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鼻咽癌肿瘤干细胞样细胞亚群的分离及初步鉴定 被引量:16
1
作者 冀天星 张鑫 +4 位作者 李祥勇 李彩虹 黄颖 周克元 李涛 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期754-757,共4页
目的:分离和鉴定具有肿瘤干细胞特性的鼻咽癌球形成细胞亚群。方法:利用无血清干细胞球悬浮培养技术从不同分化程度鼻咽癌细胞株中分离成球细胞,然后利用MTT法,软琼脂克隆形成实验,分别评价成球细胞的耐药性、克隆形成能力,最后利用RT-... 目的:分离和鉴定具有肿瘤干细胞特性的鼻咽癌球形成细胞亚群。方法:利用无血清干细胞球悬浮培养技术从不同分化程度鼻咽癌细胞株中分离成球细胞,然后利用MTT法,软琼脂克隆形成实验,分别评价成球细胞的耐药性、克隆形成能力,最后利用RT-PCR和免疫荧光细胞技术分析干性基因及Wnt信号通路关键转录因子β-catenin在成球及未成球细胞中的表达情况。结果:低分化鼻咽癌细胞含有较高成球细胞,而高分化细胞株CNE-1中未见成球细胞。与CNE-2相比较,CNE-2S(来源于CNE-2的成球细胞)具有较强的抗肿瘤药物耐药性、克隆形成能力、高表达干性基因,且β-catenin在胞浆和核内都呈高表达。结论:本研究分离到干细胞样鼻咽癌成球细胞亚群,为最终靶向杀灭鼻咽癌肿瘤干细胞提供了可能。 展开更多
关键词 鼻咽癌 肿瘤干细胞 球形成细胞 分离 鉴定
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原花青素二聚体B_2对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及炎症因子表达的影响 被引量:9
2
作者 丁伟斌 梁统 周克元 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期803-806,共4页
目的通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins di-mer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制。方法免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Wes... 目的通过观察原花青素二聚体B2(procyanidins di-mer B2,PCB2)对大鼠滑膜细胞NF-κB核转运及相关炎症因子表达的影响,探讨其抗炎的分子机制。方法免疫荧光法观察NF-κB/p65在细胞中的定位,RT-PCR检测PCB2对诱导细胞的COX-2 mRNA表达,Western blot分析COX-2蛋白含量变化,ELISA测定各处理组细胞上清液中IL-1β、VEGF的含量变化。结果 TNF-α(10μg.L-1)诱导RSC-364细胞NF-κB从细胞质转运至细胞核,50μmol.L-1 PCB2明显抑制NF-κB/P65核转运;PCB2剂量依赖性抑制COX-2基因和蛋白的表达;PCB2下调了TNF-α诱导的IL-1β、VEGF的水平。结论 PCB2能有效抑制COX-2、IL-1β及VEGF的表达,其机制可能与抑制TNF-α诱导的NF-κB核转运,抑制NF-κB活化有关。 展开更多
关键词 原花青素二聚体B2 滑膜细胞 NF-ΚB TNF-Α 抗炎 核转运
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白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用 被引量:7
3
作者 王铮华 梁统 +1 位作者 李涛 周克元 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期93-96,共4页
探讨白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用及机制。采用CCK-8法检测细胞存活率,Hochest 33258染色检测细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。结果表明白杨素对CNE-... 探讨白杨素对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的抑制作用及机制。采用CCK-8法检测细胞存活率,Hochest 33258染色检测细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3的活性。结果表明白杨素对CNE-2细胞的生长具有较强的抑制作用,并具有明显的量-效关系;白杨素可诱导CNE-2细胞凋亡,使G0/G1期细胞明显增多,S期明显减少,使细胞周期被阻滞于G0/G1期;白杨素可升高CNE-2细胞caspase-3的活性。白杨素对CNE-2细胞生长有明显的抑制作用,其机制可能与白杨素诱导的细胞周期阻滞和细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 白杨素 鼻咽癌 细胞凋亡 细胞增殖
