"三点分析法"在医学生物化学教学中的应用

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作者 李江滨 黄迪南 侯敢 《海南医学院学报》 CAS 2004年第6期427-428,共2页

生物化学是医学教学中的一门重要专业基础课,知识点密集,内容及深度更新快,教学难度较大.为了在有限学时内达到更好的教学效果,教学方法是很重要的."三点分析法"就是在授课中从"重点、难点、考点"三方面对众多知识... 生物化学是医学教学中的一门重要专业基础课,知识点密集,内容及深度更新快,教学难度较大.为了在有限学时内达到更好的教学效果,教学方法是很重要的."三点分析法"就是在授课中从"重点、难点、考点"三方面对众多知识点加以分析的教学方法,"教、学、考"相结合,引导学生增强分析能力和自学能力. 展开更多

关键词 三点分析法 化学 生物无机 医学生物化学教学

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改进生物化学检验实验课管理的实践 被引量：2

2

作者 丁航 侯敢 +2 位作者 周克元 刘新光 李江滨 《海南医学院学报》 CAS 2005年第5期459-460,共2页

关键词 生物化学 诊断 化验室 实验室 教学

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网络在细胞生物学实验中的应用 被引量：1

3

作者 梁朋 周汝滨 +1 位作者 张晓云 郑克勤 《海南医学院学报》 CAS 2005年第3期232-233,共2页

关键词 细胞 生物学 实验 计算机通信网络 教学

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医学细胞遗传学实验教学改革措施 被引量：2

4

作者 廖霞 陈小萍 《海南医学院学报》 CAS 2005年第5期461-461,共1页

关键词 遗传学 实验 教学 教育 医学

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厚朴酚对大鼠中性白细胞花生四烯酸代谢酶的影响 被引量：28

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作者 梁统 周克元 +1 位作者 李杰萍 徐美弈 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期151-154,共4页

目的 :研究厚朴酚对花生四烯酸代谢酶活性的影响 ,以阐明其抗炎机理。方法 :以大鼠胸腔白细胞为材料 ,分别用高效液相色谱法和放免方法测定白三烯B4(LTB4)、5 羟二十碳四烯酸 (5 HETE)和 6 酮前列腺素1α的生物合成。结果 :在 5 5～... 目的 :研究厚朴酚对花生四烯酸代谢酶活性的影响 ,以阐明其抗炎机理。方法 :以大鼠胸腔白细胞为材料 ,分别用高效液相色谱法和放免方法测定白三烯B4(LTB4)、5 羟二十碳四烯酸 (5 HETE)和 6 酮前列腺素1α的生物合成。结果 :在 5 5～ 13 5 μmol/L的浓度范围内 ,厚朴酚可剂量依赖性地抑制完整中性白细胞中LTB4的生物合成 ,在 10～ 2 0 μmol/L的浓度下可以抑制破碎细胞中 5 脂氧合酶 (5 LO)的酶活性。在浓度低于 10 μmol/L时 ,厚朴酚对破碎细胞中白三烯A4水解酶 (LTA4 H)的活性没有明显的影响 ,但增加其浓度 ,则可以明显地抑制LTA4 H的活性。同时 ,厚朴酚在较高浓度下可以抑制破碎细胞中环氧化酶的活性。结论 :厚朴酚可以抑制花生四烯酸的 5 LO和环氧化酶代谢通路 ,这可能与其抗炎作用机理有关。 展开更多

关键词 厚朴酚 5—脂氧合酶 白三烯A4水解酶 环氧化酶 中性白细胞 花生四烯酸

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毛细管电泳法分析血清中华法林对映体的浓度 被引量：5

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作者 梁统 周克元 +1 位作者 丁航 凌光鑫 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第1期36-38,共3页

