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“2008东北国际心血管病论坛”简介
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作者 王效增 韩雅玲 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2008年第5期400-400,共1页
关键词 心血管病 沈阳军区总医院 论坛 国际 东北 心血管内科 专业委员会 医院副院长
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2015东北心血管病论坛会议通知
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作者 韩雅玲 《中国医学前沿杂志(电子版)》 2014年第10期33-33,共1页
尊敬的各位同道: "2015东北心血管病论坛"将于2015年4月17-19日在沈阳市召开。会议由全军心血管内科专业委员会主办,沈阳军区总医院全军心血管病研究所承办,中华心血管病学会和中国心血管内科医师分会以及东北多家大型医院协办)。... 尊敬的各位同道: "2015东北心血管病论坛"将于2015年4月17-19日在沈阳市召开。会议由全军心血管内科专业委员会主办,沈阳军区总医院全军心血管病研究所承办,中华心血管病学会和中国心血管内科医师分会以及东北多家大型医院协办)。本次由百余名国内外著名心血管病专家出席的盛会,将结合行业热点设定以下分论坛:冠心病诊治论坛、心律失常诊治论坛、 展开更多
关键词 心血管病专家 论坛 东北 会议 沈阳军区总医院 专业委员会 心血管内科 大型医院
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心血管内科专业新进展及展望 被引量:49
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作者 韩雅玲 姚天明 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期355-359,共5页
目的对"十一五"期间国内外心血管内科领域的进展进行深入分析,为明确军队心血管内科专业今后的发展方向提供依据。方法检索近5年来国内外心血管内科专业文献,分析军队心血管内科专业在新药物新技术应用、临床诊断及治疗方法... 目的对"十一五"期间国内外心血管内科领域的进展进行深入分析,为明确军队心血管内科专业今后的发展方向提供依据。方法检索近5年来国内外心血管内科专业文献,分析军队心血管内科专业在新药物新技术应用、临床诊断及治疗方法等方面取得的新进展。结果"十一五"期间军队心血管内科专业在基础、临床及应用研究方面均取得了快速发展,尤其在冠心病、心律失常、外周血管疾病介入诊断治疗以及高血压治疗等方面取得了令人瞩目的成绩。结论军队心血管内科专业目前总体发展水平居国内前列。"十二五"期间,应以心脏与血管系统军事医学救治以及冠心病、外周血管疾病、心律失常等军队指战员常见疾病的基础及临床研究为重点,形成平战结合、基础与临床研究并重、具有军队医院特色的优势心血管内科专业学科。 展开更多
关键词 心血管疾病 数据收集 生物医学研究
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高频电刀应用对心血管植入型电子器械囊袋血肿发生率的影响
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作者 徐白鸽 梁延春 +7 位作者 高阳 焉晓蕾 于海波 刘荣 许国卿 王娜 王祖禄 韩雅玲 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2016年第z1期-,共1页
目的:探讨心血管植入型电子器械(CIED)植入术中应用高频电刀能否降低CIED囊袋血肿的发生率。尤其是对于有需要接受抗凝和(或)抗血小板治疗(有出血倾向)的患者。
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三联抗血小板药物对缺血性脑血管病患者冠状动脉介入治疗术后的近期疗效 被引量:5
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作者 韩雅玲 肖艳平 +2 位作者 邓捷 李成洋 徐凯 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2007年第3期149-151,共3页
