半胱胺在反刍动物中的应用 被引量：2

1

作者 谢佳喜 李平 +1 位作者 王静 李宏基 《江西农业学报》 CAS 2009年第5期118-120,共3页

半胱胺是辅酶A分子的组成部分,是动物体内的生物活性物质,在促进动物生长发育、提高动物生产性能等方面有很好的效果,且具有适用范围广、价格低廉、使用方便等优点,可作为反刍动物一种较为理想的饲料添加剂应用于生产。综述了半胱胺在... 半胱胺是辅酶A分子的组成部分,是动物体内的生物活性物质,在促进动物生长发育、提高动物生产性能等方面有很好的效果,且具有适用范围广、价格低廉、使用方便等优点,可作为反刍动物一种较为理想的饲料添加剂应用于生产。综述了半胱胺在反刍动物中的应用效果和存在的问题。 展开更多

关键词 半胱胺 饲料添加剂 反刍动物 应用

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黄芪多糖对内毒素诱发奶牛实验性乳腺炎影响初探 被引量：1

2

作者 钟凯 杨国宇 +2 位作者 王艳玲 邹思湘 陈伟华 《家畜生态学报》 2007年第5期57-61,共5页

选择同处于泌乳后期、日均产奶量相当的荷斯坦奶牛3头。每天早上挤奶后,于右后乳区经过乳头管灌注黄芪多糖20mL,左后乳区注入20mL生理盐水作为对照,连续10d。第11d早上挤奶后,两侧乳区均灌注含有100μg大肠杆菌内毒素的生理盐水10mL。... 选择同处于泌乳后期、日均产奶量相当的荷斯坦奶牛3头。每天早上挤奶后,于右后乳区经过乳头管灌注黄芪多糖20mL,左后乳区注入20mL生理盐水作为对照,连续10d。第11d早上挤奶后,两侧乳区均灌注含有100μg大肠杆菌内毒素的生理盐水10mL。分别于灌注黄芪多糖前、灌注内毒素前1h及灌注后3、6、9、12、24h采集两个乳区的乳样进行指标测定。试验结果表明,与灌注内毒素前相比,灌注PSS的对照乳区乳中的N—乙酰—β—D—氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活力在注入内毒素后9h时达到峰值(12.65U/mg protein),24h时乳中NAGase活力下降到灌注内毒素前的水平(P>0.05);而施用了APS的试验乳区,在注入内毒素后,乳中的NAGase活力6h时达到峰值(16.79U/mg protein),9h时乳中NAGrise活力已下降到灌注内毒素以前的水平(P>0.05)。总抗氧化能力(T—AOC)的测定结果表明,奶牛乳导管注入内毒素后,两种处理的乳区乳中的总抗氧化能力显著下降(P<0.05),两种处理的乳区乳之间比较无显著差异(P>0.05)。 展开更多

关键词 黄芪多糖 奶牛 乳腺炎 内毒素

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猪Mighty基因的克隆与组织表达分析 被引量：7

3

作者 张志强 李宏基 +6 位作者 王伟杰 韩立强 王静 武宇晓 臧猛 台玉磊 杨国宇 《江西农业学报》 CAS 2009年第2期1-4,共4页

Mighty基因是在骨骼肌中发现的一个新颖的肌形成前期因子。基于电子延伸序列,本试验成功克隆出了Mighty基因,其全长874 bp,开放阅读框为579 bp,编码有193个氨基酸,提交GenBank(EU559709)。同时,试验采取半定量RT-PCR法,以18S rRNA为内标... Mighty基因是在骨骼肌中发现的一个新颖的肌形成前期因子。基于电子延伸序列,本试验成功克隆出了Mighty基因,其全长874 bp,开放阅读框为579 bp,编码有193个氨基酸,提交GenBank(EU559709)。同时,试验采取半定量RT-PCR法,以18S rRNA为内标,研究了Mighty基因在仔猪18个组织中的分布和mRNA的表达水平。 展开更多