建立了血中华法林对映体的毛细管电泳分析方法。电泳缓冲液由１４０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液和７ｍｍｏｌ／Ｌ的甲基β－环糊精组成（ｐＨ７．９）。工作电压１３ｋＶ，检测波长２１０ｎｍ。两种对映体Ｓ（－）－华法林及Ｒ（＋）－华... 建立了血中华法林对映体的毛细管电泳分析方法。电泳缓冲液由１４０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液和７ｍｍｏｌ／Ｌ的甲基β－环糊精组成（ｐＨ７．９）。工作电压１３ｋＶ，检测波长２１０ｎｍ。两种对映体Ｓ（－）－华法林及Ｒ（＋）－华法林达到基线分离，在０～５μｇ／ｍｌ范围内呈线性。血中华法林对映体最低检测浓度均为０．０２μｇ／ｍｌ，精密度及回收率均较好。 展开更多

关键词 华法林 手性药物 毛细管电泳

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马铃薯X病毒载体介导的人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)在烟草中的表达 被引量：4

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作者 付宏岐 薛萍 +1 位作者 杨莉芳 庞实锋 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第4期45-51,共7页

【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的... 【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的hFGF21-smGFP融合基因和hFGF21基因克隆进PVX表达载体,构建重组表达质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。采用冻融法将质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP、pgR107-smGFP和pgR107-His-hFGF21转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟的叶片,采用SDS-PAGE、Western blotting和ELISA检测hFGF21-smGFP和hFGF21蛋白的表达情况。烟草叶片表达的融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,再用重组牛肠激酶(rbEK)裂解,获得纯度较高的重组hFGF21活性蛋白。hFGF21调节葡萄糖吸收活性用微量化的GOD-POD法检测。【结果】成功构建了植物病毒双元表达载体pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。表型观察发现,侵染第7天,烟草外源蛋白积累最高,smGFP和hFGF21-smGFP蛋白的积累主要在细胞质中。SDS-PAGE、Western blotting和ELISA分析表明,hFGF21重组蛋白可在烟草中有效表达,表达量高达500μg/g(鲜叶质量)。生物活性检测结果表明,纯化的hFGF21蛋白可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的吸收。【结论】利用PVX病毒载体,在本氏烟草中表达的重组hFGF21蛋白具备生物活性。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子21(FGF21) 融合蛋白 烟草 马铃薯X病毒

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利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21) 被引量：5

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作者 付宏岐 李海燕 +7 位作者 庞实锋 杨晶 李洪志 薛萍 刘秀明 李营 王艳芳 李校堃 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第7期163-170,共8页

【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMB... 【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。 展开更多

关键词 农杆菌 成纤维细胞生长因子-21 甘露糖-6-磷酸异构酶 生物反应器 番茄 遗传转化

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可逆的组蛋白乙酰化调控p16的表达(英文) 被引量：3

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作者 王秀莉 冯云鹏 +4 位作者 赵静 张国平 潘虹 黄百渠 陆军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第6期600-606,共7页

p16INK4a通过抑制CDK4/6的活性而在细胞周期进行中发挥重要的作用,研究发现,组蛋白乙酰转移酶p300能促进p16INK4a启动子活性,而组蛋白去乙酰化酶HDAC3/4能够逆转由p300介导的p16INK4a启动子活性的增加,HDAC3/4能够降低p16INK4amRNA和蛋... p16INK4a通过抑制CDK4/6的活性而在细胞周期进行中发挥重要的作用,研究发现,组蛋白乙酰转移酶p300能促进p16INK4a启动子活性,而组蛋白去乙酰化酶HDAC3/4能够逆转由p300介导的p16INK4a启动子活性的增加,HDAC3/4能够降低p16INK4amRNA和蛋白质的水平.染色质免疫沉淀(ChIP)实验结果表明转染p300表达质粒能够逆转由HDAC3/4介导的p16INK4a启动子组蛋白的低乙酰化状态.此外,免疫荧光实验结果表明HDAC4的核质穿梭起着重要的作用.免疫印迹和染色质免疫沉淀实验证明HDAC的抑制剂丁酸钠盐(NaBu)能通过诱导组蛋白的高乙酰化而促进p16INK4a的表达.基于这些实验结果,推测出可逆的组蛋白乙酰化参与p16INK4a基因转录调控的模型. 展开更多

