目的构建晚期糖基化终产物受体(receptor for ad-vanced glycation end-product,RAGE)胞外段基因的原核表达载体并诱导表达,应用噬菌体展示技术筛选其相互作用蛋白。方法用RT-PCR方法扩增人RAGE胞外段cDNA,构建于原核表达载体pET14b,转...目的构建晚期糖基化终产物受体(receptor for ad-vanced glycation end-product,RAGE)胞外段基因的原核表达载体并诱导表达,应用噬菌体展示技术筛选其相互作用蛋白。方法用RT-PCR方法扩增人RAGE胞外段cDNA,构建于原核表达载体pET14b,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导RAGE胞外段融合蛋白表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化并行Western blot鉴定。以重组RAGE胞外段蛋白为靶分子,进行3轮噬菌体展示环七肽库的筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选分隔良好的噬菌体克隆扩增后进行ELISA鉴定。对获得的阳性噬菌体克隆分别进行扩增、纯化,提取DNA测序后翻译为氨基酸序列,用BLAST软件搜索Gen-Bank中的同源序列。结果成功构建并表达、纯化了RAGE胞外段融合蛋白。经过3轮筛选后,随机挑取的24个噬菌体克隆中11个可与RAGE胞外段结合。对11个噬菌体测序后用BLAST软件搜索同源序列,得到14个编码蛋白。结论应用噬菌体展示技术筛选到与RAGE胞外段相互作用的蛋白,为进一步研究其功能和作用机制提供新线索。展开更多
目的：观察右美托咪啶（dexmedetomidine，Dex）在俯卧位经皮椎间孔镜椎间盘摘除术（PTED）中应用的安全性。方法：选择 PTED 患者40例， ASAⅠ～Ⅱ级，随机分为 D 组和 C 组。 D 组于俯卧位后在15 min 内静脉输注Dex 1μg／kg，继以0．...目的：观察右美托咪啶（dexmedetomidine，Dex）在俯卧位经皮椎间孔镜椎间盘摘除术（PTED）中应用的安全性。方法：选择 PTED 患者40例， ASAⅠ～Ⅱ级，随机分为 D 组和 C 组。 D 组于俯卧位后在15 min 内静脉输注Dex 1μg／kg，继以0．5μg／（kg·h）持续至术毕，C 组则静脉持续输注生理盐水至术毕。观察俯卧位（T1）、Dex 给药或生理盐水后10 min（T2）、20 min（T3）、切皮后1 min（T4）、扩张器扩皮后1 min （T5）、开始摘除椎间盘后1 min （T6）、术毕（T7）等时点的 HR、SBP、MAP、SpO2、Narcotrend 指数（NI）及Ramsay 评分，并于 T4～ T7用 VAS 评估手术部位疼痛，术中记录躁动、呼吸抑制的例数及手术时间。结果：与 C 组比较，D 组的心率在 T2～ T7显著减慢（P ＜0．05），SBP 及 MBP 在 T3～ T7显著降低（P ＜0．05），VAS 评分和 NI 也显著降低、Ramsay 评分显著增高（P ＜0．05），术中发生高血压、心动过速及躁动的例数均显著减少（P ＜0．05）；两组均未出现呼吸抑制及严重心动过缓。结论：15 min 内给予 Dex 1μg／kg 后继以0．5μg／（kg·h）持续输注复合地佐辛及局部浸润阻滞用于 PTED 可获得较好的镇静和镇痛效果，可安全应用于此类手术。展开更多
目的探讨麝香酮对氯胺酮诱导胎鼠海马神经元凋亡的抑制作用及机制。方法原代培养胎鼠海马神经元,按照处理方法不同将其分为正常对照组、氯胺酮组、麝香酮(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组。MTT法检测海马神经元存活率;流式细胞...目的探讨麝香酮对氯胺酮诱导胎鼠海马神经元凋亡的抑制作用及机制。方法原代培养胎鼠海马神经元,按照处理方法不同将其分为正常对照组、氯胺酮组、麝香酮(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组。MTT法检测海马神经元存活率;流式细胞仪检测三组海马神经元凋亡情况;逆转录聚合酶链反应检测三组海马神经元Wnt2、β-catenin m RNA的表达;蛋白质印迹法检测三组海马神经元内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果氯胺酮组、麝香酮(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组神经元存活率均显著低于正常对照组(P_均<0.01),麝香酮(10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组海马神经元存活率均显著高于氯胺酮组(P_均<0.01)。氯胺酮组海马神经元凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01);麝香酮(10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组海马神经元凋亡率均显著低于氯胺酮组(P<0.05,P<0.01)。Wnt2、β-catenin mRNA在正常对照组中表达最低,在氯胺酮组中表达最高;麝香酮+氯胺酮组海马神经元中Wnt2、β-catenin mRNA的表达随麝香酮剂量的增加而降低,麝香酮(10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组海马神经元中Wnt2、β-catenin m RNA表达均显著低于氯胺酮组(P_均<0.05)。Wnt2、β-catenin蛋白在正常对照组中表达最低,在氯胺酮组中表达最高;麝香酮+氯胺酮组海马神经元中Wnt2、β-catenin蛋白的表达随麝香酮剂量的增加而降低,麝香酮(10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组海马神经元中Wnt2、β-catenin蛋白表达均显著低于氯胺酮组(P<0.05,P<0.01)。结论麝香酮对氯胺酮诱导的胎鼠海马神经元凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2、β-catenin的表达有关。展开更多
文摘目的探讨麝香酮对氯胺酮诱导胎鼠海马神经元凋亡的抑制作用及机制。方法原代培养胎鼠海马神经元,按照处理方法不同将其分为正常对照组、氯胺酮组、麝香酮(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组。MTT法检测海马神经元存活率;流式细胞仪检测三组海马神经元凋亡情况;逆转录聚合酶链反应检测三组海马神经元Wnt2、β-catenin m RNA的表达;蛋白质印迹法检测三组海马神经元内Wnt2、β-catenin蛋白的表达。结果氯胺酮组、麝香酮(5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组神经元存活率均显著低于正常对照组(P_均<0.01),麝香酮(10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组海马神经元存活率均显著高于氯胺酮组(P_均<0.01)。氯胺酮组海马神经元凋亡率显著高于正常对照组(P<0.01);麝香酮(10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组海马神经元凋亡率均显著低于氯胺酮组(P<0.05,P<0.01)。Wnt2、β-catenin mRNA在正常对照组中表达最低,在氯胺酮组中表达最高;麝香酮+氯胺酮组海马神经元中Wnt2、β-catenin mRNA的表达随麝香酮剂量的增加而降低,麝香酮(10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组海马神经元中Wnt2、β-catenin m RNA表达均显著低于氯胺酮组(P_均<0.05)。Wnt2、β-catenin蛋白在正常对照组中表达最低,在氯胺酮组中表达最高;麝香酮+氯胺酮组海马神经元中Wnt2、β-catenin蛋白的表达随麝香酮剂量的增加而降低,麝香酮(10μmol/L,20μmol/L)+氯胺酮组海马神经元中Wnt2、β-catenin蛋白表达均显著低于氯胺酮组(P<0.05,P<0.01)。结论麝香酮对氯胺酮诱导的胎鼠海马神经元凋亡具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制Wnt2、β-catenin的表达有关。
