青霉素酰化酶产生菌的分子育种及其产酶条件的研究 被引量：5

1

作者 杨秀琴 吴芝清 +4 位作者 宋陆铧 王彦芳 张贺迎 汪丽珠 吴经才 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1989年第6期393-398,共6页

用EcoR1分别酶切质粒pACYC184和Ec108染色体,经连接、转化、筛选,得到7株克隆了青霉素酰化酶基因的转化体-C600(pPAHD1-7)。重组质粒pPAHD1在不同受体细胞内的酶活表达水平相差20倍。据此构建的工程菌其青霉素酰化酶活比出发菌株提高4～... 用EcoR1分别酶切质粒pACYC184和Ec108染色体,经连接、转化、筛选,得到7株克隆了青霉素酰化酶基因的转化体-C600(pPAHD1-7)。重组质粒pPAHD1在不同受体细胞内的酶活表达水平相差20倍。据此构建的工程菌其青霉素酰化酶活比出发菌株提高4～5倍。本文还对工程菌的产酶条件进行了研究。 展开更多

关键词 青霉素酰化酶 分子育种 产酶条件

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溶解氧浓度和补加苯乙酸对大肠杆菌工程菌青霉素酰化酶合成的影响 被引量：3

2

作者 杨秀琴 张贺迎 吴经才 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期251-255,共5页

用2升全自动发酵罐观察大肠杆菌工程菌Ec108(pPAHD1)青霉素酰化酶(Penicillin-G-acylase)基因的表达,发现溶解氧浓度对生物量的扩增和基因产物的积累有显著的影响。对数前期扩增生物量时需要相对高的溶解氧,以不低于相对饱和度80％为宜... 用2升全自动发酵罐观察大肠杆菌工程菌Ec108(pPAHD1)青霉素酰化酶(Penicillin-G-acylase)基因的表达,发现溶解氧浓度对生物量的扩增和基因产物的积累有显著的影响。对数前期扩增生物量时需要相对高的溶解氧,以不低于相对饱和度80％为宜;而产酶阶段则要求相对低的溶解氧环境,可保持相对饱和度5％。按溶解氧峰形变化特征,指导补加苯乙酸的时机;以尖峰出现的间距,决定补加剂量,采用每次补加0.03～0.05％为佳。在罐压0.3kg/cm2,通气比1:0.5及恒温条件下,借助上述手段,最高酶活水平已达342u/100ml(NIPAB法),比摇瓶发酵酶活提高1.8倍。 展开更多

关键词 青霉素酰化酶 溶解氧 诱导剂

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木耳原生质体融合新种特性研究 被引量：3

3

作者 李育岳 汪麟 +2 位作者 杨晓仙 杨国良 杨秀琴 《中国食用菌》 1992年第1期11-12,共2页

应用原生质体融合技术,将黑木耳河北6号和野生毛木耳杂交获得的8个融合株,从中筛选出具有黑木耳商品性状,表现有明显的杂交优势,遗传特性稳定的翼杂2号、3号两个新种,经在生产中示范推广,生产性能较好。现将其特性研究报告如下。一、生... 应用原生质体融合技术,将黑木耳河北6号和野生毛木耳杂交获得的8个融合株,从中筛选出具有黑木耳商品性状,表现有明显的杂交优势,遗传特性稳定的翼杂2号、3号两个新种,经在生产中示范推广,生产性能较好。现将其特性研究报告如下。一、生物学特性 (一)温度将菌株接种于未调pH的PDA培养基斜面试管中心,置于5、10、15、20、25、30、35、40℃温度下培养,6天后测量菌丝生长长度,取日长速平均值(mm/日)。结果表明,翼杂2号菌丝生长起始温度、适宜温度和最适温度分别为15℃、25～35℃和30℃,与亲本河北6号一致,翼杂3号菌丝生长起始温度为20℃,高于亲本株(表1)。 展开更多

关键词 木耳 原生质体融合 新种 品种

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黑木耳与毛木耳营养缺陷型诱变研究 被引量：1

4

作者 杨国良 杨秀琴 +2 位作者 杨晓仙 李育岳 汪麟 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1989年第3期101-105,共5页