关键词 MIGHTY 猪 RT—PCR 基因克隆 组织表达 分布

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猪KISS-1基因克隆、序列分析 被引量：7

4

作者 臧猛 晁利刚 +4 位作者 张志强 台玉磊 王静 武宇晓 杨国宇 《江西农业学报》 CAS 2008年第11期5-7,共3页

在猪的不同组织中克隆KISS-1基因,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;结果:克隆的猪KISS-1基因与牛、人、大鼠、小鼠同源性分别为81.0%、76.8%、71.4%、72.4%;克隆了猪... 在猪的不同组织中克隆KISS-1基因,提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化E.coliDH5α,检测阳性克隆并测序;结果:克隆的猪KISS-1基因与牛、人、大鼠、小鼠同源性分别为81.0%、76.8%、71.4%、72.4%;克隆了猪KISS-1基因全长并注册GenBank(Accession.EU934235),猪KISS-1基因在多种组织中表达。 展开更多

关键词 猪 KISS-1基因 GPR54 克隆 序列分析 组织分布

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猪神经介素B和受体基因的克隆与组织分布 被引量：3

5

作者 王静 李宏基 +6 位作者 王伟杰 武宇晓 李平 张志强 台玉磊 臧猛 杨国宇 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第11期126-130,共5页

基于电子延伸序列,克隆并分析了猪神经介素B(NMB)和受体(NMBR)基因。猪NMBcDNA克隆片段长度为567 bp,开放阅读框架长度为366 bp,编码121个氨基酸。NMBR cDNA克隆片段长度为1 194 bp,开放阅读框架长度为1 173 bp,编码390个氨基酸。同源... 基于电子延伸序列,克隆并分析了猪神经介素B(NMB)和受体(NMBR)基因。猪NMBcDNA克隆片段长度为567 bp,开放阅读框架长度为366 bp,编码121个氨基酸。NMBR cDNA克隆片段长度为1 194 bp,开放阅读框架长度为1 173 bp,编码390个氨基酸。同源分析表明,猪NMB的核酸序列与牛、人、小鼠和大鼠的同源性分别为87.1%,85.2%,78.1%和76.6%,氨基酸序列的同源性分别为81%,74.4%,70.2%和70.1%;NMBR的核酸序列与牛、人、小鼠和大鼠的同源性分别为91%,89%,84.2%和83.6%,氨基酸序列的同源性分别为92.3%,90.3%,86.9%和86.4%。组织分布结果显示,猪NMB在多种组织均有分布,NMBR仅分布在大脑。克隆的猪NMB和受体基因分别注册GenBank(EU375564和EU670045)。 展开更多

关键词 猪 NMB 受体 克隆 序列分析 组织分布

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牛乳汁中葡萄糖转运基因的表达 被引量：3

6

作者 李平 李宏基 +3 位作者 王静 闫威 谢佳喜 王月影 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2009年第3期4-7,共4页

以牛初乳和末乳为研究对象,利用乳汁体细胞的分子生物学技术平台,对牛乳汁中葡萄糖转运基因的表达进行研究。结果表明,初乳和末乳中均有GAT-(1,4)和SGLT-1表达,且初乳中的表达高于末乳;GLUT-1只在末乳中有表达,初乳中不表达。提示乳腺... 以牛初乳和末乳为研究对象,利用乳汁体细胞的分子生物学技术平台,对牛乳汁中葡萄糖转运基因的表达进行研究。结果表明,初乳和末乳中均有GAT-(1,4)和SGLT-1表达,且初乳中的表达高于末乳;GLUT-1只在末乳中有表达,初乳中不表达。提示乳腺细胞葡萄糖的摄取方式与泌乳阶段相关,初乳期乳腺合成乳糖的作用高于末乳期乳腺。 展开更多