目的探讨既往有缺血性脑血管事件发作史的冠心病患者行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后应用西洛他唑联合阿司匹林和氯吡格雷三联抗血小板治疗方案的近期疗效和安全性。方法回顾性分析有缺血性脑血管病史且接受PCI治疗的冠心病患者共216例,... 目的探讨既往有缺血性脑血管事件发作史的冠心病患者行经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后应用西洛他唑联合阿司匹林和氯吡格雷三联抗血小板治疗方案的近期疗效和安全性。方法回顾性分析有缺血性脑血管病史且接受PCI治疗的冠心病患者共216例,其中80例PCI后应用三联抗血小扳治疗(三联组),136例PCI后应用阿司匹林联合氯吡格雷两联抗血小板治疗(两联组)。观察两组PCI后30天主要不良心脑血管事件(MACCE)、亚急性血栓和出血发生率结果两组临床基线特征及PCI即刻结果无差异,术中均无死亡;三联组患者30天病死率、脑卒中发生率、MACCE发生率均显著低于两联组(P值分别<0.05,<0.05,<0.01)。两组亚急性血栓、30天主要出血事件、脑出血发生率差异均无显著性意义。结论有缺血性脑血管病史患者PCI后应用氯吡格雷、阿司匹林和西洛他唑三联抗血小板治疗后,可显著降低近期死亡、脑卒中及MACCE发生率,且不增加脑出血等副作用。 展开更多
关键词 血小板聚集抑制剂 脑缺血 血管成形术 经腔 经皮冠状动脉
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分泌型hCREG蛋白抑制人血管平滑肌细胞增殖的量效关系研究 被引量:1
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作者 韩雅玲 崔继福 +3 位作者 郭亮 康建 张效林 闫承慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期2121-2125,共5页
目的:探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法:构建强力霉素(Dox)调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTRE-hCREG的人血管平滑肌细胞株-HITASY细胞克隆;RT-PCR鉴定转染细胞克隆... 目的:探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法:构建强力霉素(Dox)调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTRE-hCREG的人血管平滑肌细胞株-HITASY细胞克隆;RT-PCR鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达;Western blotting和免疫共沉淀检测不同浓度的强力霉素诱导后,HITASY细胞内及培养上清中hCREG的表达;流式细胞仪检测不同浓度的强力霉素诱导后,hCREG表达与细胞增殖的关系。结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的HITASY-hCREG细胞克隆;RT-PCR检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性;Western blotting及免疫共沉淀检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0、0.01、0.1、1mg/L),HITASY-hCREG细胞及培养上清中hCREG表达均呈剂量依赖性增加;流式细胞周期分析提示,hCREG表达增加后,HITASY-hCREG细胞的G1期细胞明显增加。结论:hCREG蛋白通过剂量依赖方式抑制人血管平滑肌细胞的增殖。 展开更多
关键词 阻遏蛋白质类 血管平滑肌细胞 细胞增殖
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经血管内超声分析冠状动脉斑块的性质及特点的临床研究 被引量:1
7
作者 白延平 徐凯 +2 位作者 董海 荆全民 韩雅玲 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2016年第z1期-,共1页
目的:经血管内超声(IVUS)分析冠心病患者冠状动脉内斑块性质、特点及与临床MACE事件的相关性。
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E1A激活基因阻遏子促进人血管平滑肌细胞分化和迁移 被引量:11
8
作者 韩雅玲 胡叶 +3 位作者 刘海伟 康建 闫承慧 李少华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第6期517-522,共6页
为探讨E1A激活基因阻遏子(cellularrepressorofE1A-stimulatedgenes,CREG)蛋白在人血管平滑肌细胞株HITASY分化和迁移中的调控作用,构建了重组逆转录病毒载体pLNCX2(+)/CREG和pLXSN(-)/CREG.以带绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,G... 为探讨E1A激活基因阻遏子(cellularrepressorofE1A-stimulatedgenes,CREG)蛋白在人血管平滑肌细胞株HITASY分化和迁移中的调控作用,构建了重组逆转录病毒载体pLNCX2(+)/CREG和pLXSN(-)/CREG.以带绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)的空载体pLNCX(+)/GFP和正常HITASY为对照,用磷酸钙共沉淀法将重组逆转录病毒载体转染293细胞,包装出完整的逆转录病毒后,感染HITASY.