新疆准噶尔小胸鳖甲抗冻蛋白基因的克隆和抗冻活性分析 被引量：32

1

作者 赵干 马纪 +3 位作者 薛娜 杨长庚 专芳芳 张富春 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期667-673,共7页

根据GenBank中已发表的昆虫抗冻蛋白基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术结合3’-RACE扩增的方法,从新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲Microderapunctipenisdzunarica中获得了长约294bp不含信号肽的抗冻蛋白cDNA片段,命名为MpAFP5,其全长... 根据GenBank中已发表的昆虫抗冻蛋白基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术结合3’-RACE扩增的方法,从新疆荒漠昆虫准噶尔小胸鳖甲Microderapunctipenisdzunarica中获得了长约294bp不含信号肽的抗冻蛋白cDNA片段,命名为MpAFP5,其全长序列为363bp(GenBank注册号为AY821792)。基因测序结果表明,MpAFP5cDNA片段与加拿大拟步甲DendroidescanadensisAFP8基因片段、黄粉甲TenebriomolitorTHP4-9基因片段的核苷酸同源性分别达68.4%和71.8%,氨基酸序列同源性分别达70%和81%。将MpAFP5构建到原核表达载体pGEX4T-1中,重组质粒pGEX4T-1-MpAFP5在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达融合抗冻蛋白,SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为37kD,Western印迹分析证明MpAFP5在大肠杆菌中正确表达。细菌的抗冻实验结果显示准噶尔小胸鳖甲融合抗冻蛋白对细菌具有显著的抗冻保护作用,保护效果与抗冻蛋白剂量呈正相关性。 展开更多

关键词 准噶尔小胸鳖甲 抗冻蛋白 RT-PCR 融合蛋白 抗冻活性

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新疆荒漠昆虫光滑鳖甲cDNA文库的构建及功能基因筛选 被引量：7

2

作者 杨长庚 张富春 马纪 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第4期109-114,共6页

以过冬后早春的新疆荒漠拟步甲属昆虫光滑鳖甲(Anatolica Polita borealis)成虫为研究材料,应用SMARTTM cDNA Library Construction技术,通过总RNA提取,反转录合成cDNA,定向构建至噬菌体载体λTripEx2,经体外包装构建了光滑鳖甲的cDNA... 以过冬后早春的新疆荒漠拟步甲属昆虫光滑鳖甲(Anatolica Polita borealis)成虫为研究材料,应用SMARTTM cDNA Library Construction技术,通过总RNA提取,反转录合成cDNA,定向构建至噬菌体载体λTripEx2,经体外包装构建了光滑鳖甲的cDNA表达文库。测试结果表明库容量为2.2×106,重组率为84.8%。通过对cDNA文库克隆的序列测定和初步生物信息学分析,获得28个光滑鳖甲表达序列标签(ESTs),包括17个EST(60.7%)与NCBI中已注册的已知功能基因相似性较高,另外的11个EST(39.3%)则没有发现与之相似的序列,推测可能是功能未知的新基因。同时,利用PCR扩增文库技术从cDNA文库中克隆获得了光滑鳖甲的抗冻蛋白基因,初步表明光滑鳖甲cDNA表达文库构建的成功,为深入研究新疆荒漠昆虫的抗冻机理及发现新的昆虫功能基因奠定了基础。 展开更多

关键词 光滑鳖甲 CDNA文库 表达序列标签 抗冻蛋白

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昆虫抗冻蛋白的结构与生物学特性研究 被引量：3

3

作者 马纪 赵干 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第5期37-40,44,共5页

抗冻蛋白(antifreeze proteins AFPs)是一类抑制冰晶生长的蛋白质,它能以非依数性形式降低溶液的冰点而对其熔点影响甚微,因而也被称作热滞蛋白。近几年来对于昆虫抗冻蛋白的研究取得了较快的发展,已有20多种昆虫抗冻蛋白被分离纯化。... 抗冻蛋白(antifreeze proteins AFPs)是一类抑制冰晶生长的蛋白质,它能以非依数性形式降低溶液的冰点而对其熔点影响甚微,因而也被称作热滞蛋白。近几年来对于昆虫抗冻蛋白的研究取得了较快的发展,已有20多种昆虫抗冻蛋白被分离纯化。就昆虫抗冻蛋白的结构特征、生物学特性以及在农业、医学和食品工业等方面的应用进行介绍。 展开更多

