高转移潜力食管癌细胞株的建立及其生物学特征 被引量：1

1

作者 谢仰民 周飞 +3 位作者 谢剑君 蔡唯佳 许丽艳 李恩民 《中国比较医学杂志》 CAS 2007年第12期727-730,772,共5页

目的建立具有高转移潜力食管癌细胞株并研究其生物学特征。方法将食管癌细胞系EC109细胞悬液异位移植到SCID小鼠胃壁,约3个月后或动物濒临死亡时处死,行病理学解剖,将肉眼可见的纵隔淋巴结转移瘤块接种于SCID鼠皮下扩增,然后取小鼠皮下... 目的建立具有高转移潜力食管癌细胞株并研究其生物学特征。方法将食管癌细胞系EC109细胞悬液异位移植到SCID小鼠胃壁,约3个月后或动物濒临死亡时处死,行病理学解剖,将肉眼可见的纵隔淋巴结转移瘤块接种于SCID鼠皮下扩增,然后取小鼠皮下瘤组织块进行细胞培养,得到性状稳定的细胞株NMC109后,用MTT法分析细胞生长曲线,Western bloting法检测与细胞分裂增殖能力密切相关的TopoIIα表达,酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性,划痕实验和Transwell体外移动实验检测细胞的移动能力。结果与母本细胞EC109相比,所获得的细胞株NMC109其增殖能力和TopoIIα表达明显增强,MMP-9的活性明显升高,移动能力明显增强。结论获得了具有高转移潜力的食管癌细胞株。 展开更多

关键词 食管癌 肿瘤侵袭 肿瘤转移 细胞株

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基于自主设计研究性实验课的医学生科研创新实验能力评价指标体系的构建 被引量：16

2

作者 黄梓键 吴晓曼 +14 位作者 黎子华 李枞森 李梓博 林淳彪 詹炜杰 郑淳文 邹海鹰 方王楷 吴炳礼 龙琳 范冠华 郑少燕 杨棉华 许丽艳 李恩民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1691-1700,共10页

以能力为导向的培养模式越来越成为医学高等院校近年来教育改革的着力点。本文基于汕头大学医学院生物化学与分子生物学"疾病相关基因克隆及其功能研究"自主设计研究性实验课,以行为事件访谈法对创新实验课人员53人进行访谈,... 以能力为导向的培养模式越来越成为医学高等院校近年来教育改革的着力点。本文基于汕头大学医学院生物化学与分子生物学"疾病相关基因克隆及其功能研究"自主设计研究性实验课,以行为事件访谈法对创新实验课人员53人进行访谈,经编码与专家审核(11人,2批次),形成科研创新能力特征问卷条目40条;对创新实验课130人与普通生化实验课204人进行问卷调查,收集有效样本317份,在问卷信度分析达标的基础上(Cronbach’s alpha>0.90)进行效度分析,构建了2个方面(表象的和潜在的),5个维度(掌握和应用相关知识与技能;科学研究思维;合作与责任意识;科研实践能力和科研素养),35个具体指标形成的医学本科生科研创新实验能力效能评价模型。该模型可有效评估医学本科大学生科研创新实验能力指标,可为医学本科大学生科研创新实验能力培养相关教学模式改革提供实践经验与理论依据。 展开更多

关键词 医学本科大学生 科研创新实验 效能评价模型 行为事件访谈法

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医学生科研创新能力培养“3+X”模式的探索与实践 被引量：17

3

作者 李恩民 郑少燕 +11 位作者 许丽艳 孙宏 邹海鹰 方王楷 龙琳 吴炳礼 程银伟 谢维洁 李利艳 杨苗 范冠华 杨棉华 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期381-392,共12页

