番石榴叶天然成分抑制3T3-L1细胞成脂分化的研究 被引量：4

1

作者 杨蕾 李晓帆 +1 位作者 张雅鸥 蔡国平 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期705-708,共4页

目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactop... 目的观察番石榴叶天然成分槲皮素、槲皮素-3-O-(6″-芥子酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-eru-coyl)-β-D-galactopyranoside,QEG)及槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷(Quercetin-3-O-(6″-feruloyl)-β-D-ga-lactopyranoside,QFG)对小鼠3T3-L1细胞成脂分化的影响。方法诱导3T3-L1细胞成脂分化,油红O染色法测定脂滴含量,实时定量PCR(Q-PCR)检测丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsin,CCTTA增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)mRNA表达,Western blot检测C/EBPα和PPARγ的蛋白表达。结果 QFG和槲皮素都能抑制3T3-L1细胞成脂分化,而QEG对此没有作用。QFG能够剂量依赖性地抑制成脂分化,并且降低adipsin、C/EBPα和PPARγmRNA及后两者蛋白表达,而对ERα和ERβmRNA的表达没有影响。结论 QFG抑制细胞成脂分化的能力比槲皮素强,其作用主要是通过抑制C/EBPα和PPARγ的表达而实现的,而且可能与雌激素受体途径无关。 展开更多

关键词 番石榴叶 槲皮素-3-O-(6″-阿魏酸)-β-D-吡喃半乳糖苷 槲皮素 成脂分化 C/EBPΑ PPARγ 雌激素受体

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强抗原决定簇hAFP542-550在真核细胞膜定位表达研究 被引量：2

2

作者 羊东晔 李彩虹 +4 位作者 蓝方 张扬清 卢放根 杨峥嵘 黄来强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期592-595,599,共5页

目的:构建包含甲胎蛋白强抗原决定簇hAFP542-550、EGFP和GPI锚定蛋白GPC3三者组成的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达质粒pGPC3-EGFP,确定其定位表达在真核细胞膜上,以强化靶细胞的免疫原性。方法:①采用RT-PCR方法从人胎盘组织总RNA... 目的:构建包含甲胎蛋白强抗原决定簇hAFP542-550、EGFP和GPI锚定蛋白GPC3三者组成的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达质粒pGPC3-EGFP,确定其定位表达在真核细胞膜上,以强化靶细胞的免疫原性。方法:①采用RT-PCR方法从人胎盘组织总RNA中调取GPC3基因,化学合成基因片段-KOZAK-GPCN+afp542-550-,并从pEG-FP-N1质粒中扩增EGFP基因,三者嵌合构建融合蛋白的表达质粒pcDNA3.1(+)/GPCN+afp542-550-EGFP-GPCC(pG-PC3-EGFP);②以Lipofectamine 2000转染质粒pGPC3-EGFP入肝癌细胞株HepG2(GPC3+AFP+),转染后24h和48h引物GPCN-F和EGFP-rRT-PCR及Western blot检测融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达;③对照质粒pEGFP-N1和pG-PC3-EGFP转染HepG2,荧光显微镜观察比较两种质粒EGFP蛋白表达的部位;pGPC3-EGFP转染人胚肾HEK293细胞(GPC3-AFP-),提取细胞膜蛋白和可溶蛋白Westernblot检测融合蛋白表达。结果:①成功构建pGPC3-EGFP质粒;②融合蛋白可在HepG2中表达;③与pEGFP-N1不同,融合蛋白主要在胞膜上出现荧光反应,胞质内仅见散在零星荧光;转染后HEK293细胞的膜蛋白中检测到融合蛋白表达,而可溶蛋白中未检出。结论:pGPC3-EGFP可以在真核细胞中表达,表达的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP仍然定位表达在细胞膜,是一种新型GPI再锚定蛋白。 展开更多

关键词 人AFP542-550 glypican3 增强绿色荧光蛋白EG-FP 真核细胞 蛋白质工程

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脂多糖诱导成骨细胞中CHI3L1表达的分子机制研究 被引量：3