经G418筛选,获得稳定感染的细胞克隆.应用免疫荧光染色、蛋白质印迹等方法检测CREG和平滑肌分化标志蛋白α-肌动蛋白(SMα-actin)表达,同时通过刮伤实验、慢速显微摄像技术检测细胞迁移能力以及用明胶酶谱方法分析细胞基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMPs)的活性.结果表明:pLNCX2(+)/CREG稳定感染的HITASY中CREG和SMα-actin蛋白表达上调,MMP-2和MMP-9活性升高,细胞迁移速度加快;pLXSN(-)/CREG稳定感染的HITASY中CREG和SMα-actin蛋白表达下调,MMP-2和MMP-9活性降低,细胞迁移速度减慢.上述研究提示CREG在诱导血管平滑肌细胞分化的同时促进细胞迁移. 展开更多
关键词 阻遏子 腺病毒蛋白E1A 分化 迁移 逆转录病毒载体 平滑肌
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国产生物降解涂层雷帕霉素洗脱支架置入术治疗冠心病一年结果:国内首项单中心注册研究 被引量:31
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作者 韩雅玲 荆全民 +8 位作者 陈学智 王守力 马颖艳 刘海伟 栾波 王耿 李毅 王祖禄 王冬梅 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2008年第1期5-9,共5页
目的:评价国产生物降解涂层雷帕霉素洗脱(EXCEL)支架置入术后1年的临床疗效和安全性。方法:前瞻性连续入选100例均单一置入EXCEL支架的住院冠心病患者。术后联合应用抗血小板药氯吡格雷和阿司匹林(ASA)6个月,其后单用阿司匹林。主要研... 目的:评价国产生物降解涂层雷帕霉素洗脱(EXCEL)支架置入术后1年的临床疗效和安全性。方法:前瞻性连续入选100例均单一置入EXCEL支架的住院冠心病患者。术后联合应用抗血小板药氯吡格雷和阿司匹林(ASA)6个月,其后单用阿司匹林。主要研究终点为术后1年主要不良心脏事件(MACE),次要终点为术后30天及6个月主要不良心脏事件及平均8个月冠状动脉(冠脉)造影判定的支架内再狭窄(ISR)发生率。结果:患者全部成功置入EXCEL支架。在153处靶病变中127处为B2/C型复杂病变(83.0%),平均靶病变长度(29.42±15.90)mm,直径(3.17±0.53)mm。共置入211枚EXCEL支架,人均(2.02±1.53)枚,平均支架长度和直径分别为(35.34±17.35)mm和(3.23±0.46)mm。患者住院期及术后30天无主要不良心脏事件发生。1例分别于术后5个月,3例分别于术后6~12个月因支架内再狭窄行再次PCI,主要不良心脏事件发生率4.0%,无死亡、心肌梗死和血栓事件发生。75例患者(112处靶病变)行造影复查,定量冠脉造影测量(QCA)支架内病变再狭窄率3.6%(4/112),支架段病变再狭窄率5.4%(6/112)。结论:这项对冠心病患者应用国产生物降解涂层EXCEL支架的国内首次注册研究表明,与其它药物洗脱支架的关键性研究文献相比。EXCEL支架术后1年支架内再狭窄和主要不良心脏事件发生率相似,患者术后接受6个月氯吡格雷抗血小板治疗是安全的。这一结论有待大规模、多中心的随机对照试验进一步证实。 展开更多
关键词 雷帕霉素 生物可降解涂层 晚期血栓 抗血小板 经皮冠状动脉介入治疗
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RhoA和血清反应因子(SRF)介导E1A激活基因阻遏子诱导人血管平滑肌细胞分化 被引量:9
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作者 韩雅玲 徐红梅 +3 位作者 闫承慧 胡叶 康建 刘海伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第5期438-445,共8页
为探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的调控机制,应用重组逆转录病毒表达载体pLNCX2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染HITASY细胞模型,观察CREG蛋白过表达及表达抑制对人VSMCs分化的影响并探讨其调控机制.... 为探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)对人血管平滑肌细胞(VSMCs)分化的调控机制,应用重组逆转录病毒表达载体pLNCX2(+)/CREG及pLXSN(-)/CREG制备稳定感染HITASY细胞模型,观察CREG蛋白过表达及表达抑制对人VSMCs分化的影响并探讨其调控机制.结果显示:pLNCX2(+)/CREG稳定感染细胞呈分化表型,细胞细长变成组织样聚集生长趋势,细胞中CREG蛋白和平滑肌分化标志蛋白平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)表达显著增加,同时SMα-actin相关调控因子——血清反应因子(SRF)入核转位,RhoA总蛋白表达上调,以Rho激酶特异性抑制剂Y-27632作用后,CREG诱导的SMα-actin表达下调的同时SRF出核转位;pLXSN(-)/CREG稳定感染的细胞体积变大,细胞极性消失,呈无序生长,细胞中CREG和SMα-actin蛋白表达显著降低,同时伴有SRF出核转位及RhoA总蛋白表达下调.