N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍引起vero细胞基因表达改变及有关cDNA片段的初步鉴定 被引量：11

1

作者 胡文蔚 余应年 +1 位作者 张小山 董海涛 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期62-66,共5页

运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，... 运用ｍＲＮＡ差异显示（ＤＤ－ＰＣＲ）技术，通过２６对锚定及任意引物组合显示基因的差异表达情况，分离了７个表达有差异的片段．其中３个片段的相关基因属于对Ｎ－甲基－Ｎ′－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）处理的初级反应基因，２个属于次级反应基因．另有２个片段的差异表达仅在蛋白合成抑制剂环己亚胺（ＣＨＭ）合并ＭＮＮＧ处理时才出现．反向缝隙印迹杂交分析印证了２个片段在ＤＤ－ＰＣＲ中发现的改变，同时分析的本实验室分离的２５个片段中，８个片段的变化被验证与ＤＤ－ＰＣＲ中的改变一致．序列分析结果显示这些片段与许多基因有高同源性，其中包括一些参与信息传导的基因． 展开更多

关键词 亚硝基胍 MMNG CDNA 差异显示 MRNA 片段

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MNNG所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析 被引量：6

2

作者 孙雪敏 余应年 +1 位作者 张小山 陈星若 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期77-78,共2页

ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析１孙雪敏１余应年张小山陈星若（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室，杭州３１００３１；１杭州医学高等专科学校，杭州３１００１２）非定标性突变（ｎｏｎｔａｒｇｅ... ＭＮＮＧ所致哺乳类细胞非定标性突变的时相分析１孙雪敏１余应年张小山陈星若（浙江医科大学病理生理学教研室及医学分子生物学实验室，杭州３１００３１；１杭州医学高等专科学校，杭州３１００１２）非定标性突变（ｎｏｎｔａｒｇｅｔｅｄｍｕｔａｔｉｏｎ）为原核细胞... 展开更多

关键词 癌 细胞 非定标性突变 甲基硝基亚硝胍 时相分析

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工频磁场对细胞蛋白质酪氨酸磷酸化影响的研究 被引量：5

3

作者 孙文均 余应年 +2 位作者 付一提 鲁德强 姜槐 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第8期732-735,共4页

目的：研究５０ Ｈｚ 工频磁场对细胞胞浆蛋白质酪氨酸磷酸化的影响，以初步探讨工频磁场生物效应有关细胞信息转导的机制。方法：对分别经两个不同强度的工频磁场（ 正弦） 作不同时间辐照处理后的细胞，提取其胞浆蛋白质，定量后，以... 目的：研究５０ Ｈｚ 工频磁场对细胞胞浆蛋白质酪氨酸磷酸化的影响，以初步探讨工频磁场生物效应有关细胞信息转导的机制。方法：对分别经两个不同强度的工频磁场（ 正弦） 作不同时间辐照处理后的细胞，提取其胞浆蛋白质，定量后，以Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 方法测定并比较细胞胞浆蛋白质酪氨酸磷酸化的程度。结果：０－４ ｍＴ 和０－８ ｍ Ｔ 两个强度的工频磁场均可影响胞浆蛋白质酪氨酸磷酸化。其中，两个强度都能影响分子量为３８ 、９７ ．４（ ×１０３） 蛋白质的酪氨酸磷酸化。此外，０ ．４ ｍＴ 强度还可使６１－７ 、１０５ 及１１２（ ×１０３） 的蛋白质酪氨酸磷酸化发生改变，而０－８ ｍＴ 强度却使７９ 、１５０（ ×１０３） 的蛋白质酪氨酸磷酸化发生变化。并且上述蛋白质酪氨酸磷酸化的变化均存在着时间相关性。 展开更多

关键词 蛋白质 酪氨酸 磷酸化 工频磁场 细胞信息转导

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甲基硝基亚硝基胍诱发的遗传不稳定vero细胞DNA体外复制的保真度 被引量：7