本文报道了黑木耳(Auricularia auricula)与毛木耳(Auricularia polytricha)营养缺陷型标记株的诱变筛选过程。分离子实体担孢子,萌发后经紫外线诱变,避光培养得单菌落,采用逐个检出法和生长谱法筛选、鉴定营养缺陷型突变株,为黑木耳与... 本文报道了黑木耳(Auricularia auricula)与毛木耳(Auricularia polytricha)营养缺陷型标记株的诱变筛选过程。分离子实体担孢子,萌发后经紫外线诱变,避光培养得单菌落,采用逐个检出法和生长谱法筛选、鉴定营养缺陷型突变株,为黑木耳与毛木耳的种间原生质体融合育种提供了具有遗传标记的亲本材料。本研究的技术关键是选用了合适的基本培养基。 展开更多

关键词 黑木耳 毛木耳 营养缺陷型 诱变

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诺卡氏菌株82β－淀粉酶的部分纯化及其性质研究 被引量：1

5

作者 王银定 杨秀琴 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1995年第3期76-78,共3页

诺卡氏菌株８２（Ｎｏｃａｒｄｉａｓｐ．８２）可产生一种β一淀粉酶，经５０％硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ一纤维素离子交换层析，将其纯化２１倍。该酶在６０℃，ｐＨ７．０条件下酶活最高；１００℃处理３０ｍｉｎ仍具有４０％的最初酶活力。

关键词 诺卡氏菌 Β-淀粉酶 热稳定性 提纯 淀粉酶

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微量超氧化物歧化酶邻苯三酚/Vc测活法 被引量：15

6

作者 王会文 刘建荣 +1 位作者 静天玉 赵晓瑜 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 2000年第1期61-62,82,共3页

在Vc终止剂法的基础上 ,邻苯三酚的加入量由终浓度2mmol/L降低为0.05mmol/L ,并提高反应溶液的 pH值至8.6 ,从而提高了SOD活力测定的灵敏度。使用本方法在SOD样品最大加入量1mL时 ,最低可检测到3.3×10-8 mol/(s·mL)SOD ,比Vc... 在Vc终止剂法的基础上 ,邻苯三酚的加入量由终浓度2mmol/L降低为0.05mmol/L ,并提高反应溶液的 pH值至8.6 ,从而提高了SOD活力测定的灵敏度。使用本方法在SOD样品最大加入量1mL时 ,最低可检测到3.3×10-8 mol/(s·mL)SOD ,比Vc终止剂法灵敏度提高4倍。 展开更多

关键词 超氧化物歧化酶 邻苯三酚 抗坯血酸

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磁性蚯蚓纤溶酶脂质体的制备 被引量：4

7

作者 静天玉 王会文 赵晓瑜 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1999年第4期360-362,共3页

用超声法将磁流体和蚯蚓纤溶酶同时包入脂质体中，形成一种具有磁导向性能的溶栓药物──磁性蚯蚓纤溶酶脂质体。纤溶酶包封率达80％以上。在磁场作用下该脂质体定向聚集在血栓周围，脂质体破坏后释放出来的纤溶酶可以将血栓完全溶解。... 用超声法将磁流体和蚯蚓纤溶酶同时包入脂质体中，形成一种具有磁导向性能的溶栓药物──磁性蚯蚓纤溶酶脂质体。纤溶酶包封率达80％以上。在磁场作用下该脂质体定向聚集在血栓周围，脂质体破坏后释放出来的纤溶酶可以将血栓完全溶解。还介绍了一种简便、快速制备磁流体的方法。本系统对于制备水溶性药物的磁性脂质体可能有一定通用性。 展开更多

关键词 脂质体 磁流体 蚯蚓 纤溶酶 制备 水溶性药物

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渗透胁迫对小麦愈伤组织GST活性的影响 被引量：2

8

作者 廖祥儒 王越 +3 位作者 宋陆铧 王俊丽 杜建芳 陈丕铃 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 2000年第2期148-150,共3页

