检测,其主要成分为凝集素、热休克蛋白、蒜氨酸酶、半胱氨酸合酶和肿瘤坏死因子受体蛋白等物质。 展开更多

关键词 藠头 蛋白质 黑色素瘤 抗肿瘤作用 液相色谱-质谱

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杀虫球孢白僵菌菌株筛选及类枯草杆菌蛋白酶基因的克隆 被引量：2

13

作者 贺小红 曾智 +4 位作者 付祖姣 丁学知 胡胜标 孙运军 夏立秋 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2008年第1期100-103,共4页

在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠... 在水稻叶蝉僵虫中分离出一株球孢白僵菌(Beauveria bassiana),根据GenBank上球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶基因序列同源性设计引物,采用RT-PCR法得到一个球孢白僵菌类枯草杆菌蛋白酶CDEP2基因的cD-NA片段.利用表达载体pET28 a(+),在大肠杆菌中表达了CDEP2蛋白. 展开更多

关键词 RT-PCR 球孢白僵菌 类枯草杆菌蛋白酶

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喂食Cry1Ac毒素对棉铃虫中肠类胰蛋白酶的影响 被引量：1

14

作者 袁灿 夏立秋 +2 位作者 丁学知 田野 尹佳 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2009年第2期93-97,共5页

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在芽胞形成过程中产生的原毒素被敏感昆虫吞食进入消化道后,在中肠蛋白酶的作用下经历一系列酶的剪切活化过程,形成具有杀虫活性的毒性肽.类胰蛋白酶因其在昆虫中肠内蛋白质水解和Bt毒素活化... 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在芽胞形成过程中产生的原毒素被敏感昆虫吞食进入消化道后,在中肠蛋白酶的作用下经历一系列酶的剪切活化过程,形成具有杀虫活性的毒性肽.类胰蛋白酶因其在昆虫中肠内蛋白质水解和Bt毒素活化中起着重要作用而受到广泛研究.本研究提取了棉铃虫4龄幼虫的中肠BBMV蛋白,利用SDS-PAGE分析鉴定到喂食Cry1Ac毒素24h后,棉铃虫幼虫中肠类胰蛋白酶的表达量呈明显下降趋势.该下降趋势很有可能是作为一种昆虫对Bt毒素作用的早期反应,通过影响Bt毒素在中肠中的酶解活化过程,从而为昆虫提供即时保护. 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 棉铃虫 CRY1AC 类胰蛋白酶

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对暗黑鳃金龟成虫具有杀虫活性的Bt蛋白筛选 被引量：1

15

作者 黄世智 束长龙 +2 位作者 刘春琴 丁学知 张杰 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期546-552,共7页

暗黑鳃金龟Holotrichia parallela是一种重要的农业害虫,其成虫和幼虫均能对多种作物造成严重危害。为筛选对暗黑鳃金龟成虫具有毒杀活性的Bt蛋白,本研究首先对暗黑鳃金龟成虫的生活习性进行观察,用浸泡蛋白的榆树叶饲喂成虫,建立了Bt... 暗黑鳃金龟Holotrichia parallela是一种重要的农业害虫,其成虫和幼虫均能对多种作物造成严重危害。为筛选对暗黑鳃金龟成虫具有毒杀活性的Bt蛋白,本研究首先对暗黑鳃金龟成虫的生活习性进行观察,用浸泡蛋白的榆树叶饲喂成虫,建立了Bt蛋白对暗黑鳃金龟成虫的生物学活性测定方法;制备了6种Bt Cry8类杀虫晶体全长蛋白和胰蛋白酶消化蛋白,对暗黑鳃金龟成虫进行了杀虫活性测定。初筛结果发现Cry8Ga1原毒素和消化蛋白均对暗黑鳃金龟成虫具有较高毒杀活性,其在浓度1.0 mg/m L时对暗黑鳃金龟成虫的7 d校正死亡率分别为100%和55%。为更进一步确定Cry8Ga1蛋白的杀虫活性,进行了致死中浓度测定,7 d生测结果显示,Cry8Ga1原毒素的LC50为0.387 mg/m L(95%置信区间为0.108~0.746 mg/m L),Cry8Ga1蛋白经胰蛋白酶消化后的LC50为0.702 mg/m L(95%置信区间为0.150~2.664 mg/m L)。取食Cry8Ga1原毒素蛋白及其消化蛋白后的暗黑鳃金龟成虫中肠细胞产生显著的病理学变化。本研究筛选到对暗黑鳃金龟成虫有毒杀作用的Bt蛋白,研究结果将为金龟子的生物防治开辟新的途径。 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 Cry8Ga1蛋白 暗黑鳃金龟成虫 杀虫活性