4

作者 冯朝晖 余应年 陈星若 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期144-148,共5页

利用在猴肾ｖｅｒｏ细胞抽提物中建立的ＤＮＡ体外复制系统，对穿梭质粒ｐＺ１８９ＤＮＡ进行有效的复制后，将复制产物转化至Ｅ．ｃｏｌｉＭＢＭ７０７０，观察ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ中突变靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变的情况．在烷... 利用在猴肾ｖｅｒｏ细胞抽提物中建立的ＤＮＡ体外复制系统，对穿梭质粒ｐＺ１８９ＤＮＡ进行有效的复制后，将复制产物转化至Ｅ．ｃｏｌｉＭＢＭ７０７０，观察ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ中突变靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变的情况．在烷化剂甲基硝基亚硝基胍（Ｎ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｎ′－ｎｉｔｒｏ－Ｎ－ｎｉｔｒｏｓｏｇｕａｎｉｄｉｎｅ）诱发的遗传不稳定（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ）ｖｅｒｏ细胞胞浆抽提物中进行ｐＺ１８９质粒ＤＮＡ复制，发现经过体外复制的ｐＺ１８９质粒中ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因突变率高出对照组５－８倍（Ｐ＜０．０５）。 展开更多

关键词 MNNG 甲基 硝基亚硝基胍 VERO细胞 DNA复制

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低浓度N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍对HeLa细胞DNA聚合酶及拓扑异构酶Ⅱ α mRNA表达水平的影响 被引量：6

5

作者 冯朝晖 余应年 陈星若 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期217-221,共5页

利用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ聚合酶（Ｐｏｌα，β，δ，ε）及拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐⅡα）ｍＲＮＡ表达水平的影响．发现经０．２μｍｏｌ·... 利用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法，研究了低浓度甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ聚合酶（Ｐｏｌα，β，δ，ε）及拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐⅡα）ｍＲＮＡ表达水平的影响．发现经０．２μｍｏｌ·Ｌ－１ＭＮＮＧ处理２．５ｈ后，ＨｅＬａ细胞ＰｏｌβｍＲＮＡ水平在６－２４ｈ内升高约１倍，而Ｐｏｌα，δ，ε及ＴｏｐＩαｍＲＮＡ水平则无明显改变．提示ＰｏｌβｍＲＮＡ水平改变可能参与ＭＮＮＧ诱发细胞遗传不稳定的发生． 展开更多

关键词 甲基硝基 亚硝基胍 DNA MNNG 聚合酶 基因表达

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茶多酚对人羊膜上皮细胞FL系EROD活性的影响 被引量：4

6

作者 冯磊 余应年 陈星若 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第5期467-470,共4页

本实验测定人羊膜上皮细胞ＦＬ系乙氧基异吩恶唑Ｏ－去乙基酶（ＥＲＯＤ）的活性，观察茶多酚对ＦＬ细胞细胞色素Ｐ４５０１Ａ１同功酶活性的影响。在茶多酚（ＧＴＰＰ）对猓被鼓芤种柒－ＮＦ对ＥＲＯＤ的诱导作用。提示，茶多酚可... 本实验测定人羊膜上皮细胞ＦＬ系乙氧基异吩恶唑Ｏ－去乙基酶（ＥＲＯＤ）的活性，观察茶多酚对ＦＬ细胞细胞色素Ｐ４５０１Ａ１同功酶活性的影响。在茶多酚（ＧＴＰＰ）对猓被鼓芤种柒－ＮＦ对ＥＲＯＤ的诱导作用。提示，茶多酚可能通过抑制细胞色素同功酶的活性，降低致癌物在体内代谢活化而发挥其化学预防肿瘤的作用。 展开更多

关键词 细胞色素 茶多酚 羊膜上皮细胞 肿瘤

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人细胞色素P4502B6在哺乳类细胞中的稳定表达 被引量：3

7

作者 吴健敏 余应年 陈星若 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期131-135,共5页

〗在诱变试验中广泛应用人羊膜ＦＬ细胞，中国仓鼠ＣＨＬ和Ｖ７９细胞，但由于它们不能表达内源性细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）活化前致突变物，而严重限制了它们的使用．本工作构建了携有编码ＣＹＰ２Ｂ６单胺氧化酶的ｃＤＮＡ重组表达... 〗在诱变试验中广泛应用人羊膜ＦＬ细胞，中国仓鼠ＣＨＬ和Ｖ７９细胞，但由于它们不能表达内源性细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）活化前致突变物，而严重限制了它们的使用．本工作构建了携有编码ＣＹＰ２Ｂ６单胺氧化酶的ｃＤＮＡ重组表达体并分别导入上述三种细胞中表达，经Ｇ４１８抗性筛选，建立了ＦＬ－２Ｂ６，ＣＨＬ－２Ｂ６和Ｖ７９－２Ｂ６三种转基因细胞系，用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交证明它们都有ＣＹＰ２Ｂ６的表达．在ＣＨＬ－２Ｂ６细胞中还测得较高水平的７－乙氧基－４－三氟甲基香豆素去乙基酶活性，它对前致突变物甲基亚硝胺吡啶酮的致微核形成作用有很高敏感性，并呈剂量效应关系，但其母系细胞皆为阴性． 展开更多