比较了渗透胁迫下抗旱性不同的小麦愈伤组织GST活性的变化。结果表明 ,水分胁迫初期2种愈伤组织GST活性均明显高于对照 ,重度胁迫的高于轻度胁迫 ;但在轻度胁迫下的后期小偃22细胞GST活性明显高于对照或与对照无明显差别 ,而郑引1号GST... 比较了渗透胁迫下抗旱性不同的小麦愈伤组织GST活性的变化。结果表明 ,水分胁迫初期2种愈伤组织GST活性均明显高于对照 ,重度胁迫的高于轻度胁迫 ;但在轻度胁迫下的后期小偃22细胞GST活性明显高于对照或与对照无明显差别 ,而郑引1号GST活性明显低于对照 ; 展开更多

关键词 渗透胁迫 GST 小麦 愈伤组织 活性

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水稻悬浮系细胞的建立及植株再生 被引量：2

9

作者 王俊丽 宋陆铧 +3 位作者 薛静 廖祥儒 杜建芳 陈丕铃 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1999年第4期363-365,共3页

水稻（辽盐9）种子在LS＋2，4－D（2，4-二氯苯氧乙酸）2．0～3．0mg/L的培养基上进行诱导培养，经3～4次继代后，即可得到淡黄色颗粒性愈伤组织；将该种愈伤组织在LS＋2，4－D2．0～3．0mg／L＋LH（水解乳蛋白）300mg/L的液体培养基上... 水稻（辽盐9）种子在LS＋2，4－D（2，4-二氯苯氧乙酸）2．0～3．0mg/L的培养基上进行诱导培养，经3～4次继代后，即可得到淡黄色颗粒性愈伤组织；将该种愈伤组织在LS＋2，4－D2．0～3．0mg／L＋LH（水解乳蛋白）300mg/L的液体培养基上进行振荡培养，经4～5次继代后，即可建立起良好的细胞悬浮系；培养基中附加2．0～2．5mg／LKT，使愈伤组织和悬浮细胞均可再生，其再生率分别为15．9％～17．9％和18．1％～20．8％。 展开更多

关键词 水稻 愈伤组织 悬浮细胞 植株再生

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人La多肽融合蛋白在E.coli中的表达 被引量：2

10

作者 赵晓瑜 刘建荣 +3 位作者 静天玉 王会文 王彦芳 王锡民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期207-210,共4页

目的　构建在E .coli中表达人La多肽的质粒。方法以人脾cDNA为模板 ,通过PCR获得La多肽 (全长 )的DNA片段。将此片段利用双酶切定向克隆到MBP(麦芽糖结合蛋白 )融合系统的载体pMALTM c中 ,表达可溶性融合蛋白 ,并通过亲和层析予以纯化... 目的　构建在E .coli中表达人La多肽的质粒。方法以人脾cDNA为模板 ,通过PCR获得La多肽 (全长 )的DNA片段。将此片段利用双酶切定向克隆到MBP(麦芽糖结合蛋白 )融合系统的载体pMALTM c中 ,表达可溶性融合蛋白 ,并通过亲和层析予以纯化。结果免疫印迹实验 (IBT)证明 ,表达的融合蛋白具有La抗原多肽的特异性 ,而敏感性超过生化制备的ENA制品。 展开更多

关键词 La抗原 克隆 表达 融合蛋白 聚合酶链反应

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用渗透压冲击法提取青霉素酰化酶 被引量：2

11

作者 张贺迎 武金霞 +2 位作者 周艳芬 潘延云 姚翠鸾 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 2000年第1期63-65,共3页

采用渗透压冲击法提取青霉素酰化酶 ,粗酶液比活达8.20×10-8 mol/(s·mg) ,比超声波法高10倍以上 ,酶活总收率达93.3 %。

关键词 青霉素 酰化酶 渗透压冲击法 提取

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地衣芽孢杆菌C_(1213)碱性蛋白酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达 被引量：6

