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信号肽生物信息学分析在Neurospora crassa phyA基因鉴定中的应用 被引量:9
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作者 孙平楠 周小玲 王正祥 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1098-1101,共4页
目的对Neurospora crassa基因组中与黑曲霉phyA具有46.85%相似性的EAA33149.1蛋白基因进行鉴定并确定其功能。方法利用信号肽预测软件SignalP 3.0 Server,真核蛋白序列中精氨酸和赖氨酸前导肽切割位点以及信号肽切割位点预测软件ProP 1.... 目的对Neurospora crassa基因组中与黑曲霉phyA具有46.85%相似性的EAA33149.1蛋白基因进行鉴定并确定其功能。方法利用信号肽预测软件SignalP 3.0 Server,真核蛋白序列中精氨酸和赖氨酸前导肽切割位点以及信号肽切割位点预测软件ProP 1.0 server,跨膜结构域预测软件Tmpred和TMHMM Server v.2.0,GP I锚定位点预测软件big-P I Predictor以及亚细胞器中蛋白定位分布预测软件TargetP v1.01对EAA33149.1蛋白基因进行预测分析,根据分析结果将该基因克隆到酿酒酵母中表达。结果确定了该蛋白的信号肽、信号肽切割位点以及分泌途径。重组酿酒酵母表达的54000重组蛋白,显示了植酸酶活性。结论初步确定该蛋白基因为N.crassa phyA基因。 展开更多
关键词 信号肽 生物信息学分析 基因鉴定
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弥漫性甲状腺功能亢进症的遗传率研究 被引量:4
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作者 刘鸿禧 林珏龙 +4 位作者 李玟 郑典梅 王丽贞 李淑贞 李莉 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期14-17,共4页
本文对粤东地区204例(男49例,女155例)弥漫性甲状腺功能亢进症(以下均简称甲亢)的一级亲属和在籍贯、年龄,性别以及数量方面均与甲亢(先证者)组相对应的204例正常健康人的一级亲属的患病情况进行了分析研究.结果发现,粤东地区甲亢患者... 本文对粤东地区204例(男49例,女155例)弥漫性甲状腺功能亢进症(以下均简称甲亢)的一级亲属和在籍贯、年龄,性别以及数量方面均与甲亢(先证者)组相对应的204例正常健康人的一级亲属的患病情况进行了分析研究.结果发现,粤东地区甲亢患者的一级亲属患病率为3.232%,正常健康人一级亲属患病率为0.145%,两者对比,相差22.3倍,经 x^2检验。差异极显著(P<0.001).按多基因病遗传率公式计算,粤东地区甲亢遗传率为68.6±3.8%.此结果与先前多数学者的报告相符. 展开更多
关键词 遗传率 甲亢 病理
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pcDNA3.1-Egr.1p-p16基因联合放射治疗对裸鼠肿瘤的作用 被引量:3
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作者 马红兵 王西京 +7 位作者 胡海涛 狄政莉 夏辉 王铮 李琤 韩志楷 马洁 吴丛梅 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期7-10,15,共5页
目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种... 目的:探讨pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗移植人胰腺癌细胞JF 305裸鼠的抗肿瘤作用的 适宜照射剂量和质粒注入量。方法:不同剂量X射线照射(2,10,20Gy)及瘤内不同量脂质体包裹的pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒(10,20,30μg)注入接种JF305胰腺癌细胞的裸鼠体内,测定各组裸鼠体积以观察各种处理抑瘤效 应的差异,并用RT PCR检测放射治疗后48h各组肿瘤局部p16mRNA水平。结果:质粒注入后接受20GyX射线 照射组照射后4~28d,肿瘤生长速率明显低于2Gy和10Gy照射组(P<0.05)。质粒注入量为20μg或30μg的 联合治疗组照射后4~28d,肿瘤生长速率明显低于注入量为10μg的联合治疗组(P<0.05)。单纯接种 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组和接种pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组小鼠的肿瘤组织内有p16mRNA表达,且 pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒照射组的p16mRNA水平明显高于单纯pcDNA3.1 Egr.1p p16质粒组(P<0.05)。结 论:pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗小鼠体内抗肿瘤作用的适宜射线照射剂量为20Gy,质粒注入量为20 μg;pcDNA3.1 Egr.1p p16基因联合放射治疗的抗肿瘤作用明显优于单纯放射治疗或单纯基因治疗,这可能与辐射 激活Egr.1p基因后增强抑瘤基因p16的表达有关。 展开更多
