先天性心脏病相关易感基因的预测性研究 被引量：5

1

作者 刘毅 李秀英 +2 位作者 莫雪梅 张光 孙晗笑 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期928-933,共6页

目的:应用生物信息学预测先天性心脏病相关易感基因,为先天性心脏病的临床诊断和治疗提供理论依据。方法:通过OMIM数据库获取已知的先天性心脏病相关易感基因。将已知的疾病相关易感基因作为"种子基因",利用蛋白质相互作用网... 目的:应用生物信息学预测先天性心脏病相关易感基因,为先天性心脏病的临床诊断和治疗提供理论依据。方法:通过OMIM数据库获取已知的先天性心脏病相关易感基因。将已知的疾病相关易感基因作为"种子基因",利用蛋白质相互作用网络寻找邻近节点中富集了疾病相关易感基因的"种子基因",并视其邻居基因为候选的疾病相关易感基因。对已知的疾病相关易感基因进行GO、Pathway和Human Phenotype富集分析,并据此注释候选基因;运用文献挖掘法对候选基因进行验证性分析。结果:通过OMIM共获取已知的先天性心脏病相关易感基因28个,发现邻近节点中富集了疾病相关易感基因的"种子基因"4个,得到候选的疾病相关易感基因20个,通过功能富集分析从中预测出新的先天性心脏病易感基因7个。文献挖掘发现这7个基因在心脏发育过程中均起着极其重要的作用。结论:通过生物信息学分析发现7个候选基因与已知的先天性心脏病相关易感基因关系密切,提示该病的发生是多种基因相互作用的结果,为后续深化该病机制研究提供了有效的指导。 展开更多

关键词 心脏病 先天性 蛋白质相互作用网络 疾病易感基因 功能富集分析

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水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因的序列和表达分析 被引量：13

2

作者 王峰 王宏斌 王金发 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期101-106,共6页

以水稻(Oryza sativa)品种Cpslo17幼穗为材料,通过RT-PCR克隆了长度为698bp的编码水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因(OsCu/Zn-SOD)。序列分析表明其覆盖基因完整编码框,编码由152个氨基酸组成的蛋白,它与玉米(Zea maize)Cu/Zn-SOD基因... 以水稻(Oryza sativa)品种Cpslo17幼穗为材料,通过RT-PCR克隆了长度为698bp的编码水稻细胞质铜锌超氧化物歧化酶基因(OsCu/Zn-SOD)。序列分析表明其覆盖基因完整编码框,编码由152个氨基酸组成的蛋白,它与玉米(Zea maize)Cu/Zn-SOD基因序列的相似率为88%。TargetP和ChloroP预测编码蛋白N端无信号肽序列,且此编码区段有8个外显子和7个内含子。利用Swiss-Model站点预测OsCu/Zn-SOD三维结构,并分析其铜锌离子结合位点的结构。RT-PCR结果表明OsCu/Zn-SOD在水稻不同品种均有表达,但表达量存在差异,OsCu/Zn-SOD在Cpslo17的分裂旺盛的幼嫩组织如幼穗、开花期花序和未成熟种子中表达量较高,而在叶片中表达量相对较低,在愈伤组织中表达微弱。 展开更多

