合成生物学在新冠病毒广谱疫苗研发中的应用 被引量：1

1

作者 袁为锋 赵永亮 +1 位作者 吴芷萱 徐可 《合成生物学》 CSCD 北大核心 2024年第2期369-384,共16页

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)自2019年底引发疫情至今,已经变异出Alpha、Beta、Delta和Omicron等不同谱系。传统疫苗的抗原序列来源于某一自然分离株的原始序列,疫苗迭代速度跟不上病毒变异的速度,导致突破性感染的发生,研发跨谱系的广谱... 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)自2019年底引发疫情至今,已经变异出Alpha、Beta、Delta和Omicron等不同谱系。传统疫苗的抗原序列来源于某一自然分离株的原始序列,疫苗迭代速度跟不上病毒变异的速度,导致突破性感染的发生,研发跨谱系的广谱疫苗是预防这类高变异呼吸道病毒的迫切需求。随着合成生物技术的发展,抗原的多价偶联、核心抗原模块的提取、抗原内部保守表位的工程化设计、抗原表位展示技术、计算指导的抗原重构等抗原“再设计”方案得以实现,提高了抗原的免疫原性和广谱性。合成生物学还体现在疫苗产品的生产工艺环节,基因工程表达的疫苗抗原以纳米颗粒、病毒载体、核酸、亚单位的形式,借助细菌、酵母、植物、昆虫或哺乳动物细胞等表达平台进行规模化生产。本文综述了近年来合成生物技术在广谱疫苗(尤其是广谱新冠病毒疫苗)多种设计策略中的应用情况,总结了合成生物技术如何通过反向疫苗学的设计展示全新的共性抗原表位和交叉抗原位点,达到“以不变应万变”的广谱保护效果。本文还讨论了多种广谱疫苗设计策略的应用场景及面临的挑战。基于合成生物技术的马赛克设计策略、保守表位工程化设计策略、计算共识序列策略和新型佐剂策略,结合不同的疫苗技术路线,可提高疫苗的免疫原性、广谱保护性和安全性。这为高变异病毒的疫苗研发提供了合成生物学的新思路。 展开更多

关键词 合成生物学 反向疫苗学 新冠广谱疫苗

在线阅读 下载PDF 职称材料

羧甲基茯苓多糖对肠道病毒71型的抗病毒活性及其机制研究

2

作者 曾露芝 吴春晨 +5 位作者 向蒙 彭逸斯 王哲 汪启明 刘实 彭国平 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期104-111,共8页

为研究羧甲基茯苓多糖(CMP)对肠道病毒71型(EV71)的抗病毒活性,并探讨其作用机制,采用CCK-8法检测CMP对人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(RD细胞)增殖的影响;采用致细胞病变效应(CPE)法观察CMP对EV71感染引起的CPE的抑制作用;采用致半数细胞病理... 为研究羧甲基茯苓多糖(CMP)对肠道病毒71型(EV71)的抗病毒活性,并探讨其作用机制,采用CCK-8法检测CMP对人恶性胚胎横纹肌瘤细胞(RD细胞)增殖的影响;采用致细胞病变效应(CPE)法观察CMP对EV71感染引起的CPE的抑制作用;采用致半数细胞病理改变的病毒感染剂量(TCID50)法检测CMP对EV71感染性病毒颗粒的抑制水平;采用RT-qPCR法检测EV71结构蛋白VP1的表达;采用Western blotting法分析VP1、P62、LC3、Caspase-3、cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果表明:不同质量浓度(0、250、500、1000μg/mL)CMP对RD细胞无明显的细胞毒性;与对照组相比,CMP在无毒性浓度范围内可有效抑制EV71的复制,且能够呈剂量依赖性地降低病毒感染引起的细胞病变效应;CMP可呈剂量依赖性地降低EV71病毒结构蛋白VP1的表达和子代感染性病毒颗粒的产生;CMP可下调EV71病毒感染的RD细胞中的LC3-Ⅱ、cleaved Caspase-3的表达。 展开更多

关键词 羧甲基茯苓多糖 肠道病毒71型 抗病毒活性

在线阅读 下载PDF 职称材料

重组病毒杀虫剂应用研究进展 被引量：4

3

作者 蒋洪 韩亚娟 +2 位作者 胡柳 张珈敏 胡远扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期322-327,共6页