关键词 细胞色素 基因表达 哺乳类 化学致癌

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UV反应不一定等同于DNA损伤反应 被引量：5

8

作者 孙雪敏 余应年 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第6期564-567,共4页

哺乳类细胞遭受紫外线（ＵＶ）和其他ＤＮＡ损伤剂作用后短时间内出现的基因转录诱导称为ＵＶ反应过去认为这种反应是ＤＮＡ损伤的结果．但是近年来的一些研究对这一观点提出了不少质疑，因而有必要在此讨论几个产生争议的主要问题。

关键词 细胞 紫外线反应 DNA损伤

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c－k－ras反义寡核苷酸抑制HCe8693细胞生长及p21^（ras）表达的序列特异性 被引量：2

9

作者 钱瑛 余应年 +2 位作者 董海涛 陈星若 罗建红 《中国药理学与毒理学杂志》 CSCD 北大核心 1996年第1期45-48,共4页

本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突... 本文采用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），并结合ＰＣＲ产物直接测序法，证明人大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的ｋ－ｒａｓｃＤＮＡ片段（第３～８３密码子）中存在第１２密码子ＧＧＴ→ＧＡＴ突变，未发现其它突变或ＲＮＡ剪接异常．用分别与野生型和上述突变型ｋ－ｒａｓ第９～１５密码子互补的１８聚硫代磷酸型寡核苷酸（两者仅存在一个碱基差别）及随机设计的对照寡核苷酸（终浓度为６μｍｏｌ·Ｌ－１），发现与突变型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸能抑制ＨＣｅ８６９３细胞生长并有ｐ２１ｒａｓ蛋白表达量的抑制；而与野生型ｋ－ｒａｓ互补的寡核苷酸及随机合成的对照寡核苷酸对之无明显抑制作用，说明ｃ－ｋ－ｒａｓ反义寡核苷酸对ＨＣｅ８６９３细胞生长和ｐ２１ｒａｓ蛋白合成的抑制作用存在明显的核苷酸序列特异性． 展开更多

关键词 肿瘤细胞 原癌基因 反义 寡核苷酸 基因表达

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猴肾vero细胞中MNNG诱发非定标性点突变的序列特异性分析 被引量：2

10

作者 张小山 余应年 陈星若 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第5期463-468,共6页

我们以穿梭质粒ｐｚ１８９作为探针已在猴肾ｖｅｒｏ细胞中证实了非定标性突变的存在。本实验进一步对突变子质粒中的靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因作序列分析，以揭示非定标性突变的序列特异性。结果表明：８９％（２４／２７）的碱基置... 我们以穿梭质粒ｐｚ１８９作为探针已在猴肾ｖｅｒｏ细胞中证实了非定标性突变的存在。本实验进一步对突变子质粒中的靶基因ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因作序列分析，以揭示非定标性突变的序列特异性。结果表明：８９％（２４／２７）的碱基置换发生在Ｇ：Ｃ碱基对，５９％（１６／２７）为颠换，４１％（１１／２７）为转换，主要为Ｇ：Ｃ→Ｔ：Ａ颠换和Ｇ：Ｃ→Ａ：Ｔ转换；４８％的碱基置换发生在ｓｕｐＦｔＲＮＡ基因的６个位点中，其中４个包含有特征性的邻近ＤＮＡ序列；另有４个位点的碱基置换是迄今为止在自发突变和定标性突变中从未报道的；５个移码突变中有２个发生在位点９９—１０５（ＧＧＴＧＧＧＧ）中，此位点可能为非定标性移码突变的热点。结果提示：非定标性突变有其序列特异性而不同于自发突变和定标性突变，它的形成可能是一种易误性ＤＮＡ聚合酶的作用所致。 展开更多

关键词 突变 哺乳动物 质粒

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HeLa-MSH2-细胞的生物学特性 被引量：1

11

作者 钱瑛 余应年 +2 位作者 陈星若 罗建红 谢海洋 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期562-565,共4页