关键词 水稻 铜锌超氧化物歧化酶 序列分析 基因组结构 RT-PCR

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人转铁蛋白基因的克隆及序列分析 被引量：7

3

作者 王峰 黄璐圆 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期111-114,119,共5页

目的:克隆人转铁蛋白基因并对其编码序列进行分析。方法:以人胎肝cDNA为模板,利用PCR方法克隆人转铁蛋白基因;通过与基因组序列对比分析基因组结构;通过TargetP 1.1和S ignalP 3.0预测信号肽;通过C lustal X(1.81)进行蛋白序列联配。结... 目的:克隆人转铁蛋白基因并对其编码序列进行分析。方法:以人胎肝cDNA为模板,利用PCR方法克隆人转铁蛋白基因;通过与基因组序列对比分析基因组结构;通过TargetP 1.1和S ignalP 3.0预测信号肽;通过C lustal X(1.81)进行蛋白序列联配。结果:PCR扩增了一个长2 160 bp的基因片断,序列分析表明其覆盖了完整编码框,编码由698个氨基酸组成的人转铁蛋白。进一步分析发现人转铁蛋白基因有19个外显子和18个内含子,编码人转铁蛋白N端具有19个氨基酸组成的信号肽序列。人转铁蛋白与猩猩、猴子、兔子和老鼠的转铁蛋白氨基酸相似率分别为94%、91%、78%、73%。生物信息分析表明,人转铁蛋白含有高度保守的参与蛋白二硫键形成的半胱氨酸以及铁离子结合位点,有两个序列较同源的结构域。结论:成功克隆人转铁蛋白基因,人转铁蛋白与其它物种转铁蛋白同源。 展开更多

关键词 转铁蛋白 序列分析 基因组结构

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SARS相关冠状病毒刺突糖蛋白的研究(综述) 被引量：2

4

作者 唐小龙 江振友 +1 位作者 向军俭 孙晗笑 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2004年第4期474-477,共4页

概述了SARS -CoV的S蛋白的结构及功能相关研究。严重急性呼吸综合症相关的冠状病毒 (SARS -CoV)引起 2 0 0 3年我国南方非典型肺炎爆发流行 ,波及多个国家和地区。目前全球许多学者对SARS -CoV进行了广泛的研究 ,发现S蛋白是病毒表面的... 概述了SARS -CoV的S蛋白的结构及功能相关研究。严重急性呼吸综合症相关的冠状病毒 (SARS -CoV)引起 2 0 0 3年我国南方非典型肺炎爆发流行 ,波及多个国家和地区。目前全球许多学者对SARS -CoV进行了广泛的研究 ,发现S蛋白是病毒表面的主要蛋白 ,它构成冠状病毒科特征性的冠状样结构 ,在严重急性呼吸综合症的发病机制起着关键性作用 ,可介导表达相关受体的宿主细胞感染。现已鉴定出SARS -CoV的S蛋白相关受体 。 展开更多

关键词 刺突糖蛋白 血管紧张素转换酶2 严重急性呼吸综合症 冠状病毒

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一株脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件优化研究 被引量：6

5

作者 欧阳敏 孙晗笑 +2 位作者 莫雪梅 李秀英 张光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期111-116,共6页

通过利用溴甲酚紫显色培养基初筛和酶活测定法复筛得到产脂肪酶的一株细菌HP2,经形态学观察和生理生化测定初步鉴定该菌株为不动杆菌属。并对该菌株的摇床培养产酶条件进行了初步研究,采用正交试验对HP2菌株发酵产脂肪酶的条件进行了优... 通过利用溴甲酚紫显色培养基初筛和酶活测定法复筛得到产脂肪酶的一株细菌HP2,经形态学观察和生理生化测定初步鉴定该菌株为不动杆菌属。并对该菌株的摇床培养产酶条件进行了初步研究,采用正交试验对HP2菌株发酵产脂肪酶的条件进行了优化,得到最佳发酵条件为初始pH为7.7,培养温度为35℃,接种量(V/V)为1.5%,发酵周期为48 h,酶活力达到129.7 U/mL。 展开更多

关键词 脂肪酶 不动杆菌属 筛选 发酵 正交设计

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具有抑菌作用的放线菌GNF1的分离鉴定和生物学活性的研究 被引量：3

6

作者 王磊 孙晗笑 +2 位作者 李秀英 莫雪梅 张光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期147-152,共6页