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人IL-37在大肠杆菌表达及多克隆抗体的制备与鉴定 被引量:5
4
作者 赵付前 何素辉 +3 位作者 何玲鸽 林妙芬 王森 陈章权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期513-516,共4页
目的原核表达白细胞介素37(IL-37)及制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增IL-37b成熟肽编码区基因,克隆至表达载体pET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白IL-37为免疫原免疫... 目的原核表达白细胞介素37(IL-37)及制备其多克隆抗体。方法 PCR扩增IL-37b成熟肽编码区基因,克隆至表达载体pET28a,转化大肠杆菌感受态细胞,IPTG诱导表达,Ni2+-NTA琼脂糖凝胶柱亲和层析纯化重组蛋白,以纯化的重组蛋白IL-37为免疫原免疫BALB/c小鼠制备其特异性抗体,用ELISA、Western blot法和免疫组织化学染色检测抗体的效价和特异性。结果原核表达了重组蛋白IL-37b成熟肽,并获得高效价的小鼠抗IL-37抗体,能特异性识别天然的IL-37抗原。结论成功制备效价高、特异性好的小鼠抗IL-37抗体。 展开更多
关键词 白细胞介素37 表达 抗体 制备 小鼠
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表没食子儿茶素没食子酸酯通过调控P53/miR-34a抑制鼻咽癌细胞的增殖 被引量:3
5
作者 李彬彬 万郑 +3 位作者 孔霞 廖丹 王籽又 黄国良 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1557-1562,共6页
目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖的影响,并以微小RNA-34a(miR-34a)为靶点探讨其作用机制。方法:不同浓度的EGCG处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、Ed U染色法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测... 目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖的影响,并以微小RNA-34a(miR-34a)为靶点探讨其作用机制。方法:不同浓度的EGCG处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、Ed U染色法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期分布的改变;Western blot检测P53和Notch1蛋白水平的变化;real-time PCR检测miR-34a和Notch1 mRNA的表达。结果:EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖受到明显抑制,克隆形成能力降低,细胞周期阻滞于G0/G1期,呈剂量依赖关系;随着EGCG浓度增高,P53和miR-34a的表达水平明显上调,而其下游Notch1 mRNA和蛋白的表达水平则明显下降。结论:EGCG可能通过调控P53/miR-34a/Notch1通路诱导细胞周期阻滞,抑制鼻咽癌细胞增殖。 展开更多
关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 鼻咽癌 P53 微小RNA-34a NOTCH1
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胰岛素样生长因子Ⅰ通过改善线粒体功能保护新生大鼠心肌细胞免于凋亡 被引量:4
6
作者 李晋菊 丁碧蓝 +4 位作者 许晓玲 张剑凯 黄颖 李涛 吴柱国 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1585-1589,共5页
目的:探讨线粒体机制在胰岛素样生长因Ⅰ(IGF-Ⅰ)保护心肌细胞中的作用。方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,过氧化氢处理诱导凋亡,JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变,Annexin V-FITC/PI双染色法、cas... 目的:探讨线粒体机制在胰岛素样生长因Ⅰ(IGF-Ⅰ)保护心肌细胞中的作用。方法:体外培养新生大鼠心肌细胞,过氧化氢处理诱导凋亡,JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变,Annexin V-FITC/PI双染色法、caspase-3活性测定、DNA-ladder分析和Hoechst 33258染色方法观察心肌细胞凋亡的情况。