应用分子生物学技术可以将昆虫特异性的毒素基因、某些酶基因等外源基因插入昆虫病毒基因组,或通过改造昆虫病毒基因组等方法构建重组病毒杀虫剂,提高杀虫效果。温室及田间释放实验证实,重组病毒杀虫剂可以显著提高现场防治效果。连续... 应用分子生物学技术可以将昆虫特异性的毒素基因、某些酶基因等外源基因插入昆虫病毒基因组,或通过改造昆虫病毒基因组等方法构建重组病毒杀虫剂,提高杀虫效果。温室及田间释放实验证实,重组病毒杀虫剂可以显著提高现场防治效果。连续多代抗性筛选实验表明,宿主被诱导产生对重组病毒杀虫剂抗性的速度低于野生型病毒杀虫剂。采用在剂型中添加光增白剂等保护剂、在基因组中插入具有增效作用的基因、应用病毒增强蛋白等技术可以提高重组病毒杀虫效果。随着基因工程技术的发展和安全性研究的深入,以重组杆状病毒为主的重组昆虫病毒杀虫剂的应用研究正面临着突破。 展开更多

关键词 重组病毒杀虫剂 杆状病毒 生物防治 杀虫效果 抗性

在线阅读 下载PDF 职称材料

蟑螂浓核病毒(pfDNV)非结构基因启动子的活性研究 被引量：2

4

作者 杨波 董小敏 +5 位作者 蔡大威 刘志刚 胡征 汪浩勇 张珈敏 胡远扬 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期486-491,共6页

为了研究蟑螂Periplanetafuliginosa浓核病毒(pfDNV)非结构基因转录调控的机制,用PCR的方法从蟑螂浓核病毒基因组DNA中扩增了非结构蛋白基因ns3翻译起始密码子上游325bp的启动子序列;并进一步以其作为模板,利用聚合酶链式反应技术,得到... 为了研究蟑螂Periplanetafuliginosa浓核病毒(pfDNV)非结构基因转录调控的机制,用PCR的方法从蟑螂浓核病毒基因组DNA中扩增了非结构蛋白基因ns3翻译起始密码子上游325bp的启动子序列;并进一步以其作为模板,利用聚合酶链式反应技术,得到6个不同长度的启动子片段和两个定点突变体片段,构建由其驱动的萤火虫荧光素酶基因报告质粒,在脂质体介导下转染多种昆虫细胞,体外分析了该启动子的活性。结果表明:该325bp DNA片段在Sf9,S2,Tn368及Ld652细胞中均具有较高的启动子活性;其转录起始基序CAGT对维持该启动子的基本转录活性而言是必需的,而TATA盒对此则是非必需的,但它的存在可显著提高启动子的转录活性。同时,我们还发现,病毒非结构蛋白NS1对该启动子具有反式激活作用,并且这种激活作用的大小取决于NS1蛋白在细胞中的浓度。 展开更多

关键词 蟑螂浓核病毒 启动子 反式激活 昆虫细胞 表达载体

在线阅读 下载PDF 职称材料

应用昆虫毒素基因构建重组病毒杀虫剂研究进展 被引量：3

5

作者 蒋洪 韩亚娟 +1 位作者 张珈敏 胡远扬 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1-5,共5页

由于基因工程技术的发展和安全性研究的深入,以重组杆状病毒为主的重组昆虫病毒杀虫剂的应用正面临着突破。文章综述了通过插入昆虫专一性毒素基因构建重组昆虫病毒杀虫剂的技术路线,展望重组病毒杀虫剂的发展趋势。