3

作者 高磊 蔡国平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第5期574-579,共6页

慢性骨髓炎因其病程漫长、易出现并发症以及复发率高成为临床上棘手的难题,其主要致病原因是金黄色葡萄球菌等革兰氏阴性菌感染.脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的重要成分,用LPS在体外刺激骨组织相关细胞在一定程度上可以模拟骨髓... 慢性骨髓炎因其病程漫长、易出现并发症以及复发率高成为临床上棘手的难题,其主要致病原因是金黄色葡萄球菌等革兰氏阴性菌感染.脂多糖(LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的重要成分,用LPS在体外刺激骨组织相关细胞在一定程度上可以模拟骨髓炎患者的病理特征.实时荧光定量PCR和Western blot等试验结果表明,在骨髓炎患者的骨组织和LPS刺激的成骨细胞中,几丁质酶家族成员CHI3L1的表达均有明显升高.核因子κB(NF-κB)萤光素酶报告载体检测结果显示,LPS能诱导细胞的NF-κB活化,NF-κB活化抑制剂Bay11-7082能抑制LPS诱导的CHI3L1表达升高.用抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)的抗体预处理细胞,或采用siRNA干扰的方法抑制TNF-α受体的表达,都能明显抑制LPS诱导的CHI3L1表达上调.同时,NF-κB活化抑制剂Bay11-7082预处理细胞能抑制LPS对TNF-α表达的诱导作用.结果提示,LPS通过激活NF-κB诱导TNF-α分泌上调,刺激CHI3L1表达.提出骨髓炎及脂多糖刺激条件下CHI3L1表达上调,并在细胞水平上初步探讨了脂多糖诱导CHI3L1表达的分子机制. 展开更多

关键词 骨髓炎 脂多糖 CHI3L1 成骨细胞

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大鼠透明质酸合成酶-3基因真核表达载体的构建及趋化作用研究

4

作者 聂勇 蔡国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期751-753,共3页

目的:构建透明质酸合成酶-3(hyaluronan synthase-3)真核表达载体,转染真核细胞并检测重组蛋白酶活性。方法:提取损伤大鼠坐骨神经总RNA,RT-PCR扩增HAS-3编码框cDNA,构建于真核表达载体pcDNA3.1D中,并亚克隆到荧光载体pEGFP-N1中。将构... 目的:构建透明质酸合成酶-3(hyaluronan synthase-3)真核表达载体,转染真核细胞并检测重组蛋白酶活性。方法:提取损伤大鼠坐骨神经总RNA,RT-PCR扩增HAS-3编码框cDNA,构建于真核表达载体pcDNA3.1D中,并亚克隆到荧光载体pEGFP-N1中。将构建好的质粒转染大鼠施旺细胞RSC96,检测HAS-3的表达及酶活性。研究转染细胞培养上清对巨噬细胞的趋化作用。结果:HAS-3真核表达载体pcDNA3.1D-HAS3及pEGFP-HAS3测序结果显示片段插入正确,序列与GenBank公布数据一致,转染RSC96细胞并检测到重组蛋白的表达和酶活性,过表达HAS-3细胞的培养上清对巨噬细胞的趋化作用显著高于未转染细胞上清。结论:成功地构建HAS-3真核表达载体且真核表达的重组HAS-3具有合成HA活性,HAS-3过表达培养上清能趋化巨噬细胞,在体内可能参与到炎症反应中。 展开更多

关键词 透明质酸合成酶 载体构建 真核表达 趋化

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脉冲电磁场对骨质疏松的生物效应 被引量：12

5

作者 关志成 杨小卫 +2 位作者 王黎明 张雅鸥 刘瑛岩 《高电压技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期1-6,共6页

电磁场作为非创伤性疗法在骨病治疗中已得到广泛的关注,故清华大学深圳研究生院以近10年的工作为基础,从细胞水平、动物模型和临床研究3个方面总结了脉冲电磁场应用于防治骨质疏松研究所取得的成果。研究发现,电磁场能够促进DNA的合成... 电磁场作为非创伤性疗法在骨病治疗中已得到广泛的关注,故清华大学深圳研究生院以近10年的工作为基础,从细胞水平、动物模型和临床研究3个方面总结了脉冲电磁场应用于防治骨质疏松研究所取得的成果。研究发现,电磁场能够促进DNA的合成和影响成骨细胞的增殖和分化,且其效果存在一定的窗口效应;骨质疏松动物模型研究显示,脉冲电磁场能够改善去势诱导骨质疏松模型骨密度;初步临床实验证实了细胞研究和动物模型研究的作用效果,并且能够有效改善骨质疏松病人的疼痛和改善骨密度水平。因此认为脉冲电磁场将在骨质疏松的防治中发挥重要作用。 展开更多

关键词 脉冲电磁场 骨质疏松 机理 成骨细胞 动物模型 临床研究

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表面等离子体共振成像生物芯片检测系统 被引量：10

6

作者 李莹 钟金钢 +2 位作者 张永林 顾大勇 张雅鸥 《光子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2290-2293,共4页

根据表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)原理,提出基于表面等离子体共振成像(Surface Plasmon Resonance imaging,SPRI)的生物芯片检测系统构建方法.介绍了SPRI生物芯片检测系统的原理、自行组建的SPRI生物芯片检测系统... 根据表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance,SPR)原理,提出基于表面等离子体共振成像(Surface Plasmon Resonance imaging,SPRI)的生物芯片检测系统构建方法.介绍了SPRI生物芯片检测系统的原理、自行组建的SPRI生物芯片检测系统的结构.采用Kretschmann型棱镜耦合结构激励SPR,偏振的平行光经棱镜投射到生物芯片上,发生表面等离子体共振,由CCD摄像机采集反射光芯片图像.以巯基修饰淋病奈瑟氏菌探针为例验证该系统,利用自组装单分子层技术(Self-Assembled Monolayer,SAM)固定探针.应用该检测系统采集了探针共振、非探针处共振、探针和非探针处都不共振时的生物芯片图像. 展开更多