针对长期以来培养医学生的科研创新能力主要依靠零散的课外科研活动、受众面窄、没有系统性课程教学及其相关制度保障、致使对医学生科研创新能力培养明显乏力低效这一共性瓶颈教学问题,自2002年起,汕头大学医学院生物化学与分子生物学... 针对长期以来培养医学生的科研创新能力主要依靠零散的课外科研活动、受众面窄、没有系统性课程教学及其相关制度保障、致使对医学生科研创新能力培养明显乏力低效这一共性瓶颈教学问题,自2002年起,汕头大学医学院生物化学与分子生物学教学团队,在“科教相辅相佐”、“以学生为中心”、“以问题为导向”等先进教育理念指导下,倚重汕头大学医学院“医者之心”系列课程与书院育人文化之特色,发挥汕头大学的生物学、基础医学和临床医学一级学科均拥有本/硕/博/博后完整人才培养体系之优势,联合其他相关专业教学团队,在建立充分体现医学生科研创新能力培养内涵,覆盖医学本科5年全过程的核心课程体系的基础之上,历经20载的不懈努力,补充修善,成功构建了“3+X”模式,着力培养医学生的科研创新能力。所谓“3”意指对医学生的“全人培养”、“全程培养”和“全方位培养”。所谓“X”意指针对“3+X”模式运行效能的若干个验证性维度,主要包括组织医学生参加各种形式的全国大学生创新实验研究大赛、国际大学生学术研讨会,由医学本科生作为第一作者撰写发表学术论文等。培养医学生科研创新能力的成效十分显著,为有效解决上述共性瓶颈教学问题提供了一个有重要借鉴价值的范例。 展开更多

关键词 教学模式改革 医学生 科研创新能力

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赖氨酰氧化酶LOXL2稳定性的理论计算研究

4

作者 林李锐 林凯 +3 位作者 邹海鹰 许丽艳 李恩民 东庚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期685-695,共11页

赖氨酰氧化酶LOXL2是一种依赖于铜离子的胺氧化酶,催化胶原蛋白和弹性蛋白的赖氨酸残基侧链发生氧化脱氨,发挥着稳固细胞外基质的作用。而稳定性是蛋白质的一个重要特性,直接影响蛋白质的分子动态及其正常功能发挥,这与人类的健康和疾... 赖氨酰氧化酶LOXL2是一种依赖于铜离子的胺氧化酶,催化胶原蛋白和弹性蛋白的赖氨酸残基侧链发生氧化脱氨,发挥着稳固细胞外基质的作用。而稳定性是蛋白质的一个重要特性,直接影响蛋白质的分子动态及其正常功能发挥,这与人类的健康和疾病密切相关。然而,关于LOXL2的稳定性目前鲜有报道,哪些位点对其稳定性有显著影响尚不清楚。本研究采用冷冻电镜和Alphafold2的数据,建立LOXL2的全长结构,通过分子动力学模拟得到其优化构象。再通过4种方法(mCSM,PremPS,DeepDDG和FoldX),计算所有位点的稳定性属性,筛选出对稳定性有显性影响的位点(定义为关键位点)。结果表明,95个关键位点对LOXL2的稳定性具有显著影响,在5个结构域上的分布数量依次为14、13、8、11和26,而结构域间的连接肽段上也有23个关键位点。在这些关键位点中,类型及数量分别为Leu(24个)、Val(20个)、Ile(12个)、Trp(11个)、Phe(11个)、Tyr(6个)、Cys(6个)、Met(4个)和Arg(1个)。其中大部分关键位点(88个)为疏水性质,这与蛋白质折叠的主要力量为疏水作用的情况是一致的,而Cys两两成对,构成二硫键,对LOXL2的结构及功能发挥重要作用。讨论中,我们将预测结果与实验值进行比较,并用自由能微扰方法,对部分关键位点进行比较,从多方面论证此项工作的可信度。此项研究,可为靶向LOXL2的疾病治疗研究,提供重要指导。 展开更多

关键词 赖氨酰氧化酶样2 稳定性 分子动力学模拟 计算预测 吉布斯自由能

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磷酸化或乙酰化修饰使Fascin的促癌功能翻转 被引量：2

5

作者 李大嘉 许丽艳 +1 位作者 程银伟 李恩民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期674-684,共11页

大量研究结果表明,食管鳞癌等恶性肿瘤中,Fascin异常高表达并发挥促癌功能,其与癌症患者的不良预后密切相关。近年来,包括本实验室在内,多家实验室的研究结果一致表明,磷酸化或乙酰化修饰可使Fascin的促癌功能翻转,犹如川剧中的“变脸... 大量研究结果表明,食管鳞癌等恶性肿瘤中,Fascin异常高表达并发挥促癌功能,其与癌症患者的不良预后密切相关。近年来,包括本实验室在内,多家实验室的研究结果一致表明,磷酸化或乙酰化修饰可使Fascin的促癌功能翻转,犹如川剧中的“变脸”。最近,本室进一步研究发现,Fascin的翻译后修饰明显影响Fascin小分子抑制剂的抑癌效果,提示以Fascin为靶点的抗肿瘤药物研究应该将Fascin翻译后修饰状态纳入是否适合用药的评价体系中。为此,本文在系统评述Fascin促癌功能的基础上,重点讨论了翻译后修饰对Fascin功能的调控作用,以及翻译后修饰对Fascin小分子抑制剂抑癌功效的影响;同时还对相关领域针对Fascin的未来研究趋势进行了展望。 展开更多

