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网络在细胞生物学实验中的应用 被引量:1
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作者 梁朋 周汝滨 +1 位作者 张晓云 郑克勤 《海南医学院学报》 CAS 2005年第3期232-233,共2页
关键词 细胞 生物学 实验 计算机通信网络 教学
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医学细胞遗传学实验教学改革措施 被引量:2
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作者 廖霞 陈小萍 《海南医学院学报》 CAS 2005年第5期461-461,共1页
关键词 遗传学 实验 教学 教育 医学
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可逆的组蛋白乙酰化调控p16的表达(英文) 被引量:3
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作者 王秀莉 冯云鹏 +4 位作者 赵静 张国平 潘虹 黄百渠 陆军 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第6期600-606,共7页
p16INK4a通过抑制CDK4/6的活性而在细胞周期进行中发挥重要的作用,研究发现,组蛋白乙酰转移酶p300能促进p16INK4a启动子活性,而组蛋白去乙酰化酶HDAC3/4能够逆转由p300介导的p16INK4a启动子活性的增加,HDAC3/4能够降低p16INK4amRNA和蛋... p16INK4a通过抑制CDK4/6的活性而在细胞周期进行中发挥重要的作用,研究发现,组蛋白乙酰转移酶p300能促进p16INK4a启动子活性,而组蛋白去乙酰化酶HDAC3/4能够逆转由p300介导的p16INK4a启动子活性的增加,HDAC3/4能够降低p16INK4amRNA和蛋白质的水平.染色质免疫沉淀(ChIP)实验结果表明转染p300表达质粒能够逆转由HDAC3/4介导的p16INK4a启动子组蛋白的低乙酰化状态.此外,免疫荧光实验结果表明HDAC4的核质穿梭起着重要的作用.免疫印迹和染色质免疫沉淀实验证明HDAC的抑制剂丁酸钠盐(NaBu)能通过诱导组蛋白的高乙酰化而促进p16INK4a的表达.基于这些实验结果,推测出可逆的组蛋白乙酰化参与p16INK4a基因转录调控的模型. 展开更多
关键词 P16 P300 HDAC3 HDAC4 可逆的乙酰化
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EGFR通过提高mTOR活性增强中枢神经元生长能力 被引量:7
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作者 徐明锋 胡传银 +2 位作者 胡利 梁艳清 陈东 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期7-12,共6页
目的:探寻EGFR对中枢神经元生长活性的影响及机制。方法:构建EGFR过表达(p LEGFP-EGFR)和RNAi干扰(vshRNA-EGFR)的慢病毒载体和质粒,作用于体外培养的神经元。Western-blot检测神经元不同EGFR表达水平下胞内微管蛋白(β-Tubulin)轴突蛋... 目的:探寻EGFR对中枢神经元生长活性的影响及机制。方法:构建EGFR过表达(p LEGFP-EGFR)和RNAi干扰(vshRNA-EGFR)的慢病毒载体和质粒,作用于体外培养的神经元。Western-blot检测神经元不同EGFR表达水平下胞内微管蛋白(β-Tubulin)轴突蛋白(Tau)和神经丝蛋白(NF)的表达以及PI3K/Akt/m TOR的活化状态。利用m TOR体外抑制剂Rapamycin进一步观察EGFR的作用途径。结果:EGFR上调的同时观察到神经元中Tau、β-tubulin和NF蛋白表达水平和m TOR活性增加,同时PI3K/AKt通路活性在增强。用100μmol/L的Rapamycins处理24 h后,Tau、β-tubulin和NF表达水平明显下调,同时p-m TOR和p-Akt活性降低,神经元生长活性被抑制。结论:体外EGFR能通过PI3K/Akt信号通路激活,上调m TOR表达,从而促进神经元的生长活性。 展开更多
关键词 表皮生长因子受体 PI3K/AKT信号通路 哺乳动物雷帕霉素作用靶点蛋白 神经元
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家蝇幼虫抗菌肽天蚕素基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达(英文) 被引量:6