关键词 P16 P300 HDAC3 HDAC4 可逆的乙酰化

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丙戊酸钠对大鼠脑组织中γ-氨基丁酸代谢的影响 被引量：2

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作者 梁统 周克元 凌光鑫 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期380-382,共3页

为研究丙戊酸钠对脑组织不同区域γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）生成的机制，分别给大鼠ｉｐ２００ｍｇ／ｋｇ丙戊酸钠、２００ｍｇ／ｋｇ丙戊酸钠＋１００ｍｇ／ｋｇ氨基羟乙酸（ＡＯＡＡ），３０ｍｉｎ后断头处死，观察下丘脑、小脑、延髓... 为研究丙戊酸钠对脑组织不同区域γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）生成的机制，分别给大鼠ｉｐ２００ｍｇ／ｋｇ丙戊酸钠、２００ｍｇ／ｋｇ丙戊酸钠＋１００ｍｇ／ｋｇ氨基羟乙酸（ＡＯＡＡ），３０ｍｉｎ后断头处死，观察下丘脑、小脑、延髓、大脑皮层四个脑区谷氨酸脱羧酶（ＧＡＤ）、γ－氨基丁酸转氨酶（ＧＡＢＡ－Ｔ）活性及ＧＡＢＡ含量的变化。结果表明，丙戊酸钠既抑制ＧＡＢＡ－Ｔ也能激活ＧＡＤ，显著提高下丘脑、大脑皮层两个脑区的ＧＡＢＡ含量。虽然四个脑区的ＧＡＢＡ－Ｔ活性得到显著的抑制，但ＧＡＢＡ并没有相应地显著提高；仅在ＧＡＤ活性显著升高的下丘脑及大脑皮层两个脑区的ＧＡＢＡ含量显著增加。ＡＯＡＡ加丙戊酸钠组与单独ＡＯＡＡ组比较，各脑区ＧＡＢＡ－Ｔ活性无明显差别变化，仅在下丘脑中的ＧＡＤ活性显著提高，相应的ＧＡＢＡ含量也显著增加。提示丙戊酸钠主要是通过激活ＧＡＤ，从而提高脑组织ＧＡＢＡ的含量。 展开更多

关键词 氨基丁酶 谷氨酸脱羧酶 GABA-T 丙戊酸钠

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用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素的方法研究 被引量：2

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作者 马卫列 刘芳 何承伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第14期1476-1478,共3页

目的探索用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素(endostatin)重组蛋白的最佳生产工艺路线。方法用pTh ioH is-endo重组质粒转化不同的大肠杆菌BL21、JM109、DH5α,经几种不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-pylth io-galactoside,... 目的探索用硫氧还蛋白融合表达系统表达小鼠内皮抑素(endostatin)重组蛋白的最佳生产工艺路线。方法用pTh ioH is-endo重组质粒转化不同的大肠杆菌BL21、JM109、DH5α,经几种不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(isopro-pylth io-galactoside,IPTG)诱导表达重组融合蛋白,或诱导表达不同时间后,采用SDS-PAGE分析表达产物;按所优化的条件进行重组内皮抑素的表达、包涵体的提取、洗涤、变性和复性,最后经N i+柱纯化,再通过SDS-PAGE分析纯化的结果。结果3种大肠杆菌表达效果相差无几,最佳IPTG的浓度0.9 mmol/L,最佳诱导时间为5 h,经N i+柱纯化后可获得可溶性的重组内皮抑素。结论利用本实验的优化条件可获得高产量、高纯度、可溶性的小鼠内皮抑素重组蛋白。 展开更多

关键词 ENDOSTATIN 硫氧还蛋白融合表达系统 融合蛋白

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大豆24kDa油体蛋白与人bFGF融合基因转化拟南芥的研究 被引量：2

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作者 薛萍 庞实锋 +6 位作者 李洪志 李营 柳月英 于勤明 熊丽冬 李海燕 李校堃 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期344-350,共7页

