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传统发酵豆制品中原核微生物多样性的研究 被引量:14
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作者 陈浩 樊游 +2 位作者 陈源源 左志锐 王正祥 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期230-232,共3页
通过构建16SrDNA基因文库的方法,对2份不同种类的豆酱样品中原核微生物的多样性进行了分析。另外动态监测了一份酱油酱醅样品发酵过程中3个不同阶段原核微生物的变化情况。研究表明,发酵样品中的优势乳酸菌为魏斯氏菌(Weissella cibaria... 通过构建16SrDNA基因文库的方法,对2份不同种类的豆酱样品中原核微生物的多样性进行了分析。另外动态监测了一份酱油酱醅样品发酵过程中3个不同阶段原核微生物的变化情况。研究表明,发酵样品中的优势乳酸菌为魏斯氏菌(Weissella cibaria,Weissella confusa,Weissella paramesenteroides)和嗜盐四联球菌(Tetragenococcus halophilus)。另外还检测到芽孢杆菌、葡萄球菌、肠杆菌、柠檬酸杆菌、泛菌、不动杆菌、库特氏菌等细菌种群的存在。 展开更多
关键词 传统发酵豆制品 16SrDNA 微生物多样性
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分子生物学教学模式改革的探索与实践 被引量:16
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作者 陈献忠 王正祥 《安徽农学通报》 2010年第21期174-177,共4页
分子生物学是生物工程与生物科学类本科专业的重要(专业)基础课程,具有知识量大、发展迅速、与其他相关学科关系密切等特点。如何使学生能够掌握分子生物学基本理论和技术并学以致用是教学过程中需要探索和实践的课题。
关键词 分子生物学 教学模式 教学评价 创新能力 改革实践
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石蒜总生物碱的提取及其对酒精发酵过程的抑制机理 被引量:3
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作者 杨馨 张梁 +1 位作者 丁重阳 石贵阳 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第12期83-87,共5页
基于对石蒜生物碱抑菌作用的研究,结合生物碱的药用价值,提出酒精发酵前提取生物碱的必要性。通过单因素试验探讨生物碱的提取方式和提取条件对生物碱提取率的影响,结果表明,提取剂为甲醇、料醇比1:15(g/mL)、提取温度60℃、提取时间1h... 基于对石蒜生物碱抑菌作用的研究,结合生物碱的药用价值,提出酒精发酵前提取生物碱的必要性。通过单因素试验探讨生物碱的提取方式和提取条件对生物碱提取率的影响,结果表明,提取剂为甲醇、料醇比1:15(g/mL)、提取温度60℃、提取时间1h、提取液pH11.0条件下,生物碱的提取量达28.70mg/g;进一步对含有生物碱和不含生物碱的两种石蒜原料进行酒精发酵过程比较,结果显示,石蒜生物碱对糖化酶活性和工业酒精酵母的生长均具有明显抑制作用,对α-淀粉酶则影响较小,初步揭示了石蒜生物碱对酒精发酵过程的抑制机理。 展开更多
关键词 石蒜 生物碱提取 酒精发酵 抑制机理
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后基因组时代的丝状真菌基因组学与代谢工程 被引量:8
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作者 陈献忠 沈微 +1 位作者 樊游 王正祥 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1067-1078,共12页
