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肿瘤相关基因表达检测寡核苷酸芯片的制备及其初步应用 被引量:2
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作者 黄坚 杜清友 +1 位作者 丁雨 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期900-905,共6页
为研制肿瘤相关寡核苷酸芯片 ,并实现其在抗肿瘤反义核酸“癌泰得”作用机理研究方面的初步应用 ,制备了包含近 450种肿瘤相关基因特异寡核苷酸探针的寡核苷酸芯片 ,建立了相应的质控标准 .“癌泰得”用脂质体转染HepG2肿瘤细胞 ,提取... 为研制肿瘤相关寡核苷酸芯片 ,并实现其在抗肿瘤反义核酸“癌泰得”作用机理研究方面的初步应用 ,制备了包含近 450种肿瘤相关基因特异寡核苷酸探针的寡核苷酸芯片 ,建立了相应的质控标准 .“癌泰得”用脂质体转染HepG2肿瘤细胞 ,提取细胞总RNA反转录并荧光标记cDNA ,用制备的寡核苷酸芯片检测肝癌细胞HepG2的肿瘤相关基因表达水平 ,用软件分析获得其差异基因表达谱 .0 4μmol/L的反义核酸“癌泰得”作用于HepG2细胞 15h后 ,MDNCF、DHS等基因mRNA表达下调 ,MUC2、MPP11、LAT、HRIF B、JNK3A1等mRNA基因表达上调 ,初步检测到了“癌泰得”的抗肿瘤作用可能的相关基因 ,为进一步的分子作用机理的探讨奠定基础 .结果表明 ,制备的肿瘤相关芯片敏感度高、特异性高、重复性均较好 ,可用于检测肿瘤相关基因的表达谱 。 展开更多
关键词 肿瘤相关基因 寡核苷酸芯片 癌泰得 表达谱
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应用多重标记引物增强寡核苷酸芯片的荧光信号强度(英文) 被引量:1
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作者 文思远 曹恒杰 +3 位作者 刘军波 丁雨 陈苏红 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第8期747-752,共6页
寡核苷酸芯片技术是一种高通量发掘和采集生物信息的强大技术平台,目前已广泛应用于生物科学领域.为改善寡核苷酸芯片的分析性能,对影响芯片杂交结果的因素,如片基表面的化学处理、探针的长度、间隔臂的长度、杂交条件等,进行了深入的... 寡核苷酸芯片技术是一种高通量发掘和采集生物信息的强大技术平台,目前已广泛应用于生物科学领域.为改善寡核苷酸芯片的分析性能,对影响芯片杂交结果的因素,如片基表面的化学处理、探针的长度、间隔臂的长度、杂交条件等,进行了深入的研究和优化.对寡核苷酸芯片而言,仍有待解决的问题是如何产生更强的荧光信号来改善其检测灵敏度.利用两种类型的多个荧光分子标记的引物,来增强二维寡核苷酸芯片平面上的荧光信号强度.两种引物分别命名为:多标记线性引物和多标记分支引物.通过增加标记在目标DNA 片段上的荧光分子数,可以显著增强寡核苷酸芯片上相应捕获探针的信号强度.实验表明,使用多标记引物能将所用的寡核苷酸微阵列的检测限(以能够检测的最低模板量计算)降低至单荧光标记引物的1/100 以下,多重标记技术是一种有效增强微型化探针矩阵检测灵敏度的信号放大方法. 展开更多
关键词 寡核苷酸芯片 信号放大 多重标记 分子标记 荧光信号 信号强度 引物 多重 应用 检测灵敏度
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基因芯片检测广东省汉族人群HLA-DQB1基因多态性 被引量:1
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作者 武大林 王晖 张文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第22期2230-2231,共2页
目的调查研究了700名广东省汉族人群HLA-DQB1等位基因频率及多态性分布。方法采用深圳益生堂生物企业有限公司研制开发的“HLA-DQB1低分辨率基因分型芯片试剂盒”,应用PCR-SSP+SSO芯片检测技术,对700名广东省的中国人群进行基因分型。... 目的调查研究了700名广东省汉族人群HLA-DQB1等位基因频率及多态性分布。方法采用深圳益生堂生物企业有限公司研制开发的“HLA-DQB1低分辨率基因分型芯片试剂盒”,应用PCR-SSP+SSO芯片检测技术,对700名广东省的中国人群进行基因分型。结果鉴定了10个HLA-DQB1等位基因。广东省人群HLA-DQB1等位基因频率分布为HLA-DQB1*05>*0301>*0303>*0601>*02>*0302>*04>*0602>*0604>*0603。结论为我国疾病相关性研究、人类学研究提供了可靠的遗传学参数。 展开更多
关键词 基因芯片 HLA-DQB1 基因多态性 中国广东汉族人群
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丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片的制备及临床评价 被引量:7
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作者 张文 周枚芬 +5 位作者 陈立炎 丁亚平 曹恒杰 黄坚 耿永尧 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第6期935-939,共5页