关键词 昆虫抗冻蛋白 热滞活性 结构 生物活性

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新疆濒危植物盐桦试管苗生根培养的研究 被引量：12

4

作者 梅新娣 马纪 张富春 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2006年第3期218-223,F0003,共7页

采用L27(313)正交试验方法探讨了培养基种类A、植物生长调节剂及其不同浓度配比B、蔗糖量C、培养的光照条件D四因素对诱导盐桦生根(平均根长、生根系数、生根率)的影响。结果表明,生长素B、生长素×培养基(A×B)对生根系数有极... 采用L27(313)正交试验方法探讨了培养基种类A、植物生长调节剂及其不同浓度配比B、蔗糖量C、培养的光照条件D四因素对诱导盐桦生根(平均根长、生根系数、生根率)的影响。结果表明,生长素B、生长素×培养基(A×B)对生根系数有极显著的影响,培养基A、生长素B、生长素×培养基(A×B)仅对平均根长有极显著的影响,四个因子对生根率均无显著的影响。研究获得诱导盐桦平均根长的优化培养基为A2B1C3D1(即S27处理)MS+NAA 0.2 mg/L+蔗糖10 g/L+琼脂7%,诱导盐桦生根系数优化培养基为A3B2C3D2(与处理S21的A3B2C3D3相似)1/2MS+IBA 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7%+暗光处理3 d,诱导盐桦生根率的优化培养基为A2B3C1D1(即S10处理)MS+IAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7%。最佳生根培养基为:1/2MS+IBA 0.5mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7%+暗光处理3 d。其生根系数高达5.308,生根率高达96.30%以上。 展开更多

关键词 濒危植物 盐桦 正交试验 试管苗生根

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Tenebrio molitor抗冻蛋白基因家族cDNA片段的克隆、序列分析及原核表达 被引量：9

5

作者 刘忠渊 王芸 +3 位作者 吕国栋 王贤磊 张富春 马纪 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1532-1540,共9页

利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,克隆黄粉甲虫(Tenebriomolitor)抗冻蛋白基因cDNA片段并进行序列分析和原核表达。同源性分析表明,获得9条新cDNA片段,与黄粉甲虫抗冻蛋白基因家族的其他基因序列具有较高的同源性。重组质粒pGE... 利用反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,克隆黄粉甲虫(Tenebriomolitor)抗冻蛋白基因cDNA片段并进行序列分析和原核表达。同源性分析表明,获得9条新cDNA片段,与黄粉甲虫抗冻蛋白基因家族的其他基因序列具有较高的同源性。重组质粒pGEX-4T-1-tmafp-XJ430,转化E.coliBL21进行原核表达,SDS-PAGE分析结果表明,抗冻蛋白基因以可溶性融合蛋白表达,相对分子量为38kDa。构建真核表达载体pCDNA3-tmafp-XJ430,免疫小鼠,获得的抗血清滴度为1:2000。Westernblotting结果为单一的条带,证明该抗血清具有针对抗冻蛋白TmAFP-XJ430抗原的专一性。 展开更多

关键词 黄粉甲虫 抗冻蛋白 CDNA片段 序列分析 原核表达

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红花基因组DNA的提取及RAPD体系的优化 被引量：6

6

作者 徐莉 张富春 +2 位作者 陈友强 郝秀英 陈跃华 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2005年第2期131-134,共4页

用多种方法提取红花老叶及嫩叶DNA,进行比较,最后确定老叶DNA的提取用高盐低pH法,嫩叶用Michael等的方法。设计两次正交实验来确定红花RAPD体系中各成分的浓度,最终确定了一个既稳定又能扩增出最多条带的适合红花的RAPD最优体系,即25μ... 用多种方法提取红花老叶及嫩叶DNA,进行比较,最后确定老叶DNA的提取用高盐低pH法,嫩叶用Michael等的方法。设计两次正交实验来确定红花RAPD体系中各成分的浓度,最终确定了一个既稳定又能扩增出最多条带的适合红花的RAPD最优体系,即25μL反应液中,dNTP200μM,Mg2+1.5mM,引物0.8μM,Taq酶1U,模板30～60ng。 展开更多