丝状真菌不仅是传统发酵工业中抗生素、酶制剂和有机酸的主要生产者,而且也是代谢工程育种中异源蛋白表达的重要细胞工厂。丝状真菌的遗传修饰和代谢工程研究是现代工业生物技术领域最具活力的研究方向之一。特别是与细菌和酵母相比,丝... 丝状真菌不仅是传统发酵工业中抗生素、酶制剂和有机酸的主要生产者,而且也是代谢工程育种中异源蛋白表达的重要细胞工厂。丝状真菌的遗传修饰和代谢工程研究是现代工业生物技术领域最具活力的研究方向之一。特别是与细菌和酵母相比,丝状真菌在细胞生长、营养需求、环境适应性、翻译后修饰、蛋白分泌能力和生物安全性等方面具有显著的优势。文章综述了丝状真菌作为异源蛋白表达系统在基因组学技术研究和代谢工程研究方面的最新进展。作者在分析丝状真菌基因组结构、特点的基础上,阐述了比较基因组学、蛋白质组学、转录组学和代谢组学等对丝状真菌的代谢途径重构、新型蛋白挖掘和代谢工程育种中的作用和意义。另一方面,作者分析了丝状真菌在表达外源蛋白时遇到的瓶颈问题,总结了丝状真菌代谢工程育种中的常用策略包括异源基因的融合表达、反义核酸技术、蛋白分泌途径改造、密码子优化和蛋白酶缺陷宿主的选育等技术和手段。最后,对该领域的发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 丝状真菌 基因组学 代谢工程 异源蛋白 细胞工厂
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真菌α-淀粉酶的研究进展 被引量:21
5
作者 李松 王正祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期66-71,共6页
真菌α-淀粉酶在现代淀粉糖浆、焙烤制品、啤酒酿制及生料酒精等行业已得到广泛的应用。随着现代制糖工业与发酵工业的发展及其对真菌α-淀粉酶的使用需求,使得真菌α-淀粉酶在现代工业酶制剂中占有重要地位。对真菌α-淀粉酶的研究和利... 真菌α-淀粉酶在现代淀粉糖浆、焙烤制品、啤酒酿制及生料酒精等行业已得到广泛的应用。随着现代制糖工业与发酵工业的发展及其对真菌α-淀粉酶的使用需求,使得真菌α-淀粉酶在现代工业酶制剂中占有重要地位。对真菌α-淀粉酶的研究和利用,为满足国内市场需求、调整我国酶制剂工业结构和带动相关食品或发酵行业的发展等具有重要意义。从真菌α-淀粉的催化机制、来源、异源表达及应用等方面进行了介绍。 展开更多
关键词 真菌Α-淀粉酶 淀粉糖浆 催化机制 异源表达 应用
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黑曲霉电转化条件的研究 被引量:4
6
作者 李松 王正祥 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期11-15,共5页
研究避免了繁琐的原生体制备过程,直接使用萌发的黑曲霉孢子进行电转化,以潮霉素B作为筛选标记,从孢子萌发时间、电场强度及质粒浓度等方面考察了电转化效率的影响因素。研究表明,针对A.nigerMGG029-ΔaamA,其理想的电转化条件:孢子龄为... 研究避免了繁琐的原生体制备过程,直接使用萌发的黑曲霉孢子进行电转化,以潮霉素B作为筛选标记,从孢子萌发时间、电场强度及质粒浓度等方面考察了电转化效率的影响因素。研究表明,针对A.nigerMGG029-ΔaamA,其理想的电转化条件:孢子龄为4d,孢子萌发时间为2h,电场强度为5kV/cm。在上述条件下分别使用1μg环状或线状pBC-Hygro质粒DNA进行转化,平均可以得到34个和51个转化子,而在同样条件下使用质粒pRS303H平均可以获得163个和258个转化子。 展开更多
关键词 黑曲霉 萌发孢子 电转化
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酿酒酵母表面展示β-淀粉酶及其酶学性质研究 被引量:2
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作者 杨华 樊游 +3 位作者 沈微 石贵阳 SurenSingh 王正祥 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期135-138,共4页
通过PCR技术扩增来源于大麦的β-淀粉酶基因,将其与酿酒酵母细胞壁蛋白α凝集素基因在读框内融合,构建得到表面展示载体pBA-AG,进一步将该重组质粒通过遗传转化,整合到酿酒酵母W303-1A的染色体中,获得了β-淀粉酶经过α凝集素锚定信号... 通过PCR技术扩增来源于大麦的β-淀粉酶基因,将其与酿酒酵母细胞壁蛋白α凝集素基因在读框内融合,构建得到表面展示载体pBA-AG,进一步将该重组质粒通过遗传转化,整合到酿酒酵母W303-1A的染色体中,获得了β-淀粉酶经过α凝集素锚定信号结合到细胞壁上的重组酵母。重组酵母表面展示的β-淀粉酶活力为131U/g干细胞。对展示的β-淀粉酶酶学性质研究表明,其最适反应温度为50℃,最适作用pH为5.0,与游离酶相比,其温度稳定性和pH稳定性均得到提高。本研究利用α凝集素系统首次将β-淀粉酶成功展示在酿酒酵母表面,为以酿酒酵母为基础的全细胞催化剂研究与应用打下了一定基础。 展开更多
关键词 酿酒酵母 Β-淀粉酶 表面展示 全细胞催化
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高温α-淀粉酶高表达的研究 被引量:2