凝胶阻滞实验证实转染了本实验室构建的hMSH2反义RNA表达质粒的HeLa细胞（HeLa－MSH2-细胞），其细胞抽提物中C·T碱基对和A·C碱基对错配结合蛋白表达明显降低。该细胞系细胞与母本HeLa细胞在生长速率方面无差异，但经十几次... 凝胶阻滞实验证实转染了本实验室构建的hMSH2反义RNA表达质粒的HeLa细胞（HeLa－MSH2-细胞），其细胞抽提物中C·T碱基对和A·C碱基对错配结合蛋白表达明显降低。该细胞系细胞与母本HeLa细胞在生长速率方面无差异，但经十几次传代后，其生长速率加快约两倍，出现了次磺酸磷酸核糖转移酶（hypoxanthinephosphoribosyltransferase,hgprt）自发突变率升高，但不存在N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍（N－methyl－N’－nitro－N－nitrosogyanidine,MNNG）耐受。认为hMSH2蛋白在错配修复系统中起了错配识别和结合作用，但该基因的突变不能完全解释道传性非息向性结直肠癌（hereditarynonpolpoiscolorectalcarcinoma，HNPCC）病人来源的细胞系的生物学改变。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 基因突变 细胞生物学 HMSH2 RNA

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细胞色素P450调节剂对DNA加合物形成的影响 被引量：1

12

作者 王良君 余应年 陈星若 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期54-56,共3页

人羊膜上皮细胞ＦＬ系分别接触ａ－萘黄酮（０．６ｍｍｏｌ·Ｌ￣（－１））β－萘黄酮（２０ｐｍｏｌ·Ｌ￣（－１））２４ｈ后，再用苯并（ａ）芘［Ｂ（ａ）Ｐ，１０ｕｍｏｌ·Ｌ￣（－１）］处理２４ｈ，用３２Ｐ后标记... 人羊膜上皮细胞ＦＬ系分别接触ａ－萘黄酮（０．６ｍｍｏｌ·Ｌ￣（－１））β－萘黄酮（２０ｐｍｏｌ·Ｌ￣（－１））２４ｈ后，再用苯并（ａ）芘［Ｂ（ａ）Ｐ，１０ｕｍｏｌ·Ｌ￣（－１）］处理２４ｈ，用３２Ｐ后标记技术测定以Ｂ（ａ）－ＤＮＡ加合物。结果发现，阳性对照组，ａ－萘黄酮预处理组及β－萘黄酮预处理组加合物的量分别为（加合物个数／１０’个核苷酸）：４．７±０．２（１００％），１．８±０．９（３８．３％），１６．０±２．２（３４０．１％）．该实验结果直接显示了纳胞色素Ｐ４５０调节剂对肿瘤发生影响的作用水平。亦为药物对致癌物代谢影响的研究提供了一种方法． 展开更多

关键词 DNA加合物 细胞色素P450类 萘黄酮

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人细胞色素P450 2B6的GST融合蛋白及其抗体的制备 被引量：1

13

作者 林筱洁 罗建红 余应年 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期3-7,共5页

目的 :获得纯化抗原用于制备CYP2B6多克隆抗体。方法 :PCR扩增目的基因片段 ,亚克隆入融合蛋白表达载体pGEX - 3b ,构建了重组质粒pGEX/ 2B6。然后将该重组质粒转化大肠杆菌DH5α ,IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE分离 ,获纯化融合蛋白GST - 2B... 目的 :获得纯化抗原用于制备CYP2B6多克隆抗体。方法 :PCR扩增目的基因片段 ,亚克隆入融合蛋白表达载体pGEX - 3b ,构建了重组质粒pGEX/ 2B6。然后将该重组质粒转化大肠杆菌DH5α ,IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE分离 ,获纯化融合蛋白GST - 2B6。用GST - 2B6免疫BALB/C小鼠 ,自腹水中获取CYP2B6多克隆抗体 (2B6pAb)。结果 :融合蛋白GST - 2B6 (CYP2B6 2 0 2～ 35 2aa) ,并获其特异的多克隆抗体。结论 :通过构建融合蛋白重组表达质粒pGEX/ 2B6 ,用获得的初步纯化融合蛋白GST - 展开更多

关键词 细胞色素P450 重组融合蛋白质 抗体

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用~32P后标记法研究交链孢酚及菜油油烟凝聚物对FL细胞DNA加成作用 被引量：1

14

作者 王良君 余应年 陈星若 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 1994年第6期571-573,共3页

