出入境伴侣动物检疫现状及建议 被引量：5

1

作者 凌宗帅 刘友清 +3 位作者 潘学昌 李强 方绍庆 姜迪来 《中国动物检疫》 CAS 2003年第11期43-44,共2页

加入WTO后,我国对外交流日益增多,出入境旅客人数逐年增长,相应地出现旅客携带伴侣动物出入境的数量及种类也呈不断增加趋势,伴侣动物以犬和猫居多;另外,随着人们生活水平的提高。

关键词 进出口贸易 动物检疫 管理工作 狂犬病 疫苗注射 许可证

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燕麦属进境检疫性杂草种子的SSR标记检测 被引量：3

2

作者 邵秀玲 原永兰 +4 位作者 尼秀媚 范晓虹 刘瑞军 张德满 常兆芝 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第4期517-520,共4页

本研究对燕麦属中检疫性杂草细茎野燕麦、法国野燕麦、不实野燕麦与非检疫性杂草野燕麦、燕麦利用分子标记技术进行检测,并对其反应条件及反应体系进行优化,筛选出1对引物AM1对应的标记在五种燕麦中具有多态性,能够用于检测进境检疫性... 本研究对燕麦属中检疫性杂草细茎野燕麦、法国野燕麦、不实野燕麦与非检疫性杂草野燕麦、燕麦利用分子标记技术进行检测,并对其反应条件及反应体系进行优化,筛选出1对引物AM1对应的标记在五种燕麦中具有多态性,能够用于检测进境检疫性燕麦种子,这对以后利用分子标记技术进行种间检疫性杂草检测具有一定的指导和实践意义。 展开更多

关键词 SSR 燕麦属 检疫性杂草种子

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SPA-ELISA用于单核细胞增生性李斯特菌检验的应用研究 被引量：6

3

作者 姜迪来 凌宗帅 +5 位作者 王克刚 张志梅 孙芙蓉 王洪海 项海波 曾萍 《肉类研究》 2006年第6期47-50,共4页

本研究创造性地将SPA-ELISA应用于食品中单核细胞增生性李斯特菌(简称LM)的检验中,建立了快速检测该菌的ELISA方法。试验表明:该方法可特异性检测肉品中的LM,样品中最低检出量为5个/10克,经增菌后的培养液最低检测限可达到105CFU/ml,并... 本研究创造性地将SPA-ELISA应用于食品中单核细胞增生性李斯特菌(简称LM)的检验中,建立了快速检测该菌的ELISA方法。试验表明:该方法可特异性检测肉品中的LM,样品中最低检出量为5个/10克,经增菌后的培养液最低检测限可达到105CFU/ml,并可在48小时内报告结果,比常规分离培养鉴定方法快5～6天,适于LM的快速筛选。 展开更多

关键词 SPA-ELISA 单核细胞增生性李斯特菌

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SELEX技术及其在植物检疫中的应用前景 被引量：1

4

作者 李建勇 王英超 +5 位作者 王飞 纪瑛 厉艳 吴兴海 王简 邵秀玲 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 2016年第1期60-63,共4页

SELEX是从人工体外合成的随机单链核酸序列库中筛选出特异性与靶物质高度亲和的适配体的筛选技术。该技术的基本途径主要是通过人工合成的随机寡核苷酸序列文库,历经筛选、分离、富集得到能与各种配体结合的寡核苷酸适配体,具有高特异... SELEX是从人工体外合成的随机单链核酸序列库中筛选出特异性与靶物质高度亲和的适配体的筛选技术。该技术的基本途径主要是通过人工合成的随机寡核苷酸序列文库,历经筛选、分离、富集得到能与各种配体结合的寡核苷酸适配体,具有高特异性、高亲和力和稳定性良好的特点。本文综述了SELEX技术的发展,介绍了目前的研究进展,以及该技术在植物检疫领域中的应用情况,并对其前景进行分析和展望。 展开更多

关键词 SELEX技术 植物检验检疫 应用

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猪旋毛虫病检验方法及分析 被引量：4

5

作者 李百京 栾凤钦 +1 位作者 刘友清 刘平波 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2000年第10期58-58,共1页

关键词 猪旋毛虫病 ELISA 显微镜检验法 组织消化法

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化肥施用量对有机基质栽培番茄养分吸收利用的影响 被引量：31

6

作者 李建勇 高俊杰 +2 位作者 徐守国 史修柱 于贤昌 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期602-606,共5页