关键词 葡萄糖转运基因 乳汁体细胞 初乳 末乳

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乳腺分泌物中体细胞的研究进展 被引量：7

7

作者 钟凯 王艳玲 杨国宇 《中国畜牧兽医》 CAS 2006年第12期39-42,共4页

不同物种的乳腺分泌物中含有的细胞成分被称为体细胞,其中包括淋巴细胞、白细胞、巨噬细胞和上皮细胞。物种、乳腺感染情况、不同生理阶段和饲养管理条件等因素均会影响乳中的体细胞数量和细胞类型。近年来,乳中体细胞得到了人们的关注... 不同物种的乳腺分泌物中含有的细胞成分被称为体细胞,其中包括淋巴细胞、白细胞、巨噬细胞和上皮细胞。物种、乳腺感染情况、不同生理阶段和饲养管理条件等因素均会影响乳中的体细胞数量和细胞类型。近年来,乳中体细胞得到了人们的关注和深入研究,显示出广阔的应用前景。人们利用从初乳和常乳中得到的乳腺上皮细胞已经成功进行了乳腺细胞的原代培养和建立了乳腺细胞系,为乳生成、被动免疫转移和乳腺癌的研究提供了良好平台。体细胞中提取的RNA代表了乳腺组织的基因表达,因此为研究乳腺组织的基因表达提供了方便、良好的来源。 展开更多

关键词 乳腺分泌物 体细胞 上皮细胞 被动免疫转移 乳腺细胞系

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斑点免疫金渗滤法检测抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性研究 被引量：4

8

作者 李岩 李宏基 +2 位作者 韩立强 王静 杨国宇 《化学与生物工程》 CAS 2008年第2期32-34,共3页

采用斑点免疫金渗滤法对抗乳铁蛋白多克隆抗体特异性进行检测。结果表明金探针具有很强的选择性,斑点免疫金渗滤法能准确快速地检测出多克隆抗体的特异性。

关键词 斑点免疫金渗滤法 抗乳铁蛋白多克隆抗体 特异性 检测

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CD147基因在家兔肠道的克隆与结构预测 被引量：2

9

作者 贾海丽 韩立强 +6 位作者 杨国宇 钟凯 郭豫杰 台玉磊 刘涛 李平 王艳玲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第1期93-96,共4页

基于电子延伸序列，克隆并分析兔CD147基因。采用兔十二指肠黏膜组织提取总RNA，进行RT-PCR反应，测序并进行结构预测。克隆的兔CD147基因包含一个完整的开放阅读框架，全长为810bp，编码由270个氨基酸残基组成的CD147前体蛋白，推导的... 基于电子延伸序列，克隆并分析兔CD147基因。采用兔十二指肠黏膜组织提取总RNA，进行RT-PCR反应，测序并进行结构预测。克隆的兔CD147基因包含一个完整的开放阅读框架，全长为810bp，编码由270个氨基酸残基组成的CD147前体蛋白，推导的氨基酸序列信号肽为1～16个氨基酸。氨基酸序列与牛、人、褐鼠、野猪的同源性分别为62．5％，65．9％，59．5％和66．3％，三级结构预测表明CD147具有2个免疫球蛋白类似区。试验成功克隆了兔CD147基因，注册到GenBank（Accession．EU650668），并预测其三级结构，为进一步研究其生物学功能奠定基础。 展开更多

关键词 兔 CD147 克隆 序列分析 结构预测

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猪Chemerin和受体基因的克隆与组织分布 被引量：1

10

作者 王静 李宏基 +6 位作者 韩立强 王伟杰 武宁晓 张志强 台玉磊 臧猛 杨国宇 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期517-521,共5页