12

作者 吴宝东 杨秀琴 吴经才 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期14-16,共3页

本文采用DNA重组技术,用鸟枪法克隆获得地衣芽孢杆菌C_(1213),碱性蛋白酶基因。对胞外蛋白酶酶活测定表明,此基因在枯草芽孢杆菌中获得表达及分泌。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定其胞外蛋白质分子量,得知此基因产物与C_(1213),碱性蛋... 本文采用DNA重组技术,用鸟枪法克隆获得地衣芽孢杆菌C_(1213),碱性蛋白酶基因。对胞外蛋白酶酶活测定表明,此基因在枯草芽孢杆菌中获得表达及分泌。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定其胞外蛋白质分子量,得知此基因产物与C_(1213),碱性蛋白酶分子量相同。用酶切和琼脂糖凝胶电泳法确定了所克隆DNA片段的物理图谱,并确定其大小为2.3kb。 展开更多

关键词 碱性蛋白酶 基因克隆 地衣芽孢杆菌

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银染法在猪脾可提取性核抗原的小核RNA分析中的应用 被引量：2

13

作者 刘建荣 赵晓瑜 静天玉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1991年第5期402-403,共2页

可提取性核抗原(extractable nuclear antigens,ENA)是哺乳动物细胞核的生理盐水抽提物,它包括Sm、RNP、La(SS-B)和Ro(SS-A)等四种主要抗原成分。它们是由核内核糖核酸和蛋白质组成的复合物(snRNPs),其核糖核酸组分属于核内小RNA类,称为... 可提取性核抗原(extractable nuclear antigens,ENA)是哺乳动物细胞核的生理盐水抽提物,它包括Sm、RNP、La(SS-B)和Ro(SS-A)等四种主要抗原成分。它们是由核内核糖核酸和蛋白质组成的复合物(snRNPs),其核糖核酸组分属于核内小RNA类,称为snRNAs。近几年来,小核RNA的研究愈来愈受到广泛重视。但是,由于含量极少,给分析带来困难。 展开更多

关键词 可提取核抗原 小核RNA 银染法

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杜仲离体培养愈伤组织药物成份定性分析 被引量：3

14

作者 王俊丽 陈丕铃 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1992年第3期81-83,共3页

本文对杜仲离体培养愈伤组织的药物成份进行了初步的定性分析,其结果和杜仲树皮的定性分析结果相一致,这表明该愈伤组织中仍保持了杜仲树体内所含有的次生物质,从而为杜仲通过细胞大量培养实现药物成份工业化生产提供了理论依据。

关键词 杜仲 愈伤组织 药物成份 离体培养

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Ro、La的组成和相互关系 被引量：2

15

作者 赵晓瑜 静天玉 +2 位作者 刘建荣 王俊丽 原冀平 《生物化学杂志》 CSCD 1992年第3期262-266,共5页

本文证明,猪脾Ro和La不仅分布在细胞质中,也存在于细胞核内。Ro的抗原性多肽为60kD,La为45—47kD(二条)、26—29kD(三条)、Ro和La在细胞质中以复合形式存在,而在细胞核内则相互独立。

关键词 猪脾 Ro LA 免疫亲和层析

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R0(SS-A)抗原的纯化 被引量：1

16

作者 赵晓瑜 静天玉 王俊丽 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1991年第4期60-63,共4页

本文以猪脾细胞浆为原料,采用制备电泳方法纯化了RO抗原。纯化的样品在PAGE上呈现单条区带,通过凝胶过渡测定分子量约为80KD,在SDS-PAGE上主要表现为60KD多肽带,Western blotting证明此60KD即为RO抗原的活性多肽。

关键词 Ro抗原 制备电泳 猪脾细胞浆

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木耳营养缺陷型突变株的诱变与鉴定——兼答林芳灿先生提出的部分问题 被引量：4

