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MMP-2基因启动子区-735C→T多态性与冠状动脉粥样硬化的相关性研究 被引量:4
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作者 赵京山 温进坤 韩梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期2136-2139,共4页
目的:研究中国汉族人群基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因启动子区-735C→T多态性与冠状动脉粥样硬化(CAS)的相关性。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法,以309例经冠状动脉造影确诊为冠状动脉粥样硬化的患者为研究对... 目的:研究中国汉族人群基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因启动子区-735C→T多态性与冠状动脉粥样硬化(CAS)的相关性。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析法,以309例经冠状动脉造影确诊为冠状动脉粥样硬化的患者为研究对象,检测MMP-2基因启动子区-735C→T多态性,以311例同期体检的正常人为对照组,比较两组间MMP-2基因多态性频率分布的差异,并结合冠脉造影情况,探讨MMP-2基因多态性与CAS发病及冠状动脉狭窄程度的关系。结果:CAS组CC基因型频率(86.1%)明显高于对照组(79.7%),而CT+TT基因型频率(13.9%)明显低于对照组(20.3%),两组之间的差异显著(P<0.05);CAS组C等位基因频率(92.6%)高于对照组(89.1%),T等位基因频率(7.4%)低于对照组(10.9%),两组差异显著(P<0.05)。MMP-2基因-735C→T多态性与冠状动脉狭窄程度无关(P>0.05)。结论:MMP-2基因-735C→T多态性可能与中国汉族人群CAS有关,MMP-2基因CC基因型和C等位基因可能是CAS遗传易感性的基因标记之一。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶2 启动子 基因多态性 冠状动脉硬化 汉族人
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血清饥饿可诱导人血管平滑肌细胞再分化 被引量:26
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作者 韩梅 温进坤 +1 位作者 郑斌 聂磊 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期250-255,共6页
体外培养的分化型血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMC)以特异性标志基因表达、长梭形外观及对兴奋剂刺激产生收缩反应为其表型特征 .以血清饥饿法培养处于超汇合 (overconfluence)状态的人VSMC ,观察其分化型标志基因表... 体外培养的分化型血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecells ,VSMC)以特异性标志基因表达、长梭形外观及对兴奋剂刺激产生收缩反应为其表型特征 .以血清饥饿法培养处于超汇合 (overconfluence)状态的人VSMC ,观察其分化型标志基因表达活性及其与细胞形态特征和收缩反应性之间的关系 ,探讨细胞生存环境对VSMC基因表达及表型的影响 .研究显示 ,生长至超汇合的VSMC由含血清培养转为血清饥饿后 ,收缩蛋白如SMα肌动蛋白 (SMα actin)、SM2 2α、h1 calponin、肌球蛋白重链 (MHC)SM1和SM2亚型的表达活性明显上调 ,证实血清饥饿诱导的收缩蛋白基因表达和血清应答因子 (serumresponsefactor ,SRF)与CArG顺式元件结合活性的增强有关 .同时 ,血清饥饿还可激活参与VSMC分化调节的转录调控因子SmLIM、Gax和分化相关蛋白HRG 1基因的转录 .随着血清饥饿培养时间的延长 ,VSMC逐渐形成多层、束状、成极性排列的形式 ,对兴奋剂刺激产生的收缩反应明显增强 .结果表明 ,超汇合状态的去分化型VSMC脱离血清刺激后 。 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 再分化 表型转化 标志基因 细胞功能 血清饥饿培养 收缩蛋白 收缩调节蛋白 基因表达
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细胞外基质促血管平滑肌细胞迁移及β_3整合素和粘着斑激酶表达 被引量:29