免疫共沉淀分析发现,CREG蛋白能被分泌到VSMCs培养基中表达,并可与细胞膜受体6-磷酸甘露糖/胰岛素样生长因子Ⅱ型受体(M6P/IGF2R)发生直接相互作用.用蛋白磷酸酶PP2A特异性抑制剂okadaicacid减少M6P/IGF2R在细胞膜表面分布,可明显抑制CREG过表达引起的RhoA、SRF和SMα-actin表达.上述结果提示,在体外培养的人VSMCs中,CREG可能作为一种分泌型蛋白质通过与细胞膜受体M6P/IGF2R相互作用,依次激活SMα-actin蛋白相关调控因子RhoA和SRF引起SMα-actin表达增加,促进VSMCs向分化表型转换. 展开更多
关键词 阻遏蛋白 E1A 表型 细胞 血管平滑肌
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转录因子E2F1抑制CREG表达调控体外培养的人血管平滑肌细胞分化 被引量:5
11
作者 韩雅玲 赵昕 +5 位作者 闫承慧 康建 张效林 邓捷 徐红梅 刘海伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第5期490-496,共7页
为探讨转录因子E2F1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化中的作用及其对E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)表达调控的分子机制,应用生物信息学方法,定位人CREG(hCREG)基... 为探讨转录因子E2F1在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)表型转化中的作用及其对E1A激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)表达调控的分子机制,应用生物信息学方法,定位人CREG(hCREG)基因启动子并确定转录因子E2F1在hCREG启动子区的结合位点,PCR方法克隆并构建hCREG基因启动子绿色荧光报告基因载体,以hCREG启动子区E2F1结合位点为模板,化学合成E2F1寡聚脱氧核苷酸(ODN)和错配E2F1ODN,利用转录因子"诱骗(Decoy)"策略,用E2F1ODN转染体外培养的VSMCs以阻断E2F1与hCREG基因启动子区的结合,蛋白质印迹(Western blot)分析检测阻断前后细胞内hCREG蛋白、报告基因绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和平滑肌细胞分化标志蛋白SMα-actin表达变化.结果显示:分化表型HITASY细胞中E2F1表达下调伴出核转位,而增殖表型的HITASY细胞中E2F1蛋白表达明显增加且定位于核内.进一步应用FuGene6瞬时转染E2F1ODN和错配E2F1ODN于体外培养HITASY细胞中,蛋白质印迹分析发现,转染E2F1ODN后,HITASY细胞中hCREG、SMα-actin和GFP表达均较未阻断组及错配组细胞明显增加.上述研究结果证实,E2F1是hCREG基因转录的重要调控因子,能够直接结合于hCREG启动子区阻遏hCREG表达,参与hCREG蛋白对VSMCs表型转化的调控作用. 展开更多
关键词 E2F1 转录因子 阻遏蛋白 E1A 表型 血管平滑肌细胞
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E1A激活基因阻遏子(CREG)过表达通过抑制p38/JNK信号分子活化对抗人血管平滑肌细胞凋亡 被引量:5
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作者 吴光哲 闫承慧 +7 位作者 韩雅玲 陶杰 邓捷 田孝祥 张保海 王涛 康建 张效林 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1597-1606,共10页
血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡参与了动脉粥样硬化(AS)及冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄(RS)等心血管疾病的发生发展过程.E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一种分泌型糖蛋白,在维持细胞和组织稳态方面发挥重要作用.前期研究发现CREG... 血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡参与了动脉粥样硬化(AS)及冠状动脉介入治疗(PCI)术后再狭窄(RS)等心血管疾病的发生发展过程.E1A激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一种分泌型糖蛋白,在维持细胞和组织稳态方面发挥重要作用.