关键词 光检测技术 表面等离子体共振成像 生物芯片 高通量微量分析

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一种新型光谱表面等离子体共振二维探测方法在DNA微阵列中的应用 被引量：1

7

作者 刘乐 何永红 +4 位作者 马绥华 鲁卫平 赵欣 张雅鸥 郭继华 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2010年第1期154-158,共5页

在此前曾提出过一种新型二维折射率探测方法——并行扫描光谱表面等离子体共振(surface plasmonresonance,SPR)成像方法。在这种方法中,使用线形光照明,CCD得到的图像包含SPR光谱信息和一维空间信息,进而通过计算可得到折射率的一维分... 在此前曾提出过一种新型二维折射率探测方法——并行扫描光谱表面等离子体共振(surface plasmonresonance,SPR)成像方法。在这种方法中,使用线形光照明,CCD得到的图像包含SPR光谱信息和一维空间信息,进而通过计算可得到折射率的一维分布信息。通过一维扫描,就能够得到整个被扫描区域内的折射率二维分布信息。该方法具有高灵敏、高通量的优点,适合微阵列(microarray)的检测,并完善了这种方法的数据处理过程,使用空气折射率作为参考,消除了无法精确控制入射角的难题。使用该方法对手工点制的军团菌mip DNA探针微阵列进行了检测,证明了这种方法高灵敏无标记地探测微阵列的可行性。我们得到的军团菌mip DNA探针制备浓度与其等效折射率的关系,这对基于SPR的微阵列技术的发展有着重要的参考意义。 展开更多

关键词 SPR 光谱 成像 微阵列 生物芯片

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大鼠透明质酸合成酶-2抗血清的制备及鉴定

8

作者 聂勇 蔡国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期510-512,共3页

目的:制备大鼠透明质酸合成酶-2(HAS-2)抗血清并鉴定抗血清灵敏度及其特异性。方法:通过生物信息学分析选取HAS-2非保守的亲水区域作为抗原,通过原核表达纯化后免疫家兔,制备出抗血清。Western blot检测所制备抗血清的灵敏度。真核瞬时... 目的:制备大鼠透明质酸合成酶-2(HAS-2)抗血清并鉴定抗血清灵敏度及其特异性。方法:通过生物信息学分析选取HAS-2非保守的亲水区域作为抗原,通过原核表达纯化后免疫家兔,制备出抗血清。Western blot检测所制备抗血清的灵敏度。真核瞬时表达大鼠HAS-2和HAS-3,分别用抗His抗体和抗血清检测,鉴定制备抗血清的特异性。结果:通过原核表达并纯化得到抗原多肽,免疫家兔后获得ELISA效价大于1∶10000的抗血清。所制备的抗血清至少可以检测出10ng以上的抗原多肽,并且能够特异地检测HAS-2而与HAS-3无反应。结论:成功通过大鼠HAS-2非保守区域多肽的原核表达产物制备出高灵敏度和特异性的大鼠HAS-2抗血清,为研究透明质酸(HA)的病理生理意义提供了有利支持。 展开更多

关键词 透明质酸 透明质酸合成酶-2 重组表达 抗血清

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小鼠几丁质酶的重组表达和抗体制备

9

作者 高磊 蔡国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期884-886,共3页

目的:检测脂多糖(LPS)刺激成骨细胞后,几丁质酶(chitotriosidase)基因表达变化情况。进行小鼠chitotriosi-dase的原核和真核表达,并利用原核表达纯化的蛋白,制备兔抗鼠多克隆抗体。方法:用LPS刺激MC3T3-E1细胞,提取mRNA,通过RT-PCR获得... 目的:检测脂多糖(LPS)刺激成骨细胞后,几丁质酶(chitotriosidase)基因表达变化情况。进行小鼠chitotriosi-dase的原核和真核表达,并利用原核表达纯化的蛋白,制备兔抗鼠多克隆抗体。方法:用LPS刺激MC3T3-E1细胞,提取mRNA,通过RT-PCR获得小鼠chitotriosidase的编码区全长序列,克隆进pRSET A载体,转化BL21菌株,IPTG诱导表达。获得的包涵体蛋白用镍柱纯化后,作为抗原免疫兔子,制备多克隆抗体。用该抗体检测真核表达的小鼠chitotriosi-dase蛋白,并确定抗体的灵敏度和特异性。结果:LPS明显刺激chitotriosidase表达。原核表达的包涵体蛋白经镍柱纯化后也能制备出效果较好的多克隆抗体。结论:成功地克隆表达了小鼠的chitotriosidase蛋白,并制备出高灵敏度、高特异性的多克隆抗体,为进一步阐明chitotriosidase在病理条件下的表达变化和功能提供了一条途径。 展开更多

