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新肝炎病毒TTV在各类高危人群中分子流行病学研究 被引量：2
1
作者 郑煜煌 郑宣鹤 +3 位作者 杨旭 胡维新 黄力 何艳 《湖南医科大学学报》 CSCD 2000年第4期337-340,共4页
为观察新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况和基因分型 ,在日本株TTVORF1保守区合成了特异性引物 ,采用巢式聚合酶链反应 (nPCR)两次扩增血清TTVDNA ,对各类人群中TTVDNA分别进行了分子克隆和部分基因测序 ,并与日本报道的TTVDNA... 为观察新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况和基因分型 ,在日本株TTVORF1保守区合成了特异性引物 ,采用巢式聚合酶链反应 (nPCR)两次扩增血清TTVDNA ,对各类人群中TTVDNA分别进行了分子克隆和部分基因测序 ,并与日本报道的TTVDNA基因序列比较。结果显示 :从非甲 戊型和非庚型肝炎病人、血清HBsAg阳性的肝炎病人、正常献血员、静脉内吸毒者和女性性乱者中 ,分别获得的 6份TTVDNA克隆 ,其基因序列与日本株TTVORF1部分基因核苷酸序列同源性为 97%～ 99% ,均属于TTVla型。提示 :我国各类高危人群感染TTV以la型为主 ;TTV基因型与疾病发生和传播方式关系不大。 展开更多
关键词 肝炎病毒 聚合酶链反应 顺序分析 脱氧核糖核酸 顺序同源性 核酸 流行病学
全文增补中
人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究 被引量：4
2
作者 谭文斌 聂怡玲 +4 位作者 郭小珊 谭运年 成光杰 陈汉春 朱定尔 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第4期425-429,共5页
人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ... 人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体中 ,经序列分析证明无误 .为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域 ,用基因缺失技术从 - 1 62 ( Bst X )位点向上游分别延伸至 - 2 73( Pst )、- 339( Sma )、- 381 ( Sac )、- 44 0 ( Eco R )、- 570 ( H inc )、-853( Bgl )及 - 1 1 90 ( Xho )等位点 ,共获 7个不同长度的 h SCF基因 5′旁侧序列片段 ,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶 ( luc)报告基因载体 p GL2 - Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染 He La细胞 ,培养 48h后检测 Luc活性 .结果表明 :h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域对luc表达有明显的增强作用 ,而 - 339～ - 2 73区域则显示有抑制作用 .分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验 ,结果均出现一个或多个特异性滞留区带 ,说明这两个区域存在转录因子的结合位点 .实验结果表明 ,h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域富含 AT,是一典型基质结合区 ,而 - 339～ - 2 73区域为一新的沉默子 。 展开更多
关键词 人干细胞因子基因 序列分析 基因表达 转录调控
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定量RTPCR中人干细胞因子的RNACRS的构建 被引量：2
3
作者 谭文斌 聂怡玲 +5 位作者 罗赛群 郭小珊 成光杰 陈汉春 朱定尔 public.cs.hn.cn 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第3期315-318,共4页