前期研究发现CREG蛋白过表达能够对抗血清饥饿诱导的人血管平滑肌细胞(hVSMCs)凋亡,进一步探讨CREG对hVSMCs凋亡的调控作用及相关的分子机制.以逆转录病毒稳定转染的CREG过表达及表达抑制的hVSMCs为模型,应用两种药物Staurosporine(STS)和Etoposide(VP-16)诱导细胞发生凋亡,检测细胞凋亡和相关信号通路变化.结果显示,在药物干预后,CREG表达抑制时细胞凋亡明显增多,而CREG过表达明显抑制hVSMCs凋亡.同时也发现,CREG表达抑制时p38及JNK活性明显增强,而CREG过表达时p38和JNK活性被抑制.经腺病毒转染和药物干预抑制p38表达后,细胞凋亡均受到抑制,而且在p38活性被抑制的同时,JNK活化也受到抑制.说明p38和JNK表现为协同作用.结果也显示,VSMCs分化指标SMα-actin和SM MHC与CREG表达呈一致趋势,而细胞外基质蛋白Fibronection与CREG表达呈负相关.以上结果提示,CREG在维持VSMCs表型转换方面发挥重要作用,并且通过p38和JNK信号转导通路对hVSMCs凋亡进行调控.CREG可能对于AS和PCI术后RS的防治具有重要价值. 展开更多
关键词 E1A激活基因阻遏子 血管平滑肌细胞 细胞凋亡 信号通路
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胚胎血管发育早期PDGF-BB对血管平滑肌细胞趋化的影响 被引量:4
13
作者 韩雅玲 肖艳平 +3 位作者 齐岩梅 康建 徐凯 闫承慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期251-256,共6页
目的:建立胚胎血管发育早期血管平滑肌细胞(VSMCs)趋化模型,并观察胚胎血管发育早期血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对VSMCs趋化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子控制下表达增强型绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体的胚... 目的:建立胚胎血管发育早期血管平滑肌细胞(VSMCs)趋化模型,并观察胚胎血管发育早期血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对VSMCs趋化的影响。方法:采用转染平滑肌特异性蛋白SM22α启动子控制下表达增强型绿色荧光蛋白(GFP)报告基因载体的胚胎干细胞制备拟胚体,然后接种于under-agarose凝胶作为平滑肌细胞趋化模型。用慢速视频显微摄像技术观察拟胚体分化后表达GFP的VSMCs,分析比较不同浓度PDGF-BB对VSMCs分化和移行的影响。结果:在under-agarose凝胶中,拟胚体在无外源性生长因子存在的条件下可自发向心肌细胞、内皮细胞和VSMCs分化。拟胚体贴壁分化20 d时,对照组及4种浓度PDGF-BB(5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L)组VSMCs的平均迁移速率分别为(94.07±23.80)μm/h、(118.08±31.63)μm/h、(173.53±24.58)μm/h、(380.74±39.56)μm/h和(335.62±32.16)μm/h,峰值浓度为20μg/L。经浓度大于10μg/LPDGF-BB处理后,VSMCs向PDGF-BB孔方向移行,对照组、低浓度PDGF-BB组VSMCs呈不规则性迁移。结论:该模型能够模拟胚胎血管发育早期全过程,可用于研究不同生长因子对VSMCs趋化的影响。外源性PDGF-BB能定向诱导胚胎血管发育早期VSMCs迁移,其定向趋化作用在一定浓度范围内呈量效关系。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 血管 平滑肌细胞 趋化作用 血小板源性生长因子
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E1A激活基因阻遏子促进人血管内皮细胞VEGF分泌和单层通透性增加 被引量:3
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作者 王占胜 韩雅玲 +4 位作者 康建 张效林 陶杰 田孝祥 闫承慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期37-41,共5页
