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人NPCEDRG基因启动子的克隆及CCAAT/NFY结合位点初步分析 被引量:12
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作者 侯德富 关勇军 +3 位作者 关瑞 欧阳咏梅 余艳辉 陈主初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第8期713-723,共11页
NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的一个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.为揭示NPCEDRG基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子... NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的一个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.为揭示NPCEDRG基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子机制,联合应用生物信息学和报告基因载体系统分析方法对NPCEDRG基因启动子区进行克隆及功能分析,系统发育进化足迹分析结果表明,NPCEDRG基因5′端调控区-180~+235 bp区间在脊椎动物中高度保守,该保守区域中存在包括CCAAT/NFY、STAT1和SP1等转录因子结合位点.构建Luc和/或EGFP报告基因表达载体并检测其启动子活性,-146~-8 bp区域有较强的启动子活性,电泳迁移阻滞分析实验(EMSA)提示,CCAAT/NFY转录因子结合位点是NPCEDRG基因的转录调控元件.因此,研究确定-146~-8 bp区域是NPCEDRG基因核心启动子区域且启动子核心元件CCAAT/NFY可能参与NPCEDRG基因的转录调控. 展开更多
关键词 NPCEDRG基因 核心启动子 转录调控 CCAAT/NFY结合位点
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鼻咽癌细胞系CNE2中NPCEDRG基因mRNA剪接变异体分析 被引量:2
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作者 侯德富 关勇军 +5 位作者 关瑞 万恂恂 李国庆 欧阳咏梅 余艳辉 陈主初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期841-850,共10页
NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的1个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.本研究对CNE2细胞所表达的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体克... NPCEDRG基因是采用基因定位候选克隆策略获得的1个鼻咽癌候选抑瘤基因.NPCEDRG在鼻咽癌细胞和组织中表达下调,重新恢复NPCEDRG基因在CNE2细胞系的表达,可部分逆转CNE2的恶性表型.本研究对CNE2细胞所表达的NPCEDRG基因mRNA剪接变异体克隆、鉴定,发现NPCEDRG基因至少有7个转录起始位点,其中NM_032316的TSS位于ATG上游-85 nt处,AF538150和AK094248的TSS位于-25 nt处;AF538150不存在第2外显子中6核苷酸序列(3'-TTGCAG-3')的缺失,其CDs为516 bp,编码1种由171个氨基酸组成的蛋白质(而非GenBank中公布的CDs为510 bp,1种由169个氨基酸组成的蛋白质).本研究成功克隆得到1种新的NPCEDRG基因的mRNA剪接变异体V2,其TSS位于-23 nt处,其CDs为297 bp,编码1种由98个氨基酸组成的蛋白质. 展开更多
关键词 NPCEDRG基因 mRNA剪接变异体 5'-RACE 3'-RACE RT-PCR
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Tet调控CYP2E1基因表达细胞系的代谢能力分析 被引量:1
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作者 侯德富 万恂恂 +1 位作者 贺智敏 陈主初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期163-168,共6页
