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18β-甘草次酸诱导人乳腺癌细胞凋亡及其细胞内Ca^(2+)水平的变化 被引量:18
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作者 黄炜 陈新美 +2 位作者 张志凌 罗惠玲 张东方 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2006年第2期102-106,共5页
背景与目的:18-甘草次酸是甘草的重要成分,近年来的研究发现18-甘草次酸具有抑制人淋巴细胞性白血病、肝癌和肺癌的细胞增殖。本研究探讨18-甘草次酸对人乳腺癌MCF-7细胞诱导凋亡的作用。目前研究已证实细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的... 背景与目的:18-甘草次酸是甘草的重要成分,近年来的研究发现18-甘草次酸具有抑制人淋巴细胞性白血病、肝癌和肺癌的细胞增殖。本研究探讨18-甘草次酸对人乳腺癌MCF-7细胞诱导凋亡的作用。目前研究已证实细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的动态变化在诱发细胞凋亡过程的多个环节中起重要作用,因此本研究也探讨由18-甘草次酸诱导的MCF-7细胞凋亡发生与[Ca2+]i变化的关系。方法:用50~250μmol/L浓度梯度的18β-甘草次酸处理MCF-7细胞24h,用MTT比色法测定细胞增殖能力。100μmol/L和150μmol/L 18β-甘草次酸处理细胞24 h,用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP末端标记法、Annexin V流式细胞仪法和单细胞凝胶电泳法检测凋亡细胞。150μmol/L 18β-甘草次酸处理细胞24 h,用Fura-2荧光负载方法测定[Ca2+]i的变化。分别用100μmol/L BAPTA-AM和0.5 mmol/L EGTA与150μmol/L 18β-甘草次酸联合处理MCF-7细胞24 h,用单细胞凝胶电泳法检测凋亡细胞。结果:从100μmol/L 18β-甘草次酸浓度起对MCF-7细胞的增殖抑制率显著升高(P<0.01和P<0.05),呈剂量依赖性,半增殖抑制浓度(IC 50)为234.33μmol/L。100μmol/L和150μmol/L 18β-甘草次酸使细胞凋亡率显著升高(P<0.01和P<0.05);18β-甘草次酸处理组的[Ca2+]i也明显高于对照组(P<0.05)。18β-甘草次酸与BAPTA-AM联合处理组和18β-甘草次酸与EGTA联合处理组的凋亡率均明显低于单纯的150μmol/L18β-甘草次酸处理组(P<0.05和P<0.01)。结论:18-甘草次酸具有抑制MCF-7细胞增殖和诱导其凋亡的作用,而18-甘草次酸诱导MCF-7细胞凋亡的作用在抑制该细胞增殖方面起主要作用。18-甘草次酸诱导MCF-7细胞凋亡依赖于细胞内Ca2+水平上调,而细胞外Ca2+内流是导致细胞内Ca2+水平上调的原因之一。 展开更多
关键词 人乳腺癌细胞 18Β-甘草次酸 凋亡 增殖 细胞内CA^2+
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小鼠Neuronatin基因真核表达载体构建及其蛋白产物的检测 被引量:2
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作者 余利红 余新炳 +1 位作者 张秀明 项鹏 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S1期1-4,共4页
【目的】构建基因Nnat的真核表达载体pEGFP-N1/Nnat并在真核细胞中表达目的蛋白。【方法】RT-PCR法扩增Nnat基因编码区(ORF),利用基因克隆技术构建真核表达载体,酶切及测序进行鉴定;载体构建成功后转染HepG2细胞,观察融合蛋白在细胞中... 【目的】构建基因Nnat的真核表达载体pEGFP-N1/Nnat并在真核细胞中表达目的蛋白。【方法】RT-PCR法扩增Nnat基因编码区(ORF),利用基因克隆技术构建真核表达载体,酶切及测序进行鉴定;载体构建成功后转染HepG2细胞,观察融合蛋白在细胞中的定位,Western blot检测其在真核细胞中的表达。【结果】RT-PCR法扩增出Nnat基因的两种亚型,相应的双酶切能够获得插入的目的基因片断,测序分析未发现突变;荧光显微镜观察到两种融合蛋白在细胞中分布与EGFP明显不同,融合蛋白主要分布在细胞质中,细胞核中没有表达;Western blot结果可见两条明显的特异条带。【结论】小鼠Nnat基因真核表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达出目的蛋白。 展开更多
关键词 neuronatin 重组质粒 真核表达 蛋白定位
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PLGA微球包裹生长抑素融合基因表达质粒对家兔生长的影响 被引量:2