目的:探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)诱导的人血管内皮细胞(ECs)单层通透性改变中的作用及机制。方法:用CREG过表达及CREG表达下调的ECs为模型,Transwell chamber弥散模型观察ECs单层通透性的改变;荧光倒置显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-ac... 目的:探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)诱导的人血管内皮细胞(ECs)单层通透性改变中的作用及机制。方法:用CREG过表达及CREG表达下调的ECs为模型,Transwell chamber弥散模型观察ECs单层通透性的改变;荧光倒置显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin及黏附连接蛋白VE-cadherin在ECs中的分布和形态学改变;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测ECs血管内皮生长因子(VEGF)分泌。结果:CREG过表达的ECs(EO组)较EN组单层通透性明显增高(P<0.05);CREG表达下调的ECs(ES组)较EN组单层通透性有所下降(P<0.05)。与EN组相比较,EO组细胞中F-actin排列紊乱,形成大量应力纤维;ES组F-actin则主要呈细丝状分布于细胞周边,中央分布较少。同时,EO组VE-cadherin在细胞周边的正常拉链状结构减少或缺失,细胞间隙增宽;而ES组VE-cadherin在细胞周边呈正常拉链状分布,细胞之间连接紧密。ELISA检测显示EO组细胞上清中VEGF分泌较EN组明显增加(P<0.05);ES组VEGF分泌较EN组减少(P<0.05)。应用VEGF中和抗体阻断后,CREG过表达引起的EO通透性增加的现象明显受到抑制。结论:CREG过表达可能通过VEGF介导的信号途径引起F-actin重构及VE-cadherin减少,使血管内皮细胞单层通透性增加。 展开更多
关键词 E1A激活基因阻遏子 血管内皮细胞 VE-CADHERIN 细胞骨架 通透性 血管内皮生长因子
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CREG调控IGF2R/IGFII内吞抑制人血管平滑肌细胞增殖 被引量:4
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作者 闫承慧 栾波 +3 位作者 黄明方 李杰 张效林 韩雅玲 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1676-1681,共6页
目的:探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)抑制人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的机制。方法:应用逆转录病毒载体pLNCX2-CREG和pSM2-siCREG分别转染VSMCs,G418和puromycin筛选得到稳定转染细胞VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG;Western blotting检测转染... 目的:探讨E1A激活基因阻遏子(CREG)抑制人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的机制。方法:应用逆转录病毒载体pLNCX2-CREG和pSM2-siCREG分别转染VSMCs,G418和puromycin筛选得到稳定转染细胞VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG;Western blotting检测转染前后细胞CREG的表达;BrdU和流式细胞术检测CREG表达及对VSMCs增殖的影响。Western blotting和免疫荧光染色检测细胞胰岛素样生长因子Ⅱ受体(IGF2R)的表达;ELISA和RT-PCR检测胰岛素样生长因子Ⅱ(IGFⅡ)的表达;Alexa 488标记重组IGFII内吞实验观察CREG表达对IGFII内吞的影响;重组IGF2R和anti-IGF2R中和抗体阻断实验观察IGF2R-IGFII内吞作用对细胞增殖的影响;Western blotting检测细胞增殖信号分子PI3K/Akt和ERK表达,抑制剂阻断研究分析上述信号分子表达变化在细胞增殖中的作用。结果:实验分别得到VSMCs-CREG和VSMCs-siCREG的细胞克隆,VSMCs-CREG中CREG表达增加,而VSMCs-siCREG中CREG表达减少。VSMCs-CREG细胞增殖较正常对照组明显受抑,VSMCs-siCREG细胞增殖显著增加。VSMCs-CREG细胞中IGF2R蛋白在细胞膜上的表达及分布均显著增加,而VSMCs-siCREG细胞中IGF2R在膜上分布明显下降。CREG过表达促进IGF2R对IGFII的内吞作用,抑制了IGFII的分泌。IGFII分泌增加启动了CREG沉默后VSMCs的增殖,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号协同参与了IGFII对VSMCs增殖的调控作用。结论:CREG通过调控IGF2R在细胞膜的分布,加速IGFII内吞作用,抑制了体外培养VSMCs的增殖。 展开更多
关键词 E1A激活基因阻遏子 血管平滑肌细胞 受体 胰岛素样生长因子
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抑制Rac1蛋白活化阻碍胚胎发育早期血管新生 被引量:2
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作者 张剑 韩雅玲 +4 位作者 康建 张效林 齐岩梅 闫承慧 李少华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第6期696-701,共6页