关键词 FASCIN 蛋白质翻译后修饰 肿瘤 微丝成束蛋白抑制剂

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NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中过表达的研究 被引量：39

6

作者 许丽艳 李恩民 +2 位作者 熊华淇 蔡唯佳 沈忠英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期839-843,共5页

为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后... 为研究NGAL (neutrophilgelatinase associatedlipocalin)基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中的表达情况 ,以永生化食管上皮细胞系SHEE和食管癌细胞系SHEEC互为对照 ,用cDNA微列阵进行筛选 ,用RNA印迹和RT PCR进行鉴定 ,cDNA克隆测序后与GenBank进行BLAST分析比较 .结果表明NGAL基因在SHEEC中出现显著差异过表达 ,其cDNA序列与小鼠 2 4p3、大鼠NRL (neu relatedlipocalin)、人中性粒细胞NGAL和卵巢癌NGAL具有较高的相似性 .这提示NGAL基因在永生化食管上皮细胞恶性转化中可能发挥着重要作用 。 展开更多

关键词 NGAL cDNA微列阵 差异表达基因 食管癌 永生化食管上皮细胞 恶性转化 过表达

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反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响 被引量：9

7

作者 林珏龙 许丽艳 +6 位作者 李恩民 蔡唯佳 牛永东 方昆阳 熊华淇 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第5期409-415,共7页

为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞N... 为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆 .在细胞内F 肌动蛋白 (F actin)及DNA荧光双标记基础上 ,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞中F actin和DNA含量、F actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征 .结果显示 ,反义封闭NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞F actin的含量明显降低 ,与永生化食管上皮细胞SHEE相近 ,但细胞分裂增殖指数未见明显变化 .表明反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响 ,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显 .激光共聚焦显微镜扫描观测显示 ,反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F actin分布均匀 ,F actin小体减少 ,细胞间连接重新建立 ,结构较紧密 ,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致 .提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F actin产生明显影响 ,推测癌细胞的微丝骨架F 展开更多

关键词 微丝骨架 F-肌动蛋白 NGAL基因 SHEEC细胞 细胞周期

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肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定 被引量：5

8

作者 高书颖 李恩民 +4 位作者 孟令英 崔磊 袁华敏 杜则澎 许丽艳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第3期288-296,共9页

研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶... 研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要. 展开更多

关键词 EZRIN基因 转录调控元件 转录因子 双荧光素酶报告基因分析系统 凝胶电泳迁移率变动分析

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NGAL蛋白诱导食管癌细胞发生自噬 被引量：4

9

作者 张丕显 方王楷 +10 位作者 许丽艳 蒋纪恺 沈忠英 杜则澎 陆晓峰 周飞 谢剑君 吴炳礼 崔有宏 谢东 李恩民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第8期978-986,共9页

以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)与食管癌密切相关,改变NGAL表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明.在酵母细胞中表达NGAL蛋白,柱层析分离纯化.筛... 以往研究证明,中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)与食管癌密切相关,改变NGAL表达能够对癌细胞的形态结构产生明显影响,但确切的作用机制不明.在酵母细胞中表达NGAL蛋白,柱层析分离纯化.筛选NGALR(NGAL receptor)高表达与弱表达的人食管癌细胞系EC1.71和EC109作为实验细胞模型.5-FAM标记NGAL蛋白,加入到细胞培养上清中,对比研究NGAL蛋白入胞情况、细胞形态学改变、细胞自噬体产生、自噬相关基因表达、细胞内铁离子与铁蛋白水平以及相关细胞信号转导激酶的活性等.结果表明,NGAL蛋白可经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用,致使细胞发生典型的自噬性形态结构变化,自噬体大量产生,自噬相关基因的表达发生相应变化,ERK被激活,但细胞内的铁离子与铁蛋白未受明显影响.上述结果提示,诱导细胞发生自噬是外源性NGAL蛋白经由内吞途径进入食管癌细胞发挥作用的机制之一,与NGAL蛋白跨膜转铁未见直接关联,而ERK信号转导途径可能参与了这一过程. 展开更多