17

作者 杨国良 杨秀琴 +2 位作者 杨晓仙 李育岳 汪麟 《中国食用菌》 1991年第4期11-13,共3页

营养缺陷型菌株是进行原生质体融合研究的重要材料。梁平彦等(1981)曾报道,以需要酵母膏的营养缺陷型单倍体菌株为融合亲本,成功地获得了产黄青霉菌的营养互补二倍体。我们参考这一技术路线,进行了木耳营养缺陷型菌株的诱变与鉴定。首... 营养缺陷型菌株是进行原生质体融合研究的重要材料。梁平彦等(1981)曾报道,以需要酵母膏的营养缺陷型单倍体菌株为融合亲本,成功地获得了产黄青霉菌的营养互补二倍体。我们参考这一技术路线,进行了木耳营养缺陷型菌株的诱变与鉴定。首先顺利的鉴定出黑木耳菌株(A.a—1)是天门冬氨酸缺陷型;毛木耳菌株(A.p—243)由于其突变的遗传背景复杂(后来鉴定为腺嘌呤、脯氨酸和尼克酸三缺陷型),短时间内未能确定其是几种化合物的缺陷。但是做为融合亲本,只要该菌株在基本培养基不生长就基本符合要求。 展开更多

关键词 木耳 营养缺陷型 菌株 诱变 鉴定

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从对流免疫扩散电泳免疫复合物沉淀线提取抗原小核RNA的方法

18

作者 刘建荣 赵晓瑜 静天玉 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1992年第2期68-71,共4页

可提取性核抗原(ENA,包括Sm、RNP、Ro和La等多种抗原成分)是小核RNA和蛋白质组成的复合物。本文介绍从对流免疫扩散电泳(CIDE)形成的免疫复合物沉淀线提取单一抗原小核RNA的方法。其结果与纯化抗原的小核RNA组成相同。此法仅需约100微... 可提取性核抗原(ENA,包括Sm、RNP、Ro和La等多种抗原成分)是小核RNA和蛋白质组成的复合物。本文介绍从对流免疫扩散电泳(CIDE)形成的免疫复合物沉淀线提取单一抗原小核RNA的方法。其结果与纯化抗原的小核RNA组成相同。此法仅需约100微升的单价特异性抗体,抗原不需纯化,操作简单易行。 展开更多

关键词 小核RNA CIDE ENA

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重组质粒pPAHD1的限制性内切酶图谱分析

19

作者 宋陆铧 吴芝清 吴经才 《河北大学学报（自然科学版）》 CAS 1990年第1期45-52,共8页

本文对我们构建的含有青霉素酰化酶(Acylace)基因的重组质粒pPAHD1进行了限制性内切酶图谱的测绘。使用了限制酶14种,证明BglⅡ,SalⅠ,SmaⅠ和BamHⅠ在重组质粒上各有切点一个;EcoRⅠ有切点两个:HindlⅡ,AvaⅠ各有切点三个;PvuⅠ有切点... 本文对我们构建的含有青霉素酰化酶(Acylace)基因的重组质粒pPAHD1进行了限制性内切酶图谱的测绘。使用了限制酶14种,证明BglⅡ,SalⅠ,SmaⅠ和BamHⅠ在重组质粒上各有切点一个;EcoRⅠ有切点两个:HindlⅡ,AvaⅠ各有切点三个;PvuⅠ有切点四个;EcoRⅤ和XmnⅠ各有切点五个。 展开更多

关键词 质粒 青霉素 酰化酶 限制性 内均酶

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用改良的羟胺法测定青霉素类物质 被引量：5

20

作者 吴芝清 宋陆铧 +1 位作者 王英 吴经才 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第5期363-368,共6页

在青霉素类物质的物理—化学测定方法中,羟胺法因基于内酰胺环结构,故其结果可与生物测定方法一致,但该方法的显色稳定性极差,最多在5分钟内稳定。在反应条件分析基础上提出的改良羟胺法,显色在6小时内稳定,检测灵敏度也较Boxer方法提高... 在青霉素类物质的物理—化学测定方法中,羟胺法因基于内酰胺环结构,故其结果可与生物测定方法一致,但该方法的显色稳定性极差,最多在5分钟内稳定。在反应条件分析基础上提出的改良羟胺法,显色在6小时内稳定,检测灵敏度也较Boxer方法提高约20％。本方法可广泛用于青霉素类物质(天然青霉素类、半合成青霉素类及6-APA)的测定。 展开更多

关键词 青霉素类 羟胺法 测定

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