为探索大豆油体蛋白与人bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)蛋白在植物油体中融合表达的可行性,以大豆总DNA为模板,通过PCR扩增得到大豆油体蛋白基因(Ddoil)及启动子(Ddprm),构建Ddprm启动的Ddoil基因与植物偏好密码子改造的bFGF基因融合表... 为探索大豆油体蛋白与人bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)蛋白在植物油体中融合表达的可行性,以大豆总DNA为模板,通过PCR扩增得到大豆油体蛋白基因(Ddoil)及启动子(Ddprm),构建Ddprm启动的Ddoil基因与植物偏好密码子改造的bFGF基因融合表达载体p1390Ddprm-Ddoil-bFGF,花侵染法转化拟南芥,对T2拟南芥抗性植株基因组进行PCR检测,对种子总蛋白进行SDS-PAGE分析、Western blot检测、ELISA检测及细胞活性测定,为bFGF在其他油料作物的油体系统的表达提供参考。 展开更多

关键词 大豆油体蛋白 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 拟南芥

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人成纤维细胞生长因子-21的拟南芥油体表达系统构建 被引量：2

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作者 付宏岐 李海燕 +7 位作者 庞实锋 杨晶 薛萍 刘秀明 王艳芳 李营 李洪志 李校堃 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2011年第8期190-196,共7页

【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选... 【目的】利用拟南芥(Arabidopsis thaliana)油体系统表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblastgrowth factor-21,FGF21),为利用植物油体表达系统规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因作为转基因植物的安全筛选标记,将带有组氨酸标签的人源FGF21基因与大豆油体蛋白基因融合,克隆至大豆油体蛋白启动子驱动的表达载体pCAMBIA1390MDo(p1390MDo)上,构建植物双元表达载体p1390MDoFGF21。采用冻融法将植物双元表达载体p1390MDoFGF21转入农杆菌GV3101,花粉管导入法转化拟南芥,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因拟南芥阳性植株(T0),并对FGF21蛋白在转基因拟南芥种子(T1)中的表达进行Western blot分析。【结果】成功构建了带PMI安全筛选标记的植物双元表达载体p1390MDoFGF21。PCR扩增和Southern blot分析结果表明,重组FGF21融合基因以单拷贝和多拷贝2种方式已整合到转基因拟南芥基因组中。BandScand 5.0软件和Western blot分析结果显示,FGF21融合蛋白约占转基因拟南芥种子可溶性蛋白的3.76%,并具有良好的免疫原性。【结论】FGF21融合基因已经转入拟南芥中,并在以PMI为选择标记的转基因拟南芥种子中成功高效表达。 展开更多

关键词 拟南芥 成纤维细胞生长因子-21 油体表达 磷酸甘露糖异构酶

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红色荧光蛋白核迁移蛋白shRNA干扰载体的构建 被引量：2

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作者 廖霞 庞实锋 +5 位作者 张强 杨芳 郑克勤 周汝滨 曹定国 邹宇光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期740-743,共4页

目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法。方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆... 目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法。方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆至上述同一真核载体中,构建成一系列针对NUDC不同干扰位点的RNA干扰载体,通过采用酶切及DNA序列鉴定,然后转染293T细胞,通过荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数。结果:酶切及测序结果证实质粒为所需的序列;荧光显微镜观察结果显示,shNUDC-A的干扰效果最好。结论:成功构建了含RFP的NUDC真核shRNA干扰载体。 展开更多

关键词 融合基因 RNA干扰 SHRNA

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农杆菌介导的成纤维细胞生长因子-21基因转化甘蓝型油菜研究 被引量：1

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作者 李营 庞实锋 +7 位作者 薛萍 刘秀明 付宏岐 李洪志 熊丽东 潘国庆 李海燕 李校堃 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2010年第8期124-130,共7页