小G蛋白Rac1在胚胎发育早期血管形成尤其是内皮发生过程中的作用尚不清楚.采用胚胎干细胞(ESCs)为模型,建立稳定表达持续表达型Rac1(G12V)和显性失活型Rac1(T17N)编码序列的小鼠ESCs并制备胚胎小体(EBs),诱导分化后观察Rac1(G12V)和Rac1... 小G蛋白Rac1在胚胎发育早期血管形成尤其是内皮发生过程中的作用尚不清楚.采用胚胎干细胞(ESCs)为模型,建立稳定表达持续表达型Rac1(G12V)和显性失活型Rac1(T17N)编码序列的小鼠ESCs并制备胚胎小体(EBs),诱导分化后观察Rac1(G12V)和Rac1(T17N)对内皮细胞分化和迁移功能的影响.采用相差显微镜观察EBs发育和分化特征,Pull down分析Rac1表达变化,免疫荧光染色和Western blot分析内皮分化标志物,Matrigel凝胶实验观察血管索形成.结果表明,无论过表达或抑制Rac1的活化,并不影响EBs发育,均可形成典型的EBs胚层结构.抑制Rac1活化对内皮细胞系的发育无影响,但分化的内皮细胞不能连接成血管网.活化的Rac1表达减少,细胞迁移受到明显抑制.抑制Rac1活化导致细胞骨架F-actin排布紊乱.以上结果提示,Rac1影响胚胎早期血管发育的因素是抑制细胞游走,后者可能是通过F-actin机制所介导. 展开更多
关键词 胚胎干细胞 RAC1 分化 血管发育
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p38 MAPK介导E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管内皮细胞凋亡 被引量:2
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作者 王娜 韩雅玲 +1 位作者 陶杰 闫承慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1329-1334,共6页
目的:研究E1A激活基因阻遏子蛋白(CREG)在依托泊苷(VP-16)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用及其调控机制。方法:将体外培养的原代HUVECs用pLNCX-CREG和pLXSN-shRNA-CREG反转录病毒真核表达载体分别转染,通过G418(800 mg/L)... 目的:研究E1A激活基因阻遏子蛋白(CREG)在依托泊苷(VP-16)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡中的作用及其调控机制。方法:将体外培养的原代HUVECs用pLNCX-CREG和pLXSN-shRNA-CREG反转录病毒真核表达载体分别转染,通过G418(800 mg/L)和嘌呤霉素(2.5 mg/L)筛选分别获得CREG过表达组HUVECs(H-C)和CREG低表达组HUVECs(H-S)。在H-C、HUVECs(H)和H-S3种细胞模型中加入凋亡诱导剂VP-16(100μmol/L,6 h),用TUNEL法和流式细胞术检测细胞的凋亡情况;用Western blotting检测细胞中磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)的蛋白表达量;应用p38特异性抑制剂SB203580(20μmol/L)预处理H-S细胞后,检测VP-16刺激诱导的细胞凋亡情况。结果:HUVECs经pLNCX-CREG和pLXSN-shRNA-CREG反转录病毒真核表达载体转染获得稳定的细胞克隆。经Western blotting证实,与HUVECs对照比较,H-C组细胞CREG表达明显增加至160%,而H-S组细胞中的CREG表达下降约70%。加入凋亡诱导剂VP-16(100μmol/L,6 h)后,TUNEL和流式双荧光染色检测结果均提示H-S中的细胞凋亡率明显升高,而H-C组细胞凋亡率较HUVECs对照组明显降低,两者具有显著差异。进一步应用Western blotting分析显示经VP-16刺激后,H-S细胞中p-p38蛋白表达较HUVECs和H-C组细胞显著增加;在H-S中添加SB203580(20μmol/L)后,VP-16诱导的细胞凋亡现象被显著抑制。结论:CREG过表达可能通过抑制p38 MAPK的激活阻遏VP-16诱导的HU-VECs凋亡。 展开更多
关键词 E1A激活基因阻遇子 细胞凋亡 P38 人脐静脉内皮细胞
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冠脉旁路移植手术桥血管模型 被引量:1
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作者 祝岩 王辉山 +2 位作者 李新民 汪曾炜 王丽慧 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期804-807,共4页