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作者 刘智敏 韩梅 温进坤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期163-166,共4页
目的 :研究细胞外基质 (ECM)蛋白促血管平滑肌细胞 (VSMC)迁移与 β3整合素及粘着斑激酶 (FAK)表达之间的关系。方法 :应用细胞迁移实验观察骨桥蛋白 (OPN)和纤连蛋白 (FN)对VSMC迁移活性的影响 ,利用RT-PCR和Western印迹探讨 β3整合素... 目的 :研究细胞外基质 (ECM)蛋白促血管平滑肌细胞 (VSMC)迁移与 β3整合素及粘着斑激酶 (FAK)表达之间的关系。方法 :应用细胞迁移实验观察骨桥蛋白 (OPN)和纤连蛋白 (FN)对VSMC迁移活性的影响 ,利用RT-PCR和Western印迹探讨 β3整合素、FAK和转录因子Gax表达与细胞迁移之间的关系。结果 :VSMC经 1 0、2 0mg/LOPN和 2 0mg/LFN处理后 ,迁移活性分别达对照组的 1 36、1 57和 1 2 6倍 (P <0 0 5)。用相同浓度 (2 0mg/L)OPN和FN刺激细胞 ,随着作用时间延长 ,VSMC迁移距离逐渐增加。Western印迹和RT -PCR结果证实 ,两种基质蛋白促进VSMC迁移与诱导 β3整合素和FAK基因表达及抑制转录因子Gax表达有关。结论 :β3整合素 展开更多
关键词 细胞外基质蛋白 血管平滑肌 结合素类 局部粘着 Β3整合素 粘着斑激酶
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大鼠血管新生内膜形成过程中NF-κB的活化和ICAM-1及COX-2表达的变化 被引量:7
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作者 韩梅 温进坤 +1 位作者 刘月平 宋伟 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期257-260,共4页
目的:探讨大鼠血管内膜增生过程中NF-κB活化与内膜炎性增生的相互关系。方法:Westernblotting分析血管壁中NF-κB p65、IκBα及其下游炎性基因ICAM-1和COX-2的表达;用免疫沉淀分析检测NF-κB p65的苏氨酸磷酸化。结果:内皮剥脱后,血... 目的:探讨大鼠血管内膜增生过程中NF-κB活化与内膜炎性增生的相互关系。方法:Westernblotting分析血管壁中NF-κB p65、IκBα及其下游炎性基因ICAM-1和COX-2的表达;用免疫沉淀分析检测NF-κB p65的苏氨酸磷酸化。结果:内皮剥脱后,血管总蛋白与核蛋白中p65的含量于术后7 d达峰值;术后21 d下降但仍高于0、1 d组;但胞浆p65含量无明显变化。p65苏氨酸磷酸化水平与NF-κB核转位成负相关关系。IκBα于术后1 d表现出一过性降低,术后14 d开始回升,21 d接近正常组水平;与此相反,ICAM-1和COX-2的表达于内皮剥脱后升高,至14 d时达峰值,21 d时表达量下降但仍高于正常组。结论:血管内皮剥脱诱导的内膜增生过程中伴有持续的NF-κB p65活化和炎性因子的表达。 展开更多
关键词 内皮 血管 NF-ΚB 血管内膜 大鼠 胞间黏附分子1 环氧合酶2
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整合素β_3-粘着斑激酶信号途径的活化参与大鼠血管新生内膜的形成 被引量:5
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作者 温进坤 韩梅 +2 位作者 程云会 杨长春 刘智敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1922-1925,共4页
目的:观察整合素β3-粘着斑激酶(FAK)等信号分子表达和活化与血管新生内膜形成之间的关系。方法:用球囊剥脱法制备血管狭窄模型;用W estern印迹和免疫组化染色检测骨桥蛋白(OPN)、整合素β3和FAK等信号分子的蛋白水平及活化程度。结果:... 目的:观察整合素β3-粘着斑激酶(FAK)等信号分子表达和活化与血管新生内膜形成之间的关系。方法:用球囊剥脱法制备血管狭窄模型;用W estern印迹和免疫组化染色检测骨桥蛋白(OPN)、整合素β3和FAK等信号分子的蛋白水平及活化程度。结果:血管内皮剥脱后,OPN、整合素β3和FAK蛋白水平均在血管内皮剥脱后3 d明显增加;术后7 d时达高峰,其中升高的FAK以磷酸化形式为主;14-21 d时,有所回降,但仍高于正常。其表达峰值均出现在血管平滑肌细胞向内膜快速迁移和增殖期,而且伴有细胞外基质降解加快。结论:细胞迁移是一个细胞和细胞外基质相互作用的复杂过程,整合素β3-FAK信号途径在维系该过程的协调统一方面具有重要作用。 展开更多
关键词 血管内膜 细胞外基质 结合素类 粘着斑激酶