基于电子延伸序列,本试验克隆并分析了猪Chemerin和受体(ChemerinR)基因;各种组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliJM109,检测阳性克隆并测序;结果表明:猪Chemerin cDNA克隆片段为558 bp,开放阅读... 基于电子延伸序列,本试验克隆并分析了猪Chemerin和受体(ChemerinR)基因;各种组织提取总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T连接后转化E.coliJM109,检测阳性克隆并测序;结果表明:猪Chemerin cDNA克隆片段为558 bp,开放阅读框架为492 bp,编码有163个氨基酸。ChemerinR cDNA克隆片段为1 470 bp,开放阅读框架为1 092 bp,编码363个氨基酸。同源分析结果表明,猪Chemerin的核酸序列与牛、人和大鼠的同源性分别为86.7%、79.1%和73%,氨基酸序列的同源性分别为83.1%、83.4%和67.7%,ChemerinR的核酸序列与人、大鼠和小鼠的同源性分别为80.4%、77.6%和72.6%,氨基酸序列的同源性分别为88.2%、80.7%和79.3%。组织分布结果显示:猪Chemerin在多种组织均有分布,ChemerinR仅在膀胱、大脑和肌肉有分布。 展开更多

关键词 猪 CHEMERIN 受体 电子克隆 序列分析 组织分布

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乳汁中RNA提取方法的建立 被引量：2

11

作者 乔新安 朱彦彩 +4 位作者 范沛 都军霞 贾海丽 韩立强 杨国宇 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第1期77-79,共3页

用牛初乳作为试验材料,进行乳汁体细胞的提取及RNA的提取与扩增。结果显示:牛初乳中含有大量的体细胞(SCC约为20万/ml,活力约为60%),从体细胞中提取RNA,所提取的RNA完整性和纯度可以用来合成cDNA,管家基因GAPDH扩增条带正确,表明可以用... 用牛初乳作为试验材料,进行乳汁体细胞的提取及RNA的提取与扩增。结果显示:牛初乳中含有大量的体细胞(SCC约为20万/ml,活力约为60%),从体细胞中提取RNA,所提取的RNA完整性和纯度可以用来合成cDNA,管家基因GAPDH扩增条带正确,表明可以用合成的cDNA作为模板进行其它基因的扩增,为奶牛在基因工程方面的研究提供分子生物学技术平台。 展开更多

关键词 牛初乳 乳汁体细胞 RNA提取

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小鼠催乳素释放肽的初步克隆 被引量：1

12

作者 朱河水 都军霞 +2 位作者 王新卫 王月影 王艳玲 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第6期199-200,共2页

为克隆并分析小鼠催乳素释放肽基因,从小鼠下丘脑提取总RNA,进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T连接后转化E.coli DH5α,检测阳性克隆并测序。测序结果表明,所得序列与大鼠催乳素释放肽编码区序列的相似指数为86.3%。克隆所得序列为小鼠催乳... 为克隆并分析小鼠催乳素释放肽基因,从小鼠下丘脑提取总RNA,进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T连接后转化E.coli DH5α,检测阳性克隆并测序。测序结果表明,所得序列与大鼠催乳素释放肽编码区序列的相似指数为86.3%。克隆所得序列为小鼠催乳素释放肽的基因片段。 展开更多

关键词 小鼠 催乳素释放肽 克隆 序列

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乳腺分泌细胞钙转运机制 被引量：2

13

作者 牛惠 钟凯 +1 位作者 郭豫杰 王月影 《江西农业学报》 CAS 2009年第6期117-119,共3页

依据钙转运的模式,综述了乳腺分泌细胞钙转运机制,阐明了参与钙转运过程的关键分子,为今后的研究提供了新思路。

关键词 乳腺分泌细胞 钙 转运模式

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绵羊Gastorkine-1基因的克隆与序列分析 被引量：1

14

作者 乔新安 杨国宇 +5 位作者 王艳玲 王月影 韩立强 朱彦彩 都军霞 范沛 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第1期38-40,共3页

