白洋淀上游流经城区前后细菌群落结构和功能与环境因子的关联研究 被引量：1

1

作者 王力源 周贺 +2 位作者 秦梦 史密伟 郑翔 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期333-348,共16页

细菌群落作为水生态环境的重要组成部分,其结构和功能研究可为水生态环境污染监测与治理提供技术支撑。通过对流经城区白洋淀上游河流细菌群落的高通量测序和环境因子的监测,分析城市环境因素对白洋淀上游水质的影响,并深入探究细菌群... 细菌群落作为水生态环境的重要组成部分,其结构和功能研究可为水生态环境污染监测与治理提供技术支撑。通过对流经城区白洋淀上游河流细菌群落的高通量测序和环境因子的监测,分析城市环境因素对白洋淀上游水质的影响,并深入探究细菌群落功能与污染物动态变化的关系。结果表明,城市环境对白洋淀上游生态环境的影响较大,上、中、下游的水质等级差异显著。城区中汇入的各类污染物不仅影响细菌群落结构,使得污染严重流域高丰度的细菌种群减少和细菌群落多样性增加;还与细菌群落的硝酸盐和磷酸盐代谢功能密切相关。同时,河流虽汇集了城区的各类污染物,但下游的细菌群落结构和部分氮、磷代谢功能均有恢复为上游水平的趋势。此外,高丰度的黄杆菌属(Flavobacterium)受各类菌群和污染物的抑制作用较大,但验证其与NO-3-N污染物具有较强的相关性。对白洋淀上游流经城区前后细菌群落结构和功能与环境因子动态变化的关联研究,为白洋淀流域生态环境保护与污染治理提供理论依据。 展开更多

关键词 白洋淀 上游 流经城区 细菌群落 结构与功能 动态变化

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絮凝技术在毕赤酵母发酵液固液分离中的应用研究 被引量：1

2

作者 罗同阳 董聪 +4 位作者 王玥 高庆华 贾振华 王庆庆 刘小娜 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第12期77-81,共5页

试验旨在采用絮凝技术对毕赤酵母发酵液进行固液分离。以菌体絮凝率和酶活回收率为测定指标,采用单因素试验和正交试验,研究不同絮凝剂对重组毕赤酵母表达葡萄糖氧化酶发酵液絮凝效果的影响。结果显示,毕赤酵母发酵液最佳絮凝工艺为先加... 试验旨在采用絮凝技术对毕赤酵母发酵液进行固液分离。以菌体絮凝率和酶活回收率为测定指标,采用单因素试验和正交试验,研究不同絮凝剂对重组毕赤酵母表达葡萄糖氧化酶发酵液絮凝效果的影响。结果显示,毕赤酵母发酵液最佳絮凝工艺为先加入2.0%聚合氯化铝,再加入1.0%硅藻土,最后加入0.2%阳离子型聚丙烯酰胺,且聚合氯化铝母液添加体积不超过发酵液总体积的20%。在此条件下,发酵液菌体絮凝率达90%以上,葡萄糖氧化酶的酶活回收率达85%以上。研究表明,采用絮凝技术能够对毕赤酵母发酵液进行固液分离,该方法有利于提高酶的生产效益,从而促进饲用酶制剂行业发展。 展开更多