从几种复合微生物有机肥中分离出一系列不同的菌株,与实验室保存的菌株GNW(自生固氮菌)和HP2(解磷菌)混合接种培养,检测是否因基因杂交、突变等原因而产生具有抑菌作用的菌株。结果分离出一株具有抑菌作用的放线菌菌株GNF1,根据其形态... 从几种复合微生物有机肥中分离出一系列不同的菌株,与实验室保存的菌株GNW(自生固氮菌)和HP2(解磷菌)混合接种培养,检测是否因基因杂交、突变等原因而产生具有抑菌作用的菌株。结果分离出一株具有抑菌作用的放线菌菌株GNF1,根据其形态学特征、生理生化特征和基于16S rRNA基因序列的系统发育分析结果,鉴定其属于链霉菌属(Strepto-myces)的一个菌株,GNF1菌株的代谢产物中存在具有抑菌作用的活性成分,与植物根际促生菌GNW、HP2以及某些原核病原微生物共培养培养时能明显抑制它们的生长。 展开更多

关键词 根际促生菌 原核病原菌 共培养 代谢产物 抑菌作用

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阳春砂HMGR基因cDNA克隆及生物信息学分析 被引量：5

7

作者 陈小保 李帅广 +3 位作者 易善泽 牛得伟 周仁超 王峰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期285-292,共8页

目的:克隆阳春砂3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因的编码区c DNA.方法:根据阳春砂叶片转录组得到的HMGR基因序列自主设计引物.用改良的CTAB法提取阳春砂叶片总RNA,反转录得到c DNA,以c DNA为模板通过PCR反应扩增阳春砂HMGR基... 目的:克隆阳春砂3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因的编码区c DNA.方法:根据阳春砂叶片转录组得到的HMGR基因序列自主设计引物.用改良的CTAB法提取阳春砂叶片总RNA,反转录得到c DNA,以c DNA为模板通过PCR反应扩增阳春砂HMGR基因并克隆到p MD-18T载体,将获得的阳性克隆进行测序分析.运用生物信息学方法分析得到的c DNA序列.结果:成功扩增出全长1 716 bp的c DNA片段,将其成功克隆进入p MD-18T载体,测序后将序列提交至Gen Bank得到其编号KU572444.生物信息分析结果显示,该基因片段编码1个由571个氨基酸残基组成HMGR蛋白.HMGR二级结构主要由43.95%的α-螺旋和47.29%的β-转角组成,同时还含有8.76%的β-折叠.与其他植物该蛋白质序列同源性及进化树分析结果表明,阳春砂HMGR与小米(Setaria italic)的同源性最高,且阳春砂与单子叶植物聚为一类.结论:从阳春砂叶片中成功克隆HMGR基因并进行了生物信息学分析. 展开更多

关键词 阳春砂 HMGR 基因克隆 生物信息学分析

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人类巨细胞病毒编码US28受体拮抗性多肽的筛选鉴定及体外活性研究 被引量：1

8

作者 李璐 何滔 +3 位作者 莫雪梅 李秀英 张光 孙晗笑 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第6期618-626,共9页

立足US28的广谱趋化因子结合活性,寻找拮抗剂多肽的先导物.通过预测US28的结合模拟位设计多肽序列,合成相关多肽,再利用自建的25种趋化因子随机构成的噬菌体12肽库筛选结合模拟位,竞争性ELISA方法验证,从而获得30个阳性克隆,测序并推导... 立足US28的广谱趋化因子结合活性,寻找拮抗剂多肽的先导物.通过预测US28的结合模拟位设计多肽序列,合成相关多肽,再利用自建的25种趋化因子随机构成的噬菌体12肽库筛选结合模拟位,竞争性ELISA方法验证,从而获得30个阳性克隆,测序并推导氨基酸序列,得到7种序列:GSESLNAHCALW、EIDGFNAHCALL、VIARLNAHCALR、ATECLNAHCALW、VIESLNAHCALW、DNGSINAHCALL及VKKTLNAHCALR.所有序列富含疏水氨基酸,其中8个克隆有LNAHCAL保守序列.采用趋化抑制实验检测多肽对生理性趋化因子引起的细胞迁移活性的影响,流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度变化.结果表明,利用人源趋化因子序列构建肽库并筛选有效序列的方法取得成功,筛选出的阳性克隆保守序列LNAHCAL可以模拟HumanMIP-1β与US28N端的结合位,从而与合成多肽H22结合,多肽H22可以阻断受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用,本身不引起趋化运动,不影响胞内信号转导和细胞自然活性,具有广谱趋化因子拮抗剂的可能性. 展开更多