关键词 红花 基因组DNA 提取 RAPD体系 优化

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地高辛标记探针Southern印迹杂交技术要点及改进 被引量：7

7

作者 刘立鸿 许璐 +2 位作者 汪凯 张富春 马正海 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期57-59,共3页

Southern印迹杂交技术是检测特定DNA片段的常规方法之一,其操作程序繁琐,对基因组DNA的提取、纯化、酶切等均有较高要求,要获得理想杂交结果需要反复摸索。总结地高辛标记探针Southern印迹杂交的技术要点,并结合具体操作提出改良方案。

关键词 地高辛 SOUTHERN杂交 改进 技术要点

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小分子肽制备抗体方法的研究进展 被引量：1

8

作者 郑树涛 刘忠渊 张富春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期312-314,共3页

关键词 小分子肽 抗体制备 佐剂 偶联

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密码子优化HPV16衣壳基因真核共表达载体的构建及细胞转染

9

作者 刘立鸿 许璐 +2 位作者 李轶杰 张富春 马正海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期663-667,共5页

目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-... 目的:构建密码子优化的HPV16衣壳基因真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2。方法:用PCR技术从988载体中获得L1-IRES-L2片段,将该片段克隆到pCR-XL-TO-PO载体,然后定向亚克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,从而构建真核共表达载体pcDNA3.1-L1-IRES-L2;通过水动力转染技术(hydrodynamics-based transfection)和脂质体细胞转染法(liposome-mediated transfection of cells),检测衣壳基因的体内、外转录情况;重组质粒转染后293T细胞后观察其形态变化,用Western blot方法检测293T细胞中L1衣壳蛋白的表达。结果:酶切和测序结果表明真核共表达载体pcD-NA3.1-L1-IRES-L2构建正确。重组质粒中的L1和L2基因在小鼠肝脏、293T细胞中均发生转录。重组质粒转染293T细胞后出现CPE(cytopathic effect)现象,表明衣壳基因在细胞中已表达。Western blot方法检测发现L1蛋白在293T细胞中表达。结论:成功地构建了pcDNA3.1-L1-IRES-L2共表达真核载体,为进一步研究HPV16感染机制奠定基础。 展开更多

关键词 密码子优化 HPV16衣壳基因 共表达真核载体 细胞转染

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昆虫抗冻蛋白DAFP的原核表达、纯化和抗血清制备 被引量：5

10

作者 王芸 吕国栋 +2 位作者 薛娜 张富春 马纪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期727-730,共4页

目的:制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清。方法:根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi:2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和pMA... 目的:制备昆虫抗冻蛋白DAFP特异性的鼠抗血清。方法:根据GenBank已发表的Dendroides canadensis抗冻蛋白基因序列(gi:2737939),人工合成加拿大拟步甲虫(Dendroides canadensis)的抗冻蛋白基因(dafp),并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1和pMAL-p2x中,在大肠杆菌中进行表达。表达的融合蛋白经Glutathione Sepharose4B纯化后,免疫小鼠制备抗DAFP的抗血清,抗体的效价及特异性分别采用ELISA和Western blot进行检测。结果:SDS-PAGE检测表明,人工合成的dafp基因在大肠杆菌中可表达相对分子质量(Mr)为38000的可溶性融合蛋白。以该融合蛋白免疫小鼠所制备的抗体,其ELISA滴度为1∶5000,Western blot证实BL21/pGEX-4T-1-dafp菌和TB1/pMAL-p2x-dafp菌的表达产物可特异性地与该抗体结合。结论:在大肠杆菌中成功地表达了DAFP的融合蛋白并制备出抗融合蛋白的鼠抗血清,为进一步研究DAFP的特性奠定了基础。 展开更多

