NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究 被引量：39

1

作者 许丽艳 李恩民 +2 位作者 熊华淇 蔡唯佳 沈忠英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期839-843,共5页

为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后... 为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较 .结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达 ,其cDNA序列与小鼠 2 4p3、大鼠NRL (neu relatedlipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性 .这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用 。 展开更多

关键词 NGAL cDNA微列阵 差异表达基因 食管癌 永生化食管上皮细胞 恶性转化 过表达

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NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究 被引量：1

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作者 孟令英 缪成贵 +3 位作者 杜则澎 蔡唯佳 许丽艳 李恩民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期661-670,共10页

以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, ... 以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152～- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子. 展开更多

关键词 NGAL基因 寡核苷酸DNA亲和层析 MALDI-TOF-MS TPA反应元件 TPA反应元件结合蛋白 TPA反应性

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肿瘤细胞侵袭性体外检测的扫描电镜观察 被引量：4

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作者 沈健 陈铭华 +2 位作者 郑瑞明 陈家俊 沈忠英 《电子显微学报》 CAS CSCD 2000年第3期313-314,共2页

关键词 肿瘤细胞 侵袭性 体外检测 扫描电镜

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磷酸化或乙酰化修饰使Fascin的促癌功能翻转 被引量：2

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作者 李大嘉 许丽艳 +1 位作者 程银伟 李恩民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期674-684,共11页

大量研究结果表明,食管鳞癌等恶性肿瘤中,Fascin异常高表达并发挥促癌功能,其与癌症患者的不良预后密切相关。近年来,包括本实验室在内,多家实验室的研究结果一致表明,磷酸化或乙酰化修饰可使Fascin的促癌功能翻转,犹如川剧中的“变脸... 大量研究结果表明,食管鳞癌等恶性肿瘤中,Fascin异常高表达并发挥促癌功能,其与癌症患者的不良预后密切相关。近年来,包括本实验室在内,多家实验室的研究结果一致表明,磷酸化或乙酰化修饰可使Fascin的促癌功能翻转,犹如川剧中的“变脸”。最近,本室进一步研究发现,Fascin的翻译后修饰明显影响Fascin小分子抑制剂的抑癌效果,提示以Fascin为靶点的抗肿瘤药物研究应该将Fascin翻译后修饰状态纳入是否适合用药的评价体系中。为此,本文在系统评述Fascin促癌功能的基础上,重点讨论了翻译后修饰对Fascin功能的调控作用,以及翻译后修饰对Fascin小分子抑制剂抑癌功效的影响;同时还对相关领域针对Fascin的未来研究趋势进行了展望。 展开更多

关键词 FASCIN 蛋白质翻译后修饰 肿瘤 微丝成束蛋白抑制剂

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反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响 被引量：9

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作者 林珏龙 许丽艳 +6 位作者 李恩民 蔡唯佳 牛永东 方昆阳 熊华淇 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期409-415,共7页

为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞N... 为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆 .在细胞内F 肌动蛋白 (F actin)及DNA荧光双标记基础上 ,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞中F actin和DNA含量、F actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征 .结果显示 ,反义封闭NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞F actin的含量明显降低 ,与永生化食管上皮细胞SHEE相近 ,但细胞分裂增殖指数未见明显变化 .表明反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响 ,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显 .激光共聚焦显微镜扫描观测显示 ,反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F actin分布均匀 ,F actin小体减少 ,细胞间连接重新建立 ,结构较紧密 ,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致 .提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F actin产生明显影响 ,推测癌细胞的微丝骨架F 展开更多

关键词 微丝骨架 F-肌动蛋白 NGAL基因 SHEEC细胞 细胞周期

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肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定 被引量：5

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作者 高书颖 李恩民 +4 位作者 孟令英 崔磊 袁华敏 杜则澎 许丽艳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期288-296,共9页

研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶... 研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要. 展开更多

关键词 EZRIN基因 转录调控元件 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统 凝胶电泳迁移率变动分析