关键词 pcDNA3.1-Egr.1p-p16重组质粒 基因联合放射治疗 X射线 抗肿瘤作用 剂量 质粒注入量
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甲基鸟嘌呤甲基转移酶表达调节在肿瘤发生和治疗中的作用 被引量:6
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作者 陈玮莹 沈忠英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期26-30,共5页
甲基鸟嘌呤甲基转移酶 (O6 methylguanine DNAmethyltransferase,MGMT)是从细菌到哺乳类机体中存在的一种独特的DNA修复蛋白 ,其作用是在DNA损伤的修复过程 ,催化DNA分子鸟嘌呤O6位上的烷基从鸟嘌呤碱基转移至MGMT蛋白的半胱氨酸残基上 ... 甲基鸟嘌呤甲基转移酶 (O6 methylguanine DNAmethyltransferase,MGMT)是从细菌到哺乳类机体中存在的一种独特的DNA修复蛋白 ,其作用是在DNA损伤的修复过程 ,催化DNA分子鸟嘌呤O6位上的烷基从鸟嘌呤碱基转移至MGMT蛋白的半胱氨酸残基上 ,而使DNA分子鸟嘌呤复原 .因此 ,机体中MGMT适当的表达有利于修复由烷化剂诱导而形成的O6烷基鸟嘌呤DNA加合物 .MGMT蛋白的含量和活性不但在基因水平受到各种因素的调控 ,并且与某些药物的直接作用有关 .调节MGMT在细胞内的活性 ,对于防御肿瘤的发生及某些肿瘤的治疗过程中克服肿瘤耐药性和克服骨髓毒性具有重要的意义 . 展开更多
关键词 甲基鸟嘌呤甲基转移酶 调控 肿瘤 耐药性 骨髓毒性 表达 致癌 肿瘤治疗
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人野生型p53 cDNA的克隆、表达和意义 被引量:2
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作者 钟叔平 曹亮 吴文翰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期385-388,共4页
目的:为探讨肿瘤细胞wtp53蛋白功能失活机制的研究,检测肿瘤患者血清抗p53抗体辅助临床诊断提供人wtp53蛋白。方法:将人wtp53基因cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pQE-30中,得到重组表达质粒pQE30... 目的:为探讨肿瘤细胞wtp53蛋白功能失活机制的研究,检测肿瘤患者血清抗p53抗体辅助临床诊断提供人wtp53蛋白。方法:将人wtp53基因cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pQE-30中,得到重组表达质粒pQE30-p53;用pQE30-p53重组质粒转化大肠杆菌M15细胞,转化菌落经PCR扩增和BamHⅠ、XbaⅠ酶切证实p53基因插入。IPTG诱导大肠杆菌表达wtp53蛋白,通过Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE分离。结果:IPTG诱导后的大肠杆菌出现明显的53kD蛋白带,免疫印迹进一步证实:大肠杆菌可表达高水平的人wtp53蛋白。结论:这种原核细胞表达的人wtp53蛋白具有天然的p53蛋白的抗原性,可用于p53蛋白的体外分析。 展开更多
关键词 抗体 印迹法 P53基因 CDNA 克隆 基因表达
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核基质与基因表达调控研究进展 被引量:3
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作者 李冠武 温博贵 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期257-259,共3页
核基质是细胞核内由一群复杂多样的非组蛋白构成的纤维网状结构。核基质蛋白具有明显的组织细胞特异性及肿瘤相关性。它作为细胞核的支架结构,在DNA的复制、转录、RNA加工修饰等重要的细胞内事件中起着支持和调节作用,并通过转... 核基质是细胞核内由一群复杂多样的非组蛋白构成的纤维网状结构。核基质蛋白具有明显的组织细胞特异性及肿瘤相关性。它作为细胞核的支架结构,在DNA的复制、转录、RNA加工修饰等重要的细胞内事件中起着支持和调节作用,并通过转录调节因子。 展开更多
关键词 核基质 基因表达 调控
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辐射诱导pcDNA3.1-Egr.1p-p16对JF305细胞周期和凋亡的影响 被引量:1
