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杏仁中央核对中缝背核的神经投射介导小鼠的自主活动
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作者 耿迟 胡斌 王晓杰 《神经解剖学杂志》 北大核心 2025年第5期619-624,共6页
目的:通过激活杏仁中央核(CeA)对中缝背核(DRN)的神经投射来研究对小鼠行为的影响。方法:在C57BL/6J小鼠的CeA注射AAV-hSyn-eYFP病毒,通过免疫荧光染色技术观察CeA对DRN的神经投射;在Ser-Cre小鼠的CeA注射AAV-hSyn-ChR2-mCherry病毒,并... 目的:通过激活杏仁中央核(CeA)对中缝背核(DRN)的神经投射来研究对小鼠行为的影响。方法:在C57BL/6J小鼠的CeA注射AAV-hSyn-eYFP病毒,通过免疫荧光染色技术观察CeA对DRN的神经投射;在Ser-Cre小鼠的CeA注射AAV-hSyn-ChR2-mCherry病毒,并在DRN注射AAV-DIO-eYFP病毒来特异性标记DRN的5-羟色胺(5-HT)能神经元,通过膜片钳结合光遗传学技术来记录DRN的5-HT能神经元的光诱发的内向电流;在C57BL/6J小鼠的CeA注射AAV-hSyn-ChR2-mCherry病毒,并在DRN埋置光纤,通过蓝光刺激DRN,利用旷场实验检测小鼠自主运动的时间和距离。结果:在C57BL/6J小鼠CeA注射病毒AAV-hSyn-eYFP 4周后,在DRN观察到来自CeA绿色荧光细胞的轴突末梢;激活CeA到DRN的神经投射能够诱发DRN的5-HT能神经元的抑制性的内向电流;激活CeA到DRN的神经投射降低了小鼠在旷场中总的运动距离和在旷场中心的时间,并且增加了小鼠静止时间。结论:CeA的神经元直接投射至DRN;激活CeA到DRN神经投射能够抑制DRN的5-HT能神经元的活性,并且抑制了小鼠的自主活动。 展开更多
关键词 杏仁中央核 中缝背核 5-HT能神经元 内向电流 自主活动 小鼠
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缺血后适应下调微小RNA-19a-3p表达对大鼠脑缺血再灌注损伤后海马神经元的保护作用
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作者 刘静 邱学成 +4 位作者 崔桂云 李羽乔 杨顺 王家豪 李盟 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期523-527,共5页
目的探讨缺血后适应引发微小RNA(miR)-19a-3p下调对大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元的保护作用。方法选择在徐州医科大学附属医院神经内科首次诊断为急性缺血性脑卒中(24 h内)患者(急性缺血性脑卒中组)8例及同年龄段健康人(对... 目的探讨缺血后适应引发微小RNA(miR)-19a-3p下调对大鼠全脑缺血再灌注损伤后海马CA1区神经元的保护作用。方法选择在徐州医科大学附属医院神经内科首次诊断为急性缺血性脑卒中(24 h内)患者(急性缺血性脑卒中组)8例及同年龄段健康人(对照组)8例,检测外周血miR-19a-3p表达。选取SD大鼠109只,随机分为假手术组15只、脑缺血再灌注组23只、缺血后适应组23只、缺血后适应+miR-19a-3p激动剂组(激动剂组)9只、缺血后适应+激动剂对照组(激动剂对照组)9只、脑缺血再灌注+miR-19a-3p抑制剂组(抑制剂组)15只、脑缺血再灌注+抑制剂对照组(抑制剂对照组)15只。用qRT-PCR法检测miR-19a-3p表达,新物体识别实验检测认知能力。结果急性缺血性脑卒中组miR-19a-3p表达明显高于对照组(P<0.05)。脑缺血再灌注组再灌注24 h miR-19a-3p表达明显高于假手术组(P<0.05);而缺血后适应组再灌注24 h miR-19a-3p表达明显低于假手术组和脑缺血再灌注组(P<0.05)。缺血后适应组神经元密度、认知指数明显高于脑缺血再灌注组[(170.20±8.01)个/mm vs(15.40±6.80)个/mm,P<0.01;(65.12±7.68)%vs(50.30±5.95)%,P<0.05]。激动剂组大鼠海马CA1区神经元密度明显低于激动剂对照组(P<0.01);抑制剂组大鼠海马CA1区神经元密度、认知指数明显高于抑制剂对照组(P<0.05,P<0.01)。结论缺血后适应抑制大鼠全脑缺血再灌注后海马CA1区miR-19a-3p的表达,下调miR-19a-3p的表达促进全脑缺血再灌注后海马CA1区神经元的存活并改善大鼠的认知功能。 展开更多
关键词 微RNAS 卒中 再灌注损伤 神经元