基于电子延伸序列，克隆并分析了绵羊Gastorkine—1基因。提取皱胃黏膜组织总RNA，利用设计的引物进行RT-PCR，PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E．coli JM109感受态细胞，检测阳性克隆并测序。克隆的绵羊Gastorkine—1基因长619bp，编码... 基于电子延伸序列，克隆并分析了绵羊Gastorkine—1基因。提取皱胃黏膜组织总RNA，利用设计的引物进行RT-PCR，PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E．coli JM109感受态细胞，检测阳性克隆并测序。克隆的绵羊Gastorkine—1基因长619bp，编码185个氨基酸，与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为82．0％，48．8％，85．4％，96．9％，推测的氨基酸序列信号肽为1～20aa，BRICHOS结构域为54～150aa，结构特征与人、小鼠、猪、牛的Gastorkine-1相一致。 展开更多

关键词 绵羊 胃黏膜保护因子 克隆 序列分析

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地塞米松对小鼠脂肪组织中孤啡肽及其受体基因表达的影响研究 被引量：1

15

作者 陈福伟 李文林 +8 位作者 韩立强 王伟杰 李宏基 王月影 郭豫杰 鲁维飞 钟凯 林茂旺 杨国宇 《江西农业学报》 CAS 2010年第3期11-13,共3页

目的:探讨地塞米松对孤啡肽及其受体mRNA在小鼠附睾脂肪组织中表达的变化。方法:将12只雄性昆明小鼠,随机分为正常组和地塞米松组,分别采集其脂肪组织,用RT-PCR方法检测孤啡肽及其受体mRNA水平的变化。结果:与正常组相比,地塞米松组孤... 目的:探讨地塞米松对孤啡肽及其受体mRNA在小鼠附睾脂肪组织中表达的变化。方法:将12只雄性昆明小鼠,随机分为正常组和地塞米松组,分别采集其脂肪组织,用RT-PCR方法检测孤啡肽及其受体mRNA水平的变化。结果:与正常组相比,地塞米松组孤啡肽及其受体的mRNA表达水平明显下降(P<0.05)。结论:地塞米松可能抑制孤啡肽及其受体基因的活性和合成,对孤啡肽及其受体基因的表达可能具有强烈的下调作用。 展开更多

关键词 孤啡肽 孤啡肽受体 RT—PCR 地塞米松 脂肪组织

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妊娠和泌乳期大鼠血清激素水平的变化 被引量：1

16

作者 李海霞 李和平 +4 位作者 钟凯 郭豫杰 鲁维飞 刘涛 王月影 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第27期11780-11781,共2页

[目的]探讨大鼠血清糖代谢激素与生殖激素的关系及其与生殖周期活动的相关性。[方法]以妊娠中晚期和泌乳早中期的24只雌性处女SD大鼠和12只雄性SD大鼠为研究对象,用放射免疫法测定大鼠血清FSH、LH、胰岛素和胰岛素抗体的水平。[结果]FS... [目的]探讨大鼠血清糖代谢激素与生殖激素的关系及其与生殖周期活动的相关性。[方法]以妊娠中晚期和泌乳早中期的24只雌性处女SD大鼠和12只雄性SD大鼠为研究对象,用放射免疫法测定大鼠血清FSH、LH、胰岛素和胰岛素抗体的水平。[结果]FSH从妊娠中期到泌乳早期呈现先下降,再升高,后下降的趋势,泌乳中期降至最低,差异不显著;LH从妊娠中期到泌乳早期变化不大,从泌乳早期到泌乳中期有所上升,且差异显著;胰岛素和胰岛素抗体结合率从妊娠中期到妊娠晚期呈上升趋势,从妊娠晚期到泌乳早期急剧下降,泌乳早期降至最低,至泌乳中期迅速升至妊娠中晚期水平。[结论]大鼠血清胰岛素及其抗体与LH在妊娠和泌乳期的变化一致,与FSH的变化相反。 展开更多