关键词 人类巨细胞病毒 US28 结合模拟位 趋化抑制 拮抗剂

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阳春砂倍半萜合酶AvTPS基因的生物信息学分析和表达纯化

9

作者 张斌 印思颖 +4 位作者 付献瑶 沈良华 郑自由 周仁超 王峰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期523-534,共12页

目的:克隆阳春砂倍半萜合酶(AvTPS)编码序列,并对其蛋白进行表达和纯化.方法:根据转录组测序获得的倍半萜合酶(TPS)核苷酸序列设计引物,以反转录生成的cDNA为模板,使用RT-PCR克隆获得AvTPS的编码(CDS)序列,并连接pMD-18T载体上,对阳性... 目的:克隆阳春砂倍半萜合酶(AvTPS)编码序列,并对其蛋白进行表达和纯化.方法:根据转录组测序获得的倍半萜合酶(TPS)核苷酸序列设计引物,以反转录生成的cDNA为模板,使用RT-PCR克隆获得AvTPS的编码(CDS)序列,并连接pMD-18T载体上,对阳性菌进行基因测序.利用ClustalX等生物信息软件对AvTPS蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析.利用表达载体pSDS233,Ni-NTA亲和层析对蛋白表达和纯化.结果:通过RT-PCR获得了大小为1650 bp的AvTPS的CDS序列并成功连接到pMD-18T载体.生物信息分析表明,AvTPS蛋白含549个氨基酸残基,二级结构以α-螺旋为主等信息.通过蛋白的表达和纯化,获得纯度为94.22%的可溶性AvTPS蛋白.结论:从阳春砂中可成功克隆出AvTPS的编码基因,为后续研究其基因在阳春砂中的特异性表达奠定基础. 展开更多

关键词 阳春砂 倍半萜合酶 表达纯化 生物信息学分析

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PTBP1通过EMT途径促进肝癌细胞的迁移与侵袭 被引量：10

10

作者 沈良华 吴璐华 +4 位作者 张仙丽 刘洋 蔡鸿 吴天盈 王峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1819-1825,共7页

目的:基于上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)途径研究多聚嘧啶区结合蛋白1(polypyrimidine tract-binding protein 1,PTBP1)促进肝癌细胞迁移与侵袭的分子机制。方法:通过qPCR与Western blot实验筛选不同细胞中... 目的:基于上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)途径研究多聚嘧啶区结合蛋白1(polypyrimidine tract-binding protein 1,PTBP1)促进肝癌细胞迁移与侵袭的分子机制。方法:通过qPCR与Western blot实验筛选不同细胞中差异表达的剪接蛋白,生物信息学分析肝癌与正常肝组织中PTBP1的表达差异。划痕及侵袭实验研究过表达或敲减PTBP1对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响,Western blot检测过表达或敲减PTBP1对EMT通路蛋白的影响。结果:高转移肝癌细胞系HCCLM3中PTBP1的表达显著升高(P<0.05),且肝癌组织中PTBP1的表达水平明显高于正常组织(P<0.05)。过表达PTBP1可显著提高HCCLM3细胞的迁移与侵袭能力(P<0.05),并增加间充质标志物N-cadherin和vimentin等的表达(P<0.05),促进肝癌细胞的EMT进程。结论:PTBP1可通过促进肝癌细胞的EMT途径而促进肝癌细胞的迁移与侵袭。 展开更多