7
作者 马红兵 王西京 +5 位作者 马洁 夏辉 王铮 李琤 韩志楷 吴丛梅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1183-1186,共4页
目的检测pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒对胰腺癌细胞JF305凋亡和细胞周期变化的影响。方法进行人胰腺癌JF305细胞培养,脂质体LipofectamineTM2000转染pcDNA3.1-Egr.1p-p16重组质粒,6MV-X射线4Gy照射(剂量率2.50Gy/min),流式细胞术检测细胞周... 目的检测pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒对胰腺癌细胞JF305凋亡和细胞周期变化的影响。方法进行人胰腺癌JF305细胞培养,脂质体LipofectamineTM2000转染pcDNA3.1-Egr.1p-p16重组质粒,6MV-X射线4Gy照射(剂量率2.50Gy/min),流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况。结果pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒转染组和pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒转染+4Gy照射组的JF305细胞中早期凋亡细胞分别占6.4%、10.4%,晚期凋亡或继发性死亡细胞分别占16.8%、33.8%,均较阴性对照组显著升高(P<0.05)。质粒转染+4Gy照射组总的凋亡率高于单纯质粒转染组(P<0.05)。辐射明显导致JF-305细胞G2期阻滞。pcDNA3.1-p16质粒和pcDNA3.1-Egr.1p-p16质粒基因转染,可使JF-305细胞阻滞于G1期。当给予细胞4Gy照射后,两质粒转染组,阻滞于G1期细胞变化不大,阻滞于G2期的细胞有所增加。结论pcDNA3.1-Egr.1p-p16可致JF-305细胞凋亡,与放射联合增加了细胞凋亡率。转染pcDNA3.1-Egr.1p-p16可使细胞阻滞于G1期,联合辐射,增加了细胞的G2期阻滞。 展开更多
关键词 胰腺癌 质粒 细胞周期 凋亡
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放射诱导p16基因胰腺癌靶向性表达的研究 被引量:1
8
作者 马红兵 王西京 +7 位作者 胡海涛 狄政莉 夏辉 李铮 马洁 白明华 韩志楷 吴丛梅 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期68-70,共3页
目的 构建 pcDNA3.1 Egr.1p-p16重组质粒并检测其在人胰腺癌 JF305细胞中的辐射诱导表达。方法 将人p16 cDNA基因连接到有辐射诱导特性的早期反应因子 Egr.1p的下游,构建成 pcDNA3.1 -Egr.1p- p16 重组质粒,利用脂质体介导转染人胰腺... 目的 构建 pcDNA3.1 Egr.1p-p16重组质粒并检测其在人胰腺癌 JF305细胞中的辐射诱导表达。方法 将人p16 cDNA基因连接到有辐射诱导特性的早期反应因子 Egr.1p的下游,构建成 pcDNA3.1 -Egr.1p- p16 重组质粒,利用脂质体介导转染人胰腺癌细胞系 JF305 细胞;采用 RT- PCR方法和 Western blot方法检测不同剂量 X射线照射后,被转染细胞中 p16 的转录和表达水平。结果 酶切鉴定证实 pcDNA3. 1 Egr. 1p -p16 重组质粒构建正确。被pcDNA3.1 Egr.1p -p16重组质粒转染的人胰腺癌 JF305细胞经不同剂量 X射线照射后,p16 基因表达均高于未照射组。结论 X射线可诱导 pcDNA3.1 -Egr.1p -p16重组质粒在人胰腺癌 JF305细胞中表达增强。 展开更多
关键词 EGR-1启动子 X射线 P16表达 胰腺癌细胞系
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核孤儿受体TR3/nur77与一种新细胞凋亡机制 被引量:1
9
作者 孟斌 温博贵 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期793-796,共4页
核孤儿受体TR3/nur77是一种立刻早期基因 (immediate earlygene)的产物 ,与固醇类激素受体结构相似 ,是核受体超家族的重要成员之一 ,可被多种生长因子或凋亡诱导剂诱导表达 ,具有复杂的生物学功能 ,涉及细胞增殖、分化发育和凋亡过程 ... 核孤儿受体TR3/nur77是一种立刻早期基因 (immediate earlygene)的产物 ,与固醇类激素受体结构相似 ,是核受体超家族的重要成员之一 ,可被多种生长因子或凋亡诱导剂诱导表达 ,具有复杂的生物学功能 ,涉及细胞增殖、分化发育和凋亡过程 .最近对其诱导凋亡机制的研究取得了重大进展 ,发现当细胞受到凋亡诱导剂刺激后 ,TR3基因表达升高 ,其产物从细胞核移位至线粒体膜 ,引起细胞色素c释放 ,从而导致细胞凋亡 .即TR3的转录激活功能和诱导凋亡功能是由其不同的亚细胞定位结合所决定的 ,其诱导凋亡过程与其对基因的反式激活功能无关 .核转录因子 p5 3也具有类似情况 .这种核转录因子由细胞核移位至细胞浆并发挥生物学功能的调控方式是一种新模式 。 展开更多