一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经Exonuc... 一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理 ,以导致hSCFcDNA中一小片段缺失 ,由此获得重组 pGEMSCF模拟体 (mimic) ,经体外转录得到hSCFRNA CRS .测序表明 :该RNA CRS与hSCFmRNA比较 ,缺失了从第 4 99位至 60 8位共 110个核苷酸 ,但二者RT PCR反应可用同一对扩增引物 ,反应动力学极为相似 .这种hSCFRNA CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准 ,适用于定量RT PCR中 ,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析 .此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及 展开更多
关键词 基因表达 定量RT-PCR RNA-CRS hSCF 构建
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PCR-SSCP分析线粒体DNA突变的方法学改进 被引量：4
4
作者 朱敏 吕红斌 +2 位作者 周钢 谭文斌 谢慎思 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期291-292,共2页
在采用PCR -SSCP(PolymeraseChainReaction -SingleStrandConformationPolymorphism ,聚合酶链式反应 -单链构象多态性 )分析技术对 8例骨关节病患者软骨细胞线粒体DNA进行突变分析的过程中 ,针对区带多而杂乱的情况 ,改变变性剂成份和... 在采用PCR -SSCP(PolymeraseChainReaction -SingleStrandConformationPolymorphism ,聚合酶链式反应 -单链构象多态性 )分析技术对 8例骨关节病患者软骨细胞线粒体DNA进行突变分析的过程中 ,针对区带多而杂乱的情况 ,改变变性剂成份和电泳电压 ,从而有效提高了检出灵敏度 ,同时极大地节省了时间。 展开更多
关键词 基因突变 PCR-SSCP分析 骨关节症 线粒体DNA
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骨关节病关节软骨细胞线粒体DNA突变检测 被引量：2
5
作者 吕红斌 朱敏 +3 位作者 胡建中 王嘉芙 胡维新 谢慎思 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期241-245,共5页
目的 :探讨线粒体DNA突变在退行性疾病骨关节病发病中的意义。方法 :采用PCR -SSCP技术 ,结合线粒体DNA测序方法 ,检测了 8例骨关节病和 3例正常人的关节软骨细胞线粒体DNA在一个特点区域 (np:80 0 0— 90 0 0 )内的突变改变。结果 :在 ... 目的 :探讨线粒体DNA突变在退行性疾病骨关节病发病中的意义。方法 :采用PCR -SSCP技术 ,结合线粒体DNA测序方法 ,检测了 8例骨关节病和 3例正常人的关节软骨细胞线粒体DNA在一个特点区域 (np:80 0 0— 90 0 0 )内的突变改变。结果 :在 8例骨关节病例中 ,有 4例出现了线粒体DNA突变 (不包含中性突变 ) ,其中单有点突变并导致氨基酸发生改变的有 2例 ,单有缺失突变的有 1例 ,既有点突变又有缺失突变的有 1例 ;此外 ,发现中性突变 (不改变氨基酸 )的有 4例 ;1例正常标本发现有线粒体DNA点突变存在 ;所有进行了DNA测序检测的标本均发现线粒体DNA886 0位点AG的突变。结论 :骨关节病与线粒体DNA突变有密切关系 ,但其因果关系尚待进一步研究。 展开更多
关键词 线粒体DNA 突变 骨关节病 软骨细胞
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迎接21世纪生命科学的新时代——基因组与蛋白组计划时代 被引量：10
6
作者 谭文斌 《医学与哲学》 1998年第9期449-452,共4页
当全世界人类基因组计划在近年取得迅速和突出的进展，即将来临的２１世纪将带领人类基因组计划进入一个后基因组时代、蛋白组计划、生物信息学的新时代，所有这些将构成２１世纪生命科学研究的核心前沿和主流。同样，生物信息学的成果... 当全世界人类基因组计划在近年取得迅速和突出的进展，即将来临的２１世纪将带领人类基因组计划进入一个后基因组时代、蛋白组计划、生物信息学的新时代，所有这些将构成２１世纪生命科学研究的核心前沿和主流。同样，生物信息学的成果将高度地拓展生命科学新的研究领域和加速其研究的进程。多种多样数以千万计的生命模式（如生物大分子结构功能的模式）的数字化，将是加快生命科学信息化步入一个崭新的水平和时代的必由之路。 展开更多
关键词 人类基因组计划 蛋白组计划 生物 基因组计划
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化疗药物联合细胞因子对bcr-abl转基因小鼠骨髓细胞生长及转基因表达的影响 被引量：2
7
作者 陈汉春 《湖南医科大学学报》 CSCD 1999年第2期95-98,共4页