关键词 NGAL NGALR 自噬 细胞周期 蛋白质内吞 食管癌细胞

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食管癌细胞NGAL基因-152～-60区段存在TPA反应元件 被引量：3

10

作者 许丽艳 李恩民 +5 位作者 牛永东 蔡唯佳 袁华敏 常静霞 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第2期140-148,共9页

以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.... 以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用. 展开更多

关键词 中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白基因 食管癌细胞 基因表达调控 TPA反应元件

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一氧化氮诱导食管癌细胞线粒体DNA编码基因过表达 被引量：2

11

作者 李恩民 许丽艳 +2 位作者 杨帆 袁兰 陈跃 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期378-384,共7页

以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的... 以人食管癌细胞系EC10 9作为驱赶方 (driver) ,以被一氧化氮 (nitricoxid ,NO)诱导的EC10 9作为实验方 (tester) ,应用抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)、反向mRNA斑点印迹和RNA印迹等技术手段研究了NO诱导的食管癌细胞中基因的过表达情况 .然后对过表达基因的表达序列标签 (expressedsequencetag ,EST)实施序列测定 ,并与GenBank进行BLAST同源性比较和序列突变分析 .结果先后两次从 6 9个SSH阳性克隆中共鉴定出 6个线粒体DNA (mitochondrialDNA ,mtDNA)编码的基因 ,即ND 4L、ND 4、COX 2、Lys tRNA、ATP 8和ATP 6 .表明NO可以诱导食管癌细胞mtDNA编码的基因过表达 .另外 ,在ND 4L/ND 4基因的片段 (10 736～ 114 4 9)上发现了三处同型单核苷酸置换 (10 872T→C ,110 0 1A→G ,11346A→G) ,在COX 2 /Lys tRNA/ATP 8/ATP 6基因片段 (80 11～ 85 89)上发现了一处单核苷酸缺失(8380A) .氨基酸序列分析表明 ,在NO诱导的EC10 9中可能存在着一种结构异常的ATP 8肽链 (一条在N端被截短的只有 11个氨基酸残基的肽链 ,而正常的ATP 8肽链为 6 8个氨基酸残基 ) . 展开更多

关键词 一氧化氮 诱导 食管癌细胞 线粒体DNA编码基因 基因过表达 抑制消减杂交

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人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用 被引量：2

12

作者 许丽艳 李恩民 +6 位作者 牛永东 蔡唯佳 韩溟 吴炳礼 张灿 沈忠英 曾毅 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第2期295-300,共6页

以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedli... 以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因 .为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质 蛋白质或蛋白质 DNA相互作用为基础的功能网络调控关系 ,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库 .采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞 (SHEEC ,由人永生化食管上皮细胞转化而来 )中提取细胞总RNA ,采用OligotexmRNAKit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA ,采用SuperScriptTM ChoiceSystemForcDNASynthesisKit合成cDNA ,以PolyA+ mRNA为探针 ,化学发光法监测cDNA合成的质量 ,以 pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库 .文库的滴度为 1 19× 10 9cfu/ml,重组片段大小主要集中在 0 5～6 0kb ,重组率为 5 0 % .在此基础上 ,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF κB元件结合因子进行了筛选 ,在SD/ his/ leu/[+15mmol/L 3 AT ]缺陷培养基平板上共获得了约 36 0个单克隆 .按照平板上酵母单克隆直径的大小 ,选择直径大于 2mm者 91个 ,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验? 展开更多

关键词 人食管癌 CDNA文库 构建 鉴定 应用 酵母杂交

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贲门癌和其癌旁组织核黄素转运基因全基因外显子测序 被引量：2

13

作者 黄静 刘利敏 +8 位作者 杨建学 刘玉 李洪雷 王建坡 许丽艳 陈继理 李恩民 周福有 王立东 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第5期727-729,共3页

贲门癌显著的流行病学特征与食管癌流行地域分布一致[1-3],且贲门癌与食管癌有着相似的发病风险因素如营养缺乏、蔬菜水果的低摄入量等[4-5]。研究[6]发现C20orf54是贲门癌和食管癌的高易感基因。C20orf54位于常染色体20p13,共有5个外显... 贲门癌显著的流行病学特征与食管癌流行地域分布一致[1-3],且贲门癌与食管癌有着相似的发病风险因素如营养缺乏、蔬菜水果的低摄入量等[4-5]。研究[6]发现C20orf54是贲门癌和食管癌的高易感基因。C20orf54位于常染色体20p13,共有5个外显子,编码的蛋白为核黄素转运蛋白[1,5],其主要功能是将核黄素由细胞外转入细胞内[7]。研究[8]证实核黄素缺乏与食管癌和贲门癌的发生密切相关,补充核黄素能够降低发病风险。 展开更多