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GlnA基因对刺糖多孢菌生长发育及多杀菌素合成的影响 被引量：7

16

作者 肖洁 刘朱东 +5 位作者 彭胜男 何昊城 穰杰 刘熊 丁学知 夏立秋 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期625-638,共14页

谷氨酰胺合成酶(GS,glutamine synthetase)是由Gln A基因编码的生物体中最古老也是最广泛存在的酶,它参与许多生物体中的氮和碳代谢,是生物体氮代谢的关键酶之一,对微生物的生命活动起着重要作用。本文研究了Gln A基因对刺糖多孢菌Sacch... 谷氨酰胺合成酶(GS,glutamine synthetase)是由Gln A基因编码的生物体中最古老也是最广泛存在的酶,它参与许多生物体中的氮和碳代谢,是生物体氮代谢的关键酶之一,对微生物的生命活动起着重要作用。本文研究了Gln A基因对刺糖多孢菌Saccharopolyspora spinosa的生长发育及次级代谢产物合成的影响,从刺糖多孢菌基因组中克隆了gln A基因的部分片段,将其与穿梭载体p OJ260连接,构建敲除载体p OJ260-gln A,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌野生菌中,获得刺糖多孢菌敲除菌株S.spinosa-△gln A;同时,利用重叠延伸PCR将gln A基因置于红霉素强启动子Perm E下,并将融合片段Perm E-gln A与穿梭载体p OJ260进行酶切酶连,构建过量表达载体p OJ260-Perm E-gln A,通过接合转移将其导入刺糖多孢菌中,获得了刺糖多孢菌过量表达菌株S.spinosa-gln A。表型分析发现,gln A基因的敲除对刺糖多孢菌的菌丝形态、孢子萌发等方面都有显著的抑制作用。HPLC检测分析发现,过量表达菌株中多杀菌素产量相比原始菌株提高到170%;该研究表明gln A基因对刺糖多孢菌的生长发育与多杀菌素的合成有一定的影响,为研究其在链霉菌次级代谢过程中的作用奠定了重要基础。 展开更多

关键词 刺糖多孢菌 多杀菌素 谷氨酰胺合成酶 阻断 过量表达

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应用遗传算法和神经网络优化多杀菌素发酵培养基 被引量：2

17

作者 张峰 吴柳娟 +4 位作者 李躺 王灿 胡益波 丁学知 夏立秋 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2017年第5期36-43,共8页

通过优化刺糖多孢菌发酵合成多杀菌素培养基成分,改善培养条件,从而提高多杀菌素产量.在单因素以及Plackett-Burman试验设计的基础上,采用Box-Behnken试验设计方法对发酵培养基组分中的玉米浆、可溶性淀粉、丙酸钠进行研究,运用遗传算... 通过优化刺糖多孢菌发酵合成多杀菌素培养基成分,改善培养条件,从而提高多杀菌素产量.在单因素以及Plackett-Burman试验设计的基础上,采用Box-Behnken试验设计方法对发酵培养基组分中的玉米浆、可溶性淀粉、丙酸钠进行研究,运用遗传算法优化的BP神经网络建立多杀菌素产量与培养基组分浓度之间的预测模型,采用循环算法对此模型进行寻优,得到三种组分的最佳配比为:玉米浆7 g/L、可溶性淀粉16 g/L、丙酸钠2 g/L,多杀菌素产量达到(550.22±3.84)mg/L,采用上述方法优化后的培养基使得多杀菌素产量比原始培养基产量(225mg/L)提高145%.本研究结果可为培养基优化提供一种有效的建模方法. 展开更多

关键词 刺糖多孢菌 多杀菌素 发酵培养基优化 神经网络 遗传算法

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抗肿瘤靶向工程菌的高密度发酵及菌粉研制 被引量：1

18

作者 王灿 莫湘涛 +3 位作者 张峰 吴柳娟 李躺 夏立秋 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第2期105-111,共7页

