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鸡滑液囊支原体ST-qLAMP检测方法的建立及应用
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作者 刘昱 裴晓萌 +2 位作者 董振国 时国强 石磊 《河北农业大学学报》 北大核心 2025年第1期81-89,共9页
鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是当今世界传播广泛的一种禽类传染性疾病,是蛋鸡和肉鸡养殖场重点防治的鸡病之一。本研究对传统LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)检测方法进行改良,并评估其在鸡滑液囊支原体检测... 鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是当今世界传播广泛的一种禽类传染性疾病,是蛋鸡和肉鸡养殖场重点防治的鸡病之一。本研究对传统LAMP(Loop-mediated isothermal amplification)检测方法进行改良,并评估其在鸡滑液囊支原体检测中的应用价值,旨在建立一种能对MS早期感染进行排查及预防的核酸分子检测方法。通过针对MS的vlhA基因的保守序列设计筛选出LAMP引物组,并将其中1条环引物设计为荧光自淬灭探针,建立ST-qLAMP检测方法。建立的ST-qLAMP检测法最佳检测温度为63℃,无非特性扩增,对7个10倍梯度稀释的重组质粒检测,Ct值的线性相关系数R^(2)为0.998,检出限为2.538 copies/μL。对高、中、低浓度试验质粒重复性检测,Ct值的变异系数(Cv)均小于5%。应用qRCR、ST-qLAMP与LAMP对150份疑似感染MS样本进行平行检测,并以qRCR检测结果作为标准,ST-qLAMP的准确率、敏感率和特异率分别为96.67%、100.00%和95.15%,检测时间为45 min。本研究建立了一种改良型LAMP,可以对鸡滑液囊支原体进行快速准确检测,为LAMP的改良与发展提供了一种新思路。 展开更多
关键词 ST-qLAMP 自淬灭探针 鸡滑液囊支原体 快速检测
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鸡传染性喉气管炎恒温快速诊断方法的建立
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作者 陈曦 时国强 +3 位作者 张宗淑 李静 翟向和 张铁 《北方牧业》 2024年第13期26-26,共1页
传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡上呼吸道感染的一种急性接触性传染病,该病被认为是影响家禽健康和福利的主要问题之一。ILTV属于疱疹病毒科,α-疱疹病毒亚科,禽疱疹病毒Ⅰ型,主要易感动物是鸡,自然传播主要... 传染性喉气管炎(ILT)是由传染性喉气管炎病毒(ILTV)引起的鸡上呼吸道感染的一种急性接触性传染病,该病被认为是影响家禽健康和福利的主要问题之一。ILTV属于疱疹病毒科,α-疱疹病毒亚科,禽疱疹病毒Ⅰ型,主要易感动物是鸡,自然传播主要通过上呼吸道和眼部途径。其主要侵袭鸡的喉头、气管的上皮细胞,同时对鼻窦、气囊、肺脏造成一定损伤。本病主要表现为呼吸困难、气喘、咳出带有血丝的分泌物,喉部气管肿胀糜烂为主要特征。鸡群内一旦发生本病将会大面积感染,病死率在20%~70%,造成重大经济损失。因此快速诊断对于及时控制疫情发展、降低鸡只死淘率至关重要。 展开更多
关键词 快速诊断方法 重大经济损失 鸡传染性喉气管炎 易感动物 呼吸困难 死淘率 控制疫情 疱疹病毒科
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对虾白斑综合症病毒LAMP-TaqMan检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 刘昱 柳梦思 +3 位作者 董振国 焦义然 时国强 石磊 《中国动物传染病学报》 北大核心 2024年第6期63-68,共6页
为提高环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法的特异性,本研究建立一种LAMP-TaqMan检测方法,进行对虾白斑综合症病毒(WSSV)核酸检测。本研究以WSSV基因组中保守序列构建测试质粒并设计筛选LAMP引物组,以荧光淬灭集团修饰的环引物作为TaqMan... 为提高环介导等温扩增技术(LAMP)检测方法的特异性,本研究建立一种LAMP-TaqMan检测方法,进行对虾白斑综合症病毒(WSSV)核酸检测。本研究以WSSV基因组中保守序列构建测试质粒并设计筛选LAMP引物组,以荧光淬灭集团修饰的环引物作为TaqMan探针,建立LAMP-TaqMan检测方法。结果显示:LAMP-TaqMan法在WSSV检测中,具备良好的特异性,最适检测温度为63℃,测试质粒线性相关性系数R^(2)为0.990,最低检出限为0.76×10^(1)copies/μL,重复性检测结果的变异系数CV值均小于3%,稳定性良好;以市售检测试剂盒为对照,对60份对虾样品进行平行测试,LAMP-TaqMan检测准确率为96.67%,敏感性为100.00%。建立的LAMP-TaqMan恒温核酸检测方法具备精准快速,检出限低,有效避免LAMP非特异性扩增造成的“假阳性”等优势,在水产疫病精准快速检测中具有广泛的市场应用前景。 展开更多
关键词 LAMP TAQMAN探针 对虾白斑综合症病毒 核酸检测
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环介导等温扩增技术研究进展 被引量:24
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作者 石磊 王曼 +2 位作者 时国强 董振国 刘昱 《河北大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2021年第5期565-571,共7页
环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种高效、简便、高特异性、无需热循环设备的核酸扩增技术.由于LAMP依然具备巨大的改造潜力,所以近些年来,一直有研究改进其技术以期达到更好的扩增检测效果.本文对... 环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术是一种高效、简便、高特异性、无需热循环设备的核酸扩增技术.由于LAMP依然具备巨大的改造潜力,所以近些年来,一直有研究改进其技术以期达到更好的扩增检测效果.本文对LAMP的基本原理、应用领域范围以及技术改良方向进行了综述,为今后该技术的改良与发展提供参考. 展开更多
关键词 环介导等温扩增(LAMP) 技术改良 发展方向
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基于TaqMan探针的实时荧光LAMP检测肉制品中鸭源性成分研究 被引量:2
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作者 柳梦思 时国强 +4 位作者 高娜婷 焦义然 孙旭飞 孟亚南 董振国 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期89-94,共6页
本研究建立1种基于TaqMan探针的实时荧光环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)(TaqMan—LAMP)检测方法,用于肉制品中鸭源性成分的快速鉴别。以鸭线粒体cytb基因的保守序列设计特异性引物,优化并建立基于TaqMan... 本研究建立1种基于TaqMan探针的实时荧光环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)(TaqMan—LAMP)检测方法,用于肉制品中鸭源性成分的快速鉴别。以鸭线粒体cytb基因的保守序列设计特异性引物,优化并建立基于TaqMan探针的实时荧光LAMP检测方法,对该方法进行特异性、灵敏度试验;同时与《GB/T38164—2019常见畜禽动物源成分检测方法 实时荧光PCR法》作比较,对市售肉制品进行检测,验证本方法的准确性。所建立的TaqMan-LAMP检测方法特异性强,仅鸭肉基因组DNA呈现特异性扩增曲线,30 min内完成检测,灵敏度为0.001%(w/w),重复性好,批次内变异系数CV为1.99%,对47份肉制品进行检测,检测结果与国标法相比,相对敏感性、特异性和符合率均为100%。本研究建立的鸭源性成分TaqMan-LAMP检测方法检测快速、特异性强、灵敏度高、重复性好,适用于肉制品中鸭源性成分的快速检测。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 TaqMan-LAMP 鸭源性成分 检测
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