目的 建立冠状动脉旁路移植手术中的动脉桥血管动物模型,为研究冠脉搭桥手术中桥血管的血流动力学和生理功能建立实验平台.方法 家兔10只,12个月龄左右,麻醉后分别获取右侧的股动脉远端及同侧的颈动脉各一段,二者长度相似,约1~1.5 cm.... 目的 建立冠状动脉旁路移植手术中的动脉桥血管动物模型,为研究冠脉搭桥手术中桥血管的血流动力学和生理功能建立实验平台.方法 家兔10只,12个月龄左右,麻醉后分别获取右侧的股动脉远端及同侧的颈动脉各一段,二者长度相似,约1~1.5 cm.操作时注意避免损伤血管内膜.适当处理后将股动脉血管段端端吻合至颈动脉缺损处,建立桥血管模型,而股动脉缺损血管由颈动脉替代以防止下肢缺血坏死.闭合切口,动物饲养3周后获取移植于颈部的股动脉和左侧的颈动脉,分别用于鉴定血管内皮功能、血管收缩相似性实验以及经HE染色后进行病理形态学观测.结果 所有家兔无死亡.移植的股动脉血管全部保持通畅,血管外径增粗,管腔扩张,与原颈动脉接近.镜下观察提示移植的股动脉血管壁增厚,平滑肌层细胞适应性肥大,弹性纤维明显增多、增粗.绘制桥血管静息张力-苯肾上腺素浓度收缩曲线,提示桥血管壁产生的静息张力与苯肾上腺素浓度成正相关,并且与颈动脉具有相似的血管收缩性.结论 我们建立的桥血管动物模型,可行性和重复性都比较好,对血管内皮损伤小,符合临床实际中桥血管级别的匹配以及血液流体力学要求.桥血管与原血管具有相似的解剖结构和生理功能,是一种理想的动物模型. 展开更多
关键词 冠脉旁路移植术 桥血管 痉挛 动物模型
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E1A激活基因阻遏子基因表达变化与颈动脉血管重塑的关系 被引量:1
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作者 李洋 闫承慧 +2 位作者 田孝祥 彭程飞 韩雅玲 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第2期161-168,共8页
E1A激活基因阻遏子(CREG)是一种广泛表达的小分子糖蛋白,但其生物学功能仍不完全清楚.为了探索病理性血管重塑的病理生理机制以及CREG在其中发挥的调控作用,采用颈动脉导丝损伤模型构建小鼠病理性血管重塑模型,应用小动物超声、Masson... E1A激活基因阻遏子(CREG)是一种广泛表达的小分子糖蛋白,但其生物学功能仍不完全清楚.为了探索病理性血管重塑的病理生理机制以及CREG在其中发挥的调控作用,采用颈动脉导丝损伤模型构建小鼠病理性血管重塑模型,应用小动物超声、Masson染色、免疫组织化学染色、RT-PCR、Western-blot等方法检测小鼠颈动脉内膜-中膜厚度、胶原含量、Ⅰ型胶原和CREG表达变化.结果表明,小鼠颈动脉损伤后3 d血管壁CREG m RNA和蛋白质水平迅速下降,损伤后7 d CREG表达回升,至损伤后14 d和28 d基本恢复到正常对照组水平.血管损伤后3 d血管壁中Ⅰ型胶原m RNA水平开始升高,损伤后7 d血管壁开始增厚,管壁中Ⅰ型胶原表达水平继续增高,损伤后14 d和28 d新生内膜形成,管腔严重狭窄,Ⅰ型胶原在管壁和新生内膜内大量表达.血管损伤早期CREG表达水平的变化与病理性血管重塑程度呈负相关关系,CREG的表达为先迅速降低,再逐渐回升,而胶原表达和血管重塑程度则表现为持续加重.上述研究结果提示,CREG基因表达参与血管损伤导致的病理性血管重塑过程,并可能决定了血管重塑的进程和结局. 展开更多
关键词 E1A激活基因阻遏子 血管重塑 小鼠
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血管内皮生长因子受体-2在植入前小鼠胚胎发育中的表达变化 被引量:1
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作者 韩雅玲 李颖佳 +2 位作者 齐岩梅 康建 闫承慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1259-1262,共4页
目的:探讨植入前小鼠胚胎血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2/Flk-1)的表达规律及其在小鼠胚胎发育中的作用。方法:对0.5-3.5d小鼠胚胎行全胚免疫荧光染色及反转录-聚合酶链反应,观察胚胎发育过程中Flk-1表达时相及其变化;取8细胞期胚胎行... 目的:探讨植入前小鼠胚胎血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2/Flk-1)的表达规律及其在小鼠胚胎发育中的作用。方法:对0.5-3.5d小鼠胚胎行全胚免疫荧光染色及反转录-聚合酶链反应,观察胚胎发育过程中Flk-1表达时相及其变化;取8细胞期胚胎行体外培养,加入5mg/LFlk-1中和抗体,分析36h囊胚形成率。结果:在植入前小鼠胚胎中Flk-1mRNA于4细胞期开始表达,8细胞期达高峰,桑椹胚期和囊胚期无表达;Flk-1蛋白表达定位于胚胎外缘和细胞交界处,于4细胞期和8细胞期表达呈阳性,桑椹胚期、囊胚期表达呈阴性;于体外培养的8细胞期培养液中加入5mg/L中和抗体后,36h囊胚形成率降低。结论:在小鼠植入前胚胎发育不同阶段Flk-1表达不尽相同,其作用可能与Flk-1促进植入前胚胎发育有关。 展开更多
关键词 受体 血管内皮生长因子 胚胎发育 小鼠
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