以番茄为试验材料,以蛭石︰羊粪=2:1为基质配方,研究了有机基质栽培条件下不同化肥施用量对番茄氮、磷和钾吸收利用规律的影响。结果表明:适量施用化肥可提高番茄产量,促进番茄对氮、磷、钾养分的吸收;氮、磷、钾的吸收量均随施肥量的... 以番茄为试验材料,以蛭石︰羊粪=2:1为基质配方,研究了有机基质栽培条件下不同化肥施用量对番茄氮、磷和钾吸收利用规律的影响。结果表明:适量施用化肥可提高番茄产量,促进番茄对氮、磷、钾养分的吸收;氮、磷、钾的吸收量均随施肥量的增加而增加;基质中氮、钾的利用率均随施肥量的增加而降低,而磷的利用率则随化肥施用量的增加而增加;适量施用化肥还可明显促进基质迟效养分转化为速效养分。每形成1 000 kg番茄果实,植株需吸收氮2.540 kg、磷0.751 kg、钾4.347 kg。确定了在有机基质栽培下番茄较佳化肥施用量计算方法为:化肥施用量=(1.5倍番茄目标产量需肥量-有机基质中速效养分量)/化肥中养分吸收率。 展开更多

关键词 番茄 无土栽培 有机基质 氮磷钾 吸收规律 速效养分 迟效养分

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砷制剂作为畜禽促生长剂的作用及其危害分析 被引量：23

7

作者 袁涛 管恩平 +2 位作者 何桂华 贾俊涛 张艺兵 《中国家禽》 北大核心 2010年第22期51-53,共3页

1砷制剂的种类 砷制剂可分为两类：一类是无机砷，如动物长期摄入，在体内有积累作用而导致中毒；另一类足在动物饲料中使用的有机砷，作为饲料添加剂具有抑制病原微生物以促进生长及改善动物外观与畜产品颜色的作用。目前常用的有机... 1砷制剂的种类 砷制剂可分为两类：一类是无机砷，如动物长期摄入，在体内有积累作用而导致中毒；另一类足在动物饲料中使用的有机砷，作为饲料添加剂具有抑制病原微生物以促进生长及改善动物外观与畜产品颜色的作用。目前常用的有机砷制剂有氨苯胂酸（商品名阿散酸）和硝基羟基苯胂酸（商品名洛克沙胂），这两类是属于我国允许使用的饲料药物添加剂。 展开更多

关键词 有机砷制剂 危害分析 促生长剂 畜禽 饲料药物添加剂 动物饲料 病原微生物 饲料添加剂

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有机基质栽培番茄化肥施用效应的研究 被引量：11

8

作者 李建勇 张勇 +1 位作者 耿忠义 于贤昌 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第10期2946-2947,2969,共3页

在日光温室采用4种施肥处理的实验结果表明,在有机基质栽培条件下,追施化肥处理的番茄叶片光合速率较不施肥处理普遍提高,在开花座果期,随着施肥量增加光合速率增加,盛果期以处理②光合速率最高。叶绿素含量随施肥量增加而增大,盛果期... 在日光温室采用4种施肥处理的实验结果表明,在有机基质栽培条件下,追施化肥处理的番茄叶片光合速率较不施肥处理普遍提高,在开花座果期,随着施肥量增加光合速率增加,盛果期以处理②光合速率最高。叶绿素含量随施肥量增加而增大,盛果期番茄根系活力施肥处理明显高于不施肥处理,叶片硝酸还原酶活性以处理②最高,处理③最低。适量追施化肥,番茄开花期提前,单果重增加。施肥处理产量均显著高于不施肥处理,以处理②为最高。追施化肥可明显提高果实可溶性糖、可溶性蛋白和有机酸的含量,Vc含量以处理②为最高,过量施肥可使果实硝酸盐含量明显上升。 展开更多

关键词 番茄 有机基质 无土栽培 化肥 产量 品质

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猪流感病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：11

9

作者 张太翔 凌宗帅 +5 位作者 岳志芹 徐彪 梁成珠 刘文鹏 张焕海 张艺兵 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期181-184,共4页

本研究选取猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的NP基因序列设计引物和探针,建立了检测SIV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×108至2.0... 本研究选取猪流感病毒(swine influenza virus,SIV)的NP基因序列设计引物和探针,建立了检测SIV的TaqMan实时荧光定量PCR方法。以梯度稀释的含有SIV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×108至2.0×102拷贝/μL 7个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为20个拷贝/μL。根据病毒拷贝数与Ct值的关系绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对猪瘟病毒、伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸都没有扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高、特异性好,可以进行定量分析,在猪流感的快速检测上具有重要意义。 展开更多