关键词 絮凝技术 毕赤酵母 固液分离 葡萄糖氧化酶

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利用制革肉渣废弃物发酵生产饲用蛋白酶的研究 被引量：1

3

作者 刘春卯 赵露 +5 位作者 魏治静 吴芳彤 曹倩荣 郑翔 秦梦 王力源 《饲料工业》 CAS 北大核心 2024年第13期83-90,共8页

制革肉渣固体废弃物是一类富含蛋白质的废弃物,长期堆放易腐败变质,污染环境,因此如何开发其价值是目前制革企业比较关注的问题。本研究采用生物酶法将制革肉渣固体废弃物制备成肉渣水解液,通过试验确定肉渣水解液干粉的制备工艺,设定... 制革肉渣固体废弃物是一类富含蛋白质的废弃物,长期堆放易腐败变质,污染环境,因此如何开发其价值是目前制革企业比较关注的问题。本研究采用生物酶法将制革肉渣固体废弃物制备成肉渣水解液,通过试验确定肉渣水解液干粉的制备工艺,设定进风口温度为140℃、流速为17 r/min,肉渣水解液干粉可获得最大收率。此干粉可作为氮源用于饲用蛋白酶的发酵生产。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法,筛选出肉渣水解液干粉的最佳添加比例,同时优化培养基。结果表明,肉渣水解液干粉作为氮源时,基因工程菌株WB800N/pHT43-npr产酶的最佳培养基为糊精30 g/L,肉渣水解液干粉20 g/L,MnSO_(4) 26 mg/L,CaCl_(2) 0.05 g/L,蛋白酶发酵活性可达1 203.5 U/mL,与基础发酵培养基相比,酶活性提高了约10%。这为制革肉渣固体废弃物的资源化利用开辟了新的途径。 展开更多

关键词 制革肉渣固体废弃物 基因工程菌株 喷雾干燥 发酵条件优化 资源化利用

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基于复合诱导剂诱导枯草工程菌产饲用蛋白酶的响应面优化研究

4

作者 秦梦 王力源 +5 位作者 刘春卯 赵露 周贺 张翔 张译元 郑翔 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第16期112-117,共6页

试验为建立一种采用乳糖和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)复合诱导剂代替IPTG作为诱导剂进行枯草芽孢杆菌产饲用中性蛋白酶发酵工艺。通过初步筛选获得最佳诱导剂配比为0.025‰IPTG和11.25 g/L乳糖,在原有工艺下发酵得到饲用蛋白酶活性... 试验为建立一种采用乳糖和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)复合诱导剂代替IPTG作为诱导剂进行枯草芽孢杆菌产饲用中性蛋白酶发酵工艺。通过初步筛选获得最佳诱导剂配比为0.025‰IPTG和11.25 g/L乳糖,在原有工艺下发酵得到饲用蛋白酶活性为1066.09 U/mL;经过单因素试验和响应面优化发酵工艺,获得最佳发酵工艺条件为初始p H值7.5、培养温度36.5℃、诱导剂添加时间3.2 h、发酵时间45 h,中性蛋白酶活性为1398.54 U/mL,提高至优化前的1.31倍。研究表明,复合剂诱导条件比IPTG单独诱导更复杂,在蛋白酶的规模化生产中具有潜在的工业应用价值,为蛋白酶制剂在饲料添加剂的应用提供了基础。 展开更多

关键词 响应面优化 蛋白酶 联合诱导 乳糖

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激发子蛋白SbES高密度重组表达和粉剂研发

5

作者 杨扬 陈奕鹏 +3 位作者 王茂存 章淑艳 刘先宝 黄贵修 《热带农业科学》 2025年第2期64-71,共8页

激发子蛋白SbES是帚枝霉属内生真菌HND5产生的一个外泌丝氨酸蛋白酶,可有效诱导多种植物产生抗病性,具有可商品化开发为植物蛋白农药的潜力。为建立该蛋白的高密度发酵及粉剂制备工艺,利用已构建好的SbES蛋白毕赤酵母异源表达菌株Pichia... 激发子蛋白SbES是帚枝霉属内生真菌HND5产生的一个外泌丝氨酸蛋白酶,可有效诱导多种植物产生抗病性,具有可商品化开发为植物蛋白农药的潜力。为建立该蛋白的高密度发酵及粉剂制备工艺,利用已构建好的SbES蛋白毕赤酵母异源表达菌株Pichia pastoris X-33(pRICZA::SbES),对该蛋白的高密度发酵条件、菌体破碎条件及适宜喷雾干燥条件进行优化。结果表明,在测试范围内,SbES蛋白毕赤酵母异源表达菌株在pH 6.5、温度28℃和菌体浓度180 g/L条件下诱导108 h,可获得最大表达量;目标异源表达菌株15%菌体浓度,在300 W功率下超声40 min,可获得最大的SbES蛋白量;SbES蛋白最适的助干剂为麦芽糊精,在5%麦芽糊精,干燥塔出风口温度为140℃的条件下干燥,SbES蛋白可保存最大的酶活性。本研究结果为激发子蛋白SbES的商品化开发提供了研究基础。 展开更多