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NGAL蛋白诱导食管癌细胞发生自噬 被引量：4

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作者 张丕显 方王楷 +10 位作者 许丽艳 蒋纪恺 沈忠英 杜则澎 陆晓峰 周飞 谢剑君 吴炳礼 崔有宏 谢东 李恩民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第8期978-986,共9页

以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)与食管癌密切相关,改变NGAL表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明.在酵母细胞中表达NGAL蛋白,柱层析分离纯化.筛... 以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)与食管癌密切相关,改变NGAL表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明.在酵母细胞中表达NGAL蛋白,柱层析分离纯化.筛选NGALR(NGAL receptor)高表达与弱表达的人食管癌细胞系EC1.71和EC109作为实验细胞模型.5-FAM标记NGAL蛋白,加入到细胞培养上清中,对比研究NGAL蛋白入胞情况、细胞形态学改变、细胞自噬体产生、自噬相关基因表达、细胞内铁离子与铁蛋白水平以及相关细胞信号转导激酶的活性等.结果表明,NGAL蛋白可经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用,致使细胞发生典型的自噬性形态结构变化,自噬体大量产生,自噬相关基因的表达发生相应变化,ERK被激活,但细胞内的铁离子与铁蛋白未受明显影响.上述结果提示,诱导细胞发生自噬是外源性NGAL蛋白经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用的机制之一,与NGAL蛋白跨膜转铁未见直接关联,而ERK信号转导途径可能参与了这一过程. 展开更多

关键词 NGAL NGALR 自噬 细胞周期 蛋白质内吞 食管癌细胞

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食管癌细胞NGAL基因-152～-60区段存在TPA反应元件 被引量：3

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作者 许丽艳 李恩民 +5 位作者 牛永东 蔡唯佳 袁华敏 常静霞 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第2期140-148,共9页

以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.... 以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用. 展开更多

关键词 中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白基因 食管癌细胞 基因表达调控 TPA反应元件

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一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达 被引量：2

9

作者 李恩民 许丽艳 +2 位作者 杨帆 袁兰 陈跃 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期378-384,共7页

以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的... 以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况 .然后对过表达基因的表达序列标签 (expressedsequencetag ,EST)实施序列测定 ,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析 .结果先后两次从 6 9个SSH阳性克隆中共鉴定出 6个线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA)编码的基因 ,即ND 4L、ND 4、COX 2、Lys tRNA、ATP 8和ATP 6 .表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达 .另外 ,在ND 4L/ND 4基因的片段 (10 736～ 114 4 9)上发现了三处同型单核苷酸置换 (10 872T→C ,110 0 1A→G ,11346A→G) ,在COX 2 /Lys tRNA/ATP 8/ATP 6基因片段 (80 11～ 85 89)上发现了一处单核苷酸缺失(8380A) .氨基酸序列分析表明 ,在NO诱导的EC10 9中可能存在着一种结构异常的ATP 8肽链 (一条在N端被截短的只有 11个氨基酸残基的肽链 ,而正常的ATP 8肽链为 6 8个氨基酸残基 ) . 展开更多

关键词 一氧化氮 诱导 食管癌细胞 线粒体DNA编码基因 基因过表达 抑制消减杂交

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人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用 被引量：2

10

作者 许丽艳 李恩民 +6 位作者 牛永东 蔡唯佳 韩溟 吴炳礼 张灿 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期295-300,共6页

以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedli... 以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因 .为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质 蛋白质或蛋白质 DNA相互作用为基础的功能网络调控关系 ,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库 .采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞 (SHEEC ,由人永生化食管上皮细胞转化而来 )中提取细胞总RNA ,采用OligotexmRNAKit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA ,采用SuperScriptTM ChoiceSystemForcDNASynthesisKit合成cDNA ,以PolyA+ mRNA为探针 ,化学发光法监测cDNA合成的质量 ,以 pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库 .文库的滴度为 1 19× 10 9cfu/ml,重组片段大小主要集中在 0 5～6 0kb ,重组率为 5 0 % .在此基础上 ,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF κB元件结合因子进行了筛选 ,在SD/ his/ leu/[+15mmol/L 3 AT ]缺陷培养基平板上共获得了约 36 0个单克隆 .按照平板上酵母单克隆直径的大小 ,选择直径大于 2mm者 91个 ,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验? 展开更多

