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TIPE通过调控LDHA表达影响三阴性乳腺癌糖代谢重编程机制研究
1
作者
胡玮
任晓朦
+2 位作者
王洋
赵培庆
曹凯
《中国癌症杂志》
北大核心
2025年第4期386-393,共8页
背景与目的:肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha-induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)在多种恶性肿瘤中发挥重要的调控作用,但其在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)代谢重编程中的分子机制尚未阐明。...
背景与目的:肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha-induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)在多种恶性肿瘤中发挥重要的调控作用,但其在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)代谢重编程中的分子机制尚未阐明。本研究旨在揭示TIPE通过调控糖酵解关键酶乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)表达影响TNBC细胞增殖和糖代谢重编程的作用机制,为TNBC的临床治疗提供新的分子靶点。方法:采用慢病毒载体系统在MDA-MB-231细胞中建立TIPE-shRNA稳定转染株,通过嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系,利用转录组测序分析TIPE对TNBC细胞糖代谢重编程通路的影响,通过SeaHorse能量代谢分析仪检测细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR),并结合乳酸检测等实验评估TIPE对TNBC细胞糖酵解能力的影响;采用Co-IP/MS技术筛选TIPE相互作用蛋白,在HEK-293T细胞中共转染TIPE-Myc和LDHA-Flag质粒,进一步验证TIPE与LDHA蛋白存在相互作用;通过CHX追踪实验和泛素化分析检测TIPE对LDHA蛋白稳定性的影响;通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)CCK-8和ECAR实验、裸鼠移植瘤模型(伦理批号:202212007)结合免疫组织化学检测进一步验证TIPE介导LDHA影响TNBC细胞增殖与糖代谢重编程过程。结果:TIPE促进了TNBC细胞糖代谢重编程,实验数据显示,TIPE敲除显著抑制了TNBC细胞的糖酵解能力、糖酵解容量及乳酸生成量(P <0.001);免疫共沉淀实验证实TIPE与糖酵解关键酶LDHA存在直接结合,进一步机制研究表明TIPE通过泛素化-蛋白酶体途径延缓LDHA蛋白降解过程,但对其mRNA表达水平无显著影响;细胞实验证实TIPE通过调控LDHA显著促进TNBC细胞增殖(P<0.001)和糖酵解活性(P<0.001),在裸鼠移植瘤模型中TIPE敲除组肿瘤体积显著缩小(P<0.05)、重量减轻(P<0.01),肿瘤组织免疫组织化学分析显示TIPE与LDHA表达呈显著正相关。结论:TIPE通过抑制LDHA泛素化水平降解促进TNBC细胞增殖与糖酵解能力。
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关键词
肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8
三阴性乳腺癌
糖代谢重编程
乳酸脱氢酶A
泛素化
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职称材料
题名
TIPE通过调控LDHA表达影响三阴性乳腺癌糖代谢重编程机制研究
1
作者
胡玮
任晓朦
王洋
赵培庆
曹凯
机构
淄博市中心医院乳腺外科
淄博市
中心
血站
中心
实验室
桓台县人民
医院
检验科
淄博市
中心医院
转化医学
中心
淄博市
中心医院
药剂科
出处
《中国癌症杂志》
北大核心
2025年第4期386-393,共8页
基金
山东省自然科学基金(ZR2021MC165)。
文摘
背景与目的:肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8(tumor necrosis factor alpha-induced protein 8,TNFAIP8,TIPE)在多种恶性肿瘤中发挥重要的调控作用,但其在三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)代谢重编程中的分子机制尚未阐明。本研究旨在揭示TIPE通过调控糖酵解关键酶乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)表达影响TNBC细胞增殖和糖代谢重编程的作用机制,为TNBC的临床治疗提供新的分子靶点。方法:采用慢病毒载体系统在MDA-MB-231细胞中建立TIPE-shRNA稳定转染株,通过嘌呤霉素筛选获得稳定细胞系,利用转录组测序分析TIPE对TNBC细胞糖代谢重编程通路的影响,通过SeaHorse能量代谢分析仪检测细胞外酸化率(extracellular acidification rate,ECAR),并结合乳酸检测等实验评估TIPE对TNBC细胞糖酵解能力的影响;采用Co-IP/MS技术筛选TIPE相互作用蛋白,在HEK-293T细胞中共转染TIPE-Myc和LDHA-Flag质粒,进一步验证TIPE与LDHA蛋白存在相互作用;通过CHX追踪实验和泛素化分析检测TIPE对LDHA蛋白稳定性的影响;通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)CCK-8和ECAR实验、裸鼠移植瘤模型(伦理批号:202212007)结合免疫组织化学检测进一步验证TIPE介导LDHA影响TNBC细胞增殖与糖代谢重编程过程。结果:TIPE促进了TNBC细胞糖代谢重编程,实验数据显示,TIPE敲除显著抑制了TNBC细胞的糖酵解能力、糖酵解容量及乳酸生成量(P <0.001);免疫共沉淀实验证实TIPE与糖酵解关键酶LDHA存在直接结合,进一步机制研究表明TIPE通过泛素化-蛋白酶体途径延缓LDHA蛋白降解过程,但对其mRNA表达水平无显著影响;细胞实验证实TIPE通过调控LDHA显著促进TNBC细胞增殖(P<0.001)和糖酵解活性(P<0.001),在裸鼠移植瘤模型中TIPE敲除组肿瘤体积显著缩小(P<0.05)、重量减轻(P<0.01),肿瘤组织免疫组织化学分析显示TIPE与LDHA表达呈显著正相关。结论:TIPE通过抑制LDHA泛素化水平降解促进TNBC细胞增殖与糖酵解能力。
关键词
肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8
三阴性乳腺癌
糖代谢重编程
乳酸脱氢酶A
泛素化
Keywords
TIPE
Triple-negative breast cancer
Glycometabolic reprogramming
Lactate dehydrogenase A
Ubiquitination
分类号
R737.9 [医药卫生—肿瘤]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
TIPE通过调控LDHA表达影响三阴性乳腺癌糖代谢重编程机制研究
胡玮
任晓朦
王洋
赵培庆
曹凯
《中国癌症杂志》
北大核心
2025
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