关键词 昆虫 抗冻蛋白 原核表达 抗血清 蛋白印迹 抗冻蛋白基因 抗血清制备 原核表达载体 纯化 Western

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家蚕天蚕素cDNA原核表达及抗菌活性检测 被引量：15

11

作者 李金耀 张富春 马正海 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期407-411,共5页

采用RT PCR方法从家蚕Bombyxmori新疆品种新蚕三号组织中扩增天蚕素cDNA片段 ,回收并克隆至pMD18 T载体 ,进行序列分析。基因序列分析结果与已发表的天蚕素B的序列同源性为 98% ,表明所克隆的新疆家蚕天蚕素cDNA为独特的cDNA片段。将天... 采用RT PCR方法从家蚕Bombyxmori新疆品种新蚕三号组织中扩增天蚕素cDNA片段 ,回收并克隆至pMD18 T载体 ,进行序列分析。基因序列分析结果与已发表的天蚕素B的序列同源性为 98% ,表明所克隆的新疆家蚕天蚕素cDNA为独特的cDNA片段。将天蚕素基因与pGEX 4T 1融合表达载体中的谷胱甘肽转移酶基因融合 ,在大肠杆菌中表达 ,结果表明经IPTG诱导 30min后 ,pGEX 4T 1 天蚕素转化后的大肠杆菌生长明显受到抑制 ;当诱导 2 10min后 ,大肠杆菌数量又开始增加 ,逐渐恢复至正常水平。说明天蚕素与谷胱甘肽转移酶基因融合表达后 ,在IPTG存在的短时间内仍然对原核细胞有较强的抗菌抑杀作用。 展开更多

关键词 家蚕 天蚕素 基因分析 融合表达 抗菌活性

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盐桦(Betula halophila)愈伤组织的高效诱导和不定芽的分化 被引量：14

12

作者 梅新娣 张富春 吕会平 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2006年第1期78-81,F0003,共5页

设计不同激素、不同水平的单因子试验和正交试验,统计盐桦出愈率、分化率,筛选出诱导盐桦愈伤组织的最适外植体和最适培养基。盐桦愈伤组织高效诱导和不定芽分化的最适外植体为茎段;诱导愈伤组织的最适培养基为:LS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.4... 设计不同激素、不同水平的单因子试验和正交试验,统计盐桦出愈率、分化率,筛选出诱导盐桦愈伤组织的最适外植体和最适培养基。盐桦愈伤组织高效诱导和不定芽分化的最适外植体为茎段;诱导愈伤组织的最适培养基为:LS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.4;愈伤组织分化抽枝的最适培养基为:LS+BA 0.5 mg/L+NAA0.02 mg/L;高效诱导愈伤组织和不定芽分化的最适培养基为:LS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L。琼脂7%,蔗糖浓度20 g/L。愈伤组织诱导率和不定芽分化率分别达到82%和93.6%以上。 展开更多

关键词 濒危植物 盐桦 愈伤组织诱导 不定芽分化

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利用木质纤维原料制取燃料乙醇预处理方法的研究进展 被引量：13

13

作者 幸婷 程可可 +1 位作者 张建安 张富春 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2007年第S2期92-95,97,共5页

阐述了燃料乙醇的发展现状以及由木质纤维原料生产燃料乙醇对我国可持续发展的重要性。根据纤维质原料的性质,重点介绍了木质纤维原料预处理的方法及其应用现状。最后对木质纤维原料生产燃料乙醇进行了展望。

关键词 木质纤维素 预处理 燃料乙醇

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水浮莲无菌苗的获得及其培养体系的优化 被引量：5

14

作者 蒋刚强 王瑜 +2 位作者 兰海燕 张富春 马纪 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期615-619,共5页

为了有效地进行水浮莲(Pistia stratiotes)的基因工程改造,达到利用水浮莲进行污染水体的植物修复,本研究建立了水浮莲无菌苗培养体系。采用二次消毒法获得水浮莲的无菌苗,并研究了萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、蔗糖、pH值对其生... 为了有效地进行水浮莲(Pistia stratiotes)的基因工程改造,达到利用水浮莲进行污染水体的植物修复,本研究建立了水浮莲无菌苗培养体系。采用二次消毒法获得水浮莲的无菌苗,并研究了萘乙酸(NAA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)、蔗糖、pH值对其生长的影响,确立了水浮莲的优化培养体系为:1/2 MS+6-BA 0.25mg/L+NAA 0.3mg/L+蔗糖20g/L,pH6.0。水浮莲在此培养基上可快速扩增和长期继代培养,无菌生长的水浮莲比温室中自然水浮莲的植株形态小,易于研究操作。 展开更多

关键词 水浮莲 无菌苗 培养体系优化

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优化密码子提高草原兔尾鼠ZP3融合蛋白的原核表达 被引量：3