应用Ｈｕ或５Ｆｕ和鼠干细胞因子（ｍＳＣＦ）及鼠白细胞介素３（ｍＩＬ３）培养含金属硫蛋白（ＭＴ）启动子和增强子序列、ｂｃｒａｂｌｃＤＮＡ（ｐ２１０）序列及ＳＶ４０剪切和Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列的转基因慢粒白血病小... 应用Ｈｕ或５Ｆｕ和鼠干细胞因子（ｍＳＣＦ）及鼠白细胞介素３（ｍＩＬ３）培养含金属硫蛋白（ＭＴ）启动子和增强子序列、ｂｃｒａｂｌｃＤＮＡ（ｐ２１０）序列及ＳＶ４０剪切和Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列的转基因慢粒白血病小鼠骨髓细胞，观察化疗药物及细胞因子单独或联合应用对ＭＴ／ｐ２１０（ｂｃｒａｂｌ）转基因小鼠骨髓细胞生长的影响，并采用ＲＴＰＣＲ分析培养前后骨髓细胞中转基因的表达。结果表明，ｍＳＣＦ和ｍＩＬ３联合应用时，明显促进骨髓细胞增殖及集落形成；不加细胞因子培养，则细胞增殖和转基因表达均受抑制；Ｈｕ或５Ｆｕ与ｍＳＣＦ及ｍＩＬ３联合应用时，同样抑制细胞增殖及转基因表达。提示联合应用化疗药物及细胞因子治疗ＣＭＬ是具有极好应用前景的策略。 展开更多
关键词 慢性 白血病 骨髓移植 药物疗法 转基因小鼠
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DNA足纹步移作图法
8
作者 谭文斌 朱敏 +4 位作者 聂怡玲 罗赛群 成光杰 胡维新 彭兴华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第4期551-555,共5页
一种以PCR介导的、可对任意长度靶DNA片段上的核蛋白结合位点进行DNA足纹作图分析的新方法 .原理是 :采用被随机降解靶DNA分子作为模板 ,用标记的跨越整个模板的足够多条特异性引物进行单链扩增 .首先 ,利用某种化学试剂或酶如DNaseⅠ... 一种以PCR介导的、可对任意长度靶DNA片段上的核蛋白结合位点进行DNA足纹作图分析的新方法 .原理是 :采用被随机降解靶DNA分子作为模板 ,用标记的跨越整个模板的足够多条特异性引物进行单链扩增 .首先 ,利用某种化学试剂或酶如DNaseⅠ对已与蛋白质结合或未结合的双链靶DNA进行随机降解 ,在一定条件下使每一个DNA分子恰好只有一个位点被切割 .然后 ,这些被随机降解DNA分子即可作为模板 ,用同位素标记的跨越整个模板的足够多条特异性引物 (正向或反向 )进行单链扩增 .最后 ,扩增的单链产物通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影形成DNA片段梯队 ,而被蛋白质保护的位点则在DNA片段梯队中形成位置缺口 ,从而确定DNA与蛋白质相结合的精确位点 .该方法被应用对人干细胞因子基因 5′旁侧 - 1190～ - 2 展开更多
关键词 DNA足纹作图分析 聚合酶链式反应 人干细胞因子基因
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迎接人类基因治疗的时代到来 被引量：1
9
作者 成光杰 朱定尔 《医学与哲学》 1996年第2期57-59,共3页
遗传性疾病及肿瘤严重威胁人类的健康，本世纪７０年代以来分子生物学和重组ＤＮＡ技术的突飞猛进的发展，给人类基因治疗带来了曙光，一个崭新的基因治疗时代已经来临，我们必需做好充分的思想准备。本文简单介绍了基因治疗的方法、发... 遗传性疾病及肿瘤严重威胁人类的健康，本世纪７０年代以来分子生物学和重组ＤＮＡ技术的突飞猛进的发展，给人类基因治疗带来了曙光，一个崭新的基因治疗时代已经来临，我们必需做好充分的思想准备。本文简单介绍了基因治疗的方法、发展历史与最新进展，讨论了基因治疗目前存在的问题，探讨了发展对策。 展开更多
关键词 基因疗法 遗传疾病 肿瘤
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PCR技术的传奇诞生与发展 被引量：2
10
作者 杨宇 朱定尔 《医学与哲学》 1998年第8期397-399,共3页
通过介绍ＰＣＲ技术富有传奇色彩的诞生和发展过程以及它对分子生物学乃至整个生命科学界产生的巨大作用，可以看到分子生物学的发展和进步时刻离不开创造性思维，其中的每一项新发明和新理论都是创造性思维的外现或物化，充分体现出它... 通过介绍ＰＣＲ技术富有传奇色彩的诞生和发展过程以及它对分子生物学乃至整个生命科学界产生的巨大作用，可以看到分子生物学的发展和进步时刻离不开创造性思维，其中的每一项新发明和新理论都是创造性思维的外现或物化，充分体现出它是科学技术革命的先导。作为分子生物学工作者，对现阶段的专业理论和技术不能盲从，只有善于思考、勤于动手、富于创新，才能在分子生物学这片创造性思维的沃土上实现人生价值。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 分子生物学 创造性思维
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