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作者 黄春敏 沈微 王正祥 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期36-40,共5页
为了进一步提高工业上重要的地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶(BLA)的发酵生产性能,以高温α-淀粉酶基因(amyL)为目的基因,构建地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶基因产生菌的整合表达通用性质粒pB li16 s-amyL-EryR,采用原生质体转化法将此整合... 为了进一步提高工业上重要的地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶(BLA)的发酵生产性能,以高温α-淀粉酶基因(amyL)为目的基因,构建地衣芽胞杆菌高温α-淀粉酶基因产生菌的整合表达通用性质粒pB li16 s-amyL-EryR,采用原生质体转化法将此整合型表达质粒导入B.licheniformis CBBD302,在整合表达质粒中的16SrDNA序列的介导下实现了同源整合。挑选20株阳性转化子,分别通过提高培养基中红霉素的使用浓度,增加染色体上目的基因amyL的拷贝数,由此获得的重组菌的BLA生产水平提高了56.37%-80.29%。 展开更多
关键词 高温Α-淀粉酶 地衣芽胞杆菌 基因倍增 整合表达
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产甘油假丝酵母与酿酒酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶基因的功能比较 被引量:5
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作者 陈献忠 方慧英 +4 位作者 饶志明 沈微 诸葛斌 王正祥 诸葛健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期198-205,共8页
胞浆3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酿酒酵母细胞甘油合成过程中的关键限速酶.尽管高产甘油菌株产甘油假丝酵母基因组中编码该酶的基因CgGPD已经被克隆出来,但是具体的功能,特别是与酿酒酵母GPD1和GPD2基因的功能比较值得进一步研究.以酿酒酵... 胞浆3-磷酸甘油脱氢酶(GPD)是酿酒酵母细胞甘油合成过程中的关键限速酶.尽管高产甘油菌株产甘油假丝酵母基因组中编码该酶的基因CgGPD已经被克隆出来,但是具体的功能,特别是与酿酒酵母GPD1和GPD2基因的功能比较值得进一步研究.以酿酒酵母渗透压敏感型的gpd1/gpd2和gpd1突变株为宿主,分别导入CgGPD、GPD1和GPD2基因,比较分析了CgGPD、GPD1和GPD2基因在高渗透压胁迫条件下和厌氧环境中的表达调控,及其对细胞甘油合成能力的影响.研究发现,GPD1基因受到渗透压诱导表达,GPD2基因在细胞厌氧条件下起着氧化还原平衡调节作用,而CgGPD基因不仅能够在渗透压胁迫条件下通过过量快速合成甘油调节渗透压平衡,而且能够在厌氧培养环境中互补GPD2基因的缺失,使gpd1/gpd2缺失突变株能够正常生长,同时提高了突变株的甘油合成能力.结果表明,CgGPD基因在gpd1/gpd2缺失突变株中既具有GPD1基因的功能,又能发挥GPD2基因的功能. 展开更多
关键词 产甘油假丝酵母 3-磷酸甘油脱氢酶 甘油合成 渗透压调节 氧化还原平衡
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分泌高效蛋白的地衣芽孢杆菌及其工业应用 被引量:14
10
作者 牛丹丹 石贵阳 王正祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期45-50,共6页
革兰氏阳性、腐生性地衣芽孢杆菌是高温α-淀粉酶、碱性蛋白酶的重要工业生产用菌株。其基因组大小约为4.22 Mb,已被多个国际机构认定为GRAS工业菌株。地衣芽孢杆菌具有完善的蛋白分泌体系,蛋白合成与分泌能力可达到20-25 mg/ml。在作... 革兰氏阳性、腐生性地衣芽孢杆菌是高温α-淀粉酶、碱性蛋白酶的重要工业生产用菌株。其基因组大小约为4.22 Mb,已被多个国际机构认定为GRAS工业菌株。地衣芽孢杆菌具有完善的蛋白分泌体系,蛋白合成与分泌能力可达到20-25 mg/ml。在作为外源基因表达系统的研究中,建立了其遗传转化方法,完成了多种表达载体的构建与应用,以及进行了作为宿主细胞的地衣芽孢杆菌的遗传改良与多种重组蛋白表达的研究。显示地衣芽孢杆菌具有作为重组蛋白高效分泌表达的巨大潜力与工业应用价值。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 基因表达 工业酶制剂