关键词 猪流感病毒 实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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犬Ⅰ型腺病毒的分子生物学研究进展 被引量：6

10

作者 凌宗帅 温书坤 +1 位作者 刘友清 张太翔 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2005年第8期34-35,共2页

关键词 犬腺病毒 分子生物学研究 Ⅰ型 败血性传染病 感染病例 传染性 易感性 分泌物 排泄物

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高效液相色谱法测定聚苯乙烯发泡塑料中防老剂2246的含量 被引量：5

11

作者 王乐 王飞 +3 位作者 陈晞 张爱霞 郑新华 陶琳 《理化检验（化学分册）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期50-54,共5页

将样品0.250 0g溶于乙酸乙酯5mL中,加甲醇15mL使聚合物沉淀,静置5min,将上清液取出留用。沉淀用甲醇(每次5mL)超声洗涤3次,所得洗液与上清液合并,用甲醇定量稀释至50mL作为待测液供色谱分析。以Agela Venusil XBP C18色谱柱为固定相,以... 将样品0.250 0g溶于乙酸乙酯5mL中,加甲醇15mL使聚合物沉淀,静置5min,将上清液取出留用。沉淀用甲醇(每次5mL)超声洗涤3次,所得洗液与上清液合并,用甲醇定量稀释至50mL作为待测液供色谱分析。以Agela Venusil XBP C18色谱柱为固定相,以甲醇(9+1)溶液为流动相进行分离,外标法定量。防老剂2246的质量浓度在0.100~10.0mg·L-1范围内与相应的色谱峰面积呈线性关系。方法的测定下限(10S/N)为0.002%。在2个浓度水平(0.100%,0.250%)上进行加标回收试验,测得回收率依次为99.8%,97.7%,测定值的相对标准偏差(n=6)依次为0.3%,0.2%。色谱法测定结果经高效液相色谱-串联质谱法作进一步确证。 展开更多

关键词 高效液相色谱法 聚苯乙烯发泡塑料 防老剂2246 高效液相色谱-串联质谱法

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水中全氟化合物的污染处理研究进展 被引量：8

12

作者 王飞 李晓明 +1 位作者 李建勇 张斌 《水处理技术》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期5-11,共7页

全氟化合物(Perfluorinated Compounds,PFCs)是一类在水体中有极高的溶解度含氟烃类化合物,具有潜在的环境污染持久性、生物毒性和累积性,严重危害人类的身体健康。水中PFCs污染处理已经成为各国研究人员的一个研究热点。报告了几种常... 全氟化合物(Perfluorinated Compounds,PFCs)是一类在水体中有极高的溶解度含氟烃类化合物,具有潜在的环境污染持久性、生物毒性和累积性,严重危害人类的身体健康。水中PFCs污染处理已经成为各国研究人员的一个研究热点。报告了几种常见的水中PFCs处理技术,如物理吸附技术、光化学法、电化学氧化法、热降解以及生物降解等。物理吸附技术具有成本低,效率高以及操作简单等优点,但其只达到了吸附去除的目的,未能从根本上降解PFCs,而且后续的焚烧等处理手段会对环境造成更大的污染,常用作工业废水中的PFCs处理;化学方法及热降解虽然能够达到降解PFCs的目的,但存在试剂及装置费用高、反应条件苛刻和二次污染等缺点。生物降解目前在降解PFCs方面存在争议,受菌株筛选以及各种其他外部环境的影响,在水体中的PFCs处理中应用不多。此外,展望了水体中PFCs的降解技术的发展趋势和研究重点。 展开更多

关键词 水处理 全氟化合物 降解技术

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伪狂犬病基因缺失疫苗的研究进展 被引量：6

13

作者 凌宗帅 郭文龙 +2 位作者 刘冠华 马荣德 阎振贵 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期25-28,共4页

伪狂犬病是由疱疹病毒科伪狂犬病病毒引起的多种畜、禽及野生动物的一种急性传染病。动物感染后表现为从隐性临床症状到严重的呼吸道和神经症状综合症。该病给世界养猪业造成巨大的损失,目前预防该病主要是以疫苗接种为主。综述了当今... 伪狂犬病是由疱疹病毒科伪狂犬病病毒引起的多种畜、禽及野生动物的一种急性传染病。动物感染后表现为从隐性临床症状到严重的呼吸道和神经症状综合症。该病给世界养猪业造成巨大的损失,目前预防该病主要是以疫苗接种为主。综述了当今广泛应用的伪狂犬病基因缺失疫苗的研究现状和进展。 展开更多