为获得侵袭性抗肿瘤靶向工程菌株Ec NA高菌体浓度的培养基配方,在单因素试验的基础上,通过PlackettBurman试验筛选出对菌体浓度影响最显著的因素为酵母抽提物、K_2HPO_4用量,对显著影响因素进行中心组合试验响应面分析。结果表明最佳培... 为获得侵袭性抗肿瘤靶向工程菌株Ec NA高菌体浓度的培养基配方,在单因素试验的基础上,通过PlackettBurman试验筛选出对菌体浓度影响最显著的因素为酵母抽提物、K_2HPO_4用量,对显著影响因素进行中心组合试验响应面分析。结果表明最佳培养基成分为:可溶性淀粉2 g/L、酵母抽提物50.3 g/L、K_2HPO_4 14.26 g/L、KH_2PO_43 g/L、MgSO_4 0.3 g/L、微量元素母液2 mL/L、接种量3%。发酵后溶液中菌体OD600 nm达到7.602,菌体生物量达到2.96×109 CFU/mL,比优化前提高了78.3%。以冻干保护剂在冷冻干燥过程中对工程菌株的保护效果为研究对象,通过正交试验得到制成菌粉的最佳保护剂配方为脱脂乳14.25 g/100 mL、蔗糖3 g/100 mL、抗坏血酸钠3 g/100 mL,优化后菌体冻干粉存活率可达86.32%,利于制成延长贮存期的口服菌粉胶囊。 展开更多

关键词 抗肿瘤靶向工程菌 高密度发酵 响应面分析法 冻干保护剂 菌粉制剂

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大孢粘球菌抗肿瘤活性蛋白WGF5分离方法的优化与活性分析 被引量：1

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作者 魏慧 黄海燕 +3 位作者 于芳楠 刘熊 丁学知 夏立秋 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2017年第6期44-48,共5页

为从Myxococcus macrosporus STXZ54发酵液中高效地分离纯化出抗肿瘤活性蛋白WGF5,收集STXZ54发酵上清液,先后利用优化后的硫酸铵沉淀方法沉淀蛋白,强阳离子交换、分子筛色谱分离等方法对蛋白粗提物进行精细分离.利用CCK-8试剂盒,倒置... 为从Myxococcus macrosporus STXZ54发酵液中高效地分离纯化出抗肿瘤活性蛋白WGF5,收集STXZ54发酵上清液,先后利用优化后的硫酸铵沉淀方法沉淀蛋白,强阳离子交换、分子筛色谱分离等方法对蛋白粗提物进行精细分离.利用CCK-8试剂盒,倒置显微镜、扫描电子显微镜等观察WGF5对肿瘤细胞形态的影响,台盼蓝染色进一步检测WGF5对肿瘤细胞的毒力.实验结果观察到WGF5能够显著改变肿瘤细胞形态,与原分离体系相比较,优化后的抗肿瘤活性蛋白分离方法更为高效,简便易行. 展开更多

关键词 大孢粘球菌 抗肿瘤活性蛋白 方法优化

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苏云金杆菌4.0718菌株InhA的鉴定和不同生长时期的表达分析

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作者 李小辉 夏立秋 +2 位作者 袁灿 丁学知 尹佳 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 北大核心 2008年第2期115-119,共5页

免疫抑制因子A(Immune Inhibitor A,InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt4.0718菌株营养生长中期、芽胞... 免疫抑制因子A(Immune Inhibitor A,InhA)是苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)分泌的一种锌金属蛋白酶,具有水解昆虫抗菌肽的活性.为了研究InhA在Bt4.0718菌株中的重要功能,利用SDS-PAGE分离了Bt4.0718菌株营养生长中期、芽胞早期和芽胞晚期的细胞总蛋白质,通过MALDI-TOF/TOFMS分析以及数据库搜索,鉴定到了相对分子质量为86.5kD、pI为5.37的InhA蛋白质.然后采用双向电泳(2-DE)技术检测该蛋白质在不同时期表达量的差异,发现分离和鉴定到的InhA及相对分子质量为75kD、pI为5.13的InhA precursor蛋白质在营养生长中期的表达量比较高,说明InhA在营养生长中期前己开始形成,直到芽胞早期达最大表达量,但芽胞晚期的图谱分析和质谱鉴定均未发现InhA.InhA在营养期的高效表达说明:Bt进入昆虫体内后,InhA在Bt细胞生长繁殖初期表达,并抑制昆虫体内的抗菌肽对Bt细胞的裂解作用,从而有助于Bt在昆虫宿主中的生存,为芽胞期晶体和芽胞的形成以及菌株毒力的发挥奠定了基础. 展开更多

关键词 苏云金芽胞杆菌 INHA 双向电泳 MALDI-TOF/TOF MS 毒力

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