结果:过氧化氢可诱导心肌细胞凋亡,siRNA下调Kruppel样因子9(KLF9)48 h后,心肌细胞线粒体膜电位下降率明显降低,由对照组的(24.0±1.6)%,降为IGF-Ⅰ处理组的(18.3±1.2)%和KLF9下调组的(15.2±1.2)%;线粒体形态明显改善;DNA片段化改善;caspase-3活性降低,与对照组相比IGF-Ⅰ处理组降低(1.30±0.28)倍,KLF9下调组降低(1.31±0.43)倍;Annexin V-FITC/PI双染法显示细胞凋亡率对照组为(42.5±1.8)%,IGF-I处理组为(22.4±4.2)%,KLF9下调组为(32.5±3.5)%;Hoechst 33258染色结果显示凋亡小体减少,KLF9下调组与IGF-I的抗心肌细胞凋亡效果相似。结论:IGF-I通过下调KLF9表达改善线粒体功能,保护心肌细胞免于凋亡。 展开更多
关键词 心肌细胞 胰岛素样生长因子Ⅰ Kruppel样因子9 线粒体 细胞凋亡
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siRNA靶向干扰组蛋白H3表达对人鼻咽癌细胞增殖的抑制作用 被引量:2
7
作者 李彬彬 黄国良 +3 位作者 孔霞 李蓉 董子明 何志巍 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1625-1630,共6页
目的:应用RNA干扰技术抑制人鼻咽癌细胞株CNE1中组蛋白H3的表达,观察其对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法:构建针对组蛋白H3的小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,转染CNE1细胞并筛选获得稳定表达细胞株。实时荧光定量RT-PCR和Western blottin... 目的:应用RNA干扰技术抑制人鼻咽癌细胞株CNE1中组蛋白H3的表达,观察其对鼻咽癌细胞增殖的影响。方法:构建针对组蛋白H3的小干扰RNA(siRNA)的真核表达载体,转染CNE1细胞并筛选获得稳定表达细胞株。实时荧光定量RT-PCR和Western blotting检测细胞中组蛋白H3 mRNA和蛋白表达的改变;CCK-8法和平板克隆形成实验观察细胞增殖能力的改变;双萤光素酶报告系统检测细胞激活蛋白1(AP-1)转录活性的改变。结果:与阴性对照组和空白对照组相比,siRNA-H3质粒转染组的组蛋白H3 mRNA和蛋白表达均显著下降,细胞生长速度明显减慢,表皮生长因子诱导的细胞克隆形成能力和AP-1转录活性均受到明显抑制。结论:通过RNA干扰技术阻断组蛋白H3的表达,可抑制CNE1细胞的生长、增殖,其机制可能与下调AP-1转录活性有关。组蛋白H3可能是潜在的肿瘤治疗新靶点。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 组蛋白H3 RNA干扰 激活蛋白1
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铁硫蛋白的生物合成及相关疾病 被引量:2
8
作者 郑华珍 赵炜 刘新光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期566-574,共9页
铁硫蛋白是以铁硫簇为辅基,相对分子质量较小的一类蛋白质.它广泛存在于各种生物体内,参与电子传递、能量代谢以及基因表达调控等重要生理过程.其生物合成过程复杂,并且从细菌到人类高度保守.在真核细胞内,铁硫蛋白的组装由线粒体铁硫... 铁硫蛋白是以铁硫簇为辅基,相对分子质量较小的一类蛋白质.它广泛存在于各种生物体内,参与电子传递、能量代谢以及基因表达调控等重要生理过程.其生物合成过程复杂,并且从细菌到人类高度保守.在真核细胞内,铁硫蛋白的组装由线粒体铁硫簇组装系统(mitochondrial ironsulfur cluster assembly system,mitochondrial ISC assembly system)和细胞质铁硫簇组装器(cytosolic iron-sulfur cluster assembly,CIA)完成.研究发现,铁硫蛋白的合成异常可导致弗里德赖希共济失调(friedreich ataxia,FRDA)、遗传性肌病和铁粒幼细胞性贫血等多种罕见疾病,这些疾病严重影响个体的生活质量和寿命.因此,深入了解铁硫蛋白的结构和生物合成过程,对研究其生物学功能与相关疾病的诊断和治疗有重要意义. 展开更多
关键词 铁硫蛋白 生物合成 线粒体铁硫簇组装系统 细胞质铁硫簇组装器
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tRNA抑制子对转录因子NKX2.5提前终止密码子的通读 被引量:1
9
作者 欧阳平 刘远航 +6 位作者 黄志刚 齐小娟 倪倩 刘亚萍 宋仁生 李涛 吴柱国 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期367-373,共7页