关键词 多聚嘧啶区结合蛋白 上皮-间充质转化 肝癌 细胞侵袭 细胞迁移

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运用SYBR GreenⅠ荧光实时RT-PCR法检测草莓中甲肝病毒 被引量：5

11

作者 莫雪梅 高东微 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第14期153-157,共5页

针对甲肝病毒的vp3/vp1壳蛋白区域设计引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测甲肝病毒的反应体系。此方法的病毒检测下限达到101TCID50,标准曲线为Ct=-3.052lg(TCID50)+34.57,线形范围101～105TCID50,相关系数0.9961。该方法对甲肝... 针对甲肝病毒的vp3/vp1壳蛋白区域设计引物,建立SYBR GreenⅠ实时荧光RT-PCR检测甲肝病毒的反应体系。此方法的病毒检测下限达到101TCID50,标准曲线为Ct=-3.052lg(TCID50)+34.57,线形范围101～105TCID50,相关系数0.9961。该方法对甲肝病毒检测特异,与轮状病毒、腺病毒、诺如病毒、星状病毒无交叉反应。针对甲肝病毒标准品检测的批内试验变异系数(CV)为0.85%～1.71%(n=5)、批间试验CV为0.76%～1.98%(n=3)。运用此方法随机检测45份草莓样品,检测出3份阳性样品。该检测方法灵敏、特异、重复性好,可应用于水果和蔬菜中甲肝病毒的快速检测。 展开更多

关键词 甲肝病毒 SYBR GreenⅠ荧光实时RT-PCR 检测 草莓

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人呼吸道合胞病毒FHRA-HRB片段的表达纯化与鉴定 被引量：1

12

作者 夏超 沈良华 +5 位作者 李满妹 唐维 易善泽 牛得伟 王峰 李药兰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期301-307,共7页

目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆... 目的:克隆呼吸道合胞病毒融合F蛋白(RSV-F)中FHRA-HRB基因片段,构建体外的原核表达载体,对FHRA-HRB蛋白进行表达纯化,为进一步研究FHRA-HRB蛋白构效关系及抗RSV活性提供实验依据.方法:用Trizol法从RSV感染的Hep-2细胞中提取病毒RNA,逆转录得c DNA,使用Primer 6.0软件设计特异性引物,聚合酶链反应(PCR)扩增得到FHRA-HRB片段,测序成功后,将FHRA-HRB插入p ET-15b脱磷载体中,转化入Rosettagami表达宿主,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导FHRA-HRB的体外表达,Ni-NTA亲和层析法纯化蛋白.用Western-blot法鉴定FHRA-HRB蛋白表达.结果:成功扩增了大小约1100 bp的FHRA-HRB片段,克隆进p ET-15b载体后,菌液PCR验证与测序分析结果表明FHRA-HRB片段序列与预期一致且读码框插入正确,表达载体构建成功.工程菌经IPTG诱导后成功表达大小约43 000的FHRA-HRB蛋白,经Ni-NTA agarose纯化后FHRA-HRB蛋白纯度达95%以上.纯化后的FHRA-HRB蛋白经Western-blot鉴定其大小正确.结论:成功构建p ET-15b-FHRA-HRB表达载体,经表达纯化后,得到了纯度较高的FHRA-HRB蛋白,纯化蛋白经Western-blot鉴定正确.本研究为进一步研究其抗RSV活性和开发以F蛋白为靶点的抗RSV药物提供实验依据. 展开更多

关键词 呼吸道合胞病毒 FHRA-HRB片段 载体构建 蛋白表达

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重组病毒炎症蛋白Ⅱ长期静脉注射对食蟹猴免疫系统的影响 被引量：1

13

作者 孙晗笑 吕秋军 +4 位作者 江振友 莫雪梅 张光 陈宏 杨清玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期11-15,共5页