15

作者 李轶杰 张富春 +1 位作者 张钰 王焱冰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期700-703,共4页

目的:探讨提高草原兔尾鼠(Lagurus lagurus)卵透明带3(LZP3)基因在原核细胞中表达的水平。方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP3基因上3个稀有的密码子簇,将LZP3基因中7个稀有的密码子更换成大肠杆菌(E.coli)最常用的相应密码子。将获得的... 目的:探讨提高草原兔尾鼠(Lagurus lagurus)卵透明带3(LZP3)基因在原核细胞中表达的水平。方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP3基因上3个稀有的密码子簇,将LZP3基因中7个稀有的密码子更换成大肠杆菌(E.coli)最常用的相应密码子。将获得的LZP3突变基因(LZP3m)插入pGEX4T-1中,构建重组表达载体。以重组体转化E.coliBL21(DE3)菌株进行表达。结果:LZP3m基因的表达量比野生型LZP3基因明显提高。结论:通过密码子优化,能显著提高LZP3基因在原核细胞中的表达水平。 展开更多

关键词 草原兔尾鼠 卵透明带3 重叠PCR 密码子优化 原核表达

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喀什哈尔葡萄组织培养及再生体系的建立 被引量：5

16

作者 王起才 马纪 张富春 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2008年第1期42-46,共5页

以喀什哈尔葡萄单芽茎段为材料,进行了离体组织培养并以实验获得的喀什哈尔葡萄组培苗进行了外植体器官直接再生研究。结果表明:喀什哈尔葡萄单芽茎段最适初始培养基是:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L,侧芽萌芽率达100%;最适继代培养基... 以喀什哈尔葡萄单芽茎段为材料,进行了离体组织培养并以实验获得的喀什哈尔葡萄组培苗进行了外植体器官直接再生研究。结果表明:喀什哈尔葡萄单芽茎段最适初始培养基是:MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.01 mg/L,侧芽萌芽率达100%;最适继代培养基是:MS+KT 0.1 mg/L+IBA 0.4 mg/L,同时伸长生长与生根生长,生根率达100%。探讨了喀什哈尔葡萄器官再生的影响因素,并以叶片为试材,建立了植株再生体系。叶片不定芽再生的最佳培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L,再生率为14.3%;最佳生根培养基是MS+KT 0.1 mg/L+IBA 0.4 mg/L,生根效果良好,生根率为92%。 展开更多

关键词 葡萄 喀什哈尔 组织培养 不定芽 再生

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小鼠胚胎成纤维细胞分离培养研究 被引量：5

17

作者 庄淑珍 吕芳 +1 位作者 潘巍 张富春 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2007年第6期729-733,共5页

为探索实验室影响小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）分离和培养的因素,取昆明白小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度和作用时间对MEF分离及培养的影响进行研究,观察MEF的生长形态及其生物学... 为探索实验室影响小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）分离和培养的因素,取昆明白小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度和作用时间对MEF分离及培养的影响进行研究,观察MEF的生长形态及其生物学特性。结果表明,在实验室条件下,12.5-14.5 d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;最佳培养基为DMEM添加15%小牛血清;第3代细胞增殖最旺盛;室温条件下,0.125%胰蛋白酶消化MEF时间以8-10 min为宜。在培养ES细胞时,应选择第3-5代的MEF作为饲养层细胞。研究获得了可在实验室分离制备MEF的方法,为实验室进一步分离培养ES细胞奠定基础。 展开更多

关键词 小鼠胚胎成纤维细胞 分离 培养 生物学特性

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一种快速提取盐桦叶片总RNA的方法建立 被引量：2

18

作者 曾幼玲 邓爱华 +1 位作者 曹文尧 张富春 《种子》 CSCD 北大核心 2006年第11期51-53,共3页

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键。盐桦细胞中存在大量的胶质和多糖类物质,用Trizol试剂根本不能获得RNA。本研究采用CTAB-L iC l法,提出了一种适合盐桦叶片总RNA的简单快速提取方法。消除了蛋白... 从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键。盐桦细胞中存在大量的胶质和多糖类物质,用Trizol试剂根本不能获得RNA。本研究采用CTAB-L iC l法,提出了一种适合盐桦叶片总RNA的简单快速提取方法。消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染。该方法提取的盐桦叶片总RNA,完整性好、纯度高,可用于RT-PCR等实验操作,此法无需特殊试剂和贵重仪器,实验结果稳定,重复性好,适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取。 展开更多