关键词 TR3/nur77 核孤儿受体 立刻早期基因 线粒体 细胞凋亡 移位
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核基质与瘤基因、抑瘤基因 被引量:1
10
作者 钟叔平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1998年第1期7-8,67,共3页
核基质与瘤基因、抑瘤基因钟叔平(汕头大学医学院生物化学教研室,汕头515031)核基质是真核细胞经高盐和DNaseⅠ处理后的一种残留的核网络结构,基因组中DNA与核基质结合区为MAR(matrixatachregio... 核基质与瘤基因、抑瘤基因钟叔平(汕头大学医学院生物化学教研室,汕头515031)核基质是真核细胞经高盐和DNaseⅠ处理后的一种残留的核网络结构,基因组中DNA与核基质结合区为MAR(matrixatachregion).核基质的功能十分复杂,它与D... 展开更多
关键词 核基质 瘤基因 抑瘤基因 肿瘤发生
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异双聚体电泳及其在遗传学差异筛选中的应用 被引量:1
11
作者 温博贵 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期39-40,共2页
介绍了一种灵敏、简便、快速测定双链PCR产物或DNA片断单个碱基差异的方法。该法借助常规PAGE电泳,能区分出有单个碱基错配而发生构型改变的异双聚体与碱基互补配对的同源双聚体双链DNA分子;并判断出序列中碱基错配的百分率。
关键词 异双聚体 遗传学差异筛选 电泳
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食管癌病人运铁蛋白(Tf)和组特异性成份(Gc)亚型分布的研究
12
作者 刘鸿禧 张奎芳 +4 位作者 林珏龙 张少英 陆振虞 冯波 陈仁彪 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期9-12,共4页
应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法,分析了潮汕地区216例无血缘关系、临床上诊断为食管癌的病人和216例健康人的运铁蛋白(Tf)亚型分布情况,结果发现:食管癌病人组TfC1C1纯合子频率为0.2639,Tf*C1基因频率为0.4745显著低... 应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳法,分析了潮汕地区216例无血缘关系、临床上诊断为食管癌的病人和216例健康人的运铁蛋白(Tf)亚型分布情况,结果发现:食管癌病人组TfC1C1纯合子频率为0.2639,Tf*C1基因频率为0.4745显著低于正常人组(分别为0.4352和0.6227,均为P<0.001);同时,食管癌病人组TfC2C2纯合子频率为0.2278,Tf*C2基因频率为0.4977,显著高于正常对照组(分别为0.1852,P<0.05和0.3634,P<0.001).应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦结合免疫固定祛,分析了潮汕地区217例无血缘关系的临床上诊断为食管癌病人和217例健康人的组特异性成份(Gc)亚型的分布,发现两组间无显著性差异. 展开更多
关键词 运铁蛋白 组特异性成份 遗传多态性 食管肿瘤
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pEgr-TNFα基因协同射线抑制Hela细胞生长的实验研究
13
作者 曾菲 吴丛梅 +2 位作者 黄天华 洪菊香 周莉 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第B03期46-48,共3页
【目的】研究pEgr-TNFα重组质粒在转染的Hela细胞中的辐射诱导表达特性,验证其联合放射治疗杀伤Hela细胞的作用。【方法】将脂质体包裹的pEgr-TNFα重组质粒,转染宫颈癌细胞系Hela中;采用ELISA方法检测不同剂量X射线诱导后TNFα的表达... 【目的】研究pEgr-TNFα重组质粒在转染的Hela细胞中的辐射诱导表达特性,验证其联合放射治疗杀伤Hela细胞的作用。【方法】将脂质体包裹的pEgr-TNFα重组质粒,转染宫颈癌细胞系Hela中;采用ELISA方法检测不同剂量X射线诱导后TNFα的表达和同一剂量X射线诱导下TNFα的表达时程;用MTT法检测pEgr-TNFα基因协同射线抑制Hela细胞生长的作用。【结果】pEgr-TNFα重组质粒转染Hela细胞,不同剂量X射线均可诱导TNFα表达增强,为假照组的1.02~3.79倍(P<0.01);2 Gy X射线照射后,TNFα表达逐渐增强,在照射后12h达到最高值;被转染的细胞经2 Gy X射线照射,8d后细胞数明显低于其他实验组(P<0.05~0.001)。【结论】pEgr-TNFα基因-放射联合治疗有明显的抑制Hela细胞生长的作用,其作用优于单纯给予射线或基因转染。 展开更多