目的研究重组vMIP-Ⅱ在体内对食蟹猴免疫系统的影响。方法食蟹猴随机分为阴性对照组(静脉注射人白蛋白)和实验组(分别连续13周静脉注射50、250和1250μg/kg剂量的重组vMIP-Ⅱ),于不同时间采集血液(给药前、给药6周、给药13周和恢复期2周... 目的研究重组vMIP-Ⅱ在体内对食蟹猴免疫系统的影响。方法食蟹猴随机分为阴性对照组(静脉注射人白蛋白)和实验组(分别连续13周静脉注射50、250和1250μg/kg剂量的重组vMIP-Ⅱ),于不同时间采集血液(给药前、给药6周、给药13周和恢复期2周)及各器官、淋巴组织(给药13周和恢复期2周)样品。ELISA测定血清中重组vMIP-Ⅱ抗体,分离外周血单个核细胞(PBMCs),FACS计数CD3+、CD4+以及CD8+细胞并测定淋巴细胞转化率;各器官及淋巴组织样品做病理学检查,并采用末端转移酶介导的缺口标记(TUNEL)法检测淋巴组织细胞凋亡指数。结果长期大剂量静脉注射重组vMIP-Ⅱ并不引起食蟹猴产生中和抗体;在用药期间动物外周血CD3+T细胞、CD4+以及CD8+T细胞计数显著性增强(P<0·05),CD4+/CD8+比值仍属正常,同时体外观察到淋巴细胞转化率增加(P<0·05);各器官无病理学改变,淋巴组织出现增生,并且重组vMIP-Ⅱ注射组食蟹猴增生的淋巴组织细胞凋亡指数与阴性对照组相比无明显改变;在恢复期以上指标均有所降低。结论在重组vMIP-Ⅱ对食蟹猴免疫原性不明显的情况下,长期大剂量注射重组vMIP-Ⅱ具有刺激食蟹猴免疫系统、T淋巴细胞增生和增加T淋巴细胞功能的作用。 展开更多

关键词 重组vMIP-Ⅱ 食蟹猴 T淋巴细胞 淋巴细胞增生 凋亡

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人类疱疹病毒7型感染CD4^+T淋巴细胞的意义 被引量：2

14

作者 刘富金 孙晗笑 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期510-512,共3页

关键词 人类疱疹病毒7型感染 CD4^+T淋巴细胞 分子机制 受体

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人体自身具有的广谱抑制性调控趋化因子功能的机制分析 被引量：1

15

作者 刘毅 孙晗笑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期401-404,共4页

关键词 趋化因子 炎症性疾病 广谱 抑制

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通用型转铁蛋白融合表达载体的构建及应用价值

16

作者 王峰 孙晗笑 +2 位作者 莫雪梅 李秀英 张光 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期98-101,共4页

构建通用型转铁蛋白融合表达载体,利用PCR方法扩增编码人转铁蛋白N端半分子的基因片段,通过酶切、连接、转化等分子克隆方法构建通用型转铁蛋白融合表达载体。PCR扩增了一个长约1.1 kb的包含ScaI酶切位点的基因片段,插入pPICZα的PmlI和... 构建通用型转铁蛋白融合表达载体,利用PCR方法扩增编码人转铁蛋白N端半分子的基因片段,通过酶切、连接、转化等分子克隆方法构建通用型转铁蛋白融合表达载体。PCR扩增了一个长约1.1 kb的包含ScaI酶切位点的基因片段,插入pPICZα的PmlI和XbaI酶切位点,转化后进行菌液PCR鉴定,成功获得重组子pPICZα-TfN,测序结果表明载体构建成功,重组质粒pPICZα-TfN能被ScaI酶切。本研究成功构建通用型转铁蛋白融合表达载体,构建的载体可以用于转铁蛋白融合表达载体的构建。 展开更多