关键词 贲门癌 核黄素转运基因 外显子 测序

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NGAL基因新型TPA反应元件结合蛋白的研究 被引量：1

14

作者 孟令英 缪成贵 +3 位作者 杜则澎 蔡唯佳 许丽艳 李恩民 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第6期661-670,共10页

以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, ... 以往研究发现, 食管癌细胞的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)基因的过表达具有明显的 12-O- 十四烷酰佛波醇 -13- 醋酸酯(12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate, TPA)诱导性, 在启动子- 152～- 60 区段存在着一种新型的 TPA 反应元件(TPA response element, TRE), 但是该元件的结合蛋白尚未被鉴定出来. 采用寡核苷酸 DNA 亲和层析法(oligonucleotide trapping)从食管癌细胞中分离纯化了 NGAL 基因 TRE 结合蛋白; 经 SDS-PAGE进一步分离, 银染显示目标蛋白带. 人工切取各目标蛋白带进行 MALDI-TOF-MS 分析, 通过 Mascot 软件搜索 NCBI 数据库, 根据蛋白质的功能、细胞定位和分子质量大小等指标确定 8 个核蛋白因子: C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β、FAM54A、KLF15、KLF10 和 YY-1. 最后, 利用 RT-PCR 验证了这些核蛋白因子表达的 TPA 反应性, 结果表明 C19、KIAA1949、TDRD1、RXR β和 KLF15 等编码基因的转录表现出了明显的 TPA 反应性, 提示可能是食管癌细胞中应答 TPA刺激, 参与 NGAL 基因过表达的转录激活因子. 展开更多

关键词 NGAL基因 寡核苷酸DNA亲和层析 MALDI-TOF-MS TPA反应元件 TPA反应元件结合蛋白 TPA反应性

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细胞骨架结合蛋白Ezrin和Fascin在食管癌中的异常表达与功能及其相关细胞信号转导通路 被引量：4

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作者 李恩民 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第6期I0054-I0055,共2页

目前，作为消化道的一种常见恶性肿瘤——食管癌的发生发展分子机制，有许多方面依然不清楚。Ezrin是细胞骨架肌动蛋白微丝与细胞膜之间的一种连接蛋白，而Fascin则是细胞骨架肌动蛋白微丝之间的一种捆绑蛋白，因此二者均与细胞的形态... 目前，作为消化道的一种常见恶性肿瘤——食管癌的发生发展分子机制，有许多方面依然不清楚。Ezrin是细胞骨架肌动蛋白微丝与细胞膜之间的一种连接蛋白，而Fascin则是细胞骨架肌动蛋白微丝之间的一种捆绑蛋白，因此二者均与细胞的形态密切相关，在本文中我们将此二者统称为细胞骨架结合蛋白。本课题组以往曾研究发现，（1）在永生化食管上皮细胞的恶性转化中，Ezrin和Fascin均上调表达；（2）在食管癌组织细胞中，Ezrin的表达有从细胞膜异常转位到细胞浆的趋势；（3）Fascin在食管癌组织中显著过表达，而通过RNA于扰下凋Fascin可使食管癌细胞的增殖和侵袭受到明显抑制。这些结果表明， 展开更多

关键词 食管癌 EZRIN FASCIN 细胞生长 细胞侵袭

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食管癌细胞NGAL5′侧翼区存在TPA应答元件

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作者 许丽艳 李恩民 +6 位作者 王子良 牛永东 蔡唯佳 袁华敏 常静霞 沈忠英 曾毅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期135-141,共7页