关键词 大鼠 FSH LH 胰岛素 胰岛素抗体

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L-肉碱对母猪泌乳量及乳汁成分的影响 被引量：3

17

作者 林茂旺 杨国宇 +4 位作者 王伟杰 李卫华 冯君 都军霞 范沛 《养猪》 2007年第6期11-12,共2页

近年来的研究证实,对母猪补充L-肉碱能促进哺乳期仔猪的生长,但其作用机理尚不明确。本文结合近年来国内外的研究报道,从L-肉碱能促进母猪泌乳及其对乳汁成分影响方面分析,以阐明给母猪补充L-肉碱促进哺乳期仔猪生长的作用机理。

关键词 L-肉碱 泌乳量 乳汁成分

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乳铁蛋白纯化方法的优化 被引量：1

18

作者 李岩 李宏基 +2 位作者 韩立强 王静 杨国宇 《化学与生物工程》 CAS 2007年第11期38-40,共3页

将纯度为50%左右的乳铁蛋白溶液加入带羧甲基的弱酸性阳离子交换剂CM-Sepharose Fast Flow进行动态吸附,采用质量分数为1.6%和5%的NaCl溶液进行阶跃洗脱;并对层析过程和接样方法进行了优化。结果表明,经过重复层析和优化方法接样,乳铁... 将纯度为50%左右的乳铁蛋白溶液加入带羧甲基的弱酸性阳离子交换剂CM-Sepharose Fast Flow进行动态吸附,采用质量分数为1.6%和5%的NaCl溶液进行阶跃洗脱;并对层析过程和接样方法进行了优化。结果表明,经过重复层析和优化方法接样,乳铁蛋白纯度可达96.7%。 展开更多

关键词 乳铁蛋白 离子交换层析 阶跃洗脱

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荧光检测碱性磷酸酶活力方法的建立 被引量：1

19

作者 惠永华 韩立强 +1 位作者 杨国宇 王路 《化学与生物工程》 CAS 2008年第3期74-76,共3页

以4-甲基伞形酮磷酸酯为底物，利用动力学模式，建立了一种检测碱性磷酸酶活力的荧光法。确定了荧光检测的最佳条件为：激发波长为365nm，发射波长为449nm，作用时间为第2～6min，pH值为9，底物体积为100μL，底物缓冲溶液浓度为0．1mol... 以4-甲基伞形酮磷酸酯为底物，利用动力学模式，建立了一种检测碱性磷酸酶活力的荧光法。确定了荧光检测的最佳条件为：激发波长为365nm，发射波长为449nm，作用时间为第2～6min，pH值为9，底物体积为100μL，底物缓冲溶液浓度为0．1mol·L^-1。该法操作简便、快速。 展开更多

关键词 荧光法 碱性磷酸酶 活力

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绵羊黏膜趋化因子CCL28基因的克隆、序列分析与原核表达

20

作者 乔新安 李宏基 +4 位作者 王月影 朱彦彩 韩立强 杨国宇 王艳玲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期842-847,共6页

利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点的CCL28片段... 利用同源序列克隆原理设计1对克隆引物,从绵羊结肠黏膜组织提取mRNA,通过RT-PCR获得CCL28基因,将PCR产物克隆、测序,并进行序列分析;再根据克隆的序列设计1对表达引物,用PCR法从重组克隆载体中扩增出含BamHⅠ/XhoⅠ酶切位点的CCL28片段,双酶切后亚克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达载体pGEX-CCL28,转化宿主菌E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE鉴定。克隆的绵羊CCL28基因包含完整的开放阅读框,克隆片段长444 bp,ORF为387 bp,编码129个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛该基因的同源性分别为76.4%、61.4%、84.3%和92.9%,推测的氨基酸序列与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为76%、63%、84%和93%,表达的融合蛋白分子量约为39 ku,并以包涵体形式存在。为下一步研究绵羊CCL28的生物学功能奠定基础。 展开更多

关键词 绵羊 黏膜相关上皮趋化因子 分子克隆 序列分析 原核表达

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