关键词 激发子蛋白 异源表达 高密度发酵 粉剂制备 植物蛋白农药

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葡萄糖氧化酶在动物生产中的应用 被引量：1

6

作者 王玥 赵紫茵 +3 位作者 姚子豪 张飞燕 高庆华 唐兆宏 《饲料研究》 北大核心 2025年第5期163-168,共6页

葡萄糖氧化酶(GOD)属于葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(GMC)家族,能够利用氧气和β-D-葡萄糖氧化为葡萄糖酸(GA),同时生成过氧化氢(H_(2)O_(2)),已被广泛应用于畜牧业、生物医药和食品工业等多个领域。在动物生产中,GOD作为一种新型饲料添... 葡萄糖氧化酶(GOD)属于葡萄糖-甲醇-胆碱氧化还原酶(GMC)家族,能够利用氧气和β-D-葡萄糖氧化为葡萄糖酸(GA),同时生成过氧化氢(H_(2)O_(2)),已被广泛应用于畜牧业、生物医药和食品工业等多个领域。在动物生产中,GOD作为一种新型饲料添加剂,不仅具有促生长、抗生素替代潜力,而且在增强机体抗氧化能力、维持肠道菌群稳态、改善肠道健康、提高生产性能、增强免疫力等方面发挥重要作用。文章综述了GOD的结构、催化机理和理化性质及其对动物生长调节作用的主要机制,以及近年来GOD在家禽、猪和反刍动物生产中的应用现状,并对其开发与利用进行了展望,以推动GOD在畜牧业中的高效利用。 展开更多

关键词 葡萄糖氧化酶 作用机制 动物生产

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基于隶属度综合分析法从制革固废中回收羊毛纤维 被引量：3

7

作者 曹倩荣 吴芳彤 +1 位作者 刘春卯 郑翔 《皮革科学与工程》 CAS 北大核心 2024年第1期24-31,共8页

为提高制革固废中毛纤维的利用价值,本实验将隶属度综合分析法与响应面优化法相结合,建立了酶法回收毛纤维的工艺。运用隶属度综合分析法对不同酶法回收的羊毛纤维白度、断裂强度、断裂伸长率和酶解液总蛋白、总糖含量进行赋权计算,以... 为提高制革固废中毛纤维的利用价值,本实验将隶属度综合分析法与响应面优化法相结合,建立了酶法回收毛纤维的工艺。运用隶属度综合分析法对不同酶法回收的羊毛纤维白度、断裂强度、断裂伸长率和酶解液总蛋白、总糖含量进行赋权计算,以获得的综合评分S为响应值,运用响应面优化法对酶制剂配比进行优化,最终获得羊毛纤维的回收工艺。具体为:含毛制革固废80℃高温水浴1 h,冷却后浸入含有胶原酶2.5 g/L、胰蛋白酶2.5 g/L、菠萝蛋白酶5 g/L的溶液当中,以NaOH溶液调节pH至7.0,40℃酶解5 h,过滤洗涤,提取毛纤维。经测定提取的毛纤维白度61%,纤维断裂伸长率33%,较原毛均有所提升,纤维断裂强度1.08 cN/dteX,为原毛的96%。该研究为制革含毛固废的高值化利用提供了理论参考。 展开更多

关键词 隶属度 响应面 毛纤维 制革固废

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蛋白酶枯草芽孢杆菌工程菌株WB800N/pHT43-npr-PrsA的发酵工艺优化 被引量：1

8

作者 曹倩荣 刘春卯 +2 位作者 郑翔 贾振华 吴芳彤 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第14期100-106,共7页