交链孢酚是河南林县污染粮食中分离的互隔交链孢霉的代谢提取物，可能与食管癌的发病有关，菜油油烟凝聚物可能与非吸烟妇女的肺癌发生有关。人羊膜上皮细胞系ＦＬ细胞接触不同剂量的交链孢酚；及经β－萘磺酮诱导２４ｈ的ＦＬ细胞接触... 交链孢酚是河南林县污染粮食中分离的互隔交链孢霉的代谢提取物，可能与食管癌的发病有关，菜油油烟凝聚物可能与非吸烟妇女的肺癌发生有关。人羊膜上皮细胞系ＦＬ细胞接触不同剂量的交链孢酚；及经β－萘磺酮诱导２４ｈ的ＦＬ细胞接触不同剂量的菜油油烟凝聚物，用＾３２Ｐ后标记法检测其加成物，分别可分离到１个和４个主要加成物斑块，均有明显剂量依赖性关系，提示该两种物质有明显的细胞遗传毒效应。 展开更多

关键词 食管肿瘤 链格孢属 DNA P32 FL细胞 菜油 油烟

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化学物对CM891菌株正向突变和回复突变的抑制作用 被引量：1

15

作者 郭峻 金中初 +1 位作者 梅汝焕 陈星若 《浙江医科大学学报》 CSCD 1993年第2期61-63,共3页

本文应用E.coli CM891菌株双生物学指标——正向突变和回复突变检测环境中的抗突变物。实验结果显示,肉桂醛、二烯丙三硫和鞣酸均具有有效地拮抗4NQO诱发的低剂量链霉素抗性正向突变和色氨酸缺陷回复突变的作用;肉桂醛且有抗自发正向突... 本文应用E.coli CM891菌株双生物学指标——正向突变和回复突变检测环境中的抗突变物。实验结果显示,肉桂醛、二烯丙三硫和鞣酸均具有有效地拮抗4NQO诱发的低剂量链霉素抗性正向突变和色氨酸缺陷回复突变的作用;肉桂醛且有抗自发正向突变和回复突变的作用。本文还讨论了化学物拮抗回复突变和拮抗低剂量链霉素抗性正向突变作用的机理。 展开更多

关键词 突变 药物作用 拮抗剂 抑制剂

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细胞色素P4501A1基因mRNA的化学诱导及在人肝中的基础表达 被引量：1

16

作者 董海涛 吴健敏 余应年 《中国药理学与毒理学杂志》 CSCD 北大核心 1996年第4期277-279,共3页

利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交及逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了几种传代培养细胞和成人肝组织及人胚胎肝组织细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（１Ａ１）基础表达水平并观察了几种化学诱导剂对人羊膜细胞ＦＬ系和原代胚肝细胞... 利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交及逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术研究了几种传代培养细胞和成人肝组织及人胚胎肝组织细胞色素Ｐ４５０１Ａ１（１Ａ１）基础表达水平并观察了几种化学诱导剂对人羊膜细胞ＦＬ系和原代胚肝细胞该基因ｍＲＮＡ水平的诱导．结果显示：３－甲基胆蒽，苯巴比妥，β－萘黄酮在不同程度上能高诱导ＦＬ细胞１Ａ１ｍＲＮＡ表达．ＲＴ－ＰＣＲ结果显示ＣＨＬ细胞及Ｖ７９细胞存在基础表达，但Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果提示其表达量极低．成人肝脏中１Ａ１亦存在极低的表达水平，而人胚胎肝脏不能用高灵敏度的ＲＴ－ＰＣＲ检测到痕迹表达，提示胚胎发育时期１Ａ１基因处于完全关闭状态． 展开更多

关键词 细胞色素 基因表达 化学诱导 肿瘤发生

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hMSH2反义核糖核酸表达质粒的构建

17

作者 钱瑛 余应年 +2 位作者 陈星若 罗建红 谢海洋 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期139-143,共5页

利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），特异地扩增ＨｅＬａ细胞中ｈＭＳＨ２ｃＤＮＡ的最保守区域，并将其克隆到ＴＡ载体，从重组质粒两端进行序列分析，证实为目的片段．将该目的片段反向克隆到哺乳动物表达载体ｐＲＥＰ９的Ｂ... 利用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），特异地扩增ＨｅＬａ细胞中ｈＭＳＨ２ｃＤＮＡ的最保守区域，并将其克隆到ＴＡ载体，从重组质粒两端进行序列分析，证实为目的片段．将该目的片段反向克隆到哺乳动物表达载体ｐＲＥＰ９的ＢａｍＨⅠ和ＫｐｎⅠ位点之间，筛选后得ｐＲＥＰ９－ｈＭＳＨ２反义表达重组质粒．用磷酸钙－ＤＮＡ共沉淀法将重组质粒ＤＮＡ及载体ＤＮＡ分别导入ＨｅＬａ细胞，经Ｇ４１８筛选，扩大培养．凝胶阻滞实验证实转染有ｐＲＥＰ９－ｈＭＳＨ２重组质粒的ＨｅＬａ－ＭＳＨ２－细胞抽提物中Ｇ·Ｔ和Ａ·Ｃ错配结合蛋白质表达明显降低。 展开更多

