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新型miRNA表达框架下调端粒酶活性并抑制视网膜母细胞瘤细胞生长
1
作者
赵丹丹
丁彩云
李文涛
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期2428-2439,共12页
目的本研究致力于设计一种新的miRNA表达框架(MEC),其以hTERT和hTR的特异性序列为靶点。该框架能够有效改善传统RNAi方法中miRNA易降解和细胞毒性问题,为miRNA的合成提供一种简便的方法。方法采用重叠PCR方法构建hTERT和hTR特异的miRNA...
目的本研究致力于设计一种新的miRNA表达框架(MEC),其以hTERT和hTR的特异性序列为靶点。该框架能够有效改善传统RNAi方法中miRNA易降解和细胞毒性问题,为miRNA的合成提供一种简便的方法。方法采用重叠PCR方法构建hTERT和hTR特异的miRNA表达框架。采用TRAP银染色和TRAP实时荧光定量PCR检测端粒酶活性。实时荧光定量PCR法测定端粒长度,MTT法测定细胞活力。annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,PI单染色法检测细胞周期,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果成功构建了靶向hTERT/hTR特异性miRNA表达框架。不同MEC对端粒酶活性的抑制程度不同。端粒酶的沉默可引起视网膜母细胞瘤(RB)细胞G0/G1期生长阻滞,导致细胞凋亡。结论miRNA介导的端粒酶沉默是一种有效抑制RB细胞生长的策略,开发一个强大的系统来充分探索miRNA的作用是必要的。本文构建的MEC显示了强大的RNAi效应,可成为筛选用于RB基因治疗的RNAi靶向序列的有效工具。
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关键词
端粒酶
MIRNA
RNAI
视网膜母细胞瘤
基因治疗
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职称材料
题名
新型miRNA表达框架下调端粒酶活性并抑制视网膜母细胞瘤细胞生长
1
作者
赵丹丹
丁彩云
李文涛
机构
山西
医科
大学
附属
山西
眼科
医院
山西医科大学附属山西省人民医院中心实验室
太原科技
大学
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2022年第12期2428-2439,共12页
基金
山西省自然科学基金青年项目(201801D221256)
山西省眼科医院青年基金(Q201803)资助项目。
文摘
目的本研究致力于设计一种新的miRNA表达框架(MEC),其以hTERT和hTR的特异性序列为靶点。该框架能够有效改善传统RNAi方法中miRNA易降解和细胞毒性问题,为miRNA的合成提供一种简便的方法。方法采用重叠PCR方法构建hTERT和hTR特异的miRNA表达框架。采用TRAP银染色和TRAP实时荧光定量PCR检测端粒酶活性。实时荧光定量PCR法测定端粒长度,MTT法测定细胞活力。annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡,PI单染色法检测细胞周期,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果成功构建了靶向hTERT/hTR特异性miRNA表达框架。不同MEC对端粒酶活性的抑制程度不同。端粒酶的沉默可引起视网膜母细胞瘤(RB)细胞G0/G1期生长阻滞,导致细胞凋亡。结论miRNA介导的端粒酶沉默是一种有效抑制RB细胞生长的策略,开发一个强大的系统来充分探索miRNA的作用是必要的。本文构建的MEC显示了强大的RNAi效应,可成为筛选用于RB基因治疗的RNAi靶向序列的有效工具。
关键词
端粒酶
MIRNA
RNAI
视网膜母细胞瘤
基因治疗
Keywords
telomerase
miRNA
RNAi
retinoblastoma
gene therapy
分类号
R73-3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
新型miRNA表达框架下调端粒酶活性并抑制视网膜母细胞瘤细胞生长
赵丹丹
丁彩云
李文涛
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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