关键词 伪狂犬病病毒 基因缺失疫苗 进展

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HPLC测定食品包装用胶黏剂中5种树脂酸含量 被引量：4

14

作者 王乐 郑新华 +2 位作者 项海波 陈晞 张爱霞 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期267-271,共5页

建立高效液相色谱测定食品包装用胶黏剂中枞酸、新枞酸、去氢枞酸、长叶松酸和左旋海松酸的分析方法。对样品前处理和色谱分析条件进行了优化,以乙酸乙酯为溶剂,甲醇沉淀高聚物离心后微孔滤膜过滤,乙腈-0.4%乙酸水(80∶20)为流动相,流速... 建立高效液相色谱测定食品包装用胶黏剂中枞酸、新枞酸、去氢枞酸、长叶松酸和左旋海松酸的分析方法。对样品前处理和色谱分析条件进行了优化,以乙酸乙酯为溶剂,甲醇沉淀高聚物离心后微孔滤膜过滤,乙腈-0.4%乙酸水(80∶20)为流动相,流速为1.0 m L/min,等度洗脱,采用Venusil MP C18(2)色谱柱,二极管阵列检测器(DAD),高效液相色谱法测定,枞酸和新枞酸的检测波长为240 nm,长叶松酸和左旋海松酸为270 nm,去氢枞酸为208 nm,以外标法定量。结果表明,5种树脂酸的定量下限为2.5~10.0 mg/kg,线性范围跨越两个数量级以上,连续6次进样的相对标准偏差(RSD)不大于3.4%,加标回收率为92.2%~103.6%。该方法操作简单、干扰因素少、分析速度快,满足食品包装用胶黏剂中5种树脂酸的检测要求。 展开更多

关键词 食品包装 胶黏剂 树脂酸 高效液相色谱

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杨树冰核细菌溃疡病寄主内源激素含量变化研究 被引量：5

15

作者 毛得奖 张爱霞 +1 位作者 朱亚玲 项存悌 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2005年第4期436-440,共5页

感染冰核细菌溃疡病的杨树树皮内源生长素(IAA)和玉米素(ZR)含量要高于未被感染的健壮杨树,而感染冰核细菌溃疡病的杨树树皮内源赤霉素(GA4)和脱落酸(ABA)含量要低于未被感染的健壮杨树。内源激素的变化最终导致感染杨树患病部位肿茎形... 感染冰核细菌溃疡病的杨树树皮内源生长素(IAA)和玉米素(ZR)含量要高于未被感染的健壮杨树,而感染冰核细菌溃疡病的杨树树皮内源赤霉素(GA4)和脱落酸(ABA)含量要低于未被感染的健壮杨树。内源激素的变化最终导致感染杨树患病部位肿茎形态结构的形成、略变活跃的生理状态以及抗寒能力的降低。 展开更多

关键词 冰核细菌 杨树冰核细菌溃疡病 植物内源激素

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Ⅰ型鸭肝炎病毒PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：6

16

作者 孙涛 肖西志 +4 位作者 徐彪 梁成珠 凌宗帅 张太翔 岳志芹 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期13-18,共6页

用RT-PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),建立Ⅰ型鸭肝炎病毒的快速检测方法。根据获得的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV I)RNA聚合酶基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了1对引物,RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以正常鸭... 用RT-PCR结合变性高效液相色谱技术(DHPLC),建立Ⅰ型鸭肝炎病毒的快速检测方法。根据获得的Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV I)RNA聚合酶基因序列,应用Primer Premier5.0软件设计了1对引物,RT-PCR扩增产物经变性高效液相色谱进行快速检测。以正常鸭胚尿囊液、正常鸭肝组织、鸭瘟病毒、番鸭细小病毒、鹅细小病毒、H5N1亚型禽流感病毒、鸭源新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒作对照进行特异性检测;将强毒株核酸稀释成不同梯度,做灵敏度检测;同时将该方法与病毒分离和荧光定量RT-PCR方法做人工感染样品的平行检测。结果表明,该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到4 pg的DHV I核酸模板,与荧光定量PCR检测结果一致。PCR-DHPLC对DHVⅠ强毒株人工感染鸭组织脏器的检测结果与荧光定量PCR检测结果的阳性检出率均为100%,对脑、脾、肺病料的检出率显著(P≤0.01)高于病毒分离,PCR-DHPLC与荧光RT-PCR检测方法相比较,两种方法检测DHVⅠ的符合率为100%。研究表明该方法可用于诊断Ⅰ型鸭肝炎病毒,是一种有效的新方法。 展开更多