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解淀粉芽孢杆菌BamHI甲基转移酶基因克隆、功能鉴定与序列分析 被引量:4
11
作者 刘洋 沈微 +1 位作者 石贵阳 王正祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期65-68,共4页
从解淀粉芽孢杆菌Baillus amyloliquefaciens CICIM B2125中克隆了BamHI甲基转移酶基因(bamHIM),并在大肠杆菌JM109中得到了成功表达。该基因含有1271bp的开放阅读框(ORF),编码423个氨基酸,成熟蛋白分子量为49kD。该基因在自身启动子引... 从解淀粉芽孢杆菌Baillus amyloliquefaciens CICIM B2125中克隆了BamHI甲基转移酶基因(bamHIM),并在大肠杆菌JM109中得到了成功表达。该基因含有1271bp的开放阅读框(ORF),编码423个氨基酸,成熟蛋白分子量为49kD。该基因在自身启动子引导下,表达了具有活性的BamHI甲基转移酶(M.BamHI)。该酶可以将BamHI位点的碱基甲基化。氨基酸序列分析表明该酶存在有NADB_Rossmann结构域。 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 BamHI甲基转移酶 序列分析
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响应面法优化Rhizopus microsporus var.chinensis产生淀粉酶的条件 被引量:2
12
作者 李彧娜 石贵阳 +1 位作者 王武 王正祥 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期184-186,共3页
对Rhizopus microsporus var.chinensis固态发酵产生淀粉酶的条件进行了优化。首先采用单因子实验确定最适固态发酵基质为小麦麸皮,最适碳源和氮源分别为可溶性淀粉和硫酸铵,通过控制培养基初始pH为3.0、初始湿度为70%时,使其生淀粉酶... 对Rhizopus microsporus var.chinensis固态发酵产生淀粉酶的条件进行了优化。首先采用单因子实验确定最适固态发酵基质为小麦麸皮,最适碳源和氮源分别为可溶性淀粉和硫酸铵,通过控制培养基初始pH为3.0、初始湿度为70%时,使其生淀粉酶产量提高3.5倍。在此基础上,利用响应面中心组合设计对显著因素进行优化,得出每500mL三角摇瓶中含小麦麸皮13.7g、可溶性淀粉0.063g、硫酸铵0.052g时,生淀粉酶产量达到48.50U/mL,比初始产量提高了8倍。 展开更多
关键词 生淀粉酶 响应面优化 RHIZOPUS microsporus var.chinensis
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利用Native制备电泳分离来源于Rhizopus microsporus var. chinensis的葡萄糖淀粉酶同工酶 被引量:1
13
作者 李彧娜 石贵阳 +1 位作者 王武 王正祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期1-4,共4页
将Native制备电泳应用于Rhizopus microsporus var. chinensis中2个葡萄糖淀粉酶同工酶的分离,考察了电泳缓冲系统、凝胶浓度和凝胶长度对分离效果的影响。结果表明:先使用Ornstein-Davis系统分离同工酶,再使用0.02mol/L,pH6.2的NaAc.CH... 将Native制备电泳应用于Rhizopus microsporus var. chinensis中2个葡萄糖淀粉酶同工酶的分离,考察了电泳缓冲系统、凝胶浓度和凝胶长度对分离效果的影响。结果表明:先使用Ornstein-Davis系统分离同工酶,再使用0.02mol/L,pH6.2的NaAc.CH3COOH缓冲液洗脱,在长度为6cm的7%的Native电泳胶上,2个性质相近仅电泳迁移率略有差别的同工酶能有效分离。分离回收的蛋白质可保持其活力,便于后续研究。 展开更多