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神经型一氧化氮合酶(nNOS)与SUMO连接酶PIAS3相互作用结构基础鉴定 被引量:6
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作者 胡露露 杜彩萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1055-1063,共9页
神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在中枢神经系统广泛分布。本课题组前期研究报道,神经活性增强促进神经型一氧化氮合酶SUMO化,继而上调其活性,激活下游ERK1/2信号通路,参与调控兴奋性突触传递。SUMO连接酶PIAS... 神经型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在中枢神经系统广泛分布。本课题组前期研究报道,神经活性增强促进神经型一氧化氮合酶SUMO化,继而上调其活性,激活下游ERK1/2信号通路,参与调控兴奋性突触传递。SUMO连接酶PIAS3可通过其N-末端AAs 43~86与nNOS结合,参与介导神经型一氧化氮合酶SUMO化。本文进一步筛选和鉴定nNOS中与PIAS3结合的氨基酸序列,深入研究nNOS与PIAS3相互作用的结构基础。采用分子克隆技术,分别构建nNOS缺失结构域突变体(AAs 1~1396、1~756和1~720)的真核表达载体,然后分别与Myc-PIAS3质粒共转染于COS7细胞。结果显示,AAs 1~720与PIAS3共转染组nNOS-PIAS3的结合水平显著低于其他组;Myc-nNOS(AAs 721~756)化学合成小肽与纯化的His-PIAS3在体外也可相互结合。结果表明,nNOS的AAs 721~756(CaM结合结构域,CaMB)可与PIAS3直接结合。GST pull-down进一步证明,nNOS的CaMB与PIAS3 AAs 43~86可直接结合。构建CaMB-pcDNA3.1真核表达载体,共表达nNOS、Myc-PIAS3和CaMB,CaMB共表达组nNOS-PIAS3结合明显降低。结果提示,CaMB通过竞争结合PIAS3从而干预nNOS与PIAS3的结合。将化学合成的穿膜肽Tat融合的CaMB(Tat-CaMB,5μmol/L)与皮质神经元预孵育1 h,用荷包牡丹碱(bicuculline,50μmol/L)诱导化学性长时程增强(long-term potentiation,LTP)。结果显示,Tat-CaMB可显著逆转bicuculline诱导的ERK1/2磷酸化(活化)水平的升高,与荷包牡丹碱处理组相比,下降了29%(P<0.05)。结果表明,Tat-CaMB可通过干预nNOS-PIAS3结合,进而抑制神经型一氧化氮合酶SUMO化及其下游ERK1/2信号通路的活化。通过上述研究,证明nNOS可通过CaM结合结构域(AAs 721~756)与PIAS3结合,并提供了一种鉴定和验证蛋白质间相互作用结构基础的有效方法。 展开更多
关键词 神经型一氧化氮合酶 SUMO连接酶 PIAS3 CaM结合结构域 结合
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Akt1K64/276与SUMO1结合激活ERK1/2-Elk1-BDNF信号通路 被引量:6
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作者 孟利 杜彩萍 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1661-1670,共10页
本研究主要从蛋白质结构分析Akt1 SUMO化的位点及位点的突变对其结构与功能的影响。采用多种软件分析Akt1 SUMO化位点和Akt1野生型(Akt1wt)及Akt1K64/276R的理化性质、亲/疏水性及二/三级结构;分析结果显示,Akt1K64/276R较Akt1wt,亲/疏... 本研究主要从蛋白质结构分析Akt1 SUMO化的位点及位点的突变对其结构与功能的影响。采用多种软件分析Akt1 SUMO化位点和Akt1野生型(Akt1wt)及Akt1K64/276R的理化性质、亲/疏水性及二/三级结构;分析结果显示,Akt1K64/276R较Akt1wt,亲/疏水性未改变,α-螺旋和β-折叠都有少量的不同。三级结构分析显示,与野生型组相比,Akt1K64R氢键增多。以Myc-Akt1wt-pcDNA3.1为模板,采用PCR定点突变技术扩增出Myc-Akt1K64/276R。DNA序列分析结果显示,Myc-Akt1K64/276R基因序列编码赖氨酸(K)的密码子AAG被成功突变为精氨酸(R)密码子AGG。