关键词 hMSHZ CDNA 质粒 构建

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氰戊菊酯的UDS试验结果

18

作者 蔡朱男 张小山 +2 位作者 张丽燕 李文春 余应年 《浙江医科大学学报》 CSCD 1991年第1期13-15,共3页

UDS试验是检测DNA损伤的短期试验之一.用UDS试验检测三种不同来源的氰戊菊酯,氰戊菊酯№1和№2浓度在5×10^(-8)～10^(-5)mol/L,有或无代谢活化系统时,都无诱发UDS作用.氰戊莉酯№3在不和体外活化系统,浓度为5×10^(-5)mol/L时... UDS试验是检测DNA损伤的短期试验之一.用UDS试验检测三种不同来源的氰戊菊酯,氰戊菊酯№1和№2浓度在5×10^(-8)～10^(-5)mol/L,有或无代谢活化系统时,都无诱发UDS作用.氰戊莉酯№3在不和体外活化系统,浓度为5×10^(-5)mol/L时结果为阳性,并能获得剂量效应关系.加有大鼠肝微粒体制剂时,氰戊菊酯№3浓度在5×10^(-8)～10^(-5)mol/L,无诱发UDS作用.比较三种氰戊菊酯制品的纯度后认为,№3的DNA损伤作用可能是样本中之杂质所引起. 展开更多

关键词 有机氯杀虫剂 氰戊菊酯 UDS试验

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坏变细胞的DNA对HpaⅡ限制性片段分析法测量DNA甲基化水平的干扰作用 被引量：1

19

作者 潘孔寒 施正政 +1 位作者 余应年 陈星若 《浙江医科大学学报》 CSCD 1992年第2期49-53,共5页

用~3H-TdR在不同时期标记细胞DNA,以区别在HpaⅡ限制性片段放射活性分析中的DNA系来自增殖中的或坏变中的细胞.实验证明MNNG处理后存活的细胞中并无DNA甲基化水平的变化.而经MNNG或Hanks液处理的脱落细胞DNA,在HpaⅡ水解前后其DNA片段的... 用~3H-TdR在不同时期标记细胞DNA,以区别在HpaⅡ限制性片段放射活性分析中的DNA系来自增殖中的或坏变中的细胞.实验证明MNNG处理后存活的细胞中并无DNA甲基化水平的变化.而经MNNG或Hanks液处理的脱落细胞DNA,在HpaⅡ水解前后其DNA片段的L_w皆明显降低,并可干扰对新复制DNA的HpaⅡ识别位点的分析.因此作者认为,在缺乏严格设计以除外上述因素的体系中,作出关于细胞DNA甲基化状态变化的结论是不可信的. 展开更多

关键词 细胞 脱氢核糖核酸 甲基化 致癌物

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细菌波动试验在检测化学诱变剂中的应用 被引量：1

20

作者 张皎皎 陈星若 余应年 《浙江医科大学学报》 CSCD 1990年第4期150-153,共4页

本文首先用波动试验对标准阳性诱变剂和氨化、非氨化焦糖的诱变性进行验证;在此基础上对Ames平板试验显阴性的胺菊酯、三氯杀虫酯和杀虫脒等的诱变性进行测试,以评价波动试验的灵敏度和这些化学物的遗传毒性.实验证明波动试验测出叠氮钠... 本文首先用波动试验对标准阳性诱变剂和氨化、非氨化焦糖的诱变性进行验证;在此基础上对Ames平板试验显阴性的胺菊酯、三氯杀虫酯和杀虫脒等的诱变性进行测试,以评价波动试验的灵敏度和这些化学物的遗传毒性.实验证明波动试验测出叠氮钠对TA100的最低诱变剂量为0.015μg/ml,比平板试验低16倍;测出氨化及非氨化焦糖对TA98的诱变剂量分别为5μl/ml及10μ1/ml,比平板试验低5～10倍;胺菊酯在不加S9时对TA97仅在波动试验中显示诱变性;三氯杀虫酯在加S9时对TA98也仅在波动试验中显示诱变性;波动试验还测出了杀虫脒加S9时对TA97有诱变性. 展开更多

关键词 诱变性试验 致变物 细菌波动试验

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