关键词 Ⅰ型鸭肝炎病毒 RT-PCR 变性高效液相色谱

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O型口蹄疫病毒核酸检测标准样品的制备 被引量：3

17

作者 孙涛 梁成珠 +5 位作者 邓明俊 郑小龙 王群 雷质文 曹丙蕾 凌宗帅 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期45-50,共6页

利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒（FMDV）核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标... 利用基因克隆和体外转录技术制备O型口蹄疫病毒（FMDV）核酸检测标准样品.设计O型FMDV 3D基因的全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至PGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物.采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值.通过绘制荧光定量标准扩增曲线计算标准物质含量（拷贝数）,并根据委托单位的定值结果进行不确定度的估算.均一性结果显示瓶间差异小于5％,稳定试验表明室温20℃～25℃（相对湿度20％～50％）14 d,2℃～8℃3个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化.核酸标准物质定值为（1.260士0.485）×108 copies,可用作O型FMDV通用核酸检测的标准质控品. 展开更多

关键词 定值 O型口蹄疫病毒 实时定量RT-PCR 标准样品

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梅迪-维斯纳病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：3

18

作者 张太翔 凌宗帅 +8 位作者 孙涛 袁涛 徐彪 梁成珠 刘文鹏 孙军 王洪兵 肖越强 杨慧 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期163-165,共3页

为建立检测梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,本研究根据MVV核苷酸保守序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有MVV目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105～5.0×101拷贝范围内定... 为建立检测梅迪-维斯纳病毒(MVV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,本研究根据MVV核苷酸保守序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有MVV目的扩增片段的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果显示:5.0×105～5.0×101拷贝范围内定量PCR均有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为50拷贝。对羊的其他病毒核酸均无扩增反应。本研究建立的实时定量PCR方法,灵敏度高,特异性好,在MVV的快速检测中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 梅迪-维斯纳病毒 实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：4

19

作者 曹丙蕾 张群 +2 位作者 凌宗帅 邱洪凯 杨超然 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期1772-1776,共5页

采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His... 采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His标签蛋白)的重组N蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应。 展开更多

关键词 PRRSV 单克隆抗体 抗原位点 WESTERN-BLOT IFA

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禽肉产品中禽流感与新城疫多重PCR-DHPLC检测方法的建立 被引量：5

20

作者 孙涛 徐彪 +4 位作者 朱来华 张太翔 梁成珠 凌宗帅 岳志芹 《中国动物检疫》 CAS 2011年第3期41-45,51,共6页

应用多重RT-PCR反应(mRT-PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立禽产品中禽流感病毒和新城疫病毒的快速检测方法。以禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单相RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立多重RT-PCR(mRT-PCR)同... 应用多重RT-PCR反应(mRT-PCR)结合变性高效液相色谱(DHPLC)技术建立禽产品中禽流感病毒和新城疫病毒的快速检测方法。以禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单相RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感和新城疫,其PCR扩增产物经DHPLC技术进行快速检测分析后,检测极限分别达10-0.5ELD50/0.1mL和10-1.5ELD50/0.1mL。与普通凝胶电泳比较,敏感性高2个数量级。特异性试验表明,mRT-PCR-DHPLC仅检测到禽流感病毒与新城疫病毒,而对其他5种禽类病原体和SPF鸡胚尿囊液均未检测到阳性吸收峰。所建立的方法检测不同亚型禽流感病毒29株、不同来源及不同毒力的新城疫病毒16株,结果与实时荧光定量PCR检测结果完全一致;与病原分离法同时检测人工感染鸡的组织脏器,两种方法检测禽流感的符合率为94.4%(34/36),检测新城疫的符合率为95.4%(21/22)。病原分离法的检出率虽高于DHPLC方法,但经统计学分析两者差异不显著,两种方法同时对27份进口鸡胗样品与90份棉拭子样品进行检测,阴性符合率为100%,可适用于进出口禽肉产品的检测。 展开更多

关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 多重RT-PCR 变性高效液相色谱

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