关键词 人食管癌 CDNA文库 构建 鉴定 应用 酵母杂交

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转染HPV16E6基因人树突状细胞疫苗的制备及生物学特性 被引量：2

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作者 任会均 张锦堃 +2 位作者 陈东晓 李军 魏锡云 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1032-1035,1040,共5页

目的制备来源于人外周血并转染HPV16E6基因的树突状细胞(DC)疫苗,检测其细胞形态、分子表型及诱导的免疫效应。方法细胞因子扩增人外周血DC,Lipofectamine转染HPV16E6制备DC疫苗。动态形态学观察,免疫细胞化学及流式细胞术检测分子表达... 目的制备来源于人外周血并转染HPV16E6基因的树突状细胞(DC)疫苗,检测其细胞形态、分子表型及诱导的免疫效应。方法细胞因子扩增人外周血DC,Lipofectamine转染HPV16E6制备DC疫苗。动态形态学观察,免疫细胞化学及流式细胞术检测分子表达,体外诱导并测定CTL活性。结果转染DC呈形态迥异的多突起状,其E6蛋白、CD80、CD86和CD83分子的表达率依次为47.3%、82.5%、79.8%和85.7%,诱导杀伤Caski细胞的活性明显高于对照组(P<0.01)。结论转染DC疫苗保持了功能成熟DC的形态特征,且内源性表达E6蛋白,能诱导高效的特异性抗肿瘤免疫应答。 展开更多

关键词 树突状细胞 E6基因 基因转染 脂质体 CASKI细胞

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早期鼻咽癌癌细胞核的DNA含量及其分布型式 被引量：4

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作者 郝兴培 宗永生 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期174-178,共5页

采用Leitz—MPV Ⅲ型显微镜光度计检测75例临床Ⅰ期鼻咽癌癌细胞核的DNA含量,并分析其分布型式。结果显示:早期鼻咽癌癌细胞核DNA的分布按其主峰所在可分为五种型式。癌细胞核的DNA指数、单位面积DNA指数、2.5～5.0cDNA细胞数和>5.0c... 采用Leitz—MPV Ⅲ型显微镜光度计检测75例临床Ⅰ期鼻咽癌癌细胞核的DNA含量,并分析其分布型式。结果显示:早期鼻咽癌癌细胞核DNA的分布按其主峰所在可分为五种型式。癌细胞核的DNA指数、单位面积DNA指数、2.5～5.0cDNA细胞数和>5.0cDNA细胞数均随着Ⅱ型、Ⅲ和Ⅳ型而逐步增加;而Ⅱ+Ⅲ型的各个相应数值恰好位于Ⅱ型和Ⅲ型之间,NP型则位于Ⅲ型与Ⅳ型之间。上述结果说明,鼻咽癌发生的早期,自觉症状出现不久,绝大多数病例中癌细胞的间变性(多形性和不典型性)程度并不高。因此,早期治疗非常必要。 展开更多

关键词 DNA 含量 鼻咽肿瘤 癌细胞核

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食管鳞状细胞癌p53基因突变及其蛋白表达 被引量：3

13

作者 李淳 程继东 沈忠英 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 1999年第4期363-364,共2页

关键词 食管肿瘤 食管鳞状细胞癌 P53基因 基因突变

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鼻咽小梭形细胞癌的形态定量学特征 被引量：2

14

作者 陈茂怀 宗永生 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期179-181,共3页

采用图像分析仪检测鼻咽小梭形细胞癌的多个形态定量学参数。结果显示其特征如下:(1)平均核面积<27.84μm^2;(2)平均核椭圆形状因子<398.95;(3)平均核圆度>2.09;(4)平均核规则形状因子<866.01。因此,作者认为上述四个参数... 采用图像分析仪检测鼻咽小梭形细胞癌的多个形态定量学参数。结果显示其特征如下:(1)平均核面积<27.84μm^2;(2)平均核椭圆形状因子<398.95;(3)平均核圆度>2.09;(4)平均核规则形状因子<866.01。因此,作者认为上述四个参数可作为诊断鼻咽小梭形细胞癌的客观指标。 展开更多