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hhlim对心肌肥大的影响及其作用机制探讨 被引量:3
6
作者 郑斌 温进坤 +1 位作者 韩梅 周爱儒 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第3期427-430,共4页
hhlim是从胎儿心脏中新近分离和克隆得到的与心脏发生相关的基因 ,其表达产物作为转录因子参与多种基因的转录调控和细胞的发育与分化过程 .用细胞转染方法将外源性hhlim基因导入原代心肌细胞 ,发现该基因强制性表达可使心肌细胞体积明... hhlim是从胎儿心脏中新近分离和克隆得到的与心脏发生相关的基因 ,其表达产物作为转录因子参与多种基因的转录调控和细胞的发育与分化过程 .用细胞转染方法将外源性hhlim基因导入原代心肌细胞 ,发现该基因强制性表达可使心肌细胞体积明显增大 .RT PCR和蛋白质印迹结果表明 ,hhlim促心肌细胞肥大与诱导α 肌动蛋白 (α actin)过表达及重新启动胚胎期表达基因脑钠肽 (BNP)表达有关 .用可表达hhlim反义RNA的真核表达载体转染心肌细胞后 ,致心肌细胞肥大因子ET 1对BNP和α actin表达的诱导受到显著抑制 .这些结果表明 ,ET 1促进BNP和α actin表达及引发心肌肥大的效应可能由hhlim所介导 ,提示hhlim表达与心肌细胞肥大的启动有关 .单独或共转染转录因子hhlim、Nkx2 5、GATA 4表达质粒和BNP转录调控区指导的报告基因结果显示 ,hhlim强制性表达不仅能直接激活BNP基因表达 ,而且与NKx2 5具有协同作用 .结果表明 ,hhlim可以通过直接或与Nkx2 展开更多
关键词 HHLIM 心肌肥大 作用机制 心肌细胞 脑钠肪 Α-肌动蛋白
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在线推扫富集-胶束电动毛细管色谱检测旋覆花素中和大鼠血浆中的旋覆花内酯 被引量:3
7
作者 赵京山 温进坤 韩梅 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期508-512,共5页
采用熔融石英毛细管,以含有50mm o l/L十二烷基硫酸钠的50mm o l/L硼酸盐缓冲液为电极缓冲液,以10mm o l/L硼酸盐缓冲液为上样缓冲液,经过对分离条件的优化,成功地建立了胶束电动毛细管色谱结合在线sw eep ing(推扫)富集技术检测中性脂... 采用熔融石英毛细管,以含有50mm o l/L十二烷基硫酸钠的50mm o l/L硼酸盐缓冲液为电极缓冲液,以10mm o l/L硼酸盐缓冲液为上样缓冲液,经过对分离条件的优化,成功地建立了胶束电动毛细管色谱结合在线sw eep ing(推扫)富集技术检测中性脂溶性物质旋覆花内酯(acety lb ritann ilac tone,ABL)的实验方法。所建方法的批内、批间测定值的相对标准偏差均小于5%,灵敏度为0.005g/L,回收率大于92%;被检测样品的含量与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.997 5。用所建立的方法检测了旋覆花素中ABL的含量及其在体内的动态变化,结果表明胶束电动毛细管色谱结合在线sw eep ing样品富集技术可显著提高检测的灵敏度。该方法具有操作简单、进样量小(nL级)、检测速度快等特点,弥补了毛细管电泳在测定痕量组分方面的不足。 展开更多
关键词 胶束电动毛细管色谱 sweeping在线富集技术 旋覆花内酯 旋覆花素 大鼠血浆
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JAK-STAT参与血管平滑肌细胞血管紧张素原和心钠素基因的转录激活 被引量:4
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作者 聂磊 韩梅 温进坤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期70-76,共7页
为探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2-转导及转录激活因子5(JAK2-STAT5)途径在介导血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)血管舒-缩肽表达调节的作用及分子机制,以AngⅡ为诱发因素刺激培养的大鼠VSMC,用免疫共沉淀、Western印迹分析和... 为探讨Janus蛋白酪氨酸激酶2-转导及转录激活因子5(JAK2-STAT5)途径在介导血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)血管舒-缩肽表达调节的作用及分子机制,以AngⅡ为诱发因素刺激培养的大鼠VSMC,用免疫共沉淀、Western印迹分析和激光共聚焦显微镜观察STAT5磷酸化及其核转位,用电泳迁移率改变分析(EMSA)确定STAT5与血管活性肽基因调控区顺式调控元件的结合活性.