【目的】利用基因工程技术获得FGF21转基因油菜植株,为FGF21蛋白生产体系的建立奠定基础。【方法】将人源FGF21基因的cDNA序列,根据植物偏好密码子进行改造,并通过PCR拼接技术扩增FGF21全长基因,将该基因插入油菜油体特异表达载体,通过... 【目的】利用基因工程技术获得FGF21转基因油菜植株,为FGF21蛋白生产体系的建立奠定基础。【方法】将人源FGF21基因的cDNA序列,根据植物偏好密码子进行改造,并通过PCR拼接技术扩增FGF21全长基因,将该基因插入油菜油体特异表达载体,通过冻融法转到根瘤农杆菌LBA4404,叶盘法转化甘蓝型油菜"沪油15",并对转基因油菜进行PCR检测和Southern blot分析,最后对FGF21蛋白在转基因油菜种子中的表达的进行了Western blot分析。【结果】合成了FGF21全长基因,成功构建了含FGF21基因的植物双元表达载体p1390yoFGF21,并建立了油菜遗传转化体系。通过油菜遗传转化获得2株转基因植株,PCR扩增和Southern blot检测证实,重组FGF21基因已整合到油菜基因组中;Western blot分析检测显示,FGF21在转基因油菜种子蛋白中具有一定水平的表达量,并具有良好的抗原性。【结论】FGF21基因被成功整合到油菜基因组中,收获的T0代种子蛋白具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子-21 甘蓝型油菜 生物反应器 转基因 农杆菌

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番茄不同基因型对植株再生能力的影响 被引量：1

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作者 薛萍 肖艳双 +3 位作者 徐岩 史俊卿 庞实锋 杜金霞 《陕西农业科学》 2016年第5期38-39,44,共3页

以浙粉202、GBS-傲兰六号、中域·胜宝、中杂九号、中蔬6号5个市售番茄品种为研究对象,设计正交试验对不同品种的植株再生情况进行比较,为后期提供优良的基因工程番茄材料奠定基础。笔者以不同品种番茄的7日龄子叶和下胚轴为外植体... 以浙粉202、GBS-傲兰六号、中域·胜宝、中杂九号、中蔬6号5个市售番茄品种为研究对象,设计正交试验对不同品种的植株再生情况进行比较,为后期提供优良的基因工程番茄材料奠定基础。笔者以不同品种番茄的7日龄子叶和下胚轴为外植体诱导愈伤组织,继而将其诱导分化成再生植株,对不同番茄品种在种子发芽率、愈伤组织形成率、分化率及生根率方面进行比较。综合发芽率、愈伤诱导及器官再生这三方面因素,中蔬6号番茄的再生效率较高,并将其初步确定为遗传转化受体用于后期药用蛋白的表达。 展开更多

关键词 番茄 基因型 组织培养 再生植株

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番茄不同基因型对植株再生能力的影响 被引量：1

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作者 薛萍 肖艳双 +3 位作者 徐岩 史俊卿 庞实锋 杜金霞 《陕西农业科学》 2016年第3期57-59,44,共3页

以浙粉202、GBS-傲兰六号、中域·胜宝、中杂九号、中蔬6号5个市售番茄品种为研究对象,设计正交试验对不同品种的植株再生情况进行比较,为后期提供优良的基因工程番茄材料奠定基础。以不同品种番茄的7日龄子叶和下胚轴为外植体诱导... 以浙粉202、GBS-傲兰六号、中域·胜宝、中杂九号、中蔬6号5个市售番茄品种为研究对象,设计正交试验对不同品种的植株再生情况进行比较,为后期提供优良的基因工程番茄材料奠定基础。以不同品种番茄的7日龄子叶和下胚轴为外植体诱导愈伤组织,继而将其诱导分化成再生植株,对不同番茄品种在种子发芽率、愈伤组织形成率、分化率及生根率方面进行比较。综合发芽率、愈伤诱导及器官再生这三方面因素,中蔬6号番茄的再生效率较高,并将其初步确定为遗传转化受体用于后期药用蛋白的表达。 展开更多

关键词 番茄 基因型 组织培养 再生植株

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人核迁移蛋白shRNA慢病毒载体的构建及转导

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作者 庞实锋 廖霞 +5 位作者 郑克勤 周汝滨 梁朋 曹定国 张国平 李文荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期688-690,695,共4页