关键词 制备电泳 RHIZOPUS microsporus var.chinensis 葡萄糖淀粉酶 同工酶
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地衣芽胞杆菌dif序列的功能鉴定
14
作者 李宁 牛丹丹 +2 位作者 陈献忠 石贵阳 王正祥 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期11-15,共5页
地衣芽胞杆菌是重要的工业菌株,如何为其建立一种有效的基因删除技术是对该菌株进行遗传改良的基础。枯草芽胞杆菌difBs序列已经被成功用于枯草芽胞杆菌多基因的删除。在分析地衣芽胞杆菌基因组序列并获得与枯草芽胞杆菌difBs序列十分... 地衣芽胞杆菌是重要的工业菌株,如何为其建立一种有效的基因删除技术是对该菌株进行遗传改良的基础。枯草芽胞杆菌difBs序列已经被成功用于枯草芽胞杆菌多基因的删除。在分析地衣芽胞杆菌基因组序列并获得与枯草芽胞杆菌difBs序列十分相似的一段序列difBLi的基础上,构建了在庆大霉素抗性基因两侧具有difBLi的重组质粒pMD19-difGm和pHY-XI′::difGm,通过电击转化法将质粒pHY-XI′::difGm导入B.lichen-iformisATCC14580中,筛选获得了具有庆大霉素抗性的转化子。在转化子的传代过程中,重组质粒的庆大霉素抗性基因在体内Xer/dif位点特异性重组系统的介导下通过其侧翼的dif位点进行同源重组而被准确删除。确证了地衣芽胞杆菌中dif序列的功能,为地衣芽胞杆菌基因组中多基因的删除提供了一种新的实验途径。 展开更多
关键词 地衣芽胞杆菌 位点特异性重组 Xer/dif重组系统 基因删除
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地衣芽孢杆菌碱性果胶酶基因pelB的克隆与鉴定 被引量:1
15
作者 俞玲 沈微 +2 位作者 牛丹丹 石贵阳 王正祥 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期170-173,共4页
果胶裂解酶(E.C.4.2.2.2)可水解聚半乳糖醛酸α-1,4糖苷键释放出可溶性的不饱和寡聚乳糖醛酸,用于水果加工、棉纺织预处理、饲料工业、咖啡和茶发酵、油提取等方面。本研究从地衣芽孢杆菌CICIM B1699染色体DNA中扩增出一种新的果胶裂解... 果胶裂解酶(E.C.4.2.2.2)可水解聚半乳糖醛酸α-1,4糖苷键释放出可溶性的不饱和寡聚乳糖醛酸,用于水果加工、棉纺织预处理、饲料工业、咖啡和茶发酵、油提取等方面。本研究从地衣芽孢杆菌CICIM B1699染色体DNA中扩增出一种新的果胶裂解酶编码基因pelB,再将其克隆入启动子PQ下游,分别获得重组质粒pLa-PQ-pelB和pHY-PQ-pelB。在重组质粒pLa-PQ-pelB的介导下,基因pelB在大肠杆菌JM109中得到表达,所表达的重组果胶裂解酶的酶学性质显示其最适反应温度为45℃,最适pH为10.5。在重组质粒pHY-PQ-pelB的介导下,基因pelB在地衣芽孢杆菌CICIM B1699中表达4.2U/mL的重组果胶裂解酶酶活,较对照菌株高出60%。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 果胶酶 克隆表达 酶学性质
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过量表达DegQ有利于地衣芽胞杆菌表达高温α-淀粉酶 被引量:1
16
作者 杨艳华 牛丹丹 +1 位作者 石贵阳 王正祥 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期21-24,共4页
研究了过量表达DegQ对地衣芽胞杆菌表达高温α-淀粉酶的影响。通过PCR从地衣芽胞杆菌基因组中扩增得到degQ基因,将其克隆到pHY-P43载体中,得到重组质粒pHY-P43-degQ。将其分别转化至地衣芽胞杆菌ATCC14580和B0204中,得到重组菌ATCC14580... 研究了过量表达DegQ对地衣芽胞杆菌表达高温α-淀粉酶的影响。通过PCR从地衣芽胞杆菌基因组中扩增得到degQ基因,将其克隆到pHY-P43载体中,得到重组质粒pHY-P43-degQ。将其分别转化至地衣芽胞杆菌ATCC14580和B0204中,得到重组菌ATCC14580(pHY-P43-degQ)和B0204(pHY-P43-degQ)。通过发酵试验,证实degQ基因的表达能够显著提高高温α-淀粉酶的表达水平。 展开更多
关键词 DegQ 地衣芽胞杆菌 Α-淀粉酶
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