关键词 梭形细胞癌 形态定量学 鼻咽肿瘤

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高转移潜力食管癌细胞株的建立及其生物学特征 被引量：1

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作者 谢仰民 周飞 +3 位作者 谢剑君 蔡唯佳 许丽艳 李恩民 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第12期727-730,772,共5页

目的建立具有高转移潜力食管癌细胞株并研究其生物学特征。方法将食管癌细胞系EC109细胞悬液异位移植到SCID小鼠胃壁,约3个月后或动物濒临死亡时处死,行病理学解剖,将肉眼可见的纵隔淋巴结转移瘤块接种于SCID鼠皮下扩增,然后取小鼠皮下... 目的建立具有高转移潜力食管癌细胞株并研究其生物学特征。方法将食管癌细胞系EC109细胞悬液异位移植到SCID小鼠胃壁,约3个月后或动物濒临死亡时处死,行病理学解剖,将肉眼可见的纵隔淋巴结转移瘤块接种于SCID鼠皮下扩增,然后取小鼠皮下瘤组织块进行细胞培养,得到性状稳定的细胞株NMC109后,用MTT法分析细胞生长曲线,Western bloting法检测与细胞分裂增殖能力密切相关的TopoIIα表达,酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性,划痕实验和Transwell体外移动实验检测细胞的移动能力。结果与母本细胞EC109相比,所获得的细胞株NMC109其增殖能力和TopoIIα表达明显增强,MMP-9的活性明显升高,移动能力明显增强。结论获得了具有高转移潜力的食管癌细胞株。 展开更多

关键词 食管癌 肿瘤侵袭 肿瘤转移 细胞株

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鼻咽癌旁上皮细胞核DNA含量分析 被引量：1

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作者 郝兴培 宗永生 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期169-171,共3页

应用显微分光光度计测定15例鼻咽癌19处癌旁病变的上皮细胞核DNA含量并与浸润癌相比较。中、重度异型增生上皮细胞核DI及超过2.5c细胞的百分数处于单纯增生+轻度异型增生与浸润癌之间,3组DI及超过2.5c细胞的百分数差异显著。中、重度异... 应用显微分光光度计测定15例鼻咽癌19处癌旁病变的上皮细胞核DNA含量并与浸润癌相比较。中、重度异型增生上皮细胞核DI及超过2.5c细胞的百分数处于单纯增生+轻度异型增生与浸润癌之间,3组DI及超过2.5c细胞的百分数差异显著。中、重度异型增生以非整倍体为主,其细胞核DNA含量组方图相似于浸润癌。从细胞核DNA含量角度来看,中、重度异型增生是重要的癌前病变。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 癌前病变 DNA 含量 分析

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TGFβ1基因转染对大鼠树突状细胞分子表型和细胞因子分泌的影响

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作者 张新华 张锦堃 +3 位作者 梁春敏 周播江 顾云娣 钟翠平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期503-508,共6页

目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)基因转染大鼠树突状细胞(DC)表面分子表达以及细胞因子分泌的影响。方法:构建TGFβ1重组真核表达质粒TGFβ1-pcDNA3,以脂质体Am ine介导转染大鼠骨髓DC,经过W estern b lot、RT-PCR、免疫细胞化学以及... 目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)基因转染大鼠树突状细胞(DC)表面分子表达以及细胞因子分泌的影响。方法:构建TGFβ1重组真核表达质粒TGFβ1-pcDNA3,以脂质体Am ine介导转染大鼠骨髓DC,经过W estern b lot、RT-PCR、免疫细胞化学以及免疫荧光染色检测转染效率,应用FACS和免疫细胞化学等方法检测TGFβ1-DC分子表型以及细胞因子分泌的变化。结果:结果显示TGFβ1基因转染后可得到一定数量稳定的TGFβ1-DC,并获得有效TGFβ1的mRNA和蛋白表达。并发现TGFβ1-DC表面RT1B、B7-2、ICAM-1和OX62等分子表达均明显低于对照组,TGFβ1-DC分泌的Th2型细胞因子TGFβ1和IL-10的表达明显高于反义TGFβ1转染对照组,而Th1型细胞因子IL-12的合成则受到一定程度的下调。结论:TGFβ1基因转染可调节大鼠骨髓DC分子表型和细胞因子的分泌,增强DC的免疫耐受性,在器官移植治疗中有应用前景。 展开更多