目的:通过绿色荧光蛋白(GFP)标记,构建可示踪的人核迁移蛋白(hNUDC)慢病毒RNA干扰载体,并实现其对靶细胞的转导。方法:通过分子克隆技术将人核迁移蛋白的发夹RNA(shNUDC-F)克隆至慢病毒表达载体中,构建成靶向针对hNUDC的RNA干扰载体,通... 目的:通过绿色荧光蛋白(GFP)标记,构建可示踪的人核迁移蛋白(hNUDC)慢病毒RNA干扰载体,并实现其对靶细胞的转导。方法:通过分子克隆技术将人核迁移蛋白的发夹RNA(shNUDC-F)克隆至慢病毒表达载体中,构建成靶向针对hNUDC的RNA干扰载体,通过磷酸钙转染法,将获得的慢病毒高纯度质粒转染进低次代293T细胞中进行包装,通过高速离心收获慢病毒颗粒,经滴度测定后,对Dami巨核细胞进行转导实验。用显微镜观察转导效率,用Westernblot检测RNA干扰效果。结果:慢病毒携带的shNUDC-F片段对Dami巨核细胞能高效转导,并使其内源hNUDC基因发生基因沉默,干扰效果较好。结论:成功构建出慢病毒hNDUC RNA干扰载体,并在293T细胞中实现包装并成功转入Dami细胞。 展开更多

关键词 慢病毒 RNA干扰 发夹RNA 巨核细胞

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VEGF基因油体表达系统构建及对拟南芥的遗传转化

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作者 李洪志 庞实锋 +6 位作者 李海燕 薛萍 刘秀明 李营 李巍 肖艳双 李校堃 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第9期144-149,共6页

为研究油体系统在植物中表达外源蛋白的优势,以油菜总DNA为模板,通过PCR得到油菜油体(Ycoil)及启动子序列(Ycprm)。同时,将多对合成的寡核苷酸链,通过PCR方法拼接得到血管内皮生长因子全长基因(VEGF)。以此为基础,构建Ycoil、Ycprm、VEG... 为研究油体系统在植物中表达外源蛋白的优势,以油菜总DNA为模板,通过PCR得到油菜油体(Ycoil)及启动子序列(Ycprm)。同时,将多对合成的寡核苷酸链,通过PCR方法拼接得到血管内皮生长因子全长基因(VEGF)。以此为基础,构建Ycoil、Ycprm、VEGF融合表达载体p1390Ycprm-Ycoil-VEGF。将重组质粒转入农杆菌GV3101,并用花浸染法对拟南芥进行浸染。在含潮霉素(20mg/L)的1/2MS培养基上筛选转基因拟南芥种子(T0),获得了T1代抗性植株,通过PCR检测、SDS-PAGE检测和Western blotting检测,结果表明油菜油体及血管内皮生长因子的融合基因已经转入拟南芥中,并成功得到表达,转化率约为0.1%。 展开更多

关键词 油体 血管内皮生长因子全长基因(VEGF) 拟南芥 载体构建 植物生物反应器

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Oleosin-bFGF融合基因转化红花

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作者 薛萍 付宏岐 +4 位作者 史俊卿 庞实锋 李海燕 姜潮 李校堃 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期759-765,共7页

利用油体蛋白融合技术,为实现oleosin-b FGF油体蛋白在转基因红花中表达奠定基础,通过农杆菌介导法将含有Ca MV35S启动子和oleosin-b FGF融合基因的T-DNA转入到红花基因组中,对潮霉素抗性红花植株的基因组进行PCR检测,提取抗性植株叶片... 利用油体蛋白融合技术,为实现oleosin-b FGF油体蛋白在转基因红花中表达奠定基础,通过农杆菌介导法将含有Ca MV35S启动子和oleosin-b FGF融合基因的T-DNA转入到红花基因组中,对潮霉素抗性红花植株的基因组进行PCR检测,提取抗性植株叶片总蛋白进行SDS-PAGE分析和Western blotting检测。PCR检测结果表明,目的基因已经转入到红花基因组,蛋白检测结果证明oleosin-b FGF融合蛋白在转基因红花叶片中有表达,但融合蛋白不稳定,发生降解。 展开更多

关键词 转基因红花 生物反应器 碱性成纤维细胞生长因子(b FGF) 油体蛋白

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