结果显示,STAT5磷酸化水平分别于AngⅡ刺激10 min和12 h出现两个高峰,增加的磷酸化STAT5主要分布在细胞核内.AngⅡ诱导的STAT5活化与核转位可被JAK2的特异抑制剂AG490所抑制.EMSA结果显示,用AngⅡ刺激VSMC后,核蛋白与含有血管紧张素原基因启动子STAT5识别序列的探针结合活性显著升高;而核蛋白与含有心钠素(ANF)基因启动子STAT5识别序列的探针结合活性则呈下降趋势,核蛋白与两种探针的结合活性均可被JAK2抑制剂AG490所消除,并且加入抗STAT5抗体后均可出现滞后的超迁移带.结果提示,AngⅡ通过激活JAK2-STAT5介导信号向胞核内传递,STAT5与相应的顺式元件结合是启动血管紧张素原和心钠素基因表达所必需的转录调控机制之一. 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 血管活性肽 转导及转录激活因子5 转录激活
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无胶筛分毛细管电泳法检测微量蛋白质骨桥蛋白 被引量:3
9
作者 赵京山 温进坤 韩梅 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期520-523,共4页
采用非涂层毛细管,以150mm o l/L硼酸盐缓冲液为电泳缓冲液,30g/L聚乙二醇(PEG)20000为筛分介质,经对分离条件进行优化,成功地建立了用无胶筛分毛细管电泳检测微量蛋白质的方法。用所建立的方法测定骨桥蛋白,其批内、批间迁移时间的相... 采用非涂层毛细管,以150mm o l/L硼酸盐缓冲液为电泳缓冲液,30g/L聚乙二醇(PEG)20000为筛分介质,经对分离条件进行优化,成功地建立了用无胶筛分毛细管电泳检测微量蛋白质的方法。用所建立的方法测定骨桥蛋白,其批内、批间迁移时间的相对标准偏差均小于5%,回收率大于95%,被检测样品中骨桥蛋白的含量与其峰面积呈良好的线性关系(相关系数为0.996),最低检测限为0.079g/L。考察了无血清饥饿培养对血管平滑肌细胞分泌骨桥蛋白的影响,结果表明无血清饥饿培养24h骨桥蛋白的合成与分泌达到高峰,此后随时间延长含量随之降低,此结果与采用W estern b lo t方法检测的结果一致。该方法具有进样量小(nL级)、检测速度快、可自动化等优点,是一种简便、快捷的检测微量蛋白质的好方法。 展开更多
关键词 毛细管电泳 聚乙二醇20000 无胶筛分 骨桥蛋白 血管平滑肌细胞
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细胞肥大过程中hhLIM的亚细胞定位变化及其对细胞骨架的影响 被引量:3
10
作者 郑斌 温进坤 韩梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期255-261,共7页
hhlim (humanheartlim)是从人胎心cDNA文库中筛选克隆的一个新基因 ,作为LIM家族的新成员参与心肌肥大的发生发展过程 .为了进一步研究hhLIM在心肌肥大发生过程中的作用 ,以C2C12细胞为研究对象 ,以心肌肥大强效刺激因子内皮素 1(ET 1... hhlim (humanheartlim)是从人胎心cDNA文库中筛选克隆的一个新基因 ,作为LIM家族的新成员参与心肌肥大的发生发展过程 .为了进一步研究hhLIM在心肌肥大发生过程中的作用 ,以C2C12细胞为研究对象 ,以心肌肥大强效刺激因子内皮素 1(ET 1)为诱导因素 ,探讨hhLIM与肌动蛋白的相互作用及其影响细胞骨架的分子机制 .RT PCR、Western印迹和细胞免疫荧光分析结果表明 ,心肌肥大刺激因子ET 1在诱导心肌肥大标志基因BNP和肌动蛋白表达的同时 ,使hhLIM蛋白在C2C12细胞胞核与胞质之间进行重新定位 .激光共聚焦显微镜观察结果显示 ,hhLIM与肌动蛋白在胞质中共定位 .蛋白分步提取、鉴定及hhLIM与F肌动蛋白结合与沉降实验证明 ,hhLIM多存在于细胞骨架及其相关蛋白部分 ,在体外可与F肌动蛋白共结合 .这些结果表明 ,胞质中的hhLIM作为细胞骨架相关蛋白与肌动蛋白相互作用 .进一步研究hhLIM与细胞骨架的关系时发现 ,hhLIM过表达可使C2C12细胞的骨架变成致密网状纤维并使其对细胞松弛素导致的细胞骨架解聚产生一定的抵抗作用 ,抑制hhLIM表达则使细胞骨架稀疏 ,结构模糊 .提示hhLIM参与细胞骨架组织及重构的机制与其结合并稳定F肌动蛋白有关 . 展开更多
关键词 hhlim基因 C2C12细胞 肌动蛋白 细胞骨架
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AP-1在AngⅡ正反馈调节其前体基因表达中的作用 被引量:2
11