关键词 早期反应生长基因 射线 抑制 HELA细胞 宫颈癌细胞系
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体外培养人表皮黑素细胞样本制备及超微结构观察
14
作者 徐丹丹 李伟秋 +7 位作者 方斌 黄清霞 梁伟全 梁彦 钟耀棠 王腾彬 周远军 陈玮莹 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期295-297,共3页
目的探讨体外培养正常人表皮黑素细胞(melanocytes,MC)透射电镜制样方法及超微结构观察的作用。方法采用M254 MC培养基及添加剂HMGS培养和纯化人表皮MC;分别采用常规制样方法和以PET聚酯薄膜为培养细胞的支持物制备透射电镜样本。结果... 目的探讨体外培养正常人表皮黑素细胞(melanocytes,MC)透射电镜制样方法及超微结构观察的作用。方法采用M254 MC培养基及添加剂HMGS培养和纯化人表皮MC;分别采用常规制样方法和以PET聚酯薄膜为培养细胞的支持物制备透射电镜样本。结果人表皮MC透射电镜观察发现,常规制样标本可观察人表皮MC及其树状突起横切面的超微结构。PET聚酯薄膜作为培养MC支持物的样本可观察人表皮MC和树状突起的完整超微结构及树状突起的纵切面超微结构。结论 PET聚酯薄膜可作为人表皮MC体外培养良好的支持材料。应用不同样本制备方法可以观察MC的超微结构,使用PET聚酯薄膜作为细胞支持物制备的标本更利于MC黑素体代谢和转移的观察。 展开更多
关键词 黑素细胞 细胞培养 黑素体 PET聚酯薄膜 透射电镜
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核基质与细胞凋亡
15
作者 余跃飞 温博贵 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第4期523-526,共4页
阐述了凋亡过程中 ,核基质所发生的形态、生化变化及相关凋亡基因的表达 ,尤其是凋亡早期便出现核基质蛋白的降解 .核基质是细胞核最基本的组分 ,对维持细胞核形态结构和功能非常重要 ,其主要由核纤层 ,核内骨架及核孔复合体构成 ,在DN... 阐述了凋亡过程中 ,核基质所发生的形态、生化变化及相关凋亡基因的表达 ,尤其是凋亡早期便出现核基质蛋白的降解 .核基质是细胞核最基本的组分 ,对维持细胞核形态结构和功能非常重要 ,其主要由核纤层 ,核内骨架及核孔复合体构成 ,在DNA复制、转录、RNA加工转运等事件中起支持作用 .多少年来 ,关于凋亡时细胞核形态及生化改变的分子机理一直未阐明 ,最近对核基质与细胞凋亡的研究取得了重大进展 . 展开更多
关键词 核基质 细胞凋亡 核基质结合区 凋亡基因
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淋巴细胞凋亡与p53蛋白表达关系的研究
16
作者 钟叔平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期150-153,共4页
培养B958细胞,分离EB病毒,转染外周血和扁桃体淋巴细胞,建立永生化的LCLs和TLCL细胞株;带有wtP53基因的LCLs在DNA损伤剂———顺铂处理前未检出p53蛋白,经顺铂处理后,LCLs随作用时间延长细胞... 培养B958细胞,分离EB病毒,转染外周血和扁桃体淋巴细胞,建立永生化的LCLs和TLCL细胞株;带有wtP53基因的LCLs在DNA损伤剂———顺铂处理前未检出p53蛋白,经顺铂处理后,LCLs随作用时间延长细胞存活率明显下降、p53蛋白水平升高、DNA电泳显出梯状带;含mtP53基因的淋巴瘤细胞在顺铂处理前可检出高浓度的p53蛋白,经顺铂处理后,细胞存活率与p53蛋白并无明显改变.这些结果表明:顺铂引起细胞DNA损伤、激活wtp53蛋白的表达。 展开更多
关键词 细胞凋亡 顺铂 P53蛋白 淋巴细胞 肿瘤 药物疗法
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从核基质结构的发现谈起
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作者 钟叔平 《医学与哲学》 1997年第9期463-466,共4页
核基质是一种重要的细胞亚核结构。它的功能广泛涉及核内各种重要的细胞事件。本文以核基质发现的背景为体裁,论述了早年人们研究核基质所走过的弯路。这种现象的出现一方面与当时的研究思路和研究方法有关;另方面也与当时的生物学发... 核基质是一种重要的细胞亚核结构。它的功能广泛涉及核内各种重要的细胞事件。本文以核基质发现的背景为体裁,论述了早年人们研究核基质所走过的弯路。这种现象的出现一方面与当时的研究思路和研究方法有关;另方面也与当时的生物学发展历史背景有关。要取得出色的研究成果,科学家们不仅需要扎实的理论知识和运用自如的实验功底,而且需要良好的心理素质和及时地吸收先进科技成果的能力。 展开更多
关键词 核基质 结构 研究思路 研究方法
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