关键词 转铁蛋白 PCR 载体构建

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C25P肽对小鼠的急性毒性及体外致癌作用

17

作者 莫雪梅 孙晗笑 汤曼莉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期943-948,共6页

目的研究C25P肽对小鼠的急性毒性作用以及体外致癌性,为临床应用提供依据。方法采用最大耐受剂量法(MTD)进行对小鼠的急性毒性试验。对照组小鼠尾静脉注射生理盐水(40ml/kg);用药组小鼠尾静脉注射C25P多肽(3.64g/kg)。给药后连续观察14d... 目的研究C25P肽对小鼠的急性毒性作用以及体外致癌性,为临床应用提供依据。方法采用最大耐受剂量法(MTD)进行对小鼠的急性毒性试验。对照组小鼠尾静脉注射生理盐水(40ml/kg);用药组小鼠尾静脉注射C25P多肽(3.64g/kg)。给药后连续观察14d。14d处死小鼠,测定血常规及血液生化学指标,并解剖小鼠进行病理组织学检查。并采用染色体畸变试验、细胞转化试验、非锚定依赖性生长试验对C25P多肽进行体外的致癌性评价。结果未出现小鼠死亡,用药组有3只小鼠发生轻微毒性反应;每组小鼠体质量均有增长,各组间的平均增长率无显著差异;所测血液生化指标中,用药组GPT(谷丙转氨酶)值比对照组呈显著性升高(P<0.05);用药组ALP(碱性磷酸酶)值比对照组呈显著性降低(P<0.05);大部分小鼠器官正常,发生毒性反应的3只小鼠的肺、脾、肝脏出现病变。C25P多肽的染色体畸变试验、细胞转化试验、非锚定依赖性生长试验均呈阴性。结论 C25P肽对受试动物无明显急性毒性作用以及无明显致癌性作用,属于低毒类药物。 展开更多

关键词 急性毒性 致癌性 安全性 C25P肽

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PFP、GrB真核共表达载体的构建及表达分析

18

作者 李秀英 夏良平 赖延东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期492-495,共4页

目的:体外扩增出PFP、GrB基因的全片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB),分析其在人喉癌细胞Hep-2中的表达情况。方法:利用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段并构建共表达重组体pV... 目的:体外扩增出PFP、GrB基因的全片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG(即pVAX1-PFP-IRES-GrB),分析其在人喉癌细胞Hep-2中的表达情况。方法:利用RT-PCR的方法从人的喉癌组织浸润淋巴细胞中扩增全长PFP、GrB的cDNA片段并构建共表达重组体pVAX1-PIG。利用脂质体LipofectamineTM2000将重组真核表达载体pVAX1-PIG转染入人的Hep-2细胞株中,采用RT-PCR、间接免疫荧光法分析其在人Hep-2中的表达情况。结果:经双酶切、测序法证实已成功扩增PFP、GrB基因的全长cDNA,并构建共表达重组体pVAX1-PIG,在荧光显微镜下可见已转染pVAX1-PIG的人Hep-2细胞的胞浆发出苹果绿色荧光。结论:成功扩增PFP、GrB全片段、构建共表达重组体pVAX1-PIG,并在人Hep-2细胞中检测到PFP、GrB蛋白的表达,穿孔素(PFP)/颗粒酶B共同表达能够介导细胞的凋亡,为其在喉癌治疗中的应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 穿孔素 颗粒酶B 共表达 间接免疫荧光

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病毒受体拮抗性诱获配体H9的体外活性及其对人趋化因子受体CX_3CR1的作用 被引量：1

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作者 张敏 孙晗笑 +2 位作者 莫雪梅 李秀英 张光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期597-601,共5页