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作者 戴建威 章倩倩 +2 位作者 王妍 刘松财 张永亮 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1415-1420,共6页
将HBsAg与Somatostatin(SS)融合基因克隆到真核表达载体pIRESlneo—CMV,构建了pIRESlneo—HBsAg/SSM。应用脂质体介导转染CHO细胞,96h提取细胞总RNA,RT-PCR鉴定融合基因表达;并收集细胞上清,ELISA法测定上清中HBsAg表达情况,... 将HBsAg与Somatostatin(SS)融合基因克隆到真核表达载体pIRESlneo—CMV,构建了pIRESlneo—HBsAg/SSM。应用脂质体介导转染CHO细胞,96h提取细胞总RNA,RT-PCR鉴定融合基因表达;并收集细胞上清,ELISA法测定上清中HBsAg表达情况,结果为阳性。大量提取pIRESlneo—HBsAg/SSM质粒,用Poly D,L—lactide co—glycolicacid(PLGA)微球包裹,注射Vc獭兔后肢胫前肌,以注射生理盐水獭兔为对照。动物常规饲养45d,观察日增重并测定血清中IGF-Ⅰ、SS含量以及抗HBsAg抗体水平。结果显示注射后15~30d,质粒注射组日增重较对照组高106.8%(P〈0.01);30d时,血清中IGF-Ⅰ浓度质粒组比对照组高29.2%(P〈0.05);检测整个过程中血清中SS含量,发现注射后30d时明显低于对照组,且出现整个试验过程的最低值;质粒注射组血清中抗HBsAg抗体水平在注射后30d时出现峰值,这与SS含量出现最低值相吻合。本试验结果表明HBsAg与SS融合基因免疫獭兔,可以促进动物生长。 展开更多
关键词 生长抑素 核酸免疫 乙肝表面抗原 PLGA 免疫中和
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甲胎蛋白变异体交叉亲和酶联电泳分析法及其临床意义的研究 被引量:3
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作者 黄济群 黄铧 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1990年第6期323-325,共3页
本研究建立一种快速、直接的甲胎蛋白(AFP) 变异体分析法,这种新方法“交叉亲和酶联免疫电泳分析法”是由小扁豆凝集素(LCA)亲和电泳和酶联免疫电泳结合构成的,能直接将AFP定量地分为LCA反应性(LCA-R)和非反应性(LCA-N) 两个部分。本法... 本研究建立一种快速、直接的甲胎蛋白(AFP) 变异体分析法,这种新方法“交叉亲和酶联免疫电泳分析法”是由小扁豆凝集素(LCA)亲和电泳和酶联免疫电泳结合构成的,能直接将AFP定量地分为LCA反应性(LCA-R)和非反应性(LCA-N) 两个部分。本法的优点是灵敏度高 (1~2ng AFP即可分析),测定快速(6~7小时),图形十分清晰,试剂稳定期很长。47例病理确诊的原发性肝癌患者血清AFP LCA-R≥25%者占91.5%;46例良性肝病为2.2%,具有良好的鉴别诊断价值。 展开更多
关键词 肝癌 甲胎蛋白 酶联免疫电泳
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1-(2,6-二氯苯基)-2-吲哚酮及相关物质的HPLC分离分析
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作者 吉琼梅 张书胜 +2 位作者 郝庆秀 刘玉华 吴养洁 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期55-56,共2页
应用高效液相色谱方法研究了以2,6二氯苯酚和苯胺为起始原料合成药物中间体1(2,6二氯苯基)2吲哚酮(DCI)过程中,DCI及相关物质在不同色谱条件下的分离情况。结果表明,以CLCCN(150mm×6.0mmi.d.,7μm)为分离柱,以MeOHH2O(体积比为6∶4... 应用高效液相色谱方法研究了以2,6二氯苯酚和苯胺为起始原料合成药物中间体1(2,6二氯苯基)2吲哚酮(DCI)过程中,DCI及相关物质在不同色谱条件下的分离情况。结果表明,以CLCCN(150mm×6.0mmi.d.,7μm)为分离柱,以MeOHH2O(体积比为6∶4)为流动相,在流速为1mLmin的情况下,DCI及相关物质可以达到基线分离。建立了快速准确测定DCI纯度和检验杂质种类的高效液相色谱分析方法,方法准确可靠。对两个精品和两个粗品分别进行测定,结果表明精品中的杂质主要为N(2,6二氯二苯胺基)氯乙酰胺,粗品中的杂质主要为N(2,6二氯二苯胺基)氯乙酰胺和2,6二氯二苯胺。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 吲哚酮 DCI 分离分析
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Nnat基因在大鼠脑发育过程中表达的初步研究
