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陆地棉钾转运体基因GhHAK5的序列特征及表达分析 被引量:6
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作者 晁毛妮 温青玉 +4 位作者 张志勇 胡根海 张金宝 王果 王清连 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期236-244,共9页
KUP/HAK/KT钾转运体基因家族对植物吸收钾离子发挥重要作用,鉴定和克隆棉花的钾转运体基因,对于改良棉花的钾吸收特性,提高棉花的产量和品质具有重要意义。基于已测序的陆地棉基因组序列,本研究通过同源克隆的方法鉴定到陆地棉钾转运体... KUP/HAK/KT钾转运体基因家族对植物吸收钾离子发挥重要作用,鉴定和克隆棉花的钾转运体基因,对于改良棉花的钾吸收特性,提高棉花的产量和品质具有重要意义。基于已测序的陆地棉基因组序列,本研究通过同源克隆的方法鉴定到陆地棉钾转运体基因GhHAK5,并以陆地棉品种百棉1号为材料对其CDS序列进行扩增。结果表明,GhHAK5基因的CDS全长为2451 bp,编码816个氨基酸,分子量和等电点分别为91.23 k D和8.15。GhHAK5蛋白具有KUP/HAK/KT家族基因的保守结构域"K-trans"(Pfam02705)和标志性序列GXXXGDXXXSPLY,并具有11个跨膜区。在进化上,GhHAK5蛋白与拟南芥AtHAK5亲缘关系最近,其次是与水稻的OsHAK5,它们同属Cluster I进化簇。亚细胞定位结果显示,GhHAK5是一个定位于质膜的蛋白,这与其主要作为钾转运子参与K+吸收的功能是一致的。GhHAK5基因在根中表达量最高,在茎、叶、花瓣、纤维和花萼中表达量很低,且其表达受外界低钾环境诱导。本研究结果为进一步了解GhHAK5基因的功能及培育钾高效棉花品种奠定了基础。 展开更多
关键词 陆地棉 钾转运体基因 亚细胞定位 低钾 基因表达
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陆地棉蔗糖转运蛋白基因家族的鉴定及表达分析 被引量:5
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作者 晁毛妮 王斌 +3 位作者 陈煜 张金宝 孙新凯 王清连 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1303-1312,共10页
蔗糖转运蛋白(SUT)在蔗糖从“源”到“库”的运输与分配过程中发挥着重要作用。该研究基于最新公布的陆地棉基因组数据,利用生物信息学和荧光定量PCR等方法,对陆地棉SUT基因家族进行全基因组鉴定,并对他们的表达特性进行系统分析。结果... 蔗糖转运蛋白(SUT)在蔗糖从“源”到“库”的运输与分配过程中发挥着重要作用。该研究基于最新公布的陆地棉基因组数据,利用生物信息学和荧光定量PCR等方法,对陆地棉SUT基因家族进行全基因组鉴定,并对他们的表达特性进行系统分析。结果显示:(1)在陆地棉基因组中,共鉴定到18个GhSUT基因(GhSUT1-GhSUT18),他们不均匀地分布在陆地棉11条染色体上。(2)GhSUT蛋白间序列一致性很高,均具有11~12个跨膜结构域,且都定位于质膜。(3)进化关系分析表明,陆地棉GhSUT蛋白主要分布在双子叶植物特有的SUT1亚组,以及单、双子叶植物共有的SUT2亚组和SUT4亚组,其中SUT1亚组成员最多,包含8个GhSUT基因。(4)位于同一亚组的GhSUT基因具有相似的内含子-外显子分布模式,不同亚组间GhSUT基因内含子/外显子数目差异很大。(5)转录组分析表明,GhSUT基因在表达水平上存在差异,GhSUT1和GhSUT10在被检测的组织不表达,GhSUT5、GhSUT14、GhSUT7和GhSUT16在被检测的组织表达量较低,其他GhSUT基因在被检测的组织具有较高的表达水平;另外,GhSUT基因的表达具有组织特异性,其中GhSUT2和GhSUT11主要在“源”和“库”器官中表达,GhSUT6和GhSUT15主要在“库”器官中表达,而GhSUT9和GhSUT18主要在纤维中表达。(6)荧光定量PCR分析表明,GhSUT2在“源”和“库”器官中均具有较高的表达水平,GhSUT6主要在“库”器官包括根、花瓣、纤维和茎中表达,在“源”器官(叶片)中表达量很低;GhSUT18主要在纤维中特异性高表达,在其他组织表达量很低。研究表明,实验验证结果与转录组分析结果相对一致。该研究结果为进一步研究SUT家族基因的功能提供了重要的基因信息,并为棉花产量的提高和纤维品质的改良奠定了理论依据。 展开更多
关键词 蔗糖转运蛋白(SUT) 基因家族 进化分析 组织表达 陆地棉
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陆地棉种子快速老化的活力变化研究 被引量:5
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作者 付远志 晁毛妮 +3 位作者 胡根海 张金宝 薛惠云 王清连 《种子》 北大核心 2018年第7期31-34,共4页
为探讨棉花种子老化过程中活力的变化规律,以百棉1号为试验材料,用50%甲醇人工加速老化方法处理棉花种子,经不同时间处理后,测定指标包括发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、苗高和鲜重。结果表明,甲醇处理能够使种子劣变,导致种子老... 为探讨棉花种子老化过程中活力的变化规律,以百棉1号为试验材料,用50%甲醇人工加速老化方法处理棉花种子,经不同时间处理后,测定指标包括发芽率、发芽势、发芽指数、活力指数、苗高和鲜重。结果表明,甲醇处理能够使种子劣变,导致种子老化,50%甲醇对于棉花种子的老化的影响在0~2h变化不大,3h之后随着时间延长,其老化程度迅速加大。 展开更多