为了制备丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片 ,并对其临床应用价值进行评价 ,将基因工程表达的丙型肝炎病毒分片段抗原 ,点至经特殊处理的玻片上 ,制成蛋白质芯片 .收集来自三家临床单位用于临床验证的 90 5份血清标本 .分别用丙肝... 为了制备丙型肝炎病毒分片段抗体检测蛋白质芯片 ,并对其临床应用价值进行评价 ,将基因工程表达的丙型肝炎病毒分片段抗原 ,点至经特殊处理的玻片上 ,制成蛋白质芯片 .收集来自三家临床单位用于临床验证的 90 5份血清标本 .分别用丙肝病毒分片段抗体检测蛋白质芯片、ELISA丙肝病毒抗体检测试剂进行检测 .部分样本同时采用进口RIBA抗体检测试剂进行了检测 ,分别比较蛋白质芯片法与ELISA法以及RIBA试剂的符合率 .结果表明 :a 90 5份血清标本 ,ELISA法检出阳性 2 94份 ,阴性 611份 .阳性标本用蛋白质芯片法检测 ,融合抗原 2 92份显示阳性结果、 2份阴性结果 ,根据蛋白质芯片的核心抗原 ,以及NS3 ,NS4,NS5分片段抗原综合判断确定阳性样本 2 88份阳性 ,阴性样本 2份 ,4份样本结果不确定 .ELISA法检出的 611份阴性标本用两种蛋白质芯片法检测 ,检出阴性均为 611份 .两种蛋白质芯片法与ELISA法的阳性符合率分别为 99 3 %和98 9% ,与ELISA法的阴性符合率均为 10 0 % .用RIBA试剂检测 6份ELISA法为阳性 ,蛋白质芯片法为非阳性的样本 ,结果均为非阳性 .b 2 90份经RIBA试剂确认的阳性标本 10 4份 ,单片段阳性标本 66份 ,阴性标本12 0份 ,用蛋白质芯片法检测 ,检出阳性标本 10 3份 ,单片段阳性标本 61份 ,阴性标本 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 抗体 蛋白质芯片 临床评价
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寡核苷酸芯片用于HLA-B分型的初步研究 被引量:3
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作者 蓝柯 胡守旺 +5 位作者 张帆 王晖 管伟 丁雨 孙偶军 王升启 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期174-178,共5页
HLA基因具有复杂的多态性。本研究根据HLA B基因序列的多态性 ,设计了一套寡核苷酸探针 ,并用基因芯片点样仪点样到醛基修饰的载玻片上 ,制成寡核苷酸芯片用于HLA B基因的分型。本研究以克隆并已测序的HLA B基因序列作为标准样品 ,经PC... HLA基因具有复杂的多态性。本研究根据HLA B基因序列的多态性 ,设计了一套寡核苷酸探针 ,并用基因芯片点样仪点样到醛基修饰的载玻片上 ,制成寡核苷酸芯片用于HLA B基因的分型。本研究以克隆并已测序的HLA B基因序列作为标准样品 ,经PCR分别扩增其具有多态性的第二和第三外显子 ,PCR扩增产物与芯片进行杂交 ,利用分析软件将杂交模式转变成为HLA B基因型。结果表明 ,利用芯片进行分型的结果与标准样品序列结果完全符合。结论 :寡核苷酸芯片用于HLA B基因分型是一种简便。 展开更多
关键词 寡核苷酸芯片 HLA-B分型 多态性 白细胞抗原 血清学
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同时检测血清中多种抗体的蛋白质微阵列研究 被引量:7
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作者 丁亚平 陈立炎 +7 位作者 张文 曹恒杰 倪世明 周枚芬 梁好 凌志光 耿永尧 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期640-644,共5页
建立一种用蛋白质微阵列法可同时检测血清中艾滋病毒 (HIV) ,丙型肝炎病毒 (HCV)和梅毒螺旋体(TP)抗体的方法 .将基因工程HIV、HCV和TP 3种融合抗原共价结合于固相载体玻片上 ,制成蛋白质微阵列 ,血清样本经稀释、加样、孵育、洗涤后 ,... 建立一种用蛋白质微阵列法可同时检测血清中艾滋病毒 (HIV) ,丙型肝炎病毒 (HCV)和梅毒螺旋体(TP)抗体的方法 .将基因工程HIV、HCV和TP 3种融合抗原共价结合于固相载体玻片上 ,制成蛋白质微阵列 ,血清样本经稀释、加样、孵育、洗涤后 ,加上Cy3荧光标记二抗 ,洗涤 ,激光共聚扫描 ,将获得的图片用Bio discover公司的Imagene专用分析软件进行分析 ,所获数据在经过自行编写的软件 ,根据Cutoff值自动生成判断结果 .用此蛋白质微阵列系统检测了 4 0 0例阴性血清 ,确定了Cutoff值 ,检测中国药品生物制品检定研究所的HIV ,HCV和TP 3种参比品 ,并与 3种ELISA试剂盒的结果进行了比较 .蛋白质微阵列的艾滋病毒阳性和阴性符合率均为 10 0 % (2 0 / 2 0 ) ;丙型肝炎病毒阳性和阴性符合率均为 95 % (38/ 4 0 ) .梅毒螺旋体参比品阳性符合率为 10 0 % (10 / 10 ) ,阴性符合率为 10 0 % (2 0 / 2 0 ) ,蛋白质微阵列与三种ELISA试剂检测国家HIV、TP、HCV参比品 (共 15 0份血清样本 ) ,结果具有高度的符合率 . 展开更多
关键词 同时检测 血清 多种抗体 蛋白质微阵列
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爪蟾用于启动子组织特异性表达检测的初步研究 被引量:2
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作者 蓝轲 冯湘玲 《动物医学进展》 CSCD 2002年第2期57-58,共2页
本实验利用绿色荧光蛋白 ( GFP)与嗜上皮启动子 EDL 2连接 ,运用显微注射技术将EDL 2 -GFP注射入爪蟾受精卵以制备转基因蛙 ,根据 GFP在蛙体内的表达情况 。
关键词 启动子 绿色荧光蛋白 爪蟾 显微注射 组织特异性 表达 检测
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转基因小鼠技术及其在肿瘤研究中的应用
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作者 蓝轲 古柏燕 《动物医学进展》 CSCD 2002年第4期46-49,共4页
本文综述了近年来出现的一些转基因新方法 ,诸如精子载体法、核移植法及逆转录病毒法等 。
关键词 应用 转基因小鼠技术 肿瘤研究
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