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作者 徐建华 朱家勇 +4 位作者 金小宝 许琴英 刘雷山 马艳 王艳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期311-318,共8页
目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为... 目的从家蝇三龄幼虫中提取总RNA,先利用RT-PCR扩增编码天蚕素Cecropin的cDNA序列,克隆入T载体pUCm-T并测定其序列。然后以pUCm-T/Cecropin为模板,通过PCR方法扩增Cecropin成熟肽cDNA序列,并将该序列的N-端大肠杆菌稀有密码子GGA点突变为GGC,C-端终止密码子TAA前加进一个天冬酰胺(Asn)密码子AAC,命名为mCecropin。mCecropin基因序列克隆至融合表达载体pGEX-4T-1中。酶切分析和测序鉴定后,将阳性重组子质粒转入不同的大肠杆菌宿主细胞中进行融合表达。经SDS-PAGE分析,选用E.coliBL21(DE3)作为表达宿主菌。表达的融合蛋白GST-mCecropin通过GSTrap亲合柱纯化后用凝血酶酶切GST标签,mCecropin经HiTrap柱进一步纯化后,具有较强的抗菌活性。 展开更多
关键词 家蝇 天蚕素 抗菌肽 基因克隆 融合表达
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红色荧光蛋白核迁移蛋白shRNA干扰载体的构建 被引量:2
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作者 廖霞 庞实锋 +5 位作者 张强 杨芳 郑克勤 周汝滨 曹定国 邹宇光 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期740-743,共4页
目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法。方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆... 目的:利用红色荧光蛋白(RFP),建立一种直观、快速筛选有效RNA干扰片段的方法。方法:通过分子克隆技术将核迁移蛋白(NUDC)与RFP构建成融合基因,克隆至真核表达载体pDs中,以实现其融合表达;同时,将人U6启动子及9个NUDC的发夹结构分别克隆至上述同一真核载体中,构建成一系列针对NUDC不同干扰位点的RNA干扰载体,通过采用酶切及DNA序列鉴定,然后转染293T细胞,通过荧光显微镜观察293T细胞的荧光发光强度及荧光细胞数。结果:酶切及测序结果证实质粒为所需的序列;荧光显微镜观察结果显示,shNUDC-A的干扰效果最好。结论:成功构建了含RFP的NUDC真核shRNA干扰载体。 展开更多
关键词 融合基因 RNA干扰 SHRNA
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人核迁移蛋白shRNA慢病毒载体的构建及转导
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作者 庞实锋 廖霞 +5 位作者 郑克勤 周汝滨 梁朋 曹定国 张国平 李文荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期688-690,695,共4页
目的:通过绿色荧光蛋白(GFP)标记,构建可示踪的人核迁移蛋白(hNUDC)慢病毒RNA干扰载体,并实现其对靶细胞的转导。方法:通过分子克隆技术将人核迁移蛋白的发夹RNA(shNUDC-F)克隆至慢病毒表达载体中,构建成靶向针对hNUDC的RNA干扰载体,通... 目的:通过绿色荧光蛋白(GFP)标记,构建可示踪的人核迁移蛋白(hNUDC)慢病毒RNA干扰载体,并实现其对靶细胞的转导。方法:通过分子克隆技术将人核迁移蛋白的发夹RNA(shNUDC-F)克隆至慢病毒表达载体中,构建成靶向针对hNUDC的RNA干扰载体,通过磷酸钙转染法,将获得的慢病毒高纯度质粒转染进低次代293T细胞中进行包装,通过高速离心收获慢病毒颗粒,经滴度测定后,对Dami巨核细胞进行转导实验。用显微镜观察转导效率,用Westernblot检测RNA干扰效果。结果:慢病毒携带的shNUDC-F片段对Dami巨核细胞能高效转导,并使其内源hNUDC基因发生基因沉默,干扰效果较好。结论:成功构建出慢病毒hNDUC RNA干扰载体,并在293T细胞中实现包装并成功转入Dami细胞。 展开更多
关键词 慢病毒 RNA干扰 发夹RNA 巨核细胞
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