关键词 昆虫毒素基因 重组病毒杀虫剂 杆状病毒 生物防治

在线阅读 下载PDF 职称材料

病毒与宿主细胞的糖基化修饰及相关功能 被引量：9

6

作者 向田 章晓联 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第10期898-907,共10页

病毒的复制和对宿主的入侵与自身结构蛋白的糖基化修饰密切相关.对于宿主而言,在病毒感染宿主和宿主抗病毒的过程中,宿主的糖基化过程一方面可抑制病毒的复制和入侵,另一方面可促进病毒对宿主的感染,抑制宿主糖苷酶可抑制病毒的复制.从... 病毒的复制和对宿主的入侵与自身结构蛋白的糖基化修饰密切相关.对于宿主而言,在病毒感染宿主和宿主抗病毒的过程中,宿主的糖基化过程一方面可抑制病毒的复制和入侵,另一方面可促进病毒对宿主的感染,抑制宿主糖苷酶可抑制病毒的复制.从病毒方面来看,由于病毒自身缺乏糖基化修饰系统,病毒的糖基化过程是借宿主细胞内的合成系统对自身进行糖基化修饰.病毒的糖基化过程对病毒蛋白的折叠与稳定、病毒的感染和入侵、参与识别宿主细胞受体和参与病毒的免疫逃逸等过程起着重要的作用.随着糖基化研究技术的发展,以糖基化为基础的功能应用也越来越深入:如新型病毒疫苗和新型抗病毒药物的研制,以糖蛋白质组学研究为基础的质谱技术和生物信息学方法的发展,以及利用糖基化对病毒性疾病的诊断和治疗等,这些均为糖基化深入研究发展奠定了基础.本文就病毒与宿主细胞糖基化过程、相关功能以及研究应用等进展作一综述. 展开更多

关键词 糖基化修饰 病毒 宿主

在线阅读 下载PDF 职称材料

改造病毒基因组增强病毒杀虫剂杀虫效率研究进展 被引量：2

7

作者 蒋洪 周亮 +1 位作者 张珈敏 胡远扬 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期5-8,共4页

由于基因工程技术的发展和安全性研究的深入,以重组杆状病毒为主的重组昆虫病毒杀虫剂的应用正面临着突破。文章综述了通过修饰或删除昆虫病毒某些基因、插入控制宿主发育、代谢激素或酶的基因、删除、修饰昆虫病毒基因组中特定的基因... 由于基因工程技术的发展和安全性研究的深入,以重组杆状病毒为主的重组昆虫病毒杀虫剂的应用正面临着突破。文章综述了通过修饰或删除昆虫病毒某些基因、插入控制宿主发育、代谢激素或酶的基因、删除、修饰昆虫病毒基因组中特定的基因以扩大宿主域、应用RNA干扰技术提高昆虫病毒杀虫效率等构建重组昆虫病毒杀虫剂的技术路线,展望重组病毒杀虫剂的发展趋势。 展开更多

关键词 重组病毒杀虫剂 杆状病毒 生物防治 杀虫效率

在线阅读 下载PDF 职称材料

人类巨细胞病毒与2型糖尿病视网膜病变关系的研究 被引量：1

8

作者 王晓昆 唐瑛 +3 位作者 侯炜 邓惠玲 杨李 刁波 《实用医学杂志》 CAS 2008年第1期64-66,共3页

目的:探讨人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染与2型糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的关系。方法:采用聚合酶链反应(chain reaction technique,PCR)技术分别检测2型糖尿病(T2DM)患者86例(单纯T2DM组40例、DR组4... 目的:探讨人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染与2型糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的关系。方法:采用聚合酶链反应(chain reaction technique,PCR)技术分别检测2型糖尿病(T2DM)患者86例(单纯T2DM组40例、DR组46例)以及对照组30例外周血中的HCMV-DNA,放射免疫法测定血浆内皮素(endothelin,ET)。结果:DR组HCMV-DNA检测阳性率(65%)明显高于单纯T2DM组(35%)和对照组(13%,P<0.01),DR组ET含量与单纯T2DM组和对照组比较差异也有显著性。结论:HCMV感染与DR的发生发展有关,HCMV感染可能加重DR。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 人类巨细胞病毒 内皮素

在线阅读 下载PDF 职称材料

鲤鱼生长激素和对虾白斑病毒囊膜蛋白VP28的融合表达及功能研究 被引量：5

9

作者 韩建山 龙燕 +3 位作者 孟小林 徐进平 鲁伟 王健 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期308-313,共6页

鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白。对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子。根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后... 鲤鱼生长激素GH是鲤鱼生长腺体分泌并促进鲤鱼生长的一种分泌蛋白。对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28蛋白为囊膜蛋白,是病毒感染宿主的必需因子。根据gh和vp28的上下游序列,分别设计合成两对引物,PCR扩增gh和vp28基因,将基因gh和vp28按先后次序融合后插入穿梭质粒pPIC6αC多克隆位点,构建成重组分泌表达穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28),用Bstx1单酶切穿梭质粒pPIC6αC-(gh+vp28)线形化,转化毕赤酵母X-33。重组菌株30℃甲醇诱导,实现在酵母中的融合分泌表达,获得融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE检测和Western Blot印迹鉴定,显示与预期大小66kD相吻合的融合蛋白带。用Ni2+-柱纯化后的基因工程蛋白注射鳌虾进行蛋白生物功能测试,结果表明该蛋白获得了促鳌虾生长和抗WSSV感染的双重功效。 展开更多