作者 李爱英 温进坤 韩梅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第8期775-780,共6页
血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可诱导其前体基因在血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMC)中进行表达,其作用机制与促进转录激活蛋白-1(activatingprotein-1,AP-1)的基因调控区中存在的AP-1位点结合有关.为进一步明确AngⅡ调节AP-1结合... 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)可诱导其前体基因在血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMC)中进行表达,其作用机制与促进转录激活蛋白-1(activatingprotein-1,AP-1)的基因调控区中存在的AP-1位点结合有关.为进一步明确AngⅡ调节AP-1结合活性的分子机制,用放线菌酮(cycloheximide,CHX)作为c-Jun磷酸化抑制剂,经DNA-蛋白质相互作用和蛋白质印迹实验,探讨AngⅡ对AP-1结合活性的影响并探讨其分子机制.结果表明,受AngⅡ刺激的VSMC,其核蛋白中AP-1的组成亚基之一c-Jun水平明显升高.免疫细胞化学染色显示,在被AngⅡ处理的细胞中,c-Jun主要定位于细胞核,胞浆中几乎检测不出该转录激活蛋白的存在.用丝氨酸磷酸化抗体检测证实,AngⅡ可诱导c-Jun磷酸化.电泳迁移率改变分析(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)显示,c-Jun的磷酸化水平与AP-1结合血管紧张素原基因顺式元件的活性,和对该基因的转录激活作用呈正相关关系,CHX通过阻断c-Jun磷酸化抑制AngⅡ诱导的AP-1结合活性,但是不影响c-Jun的表达水平.上述结果提示,AP-1的磷酸化活化是AngⅡ正反馈调节其前体基因表达的重要机制之一,首次发现CHX是c-Jun磷酸化的抑制剂. 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 血管紧张素原基因 AP-1 C-JUN 转录调节
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整合素β3亚单位胞内区在骨桥蛋白诱导血管平滑肌细胞黏附和迁移中的作用 被引量:1
12
作者 李菁菁 温进坤 +1 位作者 韩梅 陈英珠 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期9-16,共8页
为阐明整合素β3亚单位胞内区及其不同保守序列在骨桥蛋白(OPN)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)黏附和迁移中所起的作用,构建了整合素β3亚单位胞内区肽段真核表达载体(pEGFP-C3-β3CD),并人工合成了含有β3亚单位胞内区不同保守序列(NXXY)的... 为阐明整合素β3亚单位胞内区及其不同保守序列在骨桥蛋白(OPN)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)黏附和迁移中所起的作用,构建了整合素β3亚单位胞内区肽段真核表达载体(pEGFP-C3-β3CD),并人工合成了含有β3亚单位胞内区不同保守序列(NXXY)的寡肽(肽-747和肽-759),通过导入VSMC,观察它们对OPN诱导VSMC黏附和迁移的影响.结果显示,整合素β3胞内区在VSMC中强制性表达可使细胞在OPN上的黏附和迁移明显下降(分别为对照组的34.3%和31.7%);导入肽-747、肽-759和肽-747+肽-759均可显著抑制VSMC的黏附和迁移,其中肽-747+肽-759的作用更强(分别为对照组的36.4%和31.1%).免疫荧光结果显示,在转染pEGFP-C3-β3CD或肽-747+肽-759的VSMC中,黏着斑蛋白的磷酸化水平降低,黏着斑形成明显减少.研究结果表明,整合素β3亚单位胞内区及其NXXY保守序列在黏着斑相关蛋白募集、黏着斑形成及VSMC黏附和迁移方面发挥重要作用. 展开更多
关键词 整合素β3亚单位胞内区 寡肽 黏附 迁移 黏着斑
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hhLIM与actin相互作用依赖其C端LIM结构域
13
作者 郑斌 温进坤 +1 位作者 韩梅 史建红 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第4期395-400,共6页