应用Tet-On基因表达系统,调控CYP2E1基因在NIH3T3细胞中的表达水平,探讨CYP2E1在化学致癌物二甲基亚硝胺(N-nitrosodimethylamine,NDMA)代谢中的作用.先后将Tet-on基因表达系统的调控质粒pRevTet-on和反应质粒pRevTRE-2E1转染NIH3T3细胞... 应用Tet-On基因表达系统,调控CYP2E1基因在NIH3T3细胞中的表达水平,探讨CYP2E1在化学致癌物二甲基亚硝胺(N-nitrosodimethylamine,NDMA)代谢中的作用.先后将Tet-on基因表达系统的调控质粒pRevTet-on和反应质粒pRevTRE-2E1转染NIH3T3细胞,分别用G418和潮霉素筛选,并通过RT-PCR和Western印迹检测,成功获得了3个具有良好诱导性Tet调控的CYP2E1基因表达细胞系(Tet/3T3-2E1).应用不同浓度强力霉素(doxycycline,Dox)处理Tet/3T3-2E1细胞诱导CYP2E1表达,HPLC分析细胞对CYP2E1特异性药物探针氯唑沙腙的原位代谢能力及MTT法分析CYP2E1介导的NDMA细胞毒性作用.结果显示,Tet/3T3-2E1细胞CYP2E1的表达及其代谢能力有明显的Dox浓度依赖性,而且NDMA对Dox诱导组细胞有明显浓度依赖性细胞毒性作用,其IC50值为12.06μmol/L,无Dox诱导组未见明显的NDMA细胞毒性作用.该细胞模型的成功建立对于开展与CYP2E1相关的毒物、致癌物代谢研究,筛选抗毒物、抗癌物等具有重要价值. 展开更多
关键词 CYP 2E1 Tet—on基因表达系统 二甲基亚硝胺 强力霉素
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NFY结合位点缺失下调NPCEDRG基因启动子转录活性和效率
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作者 侯德富 关瑞 +1 位作者 万恂恂 陈主初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1159-1165,共7页
NPCEDRG基因是一个鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)相关基因.NPCEDRG基因启动子为TATA-less启动子,其核心启动子区域位于-146~-8 bp区,该区域包含NFY、STAT1和cMYB等转录因子结合位点.前期研究结果提示,转录因子NFY可能参与NPCE... NPCEDRG基因是一个鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)相关基因.NPCEDRG基因启动子为TATA-less启动子,其核心启动子区域位于-146~-8 bp区,该区域包含NFY、STAT1和cMYB等转录因子结合位点.前期研究结果提示,转录因子NFY可能参与NPCEDRG基因的转录调控.为明确NFY转录因子在NPCEDRG基因转录中的作用,本研究应用报告基因载体系统分析方法对NPCEDRG基因核心启动子区进行NFY结合位点(或CCAAT-box)缺失突变及其功能分析,分别构建NPCEDRG基因核心启动子区NFY结合位点缺失突变的Luc和EGFP报告基因表达载体.比较核心启动子和NFY结合位点缺失突变体报告基因载体的转录活性和效率.结果表明,在MCF7和CNE2细胞中,NFY结合位点缺失突变体的转录活性分别约为其核心启动子转录活性66.94%和75.72%,即NFY结合位点缺失致使该启动子转录效率在MCF7和CNE2细胞中分别降低了33.06%和24.28%;EGFP报告基因表达载体系统研究结果与Luc报告基因载体系统结果基本吻合.本研究再次证实,转录因子NFY通过结合NPCEDRG基因启动子的核心元件NFY结合位点参与NPCEDRG基因的转录调控,并提高其基因转录活性和效率. 展开更多
关键词 NPCEDRG基因 核心启动子 转录活性 NFY结合位点
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脂多糖结合蛋白在脓毒症患者诊断和预后预测中的作用 被引量:7
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作者 焦京 蒋宇 +3 位作者 高敏 王念 杨明施 肖献忠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1294-1299,共6页
目的:探讨脂多糖结合蛋白(LBP)在脓毒症患者诊断和预后预测中的作用。方法:挑选ICU的患者共80名,患者分为全身炎症反应综合征(SIRS)组(阴性对照组)、脓毒症存活组和脓毒症死亡组;所有患者均于进入ICU后24 h内采集血清样本并进行APACHE... 目的:探讨脂多糖结合蛋白(LBP)在脓毒症患者诊断和预后预测中的作用。方法:挑选ICU的患者共80名,患者分为全身炎症反应综合征(SIRS)组(阴性对照组)、脓毒症存活组和脓毒症死亡组;所有患者均于进入ICU后24 h内采集血清样本并进行APACHEⅡ评分分析;另挑选10名健康志愿者血清作为正常对照组;ELISA检测各组样本血清LBP、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)浓度;并以APACHEⅡ评分、血清LBP、CRP和PCT浓度对脓毒症诊断和预后预测做ROC曲线,评价LBP在脓毒症患者诊断和预后预测中的作用。结果:与SIRS组相比,脓毒症组的APACHEⅡ评分、血清LBP、CRP、PCT浓度均升高(P<0.05);与脓毒症存活组相比,死亡组的APACHEⅡ评分和血清LBP浓度升高(P<0.05),而血清CRP和PCT浓度在脓毒症存活组与死亡组之间的差异无统计学意义;LBP血清浓度高于26.84 mg/L时诊断脓毒症的敏感性和特异性分别为97.1%和95.9%;LBP血清浓度高于54.16 mg/L时预测脓毒症预后的敏感性和特异性分别为85.2%和80.0%。结论:与传统的脓毒症生物标志物CRP、PCT相比,LBP在脓毒症的诊断和预测方面都具有更好的效果。 展开更多
关键词 脓毒症 脂多糖结合蛋白 APACHEⅡ评分 C反应蛋白 降钙素原
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