关键词 鲤鱼生长激素(GH) 对虾白斑综合病毒(WSSV)VP28 gh+vp28 毕赤酵母 促生长 抗病毒

在线阅读 下载PDF 职称材料

百合致病病毒及脱毒技术研究进展 被引量：7

10

作者 杨颖 彭国平 +2 位作者 刘实 饶力群 汪启明 《现代农业科技》 2019年第24期98-101,共4页

百合病毒病是当前制约百合产业发展的主要瓶颈之一,深入了解百合病毒的种类和致病的作用机制,可为百合感病种球的早发现、快速检测以及百合无毒种球筛选提供支持。本文介绍了常见的百合致病病毒种类、病毒检测技术以及脱毒技术等方面的... 百合病毒病是当前制约百合产业发展的主要瓶颈之一,深入了解百合病毒的种类和致病的作用机制,可为百合感病种球的早发现、快速检测以及百合无毒种球筛选提供支持。本文介绍了常见的百合致病病毒种类、病毒检测技术以及脱毒技术等方面的研究进展,并根据研究结果对开发无毒百合种球的新型筛选和检测技术进行展望,以期为促进百合产业健康快速发展提供参考。 展开更多

关键词 百合致病病毒 病毒检测技术 脱毒技术

在线阅读 下载PDF 职称材料

CEREC全瓷嵌体单面与多面修复随访8年的生存状况的Meta分析 被引量：6

11

作者 李晓莺 郭家平 +2 位作者 郭毅 刘俊 高群 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期299-305,共7页

目的：探讨CEREC全瓷嵌体在后牙缺损中单面与多面修复随访8年的生存情况。方法：检索Cochrane图书馆,Pubmed,Embase,CBM,中国知网,维普,万方等中英文数据库,截止至2013年12月31日所有文献。纳入后牙牙体缺损患者,实验组为CEREC全瓷嵌体... 目的：探讨CEREC全瓷嵌体在后牙缺损中单面与多面修复随访8年的生存情况。方法：检索Cochrane图书馆,Pubmed,Embase,CBM,中国知网,维普,万方等中英文数据库,截止至2013年12月31日所有文献。纳入后牙牙体缺损患者,实验组为CEREC全瓷嵌体单面修复,对照组为多面修复。研究类型为随机对照试验或同期非随机对照试验。采用Cochrane手册中偏倚风险评价方法进行方法学质量评价,使用GRADE系统评估证据质量等级。结果：3个随访研究纳入分析。共计3538个CEREC全瓷嵌体。结果：CEREC全瓷嵌体生存率二面高于一面（8年）（HR=6.32,95%CI：1.72~23.20,P=0.005）;三面高于一面（8年）（HR=5.87,95%CI：1.84~18.71,P=0.003）,一面与≥四面类似（HR=1.92,95%CI：0.42~8.79,P=0.4）。GRADE系统评价结果显示2个结局证据水平为低级（一面vs.二面;一面vs.三面）。1个结局证据水平为极低级（CEREC全瓷嵌体一面vs.≥四面）。结论：在随访8年的观察中,当前证据表明CEREC全瓷嵌体生存风险并不完全随修复涉及面数增加而增加。 展开更多