hhLIM是LIM蛋白家族成员之一,该蛋白质含有两个LIM结构域,在基因表达调节、细胞骨架组构及细胞肥大过程中发挥重要作用.构建hhLIM不同LIM结构域的突变体,探讨其两个LIM结构域在与actin相互结合中的作用及其可能机制.GST-pull down和hhLI... hhLIM是LIM蛋白家族成员之一,该蛋白质含有两个LIM结构域,在基因表达调节、细胞骨架组构及细胞肥大过程中发挥重要作用.构建hhLIM不同LIM结构域的突变体,探讨其两个LIM结构域在与actin相互结合中的作用及其可能机制.GST-pull down和hhLIM及其突变体与actin细胞定位关系的免疫荧光分析结果表明,C端的LIM结构域2是hhLIM与actin结合所必需的,该结构域中的两个Cys置换为Ser后可使hhLIM结合actin的功能完全丧失,N端的LIM结构域1突变使hhLIM结合actin的能力下降.F-actin交联实验结果显示,hhLIM通过LIM结构域2与actin直接结合并起到交联F-actin的作用.结果表明,LIM结构域2在hhLIM与actin相互作用及调节actin细胞骨架组构中起决定性作用. 展开更多
关键词 HHLIM LIM结构域 细胞定位 细胞骨架组构
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AP-1与STAT5相互作用协同调节血管紧张素原基因表达
14
作者 韩梅 温进坤 聂磊 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期465-469,共5页
为研究AP-1和STAT5协同调节血管紧张素原基因表达的作用机制,用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)和染色质免疫沉淀分析(ChIPassay)检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的AP-1和STAT5的DNA结合活性;用凝胶超迁移分析和免疫共沉淀方法观察AP-1和STAT... 为研究AP-1和STAT5协同调节血管紧张素原基因表达的作用机制,用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)和染色质免疫沉淀分析(ChIPassay)检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的AP-1和STAT5的DNA结合活性;用凝胶超迁移分析和免疫共沉淀方法观察AP-1和STAT5的相互作用.结果显示,AngⅡ可分别促进AP-1和STAT5与血管紧张素原基因调控区顺式元件的结合以及二者之间的相互作用;核蛋白与含AP-1结合位点的寡核苷酸探针结合形成的复合物可与抗c-Jun抗体和抗STAT5抗体形成超迁移电泳区带;而用抗c-Jun抗体也可从STAT5-染色质免疫沉淀复合物洗脱液中检测到AP-1的存在.而且,AP-1和STAT5的相互作用程度及其二者与DNA的结合活性与血管紧张素原表达活性具有一致关系,该效应可被JAK2特异抑制剂AG490所抑制.上述结果提示,与顺式元件结合的AP-1和STAT5通过相互作用而形成四元复合物协同调节血管紧张素原基因的表达,JAK2对该过程具有诱导活化作用. 展开更多
关键词 血管平滑肌细胞 血管紧张素原 转录调控 AP-1 STAT5
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KLF4抑制球囊损伤诱导的新生内膜形成 被引量:1
15
作者 赵欣铭 董丽华 +3 位作者 孟芳 郑斌 温进坤 韩梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1303-1306,共4页
目的:通过腺病毒载体介导外源性KLF4在大鼠颈动脉球囊剥脱血管中进行表达,观察新生内膜增生情况,研究外源性KLF4对球囊损伤诱导的新生内膜形成的影响及初步探讨其机制。方法:构建含有KLF4基因的重组腺病毒载体pAd-KLF4,将其导入内皮剥... 目的:通过腺病毒载体介导外源性KLF4在大鼠颈动脉球囊剥脱血管中进行表达,观察新生内膜增生情况,研究外源性KLF4对球囊损伤诱导的新生内膜形成的影响及初步探讨其机制。方法:构建含有KLF4基因的重组腺病毒载体pAd-KLF4,将其导入内皮剥脱的血管壁。用HE染色观察血管新生内膜的厚度,免疫组织化学染色和RT-PCR分别检测外源性KLF4在血管中的表达以及与增殖和分化标志基因表达的关系。结果:重组腺病毒pAd-KLF4可在血管壁中稳定表达KLF4。KLF4的过表达可显著抑制球囊损伤后血管新生内膜的增厚,转染pAd-KLF4的血管,其内膜/中膜比值(I/M)(0.52±0.15)明显小于pAd对照组(2.48±0.38),P<0.05。pAd-KLF4组血管壁增殖标志蛋白PCNA和c-Jun表达也较pAd组明显降低(P<0.05)。结论:KLF4过表达可阻断损伤诱导的血管平滑肌细胞表型转化,进而抑制球囊剥脱后血管内膜的增生。 展开更多
关键词 Krppel样因子 腺病毒载体 气囊损伤 新生内膜
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