目的:来源于US28受体N末端的诱惑配体多肽H9,以阐明H9的体外活性及其对细胞表面趋化因子受体CX3CR1内化及调变研究,探讨H9对人趋化因子受体CX3CR1的作用及影响。方法:立足US28的广谱趋化因子结合活性,得到趋化因子受体拮抗性多肽H9。采... 目的:来源于US28受体N末端的诱惑配体多肽H9,以阐明H9的体外活性及其对细胞表面趋化因子受体CX3CR1内化及调变研究,探讨H9对人趋化因子受体CX3CR1的作用及影响。方法:立足US28的广谱趋化因子结合活性,得到趋化因子受体拮抗性多肽H9。采用趋化抑制实验检测多肽对生理性趋化因子引起的细胞迁移活性的影响,流式细胞术方法(FCM)检测细胞内钙离子浓度变化,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别定性、定量检测CX3CR1的内化,以阐明H9的生物活性及其对人源受体CX3CR1的作用及其机制。结果:多肽H9可以阻断受体结合生理性趋化因子形成的趋化作用,本身不引起趋化运动,不影响胞内信号转导和细胞自然活性;200 ng/mL H9在给药后的最初50min钟内能使细胞表面受体CX3CR1内化达到最大值,内化率约为70%,第100分钟,内化到细胞内的CX3CR1逐渐再循环到细胞表面。证明了H9能引起细胞表面受体CX3CR1内化,内化的受体部分再循环到细胞表面。结论:H9是一种趋化因子受体抑制短肽,影响人受体CX3CR1的内化,但内化后受体再循环到细胞表面,对人受体CX3CR1生理功能没有明显影响,可以作为特异性抗病毒多肽。 展开更多

关键词 病毒受体 趋化因子受体 趋化抑制 诱惑配体 趋化因子受体拮抗剂 受体内化

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人锰超氧化物歧化酶hSOD2-Q46K突变体的表达与功能分析 被引量：1

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作者 谢珺 牛得伟 +5 位作者 李艳冰 高可 高辉 李帅广 沈良华 王峰 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期205-213,共9页

目的:构建人锰超氧化物歧化酶(hSOD2)-Q46K突变体,简化获得hSOD2突变体的步骤,探讨hSOD2结构与功能的关系.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)体外定点突变技术将hSOD2的46位Q氨基酸突变为K氨基酸,经测序鉴定正确后将p ET15b-hSOD2-Q46K突变... 目的:构建人锰超氧化物歧化酶(hSOD2)-Q46K突变体,简化获得hSOD2突变体的步骤,探讨hSOD2结构与功能的关系.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)体外定点突变技术将hSOD2的46位Q氨基酸突变为K氨基酸,经测序鉴定正确后将p ET15b-hSOD2-Q46K突变体重组质粒转化Rosetta-gami大肠杆菌,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白表达.利用SWISS-MODEL Workspace对hSOD2-Q46K突变体进行同源建模,利用Swiss-Pdb-Viewer软件对建模结果进行分析.利用Ni-NTA亲和层析纯化目的蛋白后用超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒检测目的蛋白的SOD活力.利用浓度为0.1 mmol/L百草枯(PQ)压力下生长情况测定表达hSOD2-Q46K和hSOD2蛋白的Rosetta-gami大肠杆菌的抗氧化能力.结果:测序结果表明46位密码子已由CAG突变为AAG.经过IPTG诱导后野生型和突变体均能表达出大小约为25 k Da的蛋白.SOD活性检测表明hSOD2-Q46K突变体的活力为899 U/mg,比野生型蛋白活性下降了65.4%.三维结构分析显示,突变点周围氨基酸间氢键被部分打破.结论:成功构建hSOD2-Q46K突变体并成功得到了纯化的突变体蛋白,hSOD2-Q46K的SOD活力比野生型降低了65.4%,且百草枯压力下表达hSOD2-Q46K蛋白的大肠杆菌A600达到0.84,而野生型蛋白的大肠杆菌A600达到1.14.这可能是因为突变点与周围氨基酸间氢键打破,突变点周围失去了原来的稳定结构,底物通道入口处氨基酸排列疏散,影响电子在氨基酸间的传递,影响静电导向机制,从而阻碍氧自由基在底物通道的通行,使hSOD2的催化活力下降. 展开更多

关键词 锰超氧化物歧化酶 表达 超氧化物歧化酶活性 突变体

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