免疫沉淀和免疫印迹结果显示,不共转PIAS3,Akt1也能与SUMO1结合;Myc-Akt1wt和Myc-Akt1K64/276R均可在HEK293细胞中高效表达;转染Myc-Akt1K64/276R组SUMO化水平降低了70%左右(P<0.05)。免疫印迹结果显示,在小鼠海马神经细胞HT22中,Myc-Akt1wt组ERK1/2磷酸化水平及BDNF蛋白水平是突变组的约1.5倍(P<0.05);野生型组p-Elk1是突变体组的2倍(P<0.05),而mTOR、P70S6K、4E-BP1的表达及磷酸化均无显著改变。以上结果表明,Akt1中K64/276的突变对蛋白质结构和表达未见影响,仅引起Akt1 SUMO化降低及下游ERK1/2-Elk1-BDNF信号通路的抑制。 展开更多
关键词 蛋白质激酶Bα 小泛素化 生物信息学分析 信号通路
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大鼠His-Akt1重组蛋白的真核表达、蛋白纯化及活性鉴定 被引量:5
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作者 孟利 杜彩萍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期98-103,共6页
构建His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体,于HEK293细胞进行表达,Ni-NTA亲和纯化His-Akt1,并对Akt1进行活性鉴定。以Akt1(全长)-pcDNA3.1重组体为模板,采用PCR扩增目的基因,然后克隆入真核表达载体pcDNA3.1;将His-Akt1-pcDNA3.1转染HEK293细... 构建His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体,于HEK293细胞进行表达,Ni-NTA亲和纯化His-Akt1,并对Akt1进行活性鉴定。以Akt1(全长)-pcDNA3.1重组体为模板,采用PCR扩增目的基因,然后克隆入真核表达载体pcDNA3.1;将His-Akt1-pcDNA3.1转染HEK293细胞表达,Ni-NTA纯化His-Akt1,用SDS-PAGE、考马斯亮蓝染色及免疫印迹鉴定蛋白纯度;蛋白经透析后,免疫印迹检测Akt1 Ser473和Thr308磷酸化水平。His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体构建成功,在HEK293细胞中高效表达;考马斯亮蓝染色和免疫印迹结果显示,取2 mg过表达His-Akt1的蛋白混合液经Ni-NTA纯化后,加入含100 mmol/L咪唑的洗脱液洗脱,可获得高纯度His-Akt1重组蛋白。上述His-Akt1重组蛋白经透析后,免疫印迹结果显示His-Akt1 Ser473和Thr308磷酸化水平(活化水平)均呈高水平。重组His-Akt1-pcDNA3.1真核表达载体成功构建,且蛋白高表达,His-Akt1经提取纯化后具有较高的酶活性。 展开更多
关键词 AKT1 真核表达载体 蛋白纯化 活性鉴定
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中缝核5-羟色胺能神经投射对嗅球调制效应的研究进展
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作者 王德娟 周杨 +1 位作者 操田田 李安安 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2017年第2期117-128,共12页
中缝核5-羟色胺能神经元通过其广泛的神经投射影响大脑多方面的功能,包括抑郁和焦虑、睡眠-觉醒周期、奖赏、决策中的耐心以及性别取向等.背侧中缝核和中央中缝核的5-羟色胺能神经元对嗅球有密集的神经投射,从而调控嗅觉信息的初步表征... 中缝核5-羟色胺能神经元通过其广泛的神经投射影响大脑多方面的功能,包括抑郁和焦虑、睡眠-觉醒周期、奖赏、决策中的耐心以及性别取向等.背侧中缝核和中央中缝核的5-羟色胺能神经元对嗅球有密集的神经投射,从而调控嗅觉信息的初步表征和编码.近年来,随着电生理、光学成像及光遗传技术的应用,关于中缝核5-羟色胺能神经元对嗅球的调制作用研究不断出现,大量离体和在体实验证据表明中缝核5-羟色胺能神经元对嗅球及嗅觉相关行为有广泛的调制.本文从嗅球不同神经元类型角度,就中缝核5-羟色胺能神经投射对嗅球的调控作用及其神经机制研究进展进行了总结. 展开更多
关键词 中缝核 5-羟色胺能神经元 嗅球 光遗传学
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