人类NKX2.5基因(NK2 homeobox 5,NKX2.5)提前终止密码子(Premature termination codon,PTC)突变会引起房间隔缺损、房室传导阻滞等先天性心脏病。目前,已报道的NKX2.5 PTC突变有8个(E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、... 人类NKX2.5基因(NK2 homeobox 5,NKX2.5)提前终止密码子(Premature termination codon,PTC)突变会引起房间隔缺损、房室传导阻滞等先天性心脏病。目前,已报道的NKX2.5 PTC突变有8个(E109X、Q149X、Q170X、Q187X、Q198X、Y256X、Y259X和C264X)。为了检测tRNA抑制子是否对PTC突变诱导通读产生有功能的全长蛋白,文章将8个NKX2.5 PTC突变克隆到pcDNA3.1(-)载体,将NKX2.5全长和E109X、Q149X及C264X克隆到pEGFP-N1载体,形成NKX2.5-EGFP融合质粒。将NKX2.5-EGFP与对应的tRNA抑制子质粒分别或共转染后观察绿色荧光数量定性判断tRNA抑制子是否诱导通读。Western blotting检测通读后全长蛋白和截短蛋白表达并计算通读效率。Real-time PCR检测NKX2.5下游重要调控基因Cx43 mRNA的表达判断通读后蛋白功能。结果表明,文章成功构建了8个基于pcDNA3.1(-)的NKX2.5表达质粒、4个基于pEGFP-N1的质粒;tRNA抑制子tRNA am能有效通读Q149X、Q170X、Q187X和Q198X,且对后三者的通读效率均在50%以上;tRNA op能有效通读C264X,通读效率约50%左右;tRNA oc不能通读NKX2.5 PTC突变;各通读后样本Cx43 mRNA相对表达量增加7%~41.7%;tRNA am和tRNA op能有效通读NKX2.5 PTC突变,产生具有功能的全长蛋白,但tRNA抑制子对细胞的其他影响还不明确,有待于进一步观察。 展开更多
关键词 tRNA抑制子 NKX2.5 提前终止密码子 通读 先天性心脏病
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IGF-1通过BTEB调控CYPs途径保护心肌细胞免于凋亡 被引量:1
10
作者 张剑凯 丁碧蓝 +2 位作者 许晓玲 李涛 吴柱国 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第1期64-71,共8页
目的探讨胰岛素样生长因子1对大鼠心肌细胞凋亡保护作用的基因调控机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,通过RT-PCR及Werstern-blot观察IGF-1调节BTEB及其下游细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的基因表达情况。过氧化氢处理诱... 目的探讨胰岛素样生长因子1对大鼠心肌细胞凋亡保护作用的基因调控机制。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,通过RT-PCR及Werstern-blot观察IGF-1调节BTEB及其下游细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的基因表达情况。过氧化氢处理诱导心肌细胞凋亡,通过Annexin VFITC/PI双染色法、Caspase 3活性测定、Hoechest33258染色法和Tunel法观察下调CYPs的基因表达对心肌细胞凋亡的影响;JC-1线粒体膜电位检测法和透射电镜观察心肌细胞线粒体膜电位和形态的改变。结果大鼠心肌细胞经IGF-1刺激60 min后,BTEB m RNA和蛋白表达均明显下降;IGF-1刺激48 h后,CYP1A1、2E1、3A11和11A1的m RNA和蛋白表达均明显下降(均P<0.01);用BTEB特异性的si RNA人为下调BTEB基因表达后,CYP1A1、3A1 m RNA和蛋白表达明显下降(均P<0.01),CYP2E1、11A1 m RNA和蛋白表达变化不明显。与对照组相比,H2O2诱导的大鼠心肌细胞用CYP1A1、2E1、3A11和11A1特异性的si RNA人为下调上述基因表达后,Annexin V-FITC/PI双染法显示心肌细胞凋亡率下降(均P<0.05)、Caspase 3活性测定显示酶活性降低(均P<0.05)、Hoechest33258染色和Tunel法检测结果显示凋亡小体和凋亡细胞数目减少,与IGF-1的抗心肌细胞凋亡效果相似;且细胞线粒体膜电位下降率明显降低(均P<0.05),线粒体形态明显改善。结论 IGF-1可以通过下调细胞色素C家族成员CYP1A1、2E1、3A11和11A1的表达改善线粒体功能,其中CYP1A1、3A11受BTEB调控途径发挥抗心肌细胞凋亡作用。 展开更多
关键词 心肌细胞 凋亡 基本转录元件结合蛋(BTEB) 细胞色素C 胰岛素样生长因子 I(IGF-1 )