试验旨在优化枯草芽孢杆菌工程菌株WB800N/pHT43-npr-PrsA的发酵蛋白酶活性,为国内饲用蛋白酶企业提供技术支持。试验对发酵过程进行葡萄糖含量和比消耗速率监测,确定碳源、氮源对该菌株葡萄糖消耗的动态影响。通过单因素和响应面试验... 试验旨在优化枯草芽孢杆菌工程菌株WB800N/pHT43-npr-PrsA的发酵蛋白酶活性,为国内饲用蛋白酶企业提供技术支持。试验对发酵过程进行葡萄糖含量和比消耗速率监测,确定碳源、氮源对该菌株葡萄糖消耗的动态影响。通过单因素和响应面试验对发酵培养基成分进行优化。结果显示:以0~10 h菌体OD_(600nm) 值为参数优化发酵培养基,以促进菌体生长,获得更高菌体量。10 h以后以酵母粉5 g/L、蛋白胨70 g/L进行补料,延长稳定期,以达到最大单位酶活性。优化发酵培养基的培养条件为:酵母粉60 g/L、蛋白胨30 g/L、消旋葡萄糖10 g/L、MgSO_(4) 3 g/L,发酵8 h时,添加0.5‰异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)和2‰蛋白酶抑制剂,最终发酵蛋白酶活性为1156 U/mL。研究表明,延迟稳定期能够提高培养基中蛋白胨含量,有利于提高菌体对葡萄糖比消耗速率,蛋白胨对菌体适应周围环境有促进作用,发酵过程中维持葡萄糖浓度处于较低的水平,可以有效避免乙酸生成,促进菌体生长和提高产酶效能,使菌体对底物的消耗保持最旺盛状态。 展开更多

关键词 蛋白酶 工程菌株 酶活性 发酵工艺

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金银花及其提取物的功能及其在动物生产中的应用

9

作者 王玥 刘丽娜 +3 位作者 张天亮 纪佳星 贾振华 高庆华 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第11期170-174,共5页

金银花是一种常用的药食同源植物,富含多种药理活性成分,主要包括黄酮类、有机酸类、挥发油类、环烯醚萜苷类等,在抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、消炎、保肝、护肝及调节免疫等方面发挥重要作用。金银花及其提取物可以提高动物生长性能,增强... 金银花是一种常用的药食同源植物,富含多种药理活性成分,主要包括黄酮类、有机酸类、挥发油类、环烯醚萜苷类等,在抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、消炎、保肝、护肝及调节免疫等方面发挥重要作用。金银花及其提取物可以提高动物生长性能,增强机体免疫力和抗氧化能力,防治疾病,维护肠道健康和保证畜产品质量。文章主要综述了金银花及其提取物的主要化学成分、生物功能及其在家禽、家畜和水产养殖生产中的应用现状,为金银花及其提取物在动物生产中的研究及应用提供参考。 展开更多

关键词 金银花 生物学功能 动物生产

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基于联合策略提高FAD依赖的葡萄糖脱氢酶的酵母表达 被引量：2

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作者 董聪 高庆华 +2 位作者 王玥 罗同阳 王庆庆 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期316-324,共9页

为了提高了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的表达量,本研究通过G418浓度梯度筛选,构建含有不同分子伴侣基因拷贝数共表达毕赤酵母重组菌株实现高效表达,优化摇瓶发酵条件。经G418浓度梯度筛选,得到1株高产重组菌,在此基础上分别构建... 为了提高了FAD依赖的葡萄糖脱氢酶在毕赤酵母中的表达量,本研究通过G418浓度梯度筛选,构建含有不同分子伴侣基因拷贝数共表达毕赤酵母重组菌株实现高效表达,优化摇瓶发酵条件。经G418浓度梯度筛选,得到1株高产重组菌,在此基础上分别构建了HAC1、Ero1、PDI三种分子伴侣1-4拷贝共表达重组菌株,RT-qPCR检测结果符合预期。试管水平酶活表明3拷贝PDI、3拷贝HAC1和2拷贝Ero1分别比1拷贝提高83%、77%和51%。总体比较而言,共表达3拷贝PDI的重组菌株酶活最高,比对照提高198%,优化摇瓶发酵条件表明培养基初始pH 7.0,摇瓶装液量50 mL,甲醇添加量1%,诱导温度28℃时,效果最佳。通过抗生素浓度筛选、增加分子伴侣的基因拷贝数策略可以提高FAD-GDH在毕赤酵母中的发酵产量。 展开更多