在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中,NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)过表达,提示食管癌细胞NGAL转录调控区可能存在TPA应答元件.为了对食管癌细胞NGAL的这一TPA应答元件进行分段定位鉴定,首先将NGAL5′侧翼区不同长... 在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中,NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)过表达,提示食管癌细胞NGAL转录调控区可能存在TPA应答元件.为了对食管癌细胞NGAL的这一TPA应答元件进行分段定位鉴定,首先将NGAL5′侧翼区不同长度片段-1 431^+84-、1 137^+84、-945^+84、-657^+84、-416^+84和-152^+84等依次插入质粒pGLP,构建NGAL/pGLP系列报告基因荧光素酶表达载体pGLP-1431、pGLP-1137、pGLP-945、pGLP-657、pGLP-416和pGLP-152;然后将上述质粒分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,最后用5 ng/ml的TPA刺激转染的EC109,检测报告基因荧光素酶活力,综合判定报告基因荧光素酶活力变化趋势,并以此对食管癌细胞NGAL5′侧翼区TPA应答元件进行分段定位.实验结果表明,食管癌细胞NGAL5′侧翼-657^-417区段内存在着较强的TPA应答元件.生物信息学分析显示,NGAL5′侧翼-657^-417区段至少存在3个潜在的TPA应答元件,表明有应答TPA刺激的结构基础.这些研究有助于从分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL基因过表达机制. 展开更多

关键词 NGAL基因 食管癌细胞 基因表达调控 TPA应答元件

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肠道病毒71型引起手足口病的发病机制 被引量：5

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作者 尤俊斌 苏郑明 陈玮莹 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第8期876-878,共3页

手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒引起的传染病。其中肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)属于人类肠道病毒。近30年来EV71感染在亚太地区每2～3年暴发1次。EV71是手足口病的主要病原体,其详尽发病机制目前尚不清... 手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒引起的传染病。其中肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)属于人类肠道病毒。近30年来EV71感染在亚太地区每2～3年暴发1次。EV71是手足口病的主要病原体,其详尽发病机制目前尚不清楚。文中综述EV71感染累及中枢神经系统,引起心肌炎和肺水肿的发病机制研究现状。 展开更多

关键词 手足口病 肠道病毒71型 发病机制

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Eps15同源结构域包含蛋白2通过调控Cyclin D1-CDK4-pRb信号轴影响食管鳞癌细胞的增殖 被引量：1

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作者 张知达 邓丹霞 +7 位作者 文兵 彭柳 董科 潘德渊 郑海香 廖连娣 许丽艳 李恩民 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1174-1192,共19页

微丝结合蛋白是微丝细胞骨架的重要组成成分,它们通过促进微丝的聚合和解聚来影响微丝的动力学。大量研究已经表明,微丝和微丝结合蛋白参与细胞癌变的所有阶段。我们通过对食管癌蛋白质组数据挖掘结果显示,微丝结合蛋白Eps15同源结构域... 微丝结合蛋白是微丝细胞骨架的重要组成成分,它们通过促进微丝的聚合和解聚来影响微丝的动力学。大量研究已经表明,微丝和微丝结合蛋白参与细胞癌变的所有阶段。我们通过对食管癌蛋白质组数据挖掘结果显示,微丝结合蛋白Eps15同源结构域包含蛋白2(EHD2)在食管癌组织中低表达,且EHD2低表达的食管癌患者预后不良。以往的研究已经证明,EHD2参与调控糖代谢、自噬和肿瘤迁移。然而,EHD2在食管癌进展中的作用和机制仍不清楚。本研究旨在探究EHD2在食管鳞癌细胞中的影响及其作用机制。免疫荧光和细胞组分分离结果显示,EHD2不仅定位于细胞膜和细胞质,还存在于细胞核中。使用克隆形成实验、EdU细胞增殖实验和细胞流式术检测EHD2对食管鳞癌细胞增殖能力的影响。结果显示,过表达EHD2和EHD2-3×NLS(核定位信号)抑制食管鳞癌细胞增殖和细胞周期G_(1)/S转换;同时,双荧光素报告基因结果显示,过表达EHD2和EHD2-3×NLS抑制Wnt信号通路活性。而siRNA敲降则获得相反的结果。免疫共沉淀和Duolink-PLA实验证明,EHD2与Wnt信号通路关键分子β-连环蛋白(β-catenin)和T细胞因子3(T-cell factor 3,TCF3)相互作用。蛋白质印迹和荧光定量PCR结果证实,过表达EHD2和EHD2-3×NLS抑制TCF3下游与增殖和细胞周期相关的靶基因的转录,以及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白激酶4(CDK4)和pRb的蛋白质表达。以上结果表明,核EHD2与β-catenin和TCF3复合体相互作用,通过Cyclin D1-CDK4-pRb信号轴来调控食管鳞癌细胞的增殖和细胞周期进程。 展开更多

关键词 微丝结合蛋白 Eps15同源结构域包含蛋白2(EHD2) 细胞增殖 T细胞因子3 食管鳞癌

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