关键词 盐桦叶片 总RNA 提取 RT-PCR

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spaA嵌合体核酸疫苗增强抗体水平的研究 被引量：1

19

作者 陈开旭 李轶杰 +2 位作者 张富春 曹文尧 李江伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期984-986,990,共4页

目的:探讨提高丹毒丝菌表面抗原A(spaA)N端核酸疫苗免疫应答的策略。方法:通过基因重组构建含人α胰岛素抑制剂(AAT)的信号肽、大鼠寡聚软骨基质蛋白(COMP)片段、丹毒丝菌spaA基因N末端及3分子的C3d序列的真核细胞表达质粒pcDNA3-AAT-CO... 目的:探讨提高丹毒丝菌表面抗原A(spaA)N端核酸疫苗免疫应答的策略。方法:通过基因重组构建含人α胰岛素抑制剂(AAT)的信号肽、大鼠寡聚软骨基质蛋白(COMP)片段、丹毒丝菌spaA基因N末端及3分子的C3d序列的真核细胞表达质粒pcDNA3-AAT-COMP-spaAN-C3d3(pcD-ACSC)和pcDNA3-spa(pcD-S)。肌注免疫LCR小鼠后,RT-PCR检测小鼠体内丹毒丝菌spaAN基因的瞬时表达,ELISA检测小鼠血清spaA抗体水平的变化,以丹毒丝菌XJ1249评价免疫小鼠的保护效果。结果:免疫第4周时pcD-ACSC核酸疫苗激发了较高水平的SpaAN抗体而pcD-S核酸疫苗激发的抗体水平与对照相比差异不显著;同时pcD-ACSC核酸疫苗具有70%保护效果,pcD-S核酸疫苗则不具保护效果。结论:通过融合高表达分泌蛋白信号肽、增加抗原溶解度的序列和分子佐剂C3d3能显著提高spaAN的抗体水平,为丹毒丝菌spaA核酸疫苗的应用奠定基础。 展开更多

关键词 表面保护抗原A 丹毒丝菌 核酸疫苗

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拟南芥AtNHX2启动子的克隆及表达模式分析(英文) 被引量：1

20

作者 李金耀 徐莉 +2 位作者 马纪 周洁 张富春 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1114-1118,共5页

AtNHX2基因是拟南芥NHX基因家族的一员 ,编码了一种液泡膜中的Na+ /H+ 反向运输体并对拟南芥的耐盐能力起着重要的作用 .采用PCR扩增的方法克隆了拟南芥AtNHX2基因启始密码子上游约 2 8kb的DNA片段 ,并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA13... AtNHX2基因是拟南芥NHX基因家族的一员 ,编码了一种液泡膜中的Na+ /H+ 反向运输体并对拟南芥的耐盐能力起着重要的作用 .采用PCR扩增的方法克隆了拟南芥AtNHX2基因启始密码子上游约 2 8kb的DNA片段 ,并将其克隆到植物表达载体pCAMBIA130 1 1中 ,通过基因枪轰击洋葱表皮瞬时表达的方法 ,初步检测启动子的活性 .将重组质粒pCAMBIA130 1 1/AtNHX2promoter转化拟南芥并筛选纯合子 .AtNHX2promoter GUS分析显示AtNHX2在所有的组织中均有表达 ,包括根尖 .在保卫细胞中检测到了强烈的GUS表达 ,这一结果表明 ,AtNHX2对特殊细胞的pH调控和K+ 自身稳定方面起着重要的作用 .AtNHX2启动子的活性可被NaCl抑制 ,并且抑制的强度和NaCl的浓度成正相关 .30 0mmol/LKCl处理可增强启动子的活性 ,说明NaCl和KCl是在转录水平上调控AtNHX2的表达 .在老叶中GUS活性比在新叶中GUS活性强 ,这说明了AtNHX2优先将有毒的离子积累在老叶中 ,从而有利于植物的正常发育 .在根毛细胞中也观测到了强烈的GUS活性 ,这就暗示了AtNHX2在扩大的液泡中储存Na+ . 展开更多

关键词 AtNHX2启动子 瞬时表达 表达模式分析 盐胁迫

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