关键词 FAD依赖的葡萄糖脱氢酶 毕赤酵母 抗生素梯度筛选 分子伴侣多拷贝 发酵条件

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密码子优化的吡喃糖氧化酶基因在毕赤酵母中的表达 被引量：1

11

作者 王玥 高庆华 +2 位作者 董聪 罗同阳 王庆庆 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期269-277,共9页

吡喃糖氧化酶(pyranose oxidase,PROD,简称P2O)在木质素降解、碳水化合物的生物转化合成中具有重要作用,还应用于生物燃料电池、生物传感器以及临床诊断分析中。本实验室进行了吡喃糖氧化酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究,为以... 吡喃糖氧化酶(pyranose oxidase,PROD,简称P2O)在木质素降解、碳水化合物的生物转化合成中具有重要作用,还应用于生物燃料电池、生物传感器以及临床诊断分析中。本实验室进行了吡喃糖氧化酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究,为以后吡喃糖氧化酶的工业化高效生产提供理论依据。利用生物技术方法,基于毕赤酵母密码子偏好性优化吡喃糖氧化酶基因密码子。通过基因外源表达技术构建吡喃糖氧化酶重组毕赤酵母GS115菌株以实现吡喃糖氧化酶的高效表达,并对重组吡喃糖氧化酶的酶学性质进行研究。优化高产重组菌株的发酵条件,在10 L发酵罐中进行扩大培养。结果显示,吡喃糖氧化酶密码子优化后,其在毕赤酵母中实现了高效表达。在10 L发酵罐经过132 h诱导表达后,酶活达220 U/mL。酶学性质研究发现:重组吡喃糖氧化酶最适作用温度为55℃,在不超过60℃条件下热稳定性良好。该酶作用的最适pH为6.5,在pH 5-9条件下,其相对酶活高于50%。P2O在较广的pH范围内均表现出较高的稳定性,尤其是对碱性条件有较强的耐性。金属离子Cu^(2+)对酶活的抑制作用较大。底物特异性检测结果显示,该重组酶的最适底物为D-葡萄糖。该研究成功构建了密码子优化的吡喃糖氧化酶的重组表达质粒pPIC9K-P2O,并在毕赤酵母中实现了高效表达。 展开更多

关键词 吡喃糖氧化酶 密码子优化 毕赤酵母 异源表达

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FAD依赖的葡萄糖脱氢酶多拷贝毕赤酵母菌株的构建及高效表达

12

作者 董聪 王玥 +2 位作者 罗同阳 高庆华 王庆庆 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2023年第4期18-25,共8页

通过体外多拷贝构建实现FAD依赖的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH)在毕赤酵母(Pichia pastoris)X33菌株中的高效表达。将前期构建的经密码子偏好性优化FAD-GDH基因插入到pPICZαA质粒中,通过同尾酶法酶切酶连构建含1~4个表达盒的重组表达质粒,分... 通过体外多拷贝构建实现FAD依赖的葡萄糖脱氢酶(FAD-GDH)在毕赤酵母(Pichia pastoris)X33菌株中的高效表达。将前期构建的经密码子偏好性优化FAD-GDH基因插入到pPICZαA质粒中,通过同尾酶法酶切酶连构建含1~4个表达盒的重组表达质粒,分别电转至毕赤酵母X33中,成功筛选到各种重组菌株。qRT-PCR测定结果表明,载体所含的表达盒数目与嵌合进毕赤酵母基因组中的GDH基因拷贝数之间存在正相关关系。重组菌在试管水平用甲醇诱导72 h,酶活达到最高,其中4拷贝的转化子表达水平最高;选择1拷贝和4拷贝转化子进行10 L发酵罐扩大培养,1拷贝菌株诱导108 h酶活达到最高697.125 U/mL,4拷贝菌株诱导132 h酶活达到最高1063.279 U/mL,比1拷贝酶活提高52.52%。结果表明通过增加目的基因拷贝数策略有助于提高FAD-GDH的表达量,为其进一步扩大生产提供参考。 展开更多

关键词 FAD依赖的葡萄糖脱氢酶 多拷贝 重组菌株 高效表达 毕赤酵母

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