关键词 棉花 发芽率 发芽势 发芽指数 活力指数
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陆地棉AGPase基因家族的鉴定及表达分析
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作者 晁毛妮 董洁 +4 位作者 胡根海 黄玲 张金宝 付远志 王清连 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2022年第4期299-312,共14页
【目的】腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(adenosine diphosphate-glucose pyrophosphorylase,AGPase)是淀粉生物合成途径的限速酶,在植物“源”、“库”器官淀粉的合成与积累过程中扮演着重要角色,然而棉花中AGPase基因家族的系统研究工作... 【目的】腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(adenosine diphosphate-glucose pyrophosphorylase,AGPase)是淀粉生物合成途径的限速酶,在植物“源”、“库”器官淀粉的合成与积累过程中扮演着重要角色,然而棉花中AGPase基因家族的系统研究工作尚未开展。【方法】基于已公布的陆地棉标准系TM-1基因组数据,利用生物信息学方法对陆地棉AGPase基因家族进行全基因组鉴定,并对该家族成员的理化性质、系统进化关系、基因结构、启动子区顺式作用元件进行分析。利用转录组数据和实时荧光定量聚合酶链式反应分析AGPase家族基因的组织表达特性和在非生物胁迫下的表达模式。【结果】在陆地棉基因组中,共鉴定到20个AGPase基因(GhAGP),不均匀地分布在16条染色体上。GhAGP基因包含12个大亚基基因和8个小亚基基因共2类,同一类GhAGP基因具有相似的保守基序和外显子-内含子结构。GhAGP基因启动子区含有多个与植物激素、非生物胁迫响应相关的顺式作用元件。组织表达分析结果显示,GhAGP基因具有不同的组织表达模式。非生物胁迫下的表达分析表明,多数GhAGP基因响应低温、高温、盐和干旱胁迫诱导表达,其中GhAGPL1和GhAGPL7参与棉花对多种逆境胁迫的响应。【结论】明确了陆地棉AGPase基因家族成员的分布特征、结构特征以及系统进化特征,初步揭示了该家族基因在棉花响应外界环境胁迫中的功能,可为棉花淀粉性状的遗传改良和抗逆育种提供重要的候选基因资源。 展开更多
关键词 腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPase) 基因家族 非生物胁迫 表达模式 陆地棉
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陆地棉酵母双杂交cDNA文库及VdSCP7诱饵载体的构建 被引量:7
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作者 韦春艳 秦腾飞 +5 位作者 董娜 李玉青 董涛 郭婷 孙家良 王清连 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期549-555,共7页
由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)引起的棉花黄萎病是制约我国棉花生产的首要病害,严重影响棉花的产量与品质。为研究棉花与黄萎病菌互作的分子机制,本研究以国审棉百棉1号为材料,提取被大丽轮枝菌侵染的棉花根部总RNA,检测质量并用D... 由大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)引起的棉花黄萎病是制约我国棉花生产的首要病害,严重影响棉花的产量与品质。为研究棉花与黄萎病菌互作的分子机制,本研究以国审棉百棉1号为材料,提取被大丽轮枝菌侵染的棉花根部总RNA,检测质量并用DNaseⅠ处理后,用RNA 5′末端的模板转换方法,即SMART技术合成双链cDNA,再经酶切、过柱纯化去除短片段后,连接至pGADT7载体上构建棉花cDNA文库。VdSCP7是定位于寄主细胞核的大丽轮枝菌效应因子,能激发棉花的免疫反应,增强棉花抗病性。以大丽轮枝菌cDNA为模板扩增VdSCP7,产物纯化后重组到载体pGBKT7上构建诱饵载体pGBKT7-SCP7。诱饵载体经酶切及测序鉴定后,转化到酵母AH109中,鉴定诱饵蛋白毒性并检测诱饵载体是否存在自激活活性。结果表明,获得了库容量为2×10^(6) CFU的棉花cDNA文库,文库片段多样性良好,文库重组率约94%,质粒文库滴度约2.0×10^(9 )CFU·mL^(-1),满足酵母双杂交cDNA文库构建要求。酶切及测序结果表明,诱饵载体pGBKT7-SCP7构建成功且经过鉴定后无毒性、无自激活活性。本研究结果为棉花抗黄萎病基因的筛选及VdSCP7和棉花互作机制的解析奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花 酵母双杂交文库 诱饵载体 VdSCP7 大丽轮枝菌
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