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多棘海星乙醇提取物对小鼠血清IL-4和IFN-γ水平的影响 被引量:1
11
作者 何素辉 唐晓磊 +1 位作者 邓亦峰 陈章权 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1198-1200,共3页
目的:研究多棘海星乙醇提取物对小鼠血清IL-4和IFN-γ水平的影响。方法:将多棘海星粉碎后,用无水乙醇提取,通过硅胶柱层析进行组分分离。将各组分分别腹腔注射小鼠后,用ELISA法检测小鼠血清中IL-4与IFN-γ的水平。结果:多棘海星乙醇提... 目的:研究多棘海星乙醇提取物对小鼠血清IL-4和IFN-γ水平的影响。方法:将多棘海星粉碎后,用无水乙醇提取,通过硅胶柱层析进行组分分离。将各组分分别腹腔注射小鼠后,用ELISA法检测小鼠血清中IL-4与IFN-γ的水平。结果:多棘海星乙醇提取物通过硅胶柱层析分离后,获取8个组分。多棘海星乙醇提取物的组分III和VIII能刺激小鼠产生较高水平的IL-4和IFN-γ。结论:所分离的多棘海星乙醇提取物组分III和VIII刺激小鼠产生高水平的IL-4和IFN-γ,具有自然杀伤T(NKT)细胞激活剂的作用特征。提示多棘海星中可能含有能活化NKT细胞的活性物质。 展开更多
关键词 多棘海星 IL-4 IFN-Γ 小鼠
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上皮间充质转化促进肿瘤细胞干性获得的研究进展 被引量:2
12
作者 蔚帅帅 马晓娟 +2 位作者 林碧华 李继霞 周克元 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第7期632-639,共8页
上皮间充质转化是上皮细胞丢失细胞极性和细胞黏附,而获得间充质细胞迁移和侵袭特性的生物学过程.肿瘤干细胞是存在于肿瘤中具有自我更新和异质性分化能力的一小群细胞,在肿瘤的发生发展过程中起重要的作用.上皮间充质转化(EMT)与肿瘤... 上皮间充质转化是上皮细胞丢失细胞极性和细胞黏附,而获得间充质细胞迁移和侵袭特性的生物学过程.肿瘤干细胞是存在于肿瘤中具有自我更新和异质性分化能力的一小群细胞,在肿瘤的发生发展过程中起重要的作用.上皮间充质转化(EMT)与肿瘤的转移密切相关,而近几年的研究表明,EMT也可以促进肿瘤细胞获得干细胞的特性,因此使肿瘤治疗更困难,本文对EMT促肿瘤干细胞形成机制及其对临床治疗意义的研究进展作一综述. 展开更多
关键词 上皮间充质转化 肿瘤干细胞 干性 耐药
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细胞糖代谢方式改变与肿瘤转移的相关性 被引量:5
13
作者 倪倩 杨万勇 李涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期607-611,共5页
肿瘤转移是引起肿瘤相关死亡的主要原因,肿瘤细胞的代谢异常在肿瘤转移中扮演重要角色。肿瘤的糖代谢以"Warburg效应"为显著特征,即细胞在有氧条件下也以糖酵解为主要糖代谢途径提供能量。而这种现象在转移性肿瘤细胞中更为突... 肿瘤转移是引起肿瘤相关死亡的主要原因,肿瘤细胞的代谢异常在肿瘤转移中扮演重要角色。肿瘤的糖代谢以"Warburg效应"为显著特征,即细胞在有氧条件下也以糖酵解为主要糖代谢途径提供能量。而这种现象在转移性肿瘤细胞中更为突出,表现为葡萄糖的大量摄取、高糖酵解速率和核酸合成速率等,这为肿瘤细胞的快速生长和增殖提供了重要的能量和物质基础。对于肿瘤转移过程中相关代谢改变的研究,将为最终揭示肿瘤转移的机制打下基础。本文综述肿瘤细胞糖代谢中糖酵解、线粒体有氧代谢及磷酸戊糖途径中的变化与肿瘤转移发生的相关性,其结果为进一步从调控肿瘤代谢角度发现新的肿瘤转移控制手段提供了启示。 展开更多
关键词 肿瘤转移 Warburg效应 糖酵解 线粒体 磷酸戊糖途径
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T-钙粘附素在肿瘤发生发展中的作用 被引量:1
14
作者 操龙斌 李继霞 周克元 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期232-238,共7页
T-钙粘附素是钙粘附素家族中的一个特殊成员,缺乏跨膜区和胞浆区,是通过糖基磷脂酰肌醇附着于细胞膜上.T-钙粘附素的异常表达参与到多种肿瘤的发生发展过程中,如肿瘤细胞的凋亡、增殖、侵袭和转移等过程.T-钙粘附素还可能参与肿瘤新生... T-钙粘附素是钙粘附素家族中的一个特殊成员,缺乏跨膜区和胞浆区,是通过糖基磷脂酰肌醇附着于细胞膜上.T-钙粘附素的异常表达参与到多种肿瘤的发生发展过程中,如肿瘤细胞的凋亡、增殖、侵袭和转移等过程.T-钙粘附素还可能参与肿瘤新生血管的形成和胞内外的信号传导过程.本文就T-钙粘附素在肿瘤发生发展过程中的作用及分子机制作一综述,该蛋白有可能成为肿瘤治疗的新靶点. 展开更多
关键词 T-钙粘附素 肿瘤 分子机制
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