关键词 TGFΒ1基因 树突状细胞 移植 大鼠

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食管癌细胞NGAL5′侧翼区存在TPA应答元件

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作者 许丽艳 李恩民 +6 位作者 王子良 牛永东 蔡唯佳 袁华敏 常静霞 沈忠英 曾毅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期135-141,共7页

在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中,NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)过表达,提示食管癌细胞NGAL转录调控区可能存在TPA应答元件.为了对食管癌细胞NGAL的这一TPA应答元件进行分段定位鉴定,首先将NGAL5′侧翼区不同长... 在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中,NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)过表达,提示食管癌细胞NGAL转录调控区可能存在TPA应答元件.为了对食管癌细胞NGAL的这一TPA应答元件进行分段定位鉴定,首先将NGAL5′侧翼区不同长度片段-1 431^+84-、1 137^+84、-945^+84、-657^+84、-416^+84和-152^+84等依次插入质粒pGLP,构建NGAL/pGLP系列报告基因荧光素酶表达载体pGLP-1431、pGLP-1137、pGLP-945、pGLP-657、pGLP-416和pGLP-152;然后将上述质粒分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,最后用5 ng/ml的TPA刺激转染的EC109,检测报告基因荧光素酶活力,综合判定报告基因荧光素酶活力变化趋势,并以此对食管癌细胞NGAL5′侧翼区TPA应答元件进行分段定位.实验结果表明,食管癌细胞NGAL5′侧翼-657^-417区段内存在着较强的TPA应答元件.生物信息学分析显示,NGAL5′侧翼-657^-417区段至少存在3个潜在的TPA应答元件,表明有应答TPA刺激的结构基础.这些研究有助于从分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL基因过表达机制. 展开更多

关键词 NGAL基因 食管癌细胞 基因表达调控 TPA应答元件

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冻融人脐血树突状细胞疫苗的抗肝癌活性

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作者 张锦堃 苏中静 +1 位作者 郑毓武 陈素钻 《实用医学杂志》 CAS 2005年第1期1-4,共4页

目的:观察人肝癌裂解抗原致敏的冻融人脐血树突状细胞(dendriticcells,DC)诱导的CTL抗肝癌活性,并观察与细胞因子联用的效应。方法:应用CD34+干细胞试剂盒和免疫磁珠标记法分选人脐血CD34+干细胞,细胞因子扩增培养为成熟DC,液氮冻存;人... 目的:观察人肝癌裂解抗原致敏的冻融人脐血树突状细胞(dendriticcells,DC)诱导的CTL抗肝癌活性,并观察与细胞因子联用的效应。方法:应用CD34+干细胞试剂盒和免疫磁珠标记法分选人脐血CD34+干细胞,细胞因子扩增培养为成熟DC,液氮冻存;人肝癌裂解抗原致敏冻融DC制备疫苗,进行DC疫苗及其与细胞因子联用的体外抗肿瘤实验,MTT检测各自诱导的CTL活性,并作统计学处理。结果:肝癌抗原致敏的人脐血冻融DC疫苗能诱导高效的CTL活性(P<0.01),与新鲜DC疫苗差异无显著意义(P>0.05)。冻融DC疫苗与1μg/mLGM-CSF联用,或与500U/mLTNF-α联用,诱导的CTL活性均明显增高(P<0.05)。结论:肝癌抗原致敏的人脐血冻融DC疫苗能诱导具有高度针对靶细胞的特异性CTL活性,与细胞因子联用有一定的协同作用。 展开更多

关键词 人脐血 DC疫苗 肝癌 抗原致敏 细胞因子 诱导 CTL活性 结论 培养 选人

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