关键词 嵌体 CEREC 生存 长期 HR值

在线阅读 下载PDF 职称材料

荧光光谱法研究杨树菇半乳糖凝集素与半乳糖和β-半乳糖苷的相互作用 被引量：1

12

作者 郭骊骊 王昆 +3 位作者 王迷 陈希 梁一 孙慧 《分析科学学报》 CAS CSCD 2006年第6期621-626,共6页

半乳糖凝集素是一类具有重要生理功能的蛋白质,杨树菇(Agrocybe aegerita)半乳糖凝集素(AAL)是被报道的第四种真菌半乳糖凝集素。本文用荧光光谱法研究了半乳糖、乳糖和X-gal两种含β-半乳糖残基的分子与AAL的相互作用。研究结果表明:... 半乳糖凝集素是一类具有重要生理功能的蛋白质,杨树菇(Agrocybe aegerita)半乳糖凝集素(AAL)是被报道的第四种真菌半乳糖凝集素。本文用荧光光谱法研究了半乳糖、乳糖和X-gal两种含β-半乳糖残基的分子与AAL的相互作用。研究结果表明:半乳糖对AAL的荧光光谱无明显影响;乳糖的结合使AAL折叠为更紧密的结构而使其光谱蓝移;X-gal与AAL的结合强烈猝灭AAL的荧光,且X-gal的紫外吸收光谱与AAL的荧光发射光谱有一定程度的重叠,由此得出了其反应的结合常数(Kb=7.33×103L.mol-1),结合位点数(n=8.3)及作用距离(r=2.79 nm)。用同步荧光光谱法比较了乳糖和X-gal对AAL构象的影响,结果表明,乳糖和X-gal对AAL的结合方式有可能不同。此结果为深入研究AAL的生理功能提供了线索。 展开更多

关键词 杨树菇半乳糖凝集素 β-半乳糖苷 荧光光谱

在线阅读 下载PDF 职称材料

糖基化与HCVE2诱导的体液免疫应答相关性的研究 被引量：1

13

作者 李平飞 李艳梅 +4 位作者 赵兰娟 刘敏 万崎 陈新文 章晓联 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期19-22,共4页

检测丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响。野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫3次,末次免疫后第10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设... 检测丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)包膜蛋白E2糖基化位点对体液免疫功能的影响。野生型E2基因和糖基化突变体型E2基因的真核表达质粒DNA分别肌肉注射BALB/C小鼠,免疫3次,末次免疫后第10 d,眼眶摘眼球取血清,断椎处死小鼠,同时设阴性对照和空载质粒对照。血清标本用ELISA检测特异性IgG及其亚类IgG1I、gG2α表达水平,观测特异性体液免疫反应和脾细胞分泌细胞因子水平。与阴性对照和空载组对比,E2和N-糖基化突变体质粒DNA免疫小鼠都能诱导产生强烈的特异性免疫反应(P<0.01),并且N-糖基化突变体(560、576位糖基化突变体)质粒DNA与野生型E2相比,其特异性IgG效价明显降低(P<0.05),IL-4分泌水平明显降低(P<0.05)。E2糖蛋白的560、576位N-糖基化位点是诱导体液免疫反应所需要的,除去560、576位N-糖基化会降低E2诱导的体液免疫应答。 展开更多

关键词 HCV 包膜蛋白 糖基化 体液免疫

在线阅读 下载PDF 职称材料

干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制

14

作者 王鲁文 陈辉 +2 位作者 褚小刚 严少南 龚作炯 《中国感染控制杂志》 CAS 2009年第3期155-159,共5页

目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子... 目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子OAK—STAT）信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控。方法对HepG2 2．2．15细胞给予不同剂量（0、1、10^1、10^2、10^3、10^4 U／mL）IFN-α刺激8h时，以及10^3 U／mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12h时，收集细胞或培养上清液。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测HepG22．2．15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原（HBsAg与HBeAg）水平，应用实时荧光定量PCR及RT-PCR分别检测上清液中HBVDNA水平以及细胞中HBVmRNA水平。结果无IFN-α（0 U／mL）刺激时，HepGa2．2．15细胞APOBEC3G表达水平很低。随着IFN-a浓度的升高，APOBEC3GmRNA及蛋白水平逐步升高，IFN-α浓度为10^4 U／mL时，APOBEC3G表达量最高，并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高，与APOBEC3G表达量呈现平行相关。随着IFN-a刺激时间的延长，APOBEC3G表达量明显升高，8h时达到最高，其后逐渐下降。10^4 U／mL IFN-α刺激8h时，HepG2 2．2．15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVmR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG22．2．15细胞。结论WN-a能诱导HepG22．2．15细胞表达APO—BEC3G，在一定范围内，APOBEC3G的表达与IFN—d的剂量、作用时间呈正相关；IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一；IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达，二者之间的关系及其机制尚待进一步研究。 展开更多

关键词 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G 干扰素-Α HEPG2 2.2.15细胞 STAT-1 肝炎 乙型

在线阅读 下载PDF 职称材料