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作者 余利红 张成岗 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期544-548,共5页
目的:观察Nnat基因在大鼠脑发育过程中基因表达的变化规律,藉以探讨Nnat在神经系统发育过程中的作用。方法:采用半定量RT-PCR法分析出生前后大鼠脑内Nnat表达水平的变化,Western blot检测Nnat蛋白的表达。结果:在大鼠胚胎第9 d(E9)脑内N... 目的:观察Nnat基因在大鼠脑发育过程中基因表达的变化规律,藉以探讨Nnat在神经系统发育过程中的作用。方法:采用半定量RT-PCR法分析出生前后大鼠脑内Nnat表达水平的变化,Western blot检测Nnat蛋白的表达。结果:在大鼠胚胎第9 d(E9)脑内Nnat mRNA开始表达,但表达量较低,以后其表达量逐渐升高,出生前有轻微下调。出生后大鼠的不同脑区Nnat mRNA的表达量都呈现下降趋势,60 d时达到较低的水平。Nnat蛋白在不同脑区都具有表达,但不同亚型蛋白量的相对比例不同。结论:Nnat基因在胚胎期及出生后大鼠脑内的表达量与中枢神经系统发育及分化过程的时间上有一定的同步性,提示Nnat的作用可能与神经元分化的调节有关。 展开更多
关键词 Nnat 脑发育 RT—PCR 大鼠
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大麻受体激动剂WIN-55,212-2对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响 被引量:9
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作者 王映 周于婷 赵青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期344-347,共4页
目的:探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖和凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨。方法:将细胞分成对照组、不同剂量大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)处理组。MTT法测定WIN对HepG2细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片段,流... 目的:探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖和凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨。方法:将细胞分成对照组、不同剂量大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)处理组。MTT法测定WIN对HepG2细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片段,流式细胞术检测分析各组细胞凋亡率变化,Western blot分析各组细胞caspase-3和c-myc的蛋白表达,分光光度法检测caspase-3、8、9的活性。结果:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长和c-myc的蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,上述效应具有剂量依赖性。而且WIN可能通过诱导细胞caspase-3的蛋白表达和激活caspase-3、8、9活性进而诱导肝癌细胞凋亡。结论:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspases和c-myc的蛋白表达相关。 展开更多
关键词 WIN-55 212-2 肝癌细胞HEPG2 凋亡 增殖
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原子荧光光谱法测定祛斑霜中的汞 被引量:3
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作者 朱文渊 邓志城 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期401-402,共2页
采用盐酸处理祛斑霜样品,用还原气化-原子荧光光谱法测定其中的汞,研究了仪器测定条件和不同样品处理方法对测定的影响。结果表明样品处理方法对测定结果影响不大;此方法的加标回收率在96%以上,相对标准偏差为2 5%;此方法具有快速、简... 采用盐酸处理祛斑霜样品,用还原气化-原子荧光光谱法测定其中的汞,研究了仪器测定条件和不同样品处理方法对测定的影响。结果表明样品处理方法对测定结果影响不大;此方法的加标回收率在96%以上,相对标准偏差为2 5%;此方法具有快速、简便和灵敏的特点。 展开更多
关键词 美容化妆品 祛斑霜 原子荧光光谱
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