关键词 几丁质酶 脂多糖 重组表达 多克隆抗体

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抗欧亚活血丹凝集素特异性多克隆抗体的制备(英文)

10

作者 王卫芳 VAN DAMME Els 何朝族 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1113-1119,共7页

欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹 (Glechoma hederacea) 叶片中的一种糖基化植物新蛋白. 如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测 Gleheda 的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍,为此制定了抗 Gleheda 特异性多克... 欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹 (Glechoma hederacea) 叶片中的一种糖基化植物新蛋白. 如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测 Gleheda 的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍,为此制定了抗 Gleheda 特异性多克隆抗体的纯化方案. 免疫血清蛋白经硫酸铵选择性沉淀后,分别以 Gleheda 和刺槐外源凝集蛋白 (RPA) 结合在 Sepharose 4B作为亲和配体,采用亲和层析法连续纯化 2 次,然后进一步采用离子交换层析 Q Fast Flow 提纯. 经每一步骤提纯得到的抗体组分对 Gleheda 的特异性,均同时采用双向免疫扩散检验和 Western blot 分析. 结果表明,以 Gleheda 为配体,亲和纯化制备得到的抗体组分对叶片粗提物中的许多植物 (糖) 蛋白仍然表现交叉反应. 为除去由植物糖蛋白中的聚糖所引起这些非特异性交叉反应抗体,接着以 RPA 为配体再次进行亲和纯化,Western blot 分析显示,抗体的特异性得到提高但并非除去了所有非特异性交叉反应的抗体. 最后进一步采用离子交换层析制备得到仅抗 Gleheda 蛋白的特异性抗体组分,此抗体组分适用于免疫探测研究. 该抗体纯化制备程序简易而高效,而且不需要昂贵的设备. 展开更多

关键词 特异性多克隆抗体 抗体制备 欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)

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鲤鱼CD74同源基因的原核表达及多克隆抗体制备

11

作者 陶乐 蔡国平 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第3期28-31,共4页

通过PCR扩增出鲤鱼CD74同源基因的胞外片段trcIclp1和trcIclp2,将其克隆到原核表达载体pQE-30中,并在大肠杆菌菌株M15中经IPTG诱导表达,经过变性,Ni-NTA柱亲和纯化,透析复性,得到可溶性纯化蛋白。将纯化后的蛋白免疫NIH小鼠制备多克隆抗... 通过PCR扩增出鲤鱼CD74同源基因的胞外片段trcIclp1和trcIclp2,将其克隆到原核表达载体pQE-30中,并在大肠杆菌菌株M15中经IPTG诱导表达,经过变性,Ni-NTA柱亲和纯化,透析复性,得到可溶性纯化蛋白。将纯化后的蛋白免疫NIH小鼠制备多克隆抗体,经Western鉴定,ELISA法测其效价分别高达1∶51 200和1∶12 800。 展开更多

关键词 鲤鱼 CD74基因 原核表达 多克隆抗体

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小鼠visfatin抗体的制备及应用

12

作者 马小慧 蔡国平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期504-506,共3页

目的:制备高效价抗visfatin抗体,探测visfatin在前脂肪细胞成脂分化过程中在空间上表达情况。方法:克隆鼠内脂素visfatin基因的蛋白编码区全长序列,构建其原核表达载体pET28a-visfatin,然后在E.coli(BL21)中诱导大量以包涵体形式表达,... 目的:制备高效价抗visfatin抗体,探测visfatin在前脂肪细胞成脂分化过程中在空间上表达情况。方法:克隆鼠内脂素visfatin基因的蛋白编码区全长序列,构建其原核表达载体pET28a-visfatin,然后在E.coli(BL21)中诱导大量以包涵体形式表达,提取包涵体并用Ni-NTA亲和层析柱纯化蛋白,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。以纯化后的抗血清为一抗,Western blot检测小鼠肝、肌肉等组织中visfatin的分布。结果:SDS-PAGE及Western blot显示原核表达载体pET28a-visfatin在大肠杆菌中诱导表达,融合蛋白能够被抗hismAb识别。免疫新西兰大白兔获得抗体效价在1∶25600以上。结论:用制备得到的抗体对小鼠心、肝、肺、脾、脂肪、肌肉组织样品做Western blot鉴定,结果表明visfatin在各组织中均有表达,其中脾和脂肪组织中表达量高于其他组织。 展开更多

关键词 内脂素 原核表达 抗血清制备

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